一种低成本高效乳酸菌培养基及其用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物培养发酵技术领域，具体地，涉及一种低成本高效乳酸菌培养基及其用途，专用于多种乳酸菌的快速、高密度培养。
【背景技术】
[0002]乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)是一类能够发酵糖类并产生乳酸、不形成芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。乳酸菌已经被广泛应用于食品发酵工业，从而提高食品营养价值，改善食品风味。但是，乳酸菌营养要求复杂，一般需要多种氨基酸酸类化合物、B族维生素、各种矿物元素等生长因子，不能利用复杂的碳水化合物。乳酸菌的传统培养基成分复杂，价格较高，其中MRS和M17培养基是目前最常用的两种乳酸菌培养基。MRS培养基包括蛋白胨、酵母提取物、柠檬酸二铵、葡萄糖、牛肉浸膏、MgS04.7H20、K2HP04、MnS04.4H20、乙酸钠、吐温80等10种营养成分；M17培养基包括植质蛋白胨、酵母提取物、抗坏血酸、MgS04.7H20、聚蛋白胨、牛肉浸膏、β -甘油磷酸二钠等7种营养成分。
[0003]杏鲍燕YPleurotus eryngii (DC.Ex.Fr.) Quel.]属于伞菌目(Aaricales)食用真菌，菌体肉质肥厚，口感鲜嫩，营养丰富。目前，杏鲍菇在我国的福建、江苏、广东、上海等地具有较大规模的工厂化栽培，年产量达50万吨以上，价格6-15元/公斤。在杏鲍菇栽培过程中产生大量的次等菇，是开发乳酸菌培养基的廉价原料，并且能够增加杏鲍菇工厂化栽培产业的经济价值。
[0004]因此，现有技术还有待改进和发展。
【发明内容】
[0005]鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种配方简单、原料易于购买、成本低廉的食品级乳酸菌培养基及其应用。
[0006]本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种乳酸菌培养基，其中，所述培养基组分包括杏鲍菇、乙酸钠和维生素B2。
[0007]所述的乳酸菌培养基，其中，所述乳酸菌培养基以1L计算，包括以下成分，各成分的浓度或用量:
杏鲍菇 100-200 g ；
乙酸钠 3-7 g ;
维生素 B2 0.1-2.5 mg 加蒸馏水补足1L。
[0008]所述的乳酸菌培养基，其中，所述乳酸菌培养基的pH值为6.8。
[0009]一种新型乳酸菌培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤:
(1)杏鲍菇的预处理:将杏鲍菇切成小块，称取100-200g杏鲍菇，加水100-200 mL，用打浆机打浆，再补水600-800 mL，转移至锅内煮沸20 min，用纱布过滤，取滤液；
(2)向滤液中添加3-7g乙酸钠和0.1-2.5 mg维生素B2，然后利用蒸馈水定容至1L ；
(3)利用NaOH或HCI溶液，将pH值调整至6.8，121°C湿热灭菌20 min。固体培养基需在步骤(2)的滤液中添加琼脂粉10-20 g/Lo
[0010]一种如上述乳酸菌培养基的应用，其中，所述乳酸菌包括乳酸乳球菌乳酸亚 ft (Lactococcus lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚 ft (Lactococcuslac tis subsp.cremoris)、植物乳杆菌(Lac tobacillus plan tarum)、副干酪乳杆菌(Lac tobacillus paracasei')、戊糖片球菌(Ped1coccus pen tosaceus)、鼠李糖乳杆菌(Lac tobacillus rhamnosus)等。
[0011]本发明的有益效果是:
(1)培养基配方成分简单，所用原料容易大批量获得，培养基制作方法简单；
(2)原料价格低廉，不需要传统乳酸菌培养基中的牛肉浸膏、蛋白胨、酵母提取物等价格高的原料，本发明培养基成本较传统培养基大幅降低；
(3)本发明提供的培养基能够用于培养多种乳酸菌，具有极佳的实用性，培养液菌体密度达到109 CFU/mL以上，菌液具有较强的存活能力。本发明提供的培养基接近、达到、甚至超过了传统培养基，完全达到实验室和生产的要求，可以很好的替代价格较高的传统培养基。
【附图说明】
[0012]图1为本发明培养基为液体培养基时的物理形态。
[0013]图2为乳酸乳球菌乳酸亚种在本发明培养基中的生长动态实验结果。
[0014]图3为植物乳杆菌在本发明培养基中的生长动态实验结果。
[0015]图4为乳酸乳球菌乳脂亚种在本发明培养基中的生长动态实验结果。
[0016]图5为副干酪乳杆菌在本发明培养基中的生长动态实验结果。
[0017]图6为戊糖片球菌在本发明培养基中的生长动态实验结果。
[0018]图7为鼠李糖乳杆菌在本发明培养基中的生长动态实验结果。
【具体实施方式】
[0019]下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。
[0020]本发明所用杏鲍菇是从超市随机购买。本发明所用乳酸菌菌株部分是本研究室分离、鉴定或收集获得，部分是通过市售购买获得，具体乳酸菌菌株包括乳酸乳球菌乳酸亚种(Lac tococcuslac tis subsp.lac tis) SLPE1-3菌株、乳酸乳球菌乳脂亚种 1.Lactococcuslactis subsp.cremoris) MG1363 菌株、植物乳杆菌{Lactobacillusplan tarum ) 1-3 菌株、副干酪乳杆菌(Zac tobacillus paracasei) M9_4 菌株、戊糖片球菌 QPed1coccuspentosaceus) SR2-6 菌株、鼠李糖乳杆菌 QLactobacillus rhamnosus)ATCC53103 菌株等。
[0021]以下实施例用于说明本发明，但并不限定于本发明。本领域的技术人员从本发明公开的内容直接或间接导出的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。若无特别说明，下述实施例中所用技术方法均为常规方法；若无特别说明，下述实施例中所用实验材料，均为常规材料和化学试剂。
[0022]以下所述的MRS培养基为:蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，柠檬酸二铵2 g，葡萄糖 20 g，牛肉浸膏 10 g，MgS04.7H20 0.58 g，MnS04.4H20 0.25 g，K2HP04 2 g，乙酸钠 2 g，吐温80 1 mL，蒸馏水定容至1000 mL，pH 6.8，121°C条件下湿热灭菌20 min。固体培养基需添加琼脂粉16 g/Lo
[0023]以下所述的M17培养基为:植质蛋白胨5 g，酵母提取物5 g，抗坏血酸0.5 g，MgS04.7H20 0.25 g，聚蛋白胨5 g，牛肉浸膏2.5 g，β -甘油磷酸二钠19 g，蒸馏水定容至1000 mL，121°C条件下湿热灭菌20 min。
[0024]实施例1: 一种新型乳酸菌培养基的制作方法
一种新型乳酸菌培养基，配置1 L所述乳酸菌培养基，由以下成分组成:杏鲍菇200 g、乙酸钠5 g和维生素B2 0.5 mg，其余用蒸馈水补足至1 L。
[0025]一种新型乳酸菌培养基的制作方法，其特征在于包括以下步骤:
(1)杏鲍菇的预处理:将杏鲍菇切成小块，称取200g杏鲍菇，加水200 mL，用打浆机打成楽，再补水600 mL，转移至锅内煮沸20 min，用纱布过滤，取滤液；
(2)向滤液中添加5g乙酸钠和0.5 mg维生素B2，然后利用蒸馈水定容至1000 mL ；
(3)利用1mol/L的NaOH或HCI溶液，将pH值调整至6.8，121°C湿热灭菌20 min ；
(4)结果分析:如图1，配置的液体培养基灭菌后基本透明，长时间放置不产生明显的沉淀，无分层现象，物理形态稳定。
[0026]实施例2:乳酸乳球菌乳酸亚种生长动态测定实验 (1)受试培养基:本发明培养基(简称PSR)、MRS和M17。
[0027](2)乳酸乳球菌乳酸亚种SLPE1-3菌株来源:本实验室从腐败杏鲍菇表面分离、鉴定获得。
[0028](3)本发明培养基:200 g杏鲍菇、5 g乙酸钠和0.5 mg维生素B2，其余用蒸馏水补足至1 L，pH值调整至6.8，121 °C湿热灭菌20 min。
[0029](4)乳酸菌种子液的制备:利用灭菌牙签挑取乳酸乳球菌乳酸亚种SLPE1-3菌株单菌落接种于MRS培养基，30°C静置培养14 h，作为种子菌液。
[0030](5)生长测定:将种子菌液分别以0.5% (v/v)比例接种到PSR、MRS和M17培养基中，每个处理3个重复。将接种好的培养基放置在30°C静置培养，分别于接种后0、3、9、18、30、48、72、120 h稀释涂布MRS固体平板，将涂布好的平板放置在30 °C静置培养，调查每个平板形成的单菌落个数，计算每毫升培养液中含有的乳酸菌细胞个数，即CFU/mL。
[0031](6)结果分析:结果发现(图2)，在培养的前48 h，乳酸乳球菌乳酸亚种在本发明培养基(PSR)中的菌体密度与传统培养基MRS及M17在一个数量级别，培养9_48 h期间，乳酸乳球菌乳酸亚种在三种培养基中的菌体密度在1.23-6.81X 109 CFU/mL之间；48 h后，3种培养基的菌体密度开始下降，特别是MRS培养基中的菌体密度在120 h迅速下降到1.45X 105 CFU/mL，但是本发明培养基的菌体密度为1.49X 108 CFU/mL，与M17培养基的菌体密度(1.45X108 CFU/mL)相近。这些结果表明，乳酸乳球菌乳酸亚种在本发明培养基中的生长显著优于MRS培养基，与M17培养基的培养效果相当。
[0032]实施例3:植物乳杆菌生长动态测定实验
(1)受试培养基:本发明培养基(简称PSR)、MRS和M17。
[0033](2)植物乳杆菌1-3菌株来源:本实验室从发酵蔬菜中分离、鉴定获得。
[0034](3)本发明培养基:100 g杏鲍菇、3 g乙酸钠和1.5 mg维生素B2，其余用蒸馏水补足至1 L，pH值调整至6.8，121 °C湿热灭菌20 min。
[0035](4)乳酸菌种子液的制备:利用灭菌牙签挑取植物乳杆菌1-3菌株单菌落接种于MRS培养基，30°C静置培养14 h，作为种子菌液。
[0036](5)生长测定:将种子菌液分别以0.5% (v/v)比例接种到PSR、MRS和M17培养基中，每个处理3个重复。将接种好的培养基放置在30°C静置培养，分别于接种后0、3、9、18、30、48、72、120 h稀释涂布MRS固体平板，将涂布好的平板放置在30 °C静置培养，调查每个平板形成的单菌落个数，计算每毫升培养液中含有的乳酸菌细胞个数，即CFU/mL。
[0037](6)结果分析:结果发