一种雪莲果蛋白多肽及其应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗动脉粥样硬化的多肽提取物。
【背景技术】
[0002] 动脉粥样硬化（Atherosclerosis)是由于脂肪、血栓、结缔组织和碳酸钙在血管 (主要是动脉，但也包括静脉）沉积所造成的一种对人体有害的状态。其特点是动脉管壁增 厚变硬、失去弹性和管腔缩小。动脉粥样硬化的症状主要决定于血管病变及受累器官的缺 血程度，主动脉粥样硬化常无症状，冠状动脉粥样硬化者，若管径狭窄达75 %以上，则可发 生心绞痛、心肌梗塞、心律失常，甚至猝死。脑动脉硬化可引起脑缺血、脑萎缩，或造成脑血 管破裂出血，肾动脉粥样硬化常引起夜尿、顽固性高血压、严重者可有肾功能不全。肠系膜 动脉粥样硬化可表现为饱餐后腹痛便血等症状。下肢动脉粥样硬化引起血管腔严重狭窄者 可出现间歇性跛行、足背动脉搏动消失，严重者甚至可发生坏疽。动脉粥样硬化是一组称为 动脉硬化的血管病中最常见、最重要的一种。
[0003]目前预防和治疗动脉粥样硬化的药物，主要为针对控制易患因素。如患有动脉粥 样硬化、应及时控制血糖，包括饮食控制。2型动脉粥样硬化的降糖药物应以不引起高胰岛 素血症为宜如达美康等；如有高血压则应给降压药，使血压降至适当水平，如有血胆固醇增 高，则应控制高胆固醇适当给予降脂药物。
[0004] 雪莲果，学名"yacon"（亚贡，或者阿贡），即"神果"之意，在中国四川被称作"万 根苕"，属菊科，是一种菊科多年生草本植物，菊薯属植物，故又称为菊薯，不仅能作为食品 和水果，还具有非常强的药用价值。雪莲果帮助消化，调理和改善消化系统的不良状况。因 雪莲果富含水溶性膳食纤维和所有植物含量最高的果寡糖，所以能显著促进肠胃蠕动，润 肠通便，不仅能消除便秘，还可防治下痢，是肠胃道疾病的克星。最近的研究发现，雪莲果调 理血液，能降低血糖、血脂和胆固醇，可预防和治疗高血压、糖尿病，对心脑血管疾病和肥胖 症等也有一定疗效。故雪莲果蛋白可用于治疗动脉粥样硬化。尽管如此，并没有成熟开发 的从雪莲果蛋白提取物问世，用于预防或治疗动脉粥样硬化。
【发明内容】
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[0005] 本发明目的是针对现有治疗动脉粥样硬化的药物特点，设计一种雪莲果蛋白多 肽，能安全、有效治疗动脉粥样硬化。
[0006] 技术方案
[0007] -种雪莲果蛋白多肽，其序列为ERDEFEKYDKVHNIRPKMVS。所述多肽的制备方法，其 特征在于：步骤包括（1)将晒干的雪莲果磨制成粉末，过50-100目筛，（2)加碱水溶解，（3) 离心5000-7000rpm，20-30分钟，取沉淀，（4)将沉淀溶解，调pH值至1-2,（5)加非限制性 水解蛋白酶酶解；(6)蛋白质分离，（7)半制备RP-HPLC分离纯化，（8)冻干所述的非限制性 水解蛋白酶酶解采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解。所述的蛋白质分离采用大孔树 月旨、葡聚糖凝胶。所述多肽在治疗动脉粥样硬化的应用。
[0008] 有益结果：
[0009] 本发明中的雪莲果蛋白多肽，是从雪莲果蛋白中提取多肽，安全性好，而且能有效 的预防或治疗动脉粥样硬化。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1
[0011] 多肽的制备方法
[0012] 将晒成干的雪莲果磨制成粉末，过50目筛，加入NaOH溶液中溶解，离心5000rpm， 30分钟，取沉淀，将沉淀溶解，调pH值至1-2,加1 %胃蛋白酶和0. 5 %胰蛋白酶的复合酶 酶解30分钟后，用葡聚糖凝胶分离蛋白质，再用半制备RP-HPLC分离纯化，得到的产物冻 干后，即为雪莲果蛋白多肽。应用上述方法提取的雪莲果蛋白多肽，经过质谱鉴定，序列为 ERDEFEKYDKVHNIRPKMVS，该序列为全新序列。或由上海生工合成。
[0013] 实施例2
[0014] 雪莲果蛋白多肽对小鼠动脉粥样硬化模型的影响
[0015] 建立小鼠动脉粥样硬化模型。雄性8周龄的C57BL/6J小鼠40只，随机分为4组， 分别为：A组为空白对照组：普通饲料喂养；B组为模型对照组：造模+高脂饲料喂养；C组 为药物干预组：造模+高脂饲料+雪莲果蛋白多肽（l〇mg/kg/d) ;D为阳性药干预组：造模 +高脂饲料+奥利司他片（20mg/kg/d)。连续12周。A组小鼠饲料为普通饲料，B、C、D组 小鼠用高脂高胆固醇饲料（含15%猪油+0. 25%胆固醇）喂养，以加速动脉粥样硬化模 型的形成。12周后，记录小鼠体重，检测多肽对血清胆固醇的影响：血清总胆固醇（total cholesterol，TC)、甘油三酯（tryglyeride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoproteincholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇（lowdensitylipoprotein cholesterol，HDL-C)的水平；，检测小鼠主动脉粥样硬化形成情况：对小鼠主动脉大体和 主动脉根部冰冻切片行油红〇染色，对动脉粥样斑块面积进行定量。
[0016] 结果：各组实验小鼠实验期间体重都有增长趋势。随着喂养时间的变化，高脂饮食 喂养组的体重增长较正常饮食组快（P〈〇. 05,见表1)。多肽组小鼠体重增长与正常饮食组 相当（P>0. 05)，与模型组相比体重较轻（P〈0. 05)。多肽组与高脂高胆固醇喂养的模型小鼠 组相比，TG、TC、HDL-C、LDL-C水平显著降低（P〈0. 01，见表2)，动脉粥样斑块面积显著性减 小（P〈0. 01，见表3)，与模型对照组比较差异均有统计学意义。
[0017] 表1雪莲果蛋白多肽对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠体重的影响
[0018]
[0019] *p〈0. 05, #p〈0. 01与模型组相比
[0020] 表2雪莲果蛋白多肽对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠胆固醇的影响
[0021]
[0022] *p〈0. 05, #p〈0. 01与模型组相比
[0023] 表3雪莲果蛋白多肽对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠动脉粥样硬化面积的影响
[0024]
[0025] *p〈0. 05, **p〈0. 01 与模型组相比
[0026] 结论：雪莲果蛋白多肽对小鼠动脉粥样硬化具有治疗作用。
【主权项】
1. 一种雪莲果蛋白多肽，其特征在于：其序列为ERDEFEKYDKVHNIRPKMVS。2. -种权利要求1所述多肽的制备方法，其特征在于：步骤包括（1)将晒干的雪莲果 磨制成粉末，过50-100目筛，（2)加碱水溶解，（3)离心5000-7000rpm，20-30分钟，取沉淀， (4)将沉淀溶解，调pH值至1-2,（5)加非限制性水解蛋白酶酶解；（6)蛋白质分离，（7)半 制备RP-HPLC分离纯化，（8)冻干。3. 根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于：所述的非限制性水解蛋白酶 酶解采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解。4. 根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于：所述的蛋白质分离采用大孔 树脂、葡聚糖凝胶。5. 权利要求1-4任一项的多肽在治疗动脉粥样硬化的应用。
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及雪莲果蛋白多肽，能预防或治疗动脉粥样硬化。所述的多肽序列为ERDEFEKYDKVHNIRPKMVS。所述多肽的制备方法，步骤包括（1）将晒干的雪莲果磨制成粉末，过50-100目筛，（2）加碱水溶解，（3）离心5000-7000rpm，20-30分钟，取沉淀，（4）将沉淀溶解，调pH值至1-2，（5）加非限制性水解蛋白酶酶解；（6）蛋白质分离，（7）半制备RP-HPLC分离纯化，（8）冻干。所述的非限制性水解蛋白酶酶解采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解。所述的蛋白质分离采用大孔树脂、葡聚糖凝胶。所述多肽在治疗动脉粥样硬化的应用。本发明中的雪莲果蛋白多肽，是从雪莲果蛋白中提取多肽，安全性好，而且能有效的预防或治疗动脉粥样硬化。
【IPC分类】C12P21/06, A61K38/10, A61P9/10, C07K7/08
【公开号】CN105131088
【申请号】CN201510563580
【发明人】罗瑞雪
【申请人】苏州普罗达生物科技有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月8日