效应物功能由抗体的Fc区介导，并且允许作者以或多或少的成功尝试氨基酸 的修改。糖基化，特别是Fc区的岩藻糖基化对抗体的效能具有显著的影响。这使得作者为 了改变糖基化谱，而修改CHO细胞中的抗体产生条件，从而再次以或多或少的成功尝试改 进一些效应物的功能。
[0114] 之前的研宄已经示出，FcgRIIIa基因的多态性在氨基酸158处编码苯丙氨酸（F) 或结I氨酸（V)。缴氨酸亚型的表达与增强的亲和力和与MAb的结合相关（Rowland AJ,等 人 1993.Cancer Tmmunol Immunother. 37(3):195-202 ；Sapra P,Allen TM. 2002. Cancer Res 62:7190 - 4; M0lh0j Μ,等人 2007. Mol Immunol. 44(8) :1935-43)。一些临床研宄已 经支持了这一发现，在患非霍奇金淋巴瘤的患者中对利妥昔单抗具有更大的临床反应，其 中患非霍奇金淋巴瘤的患者显露出V/V多态性（Bargou R,等人2008. Science. 321:974-7 ; Bruenke J, 2005.Br J Haematol. 130 (2):218-28 ；Cartron G, Blood. 2002Feb 1； 99 (3) : 754-8 ;Hekman A,等人 1991. Cancer Immunol Immunother 32:364 - 72) 〇
[0115] W01999051642描述了变体人类IgG Fe区，包括第270位或第329位上的氨基酸 取代，或者第270、322、329和331位上的两个或多个取代。这些修改的目的在于提高CDC 和ADCC效应物的功能。
[0116] "处理"或"治疗"指治疗处理和预防性或防护性措施。
[0117] 用于处理或治疗目的的"哺乳动物"指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人类， 家畜和耕畜，以及动物园动物、体育动物或宠物动物，诸如狗、马、猫、牛等。优选地，哺乳动 物是人类。
[0118] 术语"癌症（cancer) "和"癌性的（cancerous) "指或描述哺乳动物中的生理条件， 典型的特征是不受控制的细胞生长。癌症的实例包括，但并不限于，癌（carcinoma)、淋巴 瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这样的癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非 小细胞肺癌、胃肠癌、肾癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝脏癌、膀胱癌、肝细胞 癌、乳癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝 癌，和各种类型的头颈癌。
[0119] 本文中的术语"核酸"或"寡核苷酸"或语法等价语指共价连接在一起的至少两个 核苷酸。本发明的核酸优选是单链或双链的，并且将通常含有磷酸二酯键。
[0120] 抗体的氨基酸序列"变体"（或突变体）是通过在抗体DNA中引入适当的核苷酸改 变，或通过核苷酸合成制备的。但是，这样的修改仅能在非常有限的范围（例如如上所述的 范围）内进行。例如，修改不改变上述抗体的诸如IgG同型和抗原结合的特征，但是可能改 进重组生产的产量、蛋白稳定性或便于纯化。
【具体实施方式】
[0121] CDR序列可以根据丨MGT?、Kabat?.或普通编号系统限定，该普通编号系统保 留丨MGT?:和Kabat_?.之间的常见序列。
[0122] 本发明的抗DR5的抗体mDR5-01(具有鼠 VH和VL及人Fc的嵌合抗体）和 HzDR5-01 (具有鼠 CDR和人FR，具有或没有回复突变，并且经Fc优化或未经Fc优化的人源 化抗体）的⑶R包括以下⑶R :
[0123] 表 1
[0124]
【主权项】
1. 一种组合物，包括特异性结合DR5受体的至少一种多肽或至少两种多肽以及药学上 的载剂、稀释剂或赋形剂，其中，所述至少一种多肽或至少两种多肽包括两种免疫球蛋白结 合结构域，该两种免疫球蛋白结合结构域包括： 包括成对的VH链和VL链的第一结合结构域，其中，该VH链含有序列SEQ ID NO: 13的 CDR1、序列SEQ ID N0:14CDR1的CDR2、序列SEQ ID勵：15的0?3;并且，该￥1链含有序列 SEQ ID NO: 16 的 CDR1、序列 FAS 的 CDR2、序列 SEQ ID NO: 17 的 CDR3,以及 包括成对的VH链和VL链的第二结合结构域，其中，该VH链含有序列SEQ ID NO: 18的 0)1?1、序列3￡〇10勵：14的0)1?2、序列5￡〇10勵：19的0)1?3;并且，该￥1链含有序列5￡〇 ID N0:20 的 CDR1、序列 RTS 的 CDR2、序列 SEQ ID N0:21 的 CDR3， 其中， 所述至少一种多肽包括两种免疫球蛋白结合结构域；或者 所述至少两种多肽包括含第一结合结构域的第一多肽以及含第二结合结构域的第二 多肽，用于同时、单独或顺序地给予包括人类的哺乳动物。
2. 根据权利要求1所述的组合物，包括： 氨基酸序列对3￡〇10勵:2和3￡〇10勵:4，及氨基酸序列对3￡〇10勵:6和3￡〇10 NO:8中的一种或多种， 氨基酸序列对SEQ ID N0:2和SEQ ID N0:4， 氨基酸序列对SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 8,或者 氨基酸序列对SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4,及氨基酸序列对SEQ ID NO:6和SEQ ID N0:8 ;或者 氨基酸序列对SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:37,及氨基酸序列对SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:41中的一种或多种， 氨基酸序列对SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:37， 氨基酸序列对SEQ ID NO: 39和SEQ ID NO: 41，或者 氨基酸序列对SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:37,及氨基酸序列对SEQ ID NO:39和SEQ ID N0:41〇
3. 根据权利要求1所述的组合物，包括氨基酸序列对SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO:4,包 括氨基酸序列对SEQ ID N0:6和SEQ ID N0:8的抗体。
4. 根据权利要求1所述的组合物，包括氨基酸序列对SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 37， 包括氨基酸序列对SEQ ID N0:39和SEQ ID N0:41的抗体。
5. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中，所述多肽是Fv、Fab、F(ab'）2、 scFv、抗体，优选单克隆抗体。
6. 根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，用作药剂，以诱导肿瘤细胞的凋亡和/ 或治疗癌症，所述癌症优选是实体癌症。
7. 根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，与另一种抗癌药物组合使用。
8. -种特异性结合DR5受体的多肽，包括一种或两种结合结构域，该结合结构域包括 成对的￥11链和￥1链，其中，该￥11链含有序列3￡0 10勵：13的〇)1?1、序列3￡0 10勵：14的 CDR2、序列SEQ ID NO: 15的CDR3 ;并且，该VL链含有序列SEQ ID NO: 16的CDR1、序列FAS 的 CDR2、序列 SEQ ID NO: 17 的 CDR3。
9. 一种特异性结合DR5受体的多肽，包括一种或两种结合结构域，该结合结构域包括 成对的呢链和￥1链，其中，该￥11链含有序列3￡0 10勵：18的〇)1?1、序列3￡0 10勵：14的 CDR2、序列SEQ ID N0:19的CDR3 ;并且，该VL链含有序列SEQ ID N0:20的CDR1、序列RTS 的 CDR2、序列 SEQ ID N0:21 的 CDR3。
10. -种特异性结合DR5受体的双互补位的、双特异性的或多价的多肽，包括： 包括成对的VH链和VL链的第一结合结构域，其中，该VH链含有序列SEQ ID NO: 13的 CDR1、序列SEQ ID N0:14CDR1的CDR2、序列SEQ ID勵：15的0?3;并且，该￥1链含有序列 SEQ ID NO: 16 的 CDR1、序列 FAS 的 CDR2、序列 SEQ ID NO: 17 的 CDR3,以及 包括成对的VH链和VL链的第二结合结构域，其中，该VH链含有序列SEQ ID NO: 18的 0)1?1、序列3￡〇10勵：14的0)1?2、序列5￡〇10勵：19的0)1?3;并且，该￥1链含有序列5￡〇 ID N0:20 的 CDR1、序列 RTS 的 CDR2、序列 SEQ ID N0:21 的 CDR3。
11. 一种分离的核苷酸序列，包括核苷酸序列SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:5、 SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38 或 SEQ ID NO:40。
12. -种表达载体或宿主细胞，包括根据权利要求11所述的核苷酸序列。
13. -种组合物，包括都具有与DR5结合的能力的两种多肽或抗体或其片段，所述两种 多肽或抗体或其片段用于同时、独立或顺序地给予包括人类的哺乳动物， 第一多肽或抗体包括与所述DR5的第一表位结合的第一抗原-结合位点，该第一表位 是与包括成对的VH链和VL链的结合结构域特异性结合的表位，其中，该VH链含有序列SEQ 10勵：13的001?1、序列5￡〇10勵：14〇01?1的〇01?2、序列5￡〇10勵：15的〇01?3 ;并且，该￥1 链含有序列SEQ ID NO: 16的CDR1、序列FAS的CDR2、序列SEQ ID NO: 17的CDR3,以及 第二多肽或抗体包括与所述DR5的第二表位结合的不同的第二抗原-结合位点，该表 位是与包括成对的VH链和VL链的结合结构域特异性结合的表位，其中，该VH链含有序列 5￡0 10勵：18的〇01?1、序列5￡0 10勵：14的〇01?2、序列5￡0 10勵：19的〇)1?3;并且，该￥1 链含有序列 SEQ ID N0:20 的 CDR1、序列 RTS 的 CDR2、序列 SEQ ID N0:21 的 CDR3。
14. 一种具有与DR5结合的能力的双特异性的抗体或其片段，所述抗体包括第一抗原 结合位点和不同的第二抗原结合位点，其中， 所述第一抗原结合位点与所述DR5的第一表位结合，该第一表位是与包括成对的VH链 和VL链的结合结构域特异性结合的表位，其中，该VH链含有序列SEQ ID NO: 13的CDR1、序 列 SEQ ID NO: 14CDR1 的 CDR2、序列 SEQ ID NO: 15 的 CDR3 ;并且，该 VL 链含有序列 SEQ ID NO: 16 的 CDR1、序列 FAS 的 CDR2、序列 SEQ ID NO: 17 的 CDR3,以及 不同的所述第二抗原结合位点与所述DR5的第二表位结合，该表位是与包括成对的VH 链和VL链的结合结构域特异性结合的表位，其中，该VH链含有序列SEQ ID NO: 18的CDR1、 序列SEQ ID NO: 14的CDR2、序列SEQ ID NO: 19的CDR3 ;并且，该VL链含有序列SEQ ID N0:20 的 CDR1、序列 RTS 的 CDR2、序列 SEQ ID N0:21 的 CDR3。
15. -种治疗或预防癌症、自身免疫疾病、炎症病症、病毒传染或病毒性疾病的方法，包 括给予包括人类的哺乳动物有效量的根据权利要求1至10、13和14中任一项所述的组合 物或多肽。
【专利摘要】本发明公开了抗DR5家族成员的抗体和双特异性的抗体，包括一种或多种抗DR5家族成员的抗体。这些抗体可以用于引发DR5阳性细胞的细胞死亡。
【IPC分类】C07K16-28
【公开号】CN104619725
【申请号】CN201380036952
【发明人】克劳丁·布丽奇特·费尔南德·瓦瑞默特-迪斯洛契斯, 奥利维尔·弗里德里克·素贝格, 劳伦斯·弗朗索瓦丝·珍妮-玛丽·布尔丹
【申请人】国际生物技术药物开发公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2013年7月9日
【公告号】CA2878790A1, EP2684896A1, EP2877491A1, US20150139997, WO2014009358A1