圈为26-30mm，其它7种都达到30-35mm，抑菌率统计法中，抑菌率78. 00-88. 20%。即抑菌 圈26-35mm，抑菌率78. 00-88. 20%，均属于强抑菌活性，具有研制新杀菌剂的潜力。
[0031] 实施例3 :在CT-2628菌株在植物活体的定植
[0032] 所试方法均为植物定植常规测试方法：CT-2628做利福平标记后上述方法培养发 酵，番茄苗、黄瓜苗浸入发酵菌液，分别栽入普通耕作土和海滨盐渍土（NaCl含量0. 5% ) 的盆钵，分别在1、3、5、7、10、15天将苗各组织研磨，取样在添加利福的平板培养基上培养 观察，并折算成每克检样细菌菌落个数（cfu/g)，结果证明CT-2628菌株无论在普通耕作 土还是海滨盐渍土的栽种的黄瓜、番茄、辣椒、甘蓝、甜瓜、茄子都可以正常定植，浸根栽种 5天后根、茎、叶的最高定植数分别可达6. OOX 103、8. 30X 103、4. 65X 103,处理后15天后， CT-2628在番茄内部仍能维持在一个较好的水平。
[0033] 表2浸根栽种5天后CT-2628在植物体内定植情况
[0036] 实施例4 :CT_2628菌株对植物活体防治病害作用
[0037] 常规方法对植物病害做防治和治疗测试，防治先在盆栽植株上喷施菌株CT-2628 发酵液，24小时后，喷病原菌孢子悬浮液；治疗相反先接种病原菌，后喷施菌株发酵液，1周 后进行病情调查，以喷粉锈宁作为阳性对照，喷清水作为阴性对照，计算防治效果（％)。
[0038]
[0039] 上表数据证明，盆栽植物病害的防治，CT-2628对4种栽培植物病害，具有 很好的防治效果，其中预防效果最好，防治效率可达77. 1% -89.0%，治疗效果稍低 59. 0% -62. 4%，预防与治疗效果均高于传统的化学农药多菌灵。
[0040] 实施例5 :CT-2628菌株对植物诱导抗逆作用
[0041] 所试方法均为植物植物诱导抗逆常规测试方法：（1)抗寒测试：番茄苗栽入普通 耕作土的盆钵，分别置低温（(TC -2°C )培养2天，喷施CT-2628发酵液处理苗与清水（对 照CK)进行比较；（2)抗盐测试：番茄苗栽入海滨盐渍土（NaCl含量0. 5% -0. 6% )的盆钵， 培养10天，浇灌CT-2628发酵液处理苗与清水（对照CK)进行比较.分别测试电解质外渗 率（REC)，可溶性糖（SS)，超氧化物歧化酶（SOD)，过氧化物酶（POD)，丙二醛（MDA)，脯氨酸 (Pro)的含量
[0042] 表3CT-2628诱导植物抗逆过程番茄防御酶等指标的变化
[0044] 注：①电解质外渗率（REC)，可溶性糖（SS)，超氧化物歧化酶（SOD)，过氧化物酶 (POD)，丙二醛（MDA)，脯氨酸（Pro)，②表示未测，负数表示降低
[0045] 植物在盐、寒等逆境胁迫条件下受害，脂质过氧化产物（MDA)的含量，对膜损伤程 度具有重要的指示作用。电解质外渗率（REC)是细胞质膜是否受到寒害的指标，电导率越 高，说明受到的伤害越重。植物细胞的可溶性糖含量与植物的抗寒、抗盐性呈正相关，可溶 性糖保护植物原生质体和蛋白质。脯氨酸（Pro)、超氧化物歧化酶（SOD)，过氧化物酶（POD) 的积累，通过维持渗透调节，稳定蛋白质，保护细胞膜结构的稳定，因此，这些反应被作为衡 量植株抗逆性的重要指标。
[0046] 植物在逆境条件下，电解质外渗率（REC)和丙二醛（MDA)越低，可溶性糖（SS)， 超氧化物歧化酶（SOD)，过氧化物酶（POD)，脯氨酸（Pro)越高，抗逆能力越强，表3显示在 (TC _2°C的低温条件下CT2628菌株诱导植物抗寒的效果显著，番茄电解质外渗率和丙二醛 含量分别降低了 98. 66%和63. 12%，可溶性糖、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、脯氨酸分别 提高了 62·47%，62· 16%，205· 13%，342· 11%。在盐害 NaC10.5-0.6%胁迫下，经 CT2628 菌株处理，丙二醛降低了 72. 38%，可溶性糖、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、脯氨酸分别 提高了，可溶性糖、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、脯氨酸分别提高了 80. 47%，89. 33%， 117. 44%，230. 53%，这些指标的变化间接证明CT2628菌株诱导植物抗逆效果显著。
[0047] 尽管上面已经描述了本发明的具体例子，但是有一点对于本领域技术人员来说是 明显的，即在不脱离本发明的精神和范围的前提下可对本发明作各种变化和改动，都在本 发明的保护范围内，对于上述实施例进行修改，添加和替换，其都没有超出本发明的保护范 围。
【主权项】
1. 一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，为从海洋生境获得海洋芽孢杆菌 CT2628菌株（Bacillus sp.)，经人工诱变育种和培养条件优化，其适宜的人工培养发酵的 条件为： 1) 以其保藏编号为：CGMCC No. 8921的CT2628菌株，菌株经培养基优化测试，其适宜的 发酵培养液的配方为：牛肉膏l_3g，蛋白胨2-3g，酵母粉l-3g，葡萄糖l-3g，NaCl，20-25g， KC10. 3-0. 5g，MgCl2 ? 7H201. 9-2. 5g，FePO40.0 1-0. 02g，水 1000ml，pH7. 0-8. 0 上述为培养 液，加琼脂16_19g为固体培养基； 2) 菌株在上述固体培养基置23°C -28°C温箱培养3-5天，将固体培养基生长好的菌体 刮下，接入步骤1中的培养液培养3天为种子液，再将种子液按I : 10接入40-50L上述培养 液中，23°C _28°C，转速150rpm，振荡培养3-5天获得发酵物，根据需要可用相同方法扩大到 目标培养量。2. 根据权利要求1所述的一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，其特征在于： 菌株特性为菌落浊黄色，表面大多有褶，有时光滑，后期在蛋白胨培养基上产生深蓝色素； 菌体杆状，革兰氏染色阳性0. 6-1. 9 ii mX 2. 9-5. 9 ii m，无荚膜，周生鞭毛，芽孢中生，聚集成 链状，水解淀粉，明胶、接触酶、VP试验均为阳性，能利用葡萄糖、木糖、阿拉伯糖产酸，酪氨 酸水解阴性，不分解木质素，还原硝酸盐，利用柠檬酸盐。3. 根据权利要求1所述的一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，其特征在：经 过海洋生境芽孢杆菌CT2628菌株处理，在低温0°C _2°C条件下番茄电解质外渗率和丙二 醛含量分别降低了 98. 66%和63. 12%，可溶性糖、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、脯氨酸 分别提高了 62.47%，62.16%，205.13%，342.11%，在盐害恥(：10.5-0.6%胁迫下，丙二 醛降低了 72. 38%，可溶性糖、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、脯氨酸分别提高了 80.47%， 89. 33%，117. 44%，230. 53%，CT2628菌株诱导植物抗寒及抗盐效果显著。4. 根据权利要求1所述的一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，其特征 在于：海洋芽孢杆菌菌株采用常规的对峙培养法和抑菌率统计法筛选获得，靶标菌为 在农业生产危害严重的9种植物病原真菌：稻癌霉菌Pyricularia oryzae、爺链孢菌 Alternaria solani、鎌抱霉菌 Fusarium oxysporum、灰葡萄抱菌 Botrytis cinerea、 大而轮枝菌Verticillium dahliae、芽枝霉菌Cladosporium fulvum、辣椒疫霉菌 Phytophthoracapsici、丝核菌 Rhizoctonia solani 赤霉菌 Fusarium graminearum 作为革巴 标菌进行抑菌测试，对峙培养法抑菌圈26-35mm，抑菌率统计法抑菌率78. 00-88. 20 %，均 属于强抑菌活性。5. 根据权利要求1所述的一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，其特征在于： 海洋芽孢杆菌菌株在普通耕作土及海滨盐渍土的栽种的黄瓜、番茄、辣椒、甘蓝、甜瓜、茄子 均可以正常定殖，浸根栽种4-6天后在植物根、茎、叶的最高定植数分别可达6. OOX 103、 8. 30 X 103、4. 65 X 103,定殖群体数可维持15-20天。6. 根据权利要求1所述的一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，其特征在于： 海洋芽孢杆菌菌株对黄瓜、番茄、辣椒的白粉、早疫、疫霉、灰霉4种病害，预防效果可达 77. 1% -89.0%，治疗效果59.0% -62. 4%，预防与治疗效果均高于传统的化学农药多菌 灵。
【专利摘要】本发明公开一株诱导植物抗病抗逆的海洋生境芽孢杆菌，为从海洋生境获得海洋芽孢杆菌CT2628菌株(Bacillus？sp.)，经人工诱变育种和培养条件优化，其适宜的人工培养发酵的条件为：以其保藏编号为：CGMCC？No.8921的CT2628菌株，其适宜的发酵培养液的配方为：牛肉膏1-3g，蛋白胨2-3g，酵母粉1-3g，葡萄糖1-3g，NaCl，20-25g，KCl0.3-0.5g，MgCl2·7H2O1.9-2.5g，FePO40.01-0.02g，水1000ml，pH7.0-8.0上述为培养液。优点：具有诱导植物抗病、抗盐、抗寒的海洋生境芽孢杆菌及在农业上应用。CGMCC No892120140317
【IPC分类】A01N63/02, C12R1/07, C12N1/20, A01P3/00
【公开号】CN105018367
【申请号】CN201410168402
【发明人】陈杰, 田黎
【申请人】浙江农林大学, 青岛科技大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月18日