容】、精神和范围内对本文所述的产品及方 法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0034] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种CIK细胞的诱导培 养方法进行详细说明。
[0035] 实施例1:本发明所述诱导培养方法
[0036] 用抗CD8的抗体包被Τ75细胞培养瓶2-3小时；
[0037] 采集20ml血液，采用Ficoll分离液运用S巧mate离屯、管（购自STEMCE化公司） 分离外周血单个核细胞（PBMC); 阳03引将PBMC用X-VIV0 15培养基重悬，按照10X105个/ml的细胞密度接种在已包被 好的T75培养瓶中；加入lOOOU/mLIFN-λ，将细胞置于39°C、5%二氧化碳的培养箱中培养 12-24小时；
[0039] 培养后轻摇培养瓶2-5下，用移液管吸走培养基，重新加入新的X-VIV015培养 基将瓶底的所有细胞重悬，转移到新的无抗体包被的T75培养瓶中，并加入800U/mL的 IFN-λ、lOOU/mL的比-1α、30ng/ml的 0KT-3W及 550U/ml的比-2 溶液，诱导培养CIK细 胞；
[0040] 每日在显微镜下观察细胞的形态，并拍照。图1即是CIK细胞培养14天后的形态 图；由图1可知，绝大多数细胞呈圆形，且折光性很强，胞质明显。
[0041] 每隔两天进行细胞计数，并根据细胞密度补加X-VIV0 15培养基和IL-2细胞因 子；
[0042] 培养14天后，收集细胞进行细胞流式检测和杀伤活性检测；同时收集细胞培养液 进行细胞因子TGF-β和IL-10含量的检测。
[00创实施例2观有诱导培养方法
[0044] 采集20ml血液，采用Ficoll分离液分离外周血单个核细胞（PBMC); W45] 将PBMCX-VIVO15培养基重悬，按照10XΙΟ5个/ml的细胞密度接种在T75培养 瓶中；加入lOOOU/mLIFN-λ，将细胞置于37°C、5%二氧化碳的培养箱中诱导培养CIK细 胞；
[0046]第二天加入 800U/mL的IFN-λ、lOOU/mL的比-1α、30ng/ml的 0KT-3W及 550U/ ml的IL-2溶液，继续培养；
[0047] 每日在显微镜下观察细胞的形态，并拍照。根据镜检结果得知，多数细胞呈圆形， 且折光性较弱，胞质不明显，整体细胞形态不如本发明方法诱导培养的CIK细胞。
[0048] 每隔两天进行细胞计数，并根据细胞密度补加X-VIV0 15培养基和IL-2细胞因子
[0049] 养14天后，收集细胞进行细胞流式检测和杀伤活性检测；同时收集细胞培养液进 行细胞因子TGF-β和IL-10含量的检测。
[0050] 实施例3:本发明所述诱导培养方法
[0051] 用抗CD8的抗体包被T75细胞培养瓶2-3小时；
[0052] 采集20ml血液，采用Ficoll分离液运用S巧mate离屯、管（购自STEMCE化公司） 分离外周血单个核细胞（PBMC); 阳05引将PBMC用X-VIV0 15培养基重悬，按照10X105个/ml的细胞密度接种在已包被 好的T75培养瓶中；加入500U/mLIFN-λ，将细胞置于39°C、5%二氧化碳的培养箱中培养 12-24小时；
[0054] 培养后轻摇培养瓶2-5下，用移液管吸走培养基，重新加入新的X-VIV015培养 基将瓶底的所有细胞重悬，转移到新的无抗体包被的T75培养瓶中，并加入1400U/mL的 IFN-λ、150U/mL的比-1α、lOng/ml的 0KT-3W及lOOOU/ml的比-2 溶液，诱导培养CIK细 胞；
[0055] 每日在显微镜下观察细胞的形态，并拍照。根据镜检结果可知，绝大多数细胞呈圆 形，且折光性很强，胞质明显。
[0056] 每隔两天进行细胞计数，并根据细胞密度补加X-VIV0 15培养基和IL-2细胞因 子；
[0057] 培养14天后，收集细胞进行细胞流式检测和杀伤活性检测；同时收集细胞培养液 进行细胞因子TGF-β和IL-10含量的检测。
[0058] 实施例4 :本发明所述诱导培养方法
[0059] 用抗CD8的抗体包被T75细胞培养瓶2-3小时；
[0060] 采集20ml血液，采用Ficoll分离液运用S巧mate离屯、管（购自STEMCE化公司） 分离外周血单个核细胞（PBMC); 阳06U 将PBMC用X-VIVO15培养基重悬，按照10X105个/ml的细胞密度接种在已包被 好的T75培养瓶中；加入1200U/mLIFN-λ，将细胞置于39°C、5%二氧化碳的培养箱中培养 12-24小时；
[0062] 培养后轻摇培养瓶2-5下，用移液管吸走培养基，重新加入新的X-VIV015培养 基将瓶底的所有细胞重悬，转移到新的无抗体包被的T75培养瓶中，并加入600U/mL的 IFN-λ、50U/mL的比-1α、20ng/ml的 0KT-3W及 600U/ml的比-2 溶液，诱导培养CIK细 胞；
[0063]每日在显微镜下观察细胞的形态，并拍照。根据镜检结果可知，绝大多数细胞呈圆 形，且折光性很强，胞质明显。
[0064] 每隔两天进行细胞计数，并根据细胞密度补加X-VIV0 15培养基和IL-2细胞因 子；
[0065] 培养14天后，收集细胞进行细胞流式检测和杀伤活性检测；同时收集细胞培养液 进行细胞因子TGF-β和IL-10含量的检测。
[0066] 实施例5 :本发明所述诱导培养方法
[0067] 用抗CD8的抗体包被T75细胞培养瓶2-3小时；
[0068] 采集20ml血液，采用Ficoll分离液运用S巧mate离屯、管（购自STEMCE化公司） 分离外周血单个核细胞（PBMC); W例将PBMC用X-VIV0 15培养基重悬，按照10X105个/ml的细胞密度接种在已包被 好的T75培养瓶中；加入1500U/mLIFN-λ，将细胞置于39°C、5%二氧化碳的培养箱中培养 12-24小时；
[0070] 培养后轻摇培养瓶2-5下，用移液管吸走培养基，重新加入新的X-VIV015培养 基将瓶底的所有细胞重悬，转移到新的无抗体包被的T75培养瓶中，并加入lOOOU/mL的 IFN-λ、80U/mL的比-1α、50ng/ml的 0KT-3W及lOOU/ml的比-2 溶液，诱导培养CIK细 胞；
[0071] 每日在显微镜下观察细胞的形态，并拍照。根据镜检结果可知，绝大多数细胞呈圆 形，且折光性很强，胞质明显。
[0072] 每隔两天进行细胞计数，并根据细胞密度补加X-VIV0 15培养基和IL-2细胞因 子；
[0073] 培养14天后，收集细胞进行细胞流式检测和杀伤活性检测；同时收集细胞培养液 进行细胞因子TGF-β和IL-10含量的检测。 阳074] 实施例6:流式细胞仪检测结果 阳075] 将实施例1和实施例2中培养14天后收集的CIK细胞进行流式检测，取1X1〇6个 CIK细胞，250g离屯、5min去上清，用含10%FBS的PBS溶液清洗2次，避光加入CD4、CD25 抗体2. 5μL室溫解育30min，用含10%FBS的PBS溶液清洗2次；用500血RPMI1640培 养基重悬细胞并过滤，上流式细胞仪进行检测，结果见图2。 阳076] 由如图2所示，本发明所述方法中化eg细胞的比例为3.6%，现有技术中化eg细 胞的比例为6. 7%，明显高于本发明诱导培养方法（A和B)。本发明所述方法中效应细胞的 比例为34. 3%，现有技术中效应细胞的比例为20.8%，明显高于现有的培养方法（C和D)。 此外，将实施例3-实施例5的细胞培养液进行同样的检测，结果显示，由本发明培养出的 CIK细胞其效应细胞比例均高于实施例2,而化eg细胞的比例均低于实施例2,差异明显。 [0077] 实施例7 :ELASA法定量检测TGF-β和比-10含量 阳07引检测对象：实施例1和实施例2;
[0079] 将CIK细胞培养后的细胞培养液收集起来进行浓缩，为实验品；分别将TGF-β和 比-10标准品溶解，分别设置了 5个浓度，分