具有抗肿瘤活性的达玛烷型皂苷类化合物、其制备方法及应用与流程

本发明涉及一种从植物绞股蓝(gynostemmapentaphyllum)中提取得到的具有抗肿瘤活性的皂苷类化合物；本发明还涉及该皂苷类化合物的制备方法以及该化合物在医药中的应用，属于植物化学领域。

背景技术：

绞股蓝为葫芦科(cucurbitaceae)绞股蓝属(gynostemma)绞股蓝gynostemmapentaphyllum(thunb.)makino的全草，具有清热解毒，止咳祛痰等功能。

绞股蓝中最主要的药效成分是皂苷类成分。研究表明，具有c20(21)和c20(22)双键的达木林b和达木林a与侧链c20位连有羟基的绞股蓝皂苷gypenosidel和gypenosideli相比，具有更强的抑制癌细胞增殖作用，而它们在绞股蓝中的含量甚微。对于这些有较强活性的稀有皂苷，它们的来源有限而且在植物体内含量较低。如果用传统方法进行分离，不但耗费大量的药用资源，而且得率也很低。因此，对化合物进行合理的成分转化和特殊方法处理已经成为现代药学研究的热点，可创造更大的经济效益、社会效益和生态效益。

技术实现要素：

本发明人在对绞股蓝热处理产物的有效成分研究中分离得到具有结构式(i)和(ii)的新化合物，在现有文献中从未报道，于是对其进一步进行了药理实验，发现对人胃癌细胞sgc-7901，人肺癌细胞a549，人肺癌细胞h1299，人骨髓神经母细胞瘤细胞株sh-sy5y，人膀胱癌细胞t24，人髓性白血病细胞k562具有抑制作用，从而完成了本发明。

本发明目的之一是提供一种下述式(i)或(ii)的化合物：

其中，r1、r2和r3彼此独立选自oh或糖基；

优选的：r1或r3为oh；r2为糖基；

特别优选的，所述化合物的结构式为式(iii)或(iv)所示：

本发明的另外一个目的是提供制备上述式(i)或(ii)化合物的方法。

本发明的另外一个目的通过以下技术方案来实现的：

一种制备上述式(i)或(ii)化合物的方法，包括：

(1)将植物绞股蓝的干燥全草的粗粉在高温高压下热处理后，用乙醇回流提取，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；

(2)将乙醇提取浸膏通过hp20树脂，用20％乙醇、50％乙醇洗脱后，用95％乙醇进行洗脱，95％乙醇洗脱液减压浓缩，得95％乙醇洗脱物；将95％乙醇洗脱物上硅胶柱色谱，用20∶1～2∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到13个组分，将其中第8个组分用半制备色谱柱(250×2.5mm，5μm)，流速为1ml/min，用50∶50体积比的乙腈/水洗脱，即得。

上述制备方法中，步骤(1)中优选将绞股蓝干燥全草的粗粉在125℃、0.24mpa条件下热处理3h-10h，用80％乙醇回流提取3次，3次回流提取的时间依次为2h、2h和2h；合并提取液，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；

步骤(2)中用95％乙醇洗脱，回收溶剂的总皂苷提取物。

本发明式(iii)或(iv)化合物具有较强的抑制癌细胞增殖活性，具体来说本发明式(iii)或(iv)化合物对人胃癌细胞sgc-7901，人肺癌细胞a549，人肺癌细胞h1299，人骨髓神经母细胞瘤细胞株sh-sy5y，人膀胱癌细胞t24，人髓性白血病细胞k562具有明显的抑制作用，其半数抑制率浓度均小于100μg/ml。

附图说明

图1本发明化合物达木林e、达木林f的lc-ms图谱

具体实施方式

实施例1本发明化合物的制备

绞股蓝全草的干燥粗粉在125℃、0.24mpa条件下热处理3～10h，用80％乙醇回流提取3次，时间分别为2h、2h和2h。提取液合并后减压回收溶剂，得80％乙醇提取浸膏。取80％乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，乙醇提取物加蒸馏水混悬，并用hp-20大孔树脂，用水、50％乙醇、95％乙醇分别进行洗脱；减压回收溶剂，得到水提物，乙醇提取物；将95％乙醇提取物减压浓缩后，干燥后与硅胶1∶1混合，用硅胶柱色谱分离，用20∶1～1∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到14个组分，将其中第8个组分用制备色谱柱(250×2.5mm，5μm)，流速为1ml/min，用50∶50体积比的乙腈/水洗脱，将分离得到的两个组分，旋蒸及冷冻干燥后，得到2种白色粉末体(命名为达木林e和达木林f)；对所得到的化合物(达木林e和达木林f)的结构鉴定波谱数据见下表1。

表1分离化合物的¹³cnmr数据

达木林f在¹h-nmr谱的高场区给出7个甲基信号δ0.53(3h，s，h-19)，0.59(3h，s，h-30)，0.64(3h，s，h-18)，0.69(3h，s，h-29)，1.05(3h，s，h-28)，1.23(3h，s，h-27)和1.29(3h，s，h-26)；给出1个糖的端基质子信号δ4.62(1h，d，j＝7.9hz，h-1′)，根据糖的端基质子偶合常数值7.9hz，判断此糖的构型为β型；给出1个二取代烯氢质子信号δ4.77(1h，bs，h-21a)，4.55(1h，bs，h-21b)及一个三取代烯氢质子信号δ4.93(1h，m，h-24)。在¹³c-nmr谱中，给出了36个碳信号，其中20、25、24、21位的碳化学位移分别为δ156.9、132.6、126.8、109.5示有4个烯碳存在；结合糖的端基碳信号107.9(c-1′)和hmbc谱中h-3相关信号，推测该化合物是在c-3位上连有1个糖。达木林f的¹h-nmr谱和¹³c-nmr谱数据与达木林b很相似。因此化合物达木林f鉴定为：2α，3β，12β-三羟基达玛烷-20(21)，24-二烯-3-o-β-d-葡萄糖苷[2α，3β，12β-trihydroxydammar-20(21)，24-diene-3-o-β-d-glucopyranoside]。

达木林e在¹h-nmr谱的高场区给出8个甲基信号δ0.53(3h，s，h-19)，0.58(3h，s，h-30)，0.64(3h，s，h-18)，0.69(3h，s，h-29)，1.05(3h，s，h-28)，1.21(3h，s，h-27)，1.25(3h，s，h-26)和1.46(3h，s，h-21)；给出1个糖的端基质子信号δ4.62(1h，d，j＝7.9hz，h-1′)，根据糖的端基质子偶合常数值7.9hz，判断此糖的构型为β型；给出2个三取代烯氢质子信号δ4.85(1h，m，h-24)，5.13(1h，m，h-22)。在¹³c-nmr谱中，给出了36个碳信号，其中20、25、22、24位的碳化学位移分别为δ141.5，132.6，124.5，124.9示有4个烯碳存在；糖的端基碳信号δ107.9(c-1′)和hmbc谱中2.93(1h，d，j＝9.2hz，h-3)相关，推测该化合物是在c-3位上连有1个糖。达木林e的¹h-nmr谱和¹³c-nmr谱数据与达木林a很相似。因此化合物达木林e鉴定为：2α，3β，12β-三羟基达玛烷-20(22)，24-二烯-3-o-β-d-葡萄糖苷[2α，3β，12β-trihydroxydammar-20(22)，24-diene-3-o-β-d-glucopyranoside]。

试验例1本发明化合物达木林e(damuline)和达木林f(damulinf)的抗肿瘤的活性实验

1)实验材料

细胞：人肝癌细胞(hepg2cell)。人胃癌细胞sgc-7901，人肺癌细胞a549，人肺癌细胞h1299，人骨髓神经母细胞瘤细胞株sh-sy5y，人膀胱癌细胞t24，人髓性白血病细胞k562。

2)实验方法

人胃癌细胞sgc-7901，人肺癌细胞a549，人肺癌细胞h1299，人骨髓神经母细胞瘤细胞株sh-sy5y，人膀胱癌细胞t24活性测定采用mtt法；人髓性白血病细胞k562活性测定采用cck-8法。

3)供试化合物：实施例1所制备的化合物(达木林e和达木林f)。

4)实验结果

表2本发明化合物(达木林e和达木林f，damulineanddamulinf)的抗肿瘤活性测定结果。

注：+表示有效；-表示无效。

注：+表示有效；-表示无效。

注：+表示有效；-表示无效。

注：+表示有效；-表示无效。

注：+表示有效；-表示无效。

注：+表示有效；-表示无效。

实验结果表明：本发明式(iii)和(iv)化合物具有较强的抗肿瘤活性。