一种从盐渍萝卜中制备对羟基苯甲醛的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及活性药物的技术领域，尤其涉及一种从盐渍萝卜中制备对羟基苯甲醛 的方法。
【背景技术】
[0002] 对羟基苯甲醛（4-羟基苯甲醛）广泛分布于自然界中，植物、海洋生物中都存在对 羟基苯甲醛。它们或作为某些植物或食品中的挥发性成分，或是某些海洋生物的代谢物产 物，对一些人体致病菌如金黄色葡萄球菌、白色念珠菌以及其他海洋细菌等都具有很好的 抑菌效果。在现有技术中，在萝卜中还鲜有报道对羟基苯甲醛的存在。
[0003] 有鉴于此，本发明人研宄和设计了一种从盐渍萝卜中制备对羟基苯甲醛的方法， 本案由此产生。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种从盐渍萝卜中制备对羟基苯甲醛的方法，通过在盐渍 萝卜中加入抽提液逐步抽提后，并通过反相硅胶柱及正相硅胶柱的色谱分离，最终制得对 羟基苯甲醛，本发明首次从盐渍萝卜中分离到了对羟基苯甲醛，该成分是盐渍萝卜中抑制 真菌的活性物质。
[0005] 为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：
[0006] 一种从盐渍萝卜中制备对羟基苯甲醛的方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤一、盐渍萝卜干粉的制备：将盐渍萝卜切成薄片，于50°C下烘干，粉碎，过20 目筛，得盐渍萝卜干粉，装于密封袋中，干燥器中保存备用；
[0008] 步骤二、盐渍萝卜粗提物的制备：称取已烘干粉碎的5年盐渍萝卜粉2份，每份 20g，分别置于2个500mL三角瓶中，按料液比1:15分别加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于 摇床中，40°C，150rpm下提取6h，抽滤，收集滤液；再向残渣中加入相应溶剂进行第二次提 取，在同样的条件下提取3h，抽滤，收集滤液，待残渣中溶剂挥干后，再交换溶剂提取1次， 提取条件同第二次提取，合并滤液，40°C减压浓缩至圆底烧瓶中，回收溶剂，分别得乙酸乙 酯和丙酮提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到盐渍萝卜粗提物，4°C贮存备 用；
[0009] 步骤三、盐渍萝卜粗提物的初步分离：将盐渍萝卜粗提物用甲醇溶解后过滤，40°C 减压浓缩后上含170g填料的S印hadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，控制流 速为5~9s/drop，使用自动收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流 份；合并第48至第63管的流份，再进行减压浓缩，得到组分Yl ;
[0010] 步骤四、组分Yl的分离纯化：组分Yl用适量甲醇溶解后，直接上含170g填料的 Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，经若干次凝胶柱分离，最终收集得到 31管流份，合并第11至第15管流份得310mg样品，将该部分标记为组分1-2 ;
[0011] 步骤五、组分1-2的分离纯化：组分1-2加适量甲醇溶解后，过反相硅胶柱进行分 离，以50% CH3OH进行洗脱，洗脱体积为1L，每200mL收集1个流份，共收集得到5个流份， 45°C减压浓缩除去溶剂后，选择第1个流份用正相硅胶进行分离；将正相硅胶分离后的2mg 样品用IOmg硅胶粉拌样，0. 08g硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后，用石油醚进行洗 脱，收集第20至第32管的流份，合并流份后浓缩，蒸干溶剂后，制得对羟基苯甲醛。
[0012] 作为实施例的优选方式，所述步骤五中采用的正相硅胶柱进行分离的步骤为：
[0013] (1)硅胶粉活化
[0014] 取200~300目硅胶粉于试剂瓶中，用扎孔的锡箔纸包好瓶口，置于IKTC烘箱中 活化2~3h，冷却后封好瓶口置于干燥器中，备用；
[0015] ⑵拌样
[0016] 根据样品的量4mg，向干净的圆底烧瓶中硅胶粉20mg，用胶头滴管吸取样品液滴 至圆底烧瓶中的硅胶粉上，迅速搅拌均匀并间歇用电吹风给圆底烧瓶加热以使溶剂快速挥 干，使样品呈均匀粉末状，如此重复，直至样品全部吸附于硅胶粉上，继续加热，使样品中的 溶剂完全挥发，用滤纸封口后置于干燥器中备用；
[0017] ⑶装柱
[0018] 采用湿法装柱，称取0. 2g硅胶用石油醚饱和后装柱；
[0019] ⑷上样
[0020] 采用干法上样，将吸附有样品的硅胶粉装至层析柱中，使其均匀沉降于硅胶层表 面，待样品沉降完全，打开阀门，收集洗脱液；
[0021] (5)样品洗脱
[0022] 梯度洗脱：先用初始洗脱剂对样品进行洗脱，然后逐渐增加洗脱剂的极性，洗脱过 程中用泵加压并用薄层层析TLC追踪，直至目标点被洗脱；
[0023] (6)样品的收集与合并
[0024] 用小试管分部收集样品，将含有目标点的样品管按照出柱顺序合并为几个部分， 减压浓缩后，继续进行薄层层析，根据样品的具体情况继续进行分离或者合并浓缩后4°C贮 减备用。
[0025] 作为实施例的优选方式，所述薄层层析TLC追踪为：将GF254硅胶板于IKTC烘 箱中活化2~3h，待其自然冷却至室温后取出，置于干燥器中备用，用玻璃毛细管吸取适 量样品，点于硅胶板基线上，并在样点下端用铅笔做好标记，硅胶板上基线距板底端距离为 0· 8~lcm，两样点之间的距离不小于0· 8cm，用吹风机吹干溶剂后，置于装有饱和层析液的 层析缸中展开，待溶剂前沿展至距薄层板顶端约Icm时，用镊子取出，吹干溶剂，用紫外分 析仪和其它显色剂进行显色。
[0026] 作为实施例的优选方式，还包括对羟基苯甲醛的结构鉴定：将过正相硅胶柱后制 得的对羟基苯甲醛装入核磁管中，蒸干溶剂，加入氘代试剂，以TMS作为内标，使用400MHz 核磁共振仪测定化合物的核磁谱，测定项目包括1H-NMR、13C-NMR、DEPT 90、DEPT 135^H-1H COSY、HSQC、HMBC ;将样品用含5%甲酸的甲醇溶液溶解后测定质谱，质谱条件：电离源： 电喷雾电离源；干燥气温度：200°C ;干燥气压力：20psi ;雾化气压力：50psi ;雾化室温度 50°C ;针孔电压：5000V ;屏蔽电压：600V ;毛细管电压：80V。
[0027] 本发明采用上述技术方案后，通过在盐渍萝卜中加入抽提液逐步抽提，并通过反 相硅胶柱及正相硅胶柱的色谱分离，最终制得对羟基苯甲醛，本发明从盐渍萝卜中首次分 离到了对羟基苯甲醛，该成分是盐渍萝卜中抑制真菌的活性物质。
【附图说明】
[0028] 图1是本发明Y3的薄层层析结果；其中，展开剂石油醚：乙酸乙酯=5:1，碘显示；
[0029] 图2是本发明Y3的结构图。
【具体实施方式】
[0030] 本发明揭示了一种从盐渍萝卜中制备对羟基苯甲醛的方法，包括以下步骤：
[0031] 步骤一、盐渍萝卜干粉的制备：将盐渍萝卜切成薄片，于50°C下烘干，粉碎，过20 目筛，得盐渍萝卜干粉，装于密封袋中，干燥器中保存备用；
[0032] 步骤二、盐渍萝卜粗提物的制备：称取已烘干粉碎的5年盐渍萝卜粉2份，每份 20g，分别置于2个500mL三角瓶中，按料液比1:15分别加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于 摇床中，40°C，150rpm下提取6h，抽滤，收集滤液；再向残渣中加入相应溶剂进行第二次提 取，在同样的条件下提取3h，抽滤，收集滤液，待残渣中溶剂挥干后，再交换溶剂提取1次， 提取条件同第二次提取，合并滤液，40°C减压浓缩至圆底烧瓶中，回收溶剂，分别得乙酸乙 酯和丙酮提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到盐渍萝卜粗提物，4°C贮存备 用；
[0033] 步骤三、盐渍萝卜粗提物的初步分离：将盐渍萝卜粗提物用甲醇溶解后过滤，40°C 减压浓缩后上含170g填料的S印hadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，控制流 速为5~9s/drop，使用自动收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流 份；合并第48至第63管的流份，再进行减压浓缩，得到组分Yl ;
[0034] 步骤四、组分Yl的分离纯化：组分Yl用适量甲醇溶解后，直接上含170g填料的 Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，经若干次凝胶柱分离，最终收集得到 31管流份，合并第11至第15管流份得310mg样品，将该部分标记为组分1-2 ;
[0035] 步骤五、组分1-2的分离纯化：组分1-2加适量甲醇溶解后，过反相硅胶柱进行分 离，以50% CH3OH进行洗脱，洗脱体积为1L，每200mL收集1个流份，共收集得到5个流份， 45°C减压浓缩除去溶剂后，选择第1个流份用正相硅胶进行分离；将正相硅胶分离后的2mg 样品用IOmg硅胶粉拌样，0. 08g硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后，用石油醚进行洗 脱，收集第20至第32管的流份，合并流份后浓缩，蒸干溶剂后，制得对羟基苯甲醛。
[0036] 作为实施例的优选方式，所述步骤五中采用的正相硅胶柱进行分离的步骤为：
[0037] (1)硅胶粉活化
[0038] 取200~300目硅胶粉于试剂瓶中，用扎孔的锡箔纸包好瓶口，置于IKTC烘箱中 活化2~3h，冷却后封好瓶口置于干燥器中，备用；
[0039] (2)拌样
[0040] 根据样品的量4mg，向干净的圆底烧瓶中硅胶粉2