[0069] 所述扩增所述昆虫的持家基因的成套DNA分子具体为如下A所示的成套DNA分 子：
[0070] A、由SEQ ID No. 5所示的DNA分子和SEQ ID No. 6所示的DNA分子组成的成套 DNA分子；
[0071] 所述精氨酸激酶的氨基酸序列具体如SEQ ID No. 4所示，所述精氨酸激酶基因的 核苷酸序列具体如SEQ ID No. 3所示；
[0072] 所述SEQIDNo. 5所示的DNA分子和所述SEQIDNo.6所示的DNA分子可以混合 包装也可以独立包装。
[0073] 上述任一所述的生境适合度是指昆虫个体在一定生境环境中，能生存并传递其基 因于下代的能力，生境适合度可以通过待测昆虫的存活率来体现。
[0074] 本发明的实验证明，可以通过检测精氨酸激酶基因表达量来检测不同种群的昆虫 的生境适合度，特别是不同生境中的亚洲小车蝗的生境适合度。
[0075] 采用本发明提供的引物对及方法检测昆虫的生境适合度仅需2-3天，而用传统的 生物学方法需要30-60天左右。本发明提供的检测方法涉及的材料来源广，易购买，操作简 单，省时，省力，适合于在昆虫商品检验检测中推广应用。
【附图说明】
[0076] 图1为亚洲小车蝗EF内参扩增曲线。
[0077] 图2为亚洲小车蝗EF内参融解曲线。
[0078] 图3为亚洲小车蝗精氨酸激酶基因扩增曲线。
[0079] 图4为亚洲小车蝗精氨酸激酶基因融解曲线。
[0080] 图5为不同生境中亚洲小车蝗精氨酸激酶基因的相对表达量。
[0081] 图6为亚洲小车蝗在不同生境中的存活率。
【具体实施方式】
[0082] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0083] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0084] 实施例1、用于扩增精氨酸激酶基因的引物的设计与合成
[0085] 根据亚洲小车蝗的精氨酸激酶基因设计并合成如下用于扩增该基因部分片段的 引物：
[0086] 上游引物 AK-F :5' -GGGGCAGAATGTGAGGAAA-3'（SEQ ID No. 1)
[0087] 下游引物 AK-R :5'-CCTGGTGGTGACTTGGGAC-3'（SEQ ID No. 2)
[0088] 亚洲小车蝗的精氨酸激酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 3所示，其精氨酸激酶 的氨基酸序列如SEQ ID No. 4所示。
[0089] 实施例2、检测亚洲小车蝗的生境适合度
[0090] 一、将亚洲小车幢（Oedaleus decorus asiaticus Bei-Bienko, 1941)根据其生 境的不同分为如下四组：
[0091] I组：糙隐子草群系中的亚洲小车蝗；
[0092] II组：羊草群系中的亚洲小车蝗；
[0093] III组：克氏针茅群系中的亚洲小车蝗；
[0094] IV组：冷蒿群系中的亚洲小车蝗；
[0095] 上述各组的亚洲小车蝗均为20只，一直到亚洲小车蝗自然死亡。
[0096] 上述各组的生境类型（如糙隐子草群系、羊草群系、克氏针茅群系和冷蒿群系）为 调查不同生境中植物的多样性，高度，盖度，密度，昆虫多样性等划分的生境类型。
[0097] 二、分别提取I组、II组、III组和IV组各组的亚洲小车蝗的RNA，并反转录分别 得到I组、II组、III组和IV组各组的亚洲小车蝗的cDNA。
[0098] 三、实时荧光定量PCR扩增
[0099] 分别以步骤二得到的I组、II组、III组和IV组各组的亚洲小车蝗的cDNA为模板， 以实施例1合成的上游引物AK-F和下游引物AK-R为引物，按照SYBR(R)Green I Nucleic A kit (Invitrogen产品，产品目录号为S7567)说明书进行RT-PCR，检测各组亚洲小车蝗的 精氨酸激酶基因（AK)的相对表达量，以亚洲小车蝗延伸因子EF基因（延伸因子基因）作 为内参基因，扩增该内参基因的引物为上游引物EF-F和下游引物EF-R。
[0100] 上游引物 EF-F :5' -AGAACGGACAAACTCGTGAGC-3' ；（SEQ ID No. 5)
[0101] 下游引物 EF-R:5' -AATAGGAACAAAGGCAACAGC-3'。（SEQ ID No. 6)
[0102] 以上RT-PCR反应体系如表1所示，RT-PCR反应条件如表2所示。
[0103] 表1RT-PCR反应体系
[0104]
【主权项】
1. 检测精氨酸激酶基因表达量的物质在鉴定或辅助鉴定昆虫的生境适合度中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测精氨酸激酶基因表达量的物质 包含如下（1)-(6)所示的产品中的至少一种： (1) 成套DNA分子，由SEQIDNo. 1所示的DNA分子和SEQIDNo. 2所示的DNA分子组 成； (2) 成套DNA分子组合物，由（1)所述的成套DNA分子和扩增所述昆虫的持家基因的成 套DNA分子组成； (3) 含有⑴所述的成套DNA分子的试剂盒； (4) 含有（2)所述的成套DNA分子组合物的试剂盒； (5) 精氨酸激酶； (6) 精氨酸激酶基因。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述扩增所述昆虫的持家基因的成套DNA 分子为如下A所示的成套DNA分子： A、由SEQIDNo. 5所示的DNA分子和SEQIDNo. 6所示的DNA分子组成的成套DNA分 子。
4. 根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述昆虫为亚洲小车蝗。
5. 鉴定或辅助鉴定昆虫的生境适合度的方法，包括如下步骤：检测名称为A生境和B 生境的两种生境中的同一种待测昆虫的精氨酸激酶基因表达量，如果A生境的所述待测昆 虫的精氨酸激酶基因表达量高于B生境的所述待测昆虫的精氨酸激酶基因表达量，则所述 待测昆虫在A生境中的生境适合度低于或候选低于所述待测昆虫在B生境中的生境适合 度。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述待测昆虫的精氨酸激酶基因表达量 的检测方法包括如下步骤：以所述待测昆虫的cDNA为模板，以SEQIDNo. 1所示的DNA分 子和SEQIDNo. 2所示的DNA分子为引物，进行实时荧光定量PCR，得到所述待测昆虫的精 氨酸激酶基因表达量； 所述实时荧光定量PCR的内参基因具体为EF基因； 所述实时荧光定量PCR中，用SEQIDNo. 5所示的DNA分子和SEQIDNo. 6所示的DNA分子组成的引物对扩增所述EF基因。
7. 根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述昆虫为亚洲小车蝗。
8. 成套DNA分子，由SEQIDNo. 1所示的DNA分子和SEQIDNo. 2所示的DNA分子组 成； 或， 成套DNA分子组合物，由SEQIDNo. 1所示的DNA分子和SEQIDNo. 2所示的DNA分 子组成的成套DNA分子和扩增昆虫的持家基因的成套DNA分子组成。
9. 鉴定或辅助鉴定昆虫的生境适合度的试剂盒，该试剂盒包含权利要求8所述的成套 DNA分子； 或， 鉴定或辅助鉴定昆虫的生境适合度的试剂盒，该试剂盒包含权利要求8所述的成套 DNA分子组合物。
10.权利要求5-7任一所述的方法和/或检测精氨酸激酶基因表达量的物质在如下A-F任一所示中的应用： A、 昆虫的栖息地风险评价； B、 昆虫监测预警； C、 昆虫宜生区划分； D、 评价昆虫生活环境的恶化情况； E、 鉴定或辅助鉴定昆虫对环境的适应程度； F、 鉴定或辅助鉴定昆虫在生境中的生活力； 所述昆虫具体为亚洲小车蝗； 所述检测精氨酸激酶基因表达量的物质具体包含如下（1)-(6)所示的产品中的至少 一种： (1) 成套DNA分子，由SEQIDNo. 1所示的DNA分子和SEQIDNo. 2所示的DNA分子组 成； (2) 成套DNA分子组合物，由（1)所述的成套DNA分子和扩增所述昆虫的持家基因的成 套DNA分子组成； (3) 含有⑴所述的成套DNA分子的试剂盒； (4) 含有（2)所述的成套DNA分子组合物的试剂盒； (5) 精氨酸激酶； (6) 精氨酸激酶基因。
【专利摘要】本发明公开了一种用精氨酸激酶基因检测昆虫的生境适合度的方法。本发明公开如下(1)-(6)任一所示的产品在鉴定或辅助鉴定昆虫的生境适合度中的应用。采用本发明提供的引物对及方法检测昆虫的生境适合度仅需2-3天，而用传统的生物学方法需要30-60天左右。本发明提供的检测方法涉及的材料来源广，易购买，操作简单，省时，省力，适合于在昆虫商品检验检测中推广应用。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104762378
【申请号】CN201510140983
【发明人】秦兴虎, 张泽华, 黄训兵, 马景川, 刘静雨
【申请人】中国农业科学院植物保护研究所
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年3月27日