agents)等可以加入到组合物 中。
[0077] 在任何情况中，本领域技术人员会保证对这些添加剂以及其量进行选择以使之 不破坏本发明的组合物的希望的有利性质。例如，这些添加剂可以相应于组合物总重量的 0. 01-20%。当本发明组合物是乳液时，脂肪相基于组合物的总重量可以是5-80% (重量）、 优选5-50% (重量）。组合物中使用的乳化剂和共乳化剂从相关领域常规使用的那些中选 择。例如，它们可以以基于组合物总重量为0.3-30% (重量）的比例使用。
[0078] 本发明的第三个目的涉及所述肽化合物用作Clock激活物活性成分。"Clock激活 物"肽意味着能够增加Clock活性的任何生物学活性肽或衍生物，其通过增加Clock蛋白合 成（通过直接或间接调节Clock基因表达）或者通过其它生物学过程如Clock蛋白的稳定 化或者RNA信使转录物的稳定化。
[0079] 本发明的另一个目的涉及使用本发明的组合物以恢复昼夜节律及再同步皮肤细 胞的生物钟。
[0080] 本发明的一个具体实施方案是使用组合物激活细胞更新及刺激细胞代谢。更具体 地，本发明包括使用组合物降低由飞行时差和/或夜班工作导致的功能障碍。本发明有利 地涉及在组合物中使用所述肽化合物以遵循皮肤时间生物学，特别是应用夜间化妆处理形 式。
[0081] 本发明另一个实施方案包括使用组合物预防或者治疗衰老的皮肤迹象。"衰老 的皮肤迹象"包括但不限于由衰老导致的皮肤上的任何可见表现。具体地，这意味着皱 纹、细纹（finelines)、皮肤皲裂（chappedskin)、毛孔增大、瑕疵、紧度丧失（lossesin firmness)、褪色、衰老区域、角化病、胶原丧失、真皮和表皮的其他改变等。"衰老的皮肤迹 象"也意味着由衰老导致的皮肤和皮肤附件外观的任何改变，如角质层的表面粗糙、细纹和 皱纹，以及未系统地表现为改变的外观的任何皮肤内部改变，如真皮变薄或者暴露于紫外 (UV)照射之后皮肤的任何其他内部退化。更具体地，本发明涉及使用上述组合物以降低皮 肤疲劳迹象。
[0082] 本发明进一步的目的涉及使用有效量的本发明的肽活性成分以制备用于预防或 者对抗与昼夜节律功能障碍相关的病变的组合物。
[0083] 本发明最后一个目的涉及化妆处理方法，其特征在于将含有有效量的肽活性成分 的组合物局部施用于皮肤或皮肤附件，以恢复昼夜节律及再同步细胞的生物钟。
[0084] 另外，这种化妆处理方法特征在于为了具有皮肤抗衰老作用，所述组合物在睡觉 前施用以遵守皮肤的昼夜节律。事实上，在夜间，皮肤促进更新功能以及代谢合成过程。因 此，通过遵守皮肤的生物学节律，所述组合物的施用使得可以获得抗衰老作用（其刺激细 胞更新）以及再生作用（其因此降低衰老迹象）。
[0085] 下述实施例描述和证实本发明所述肽化合物的功效。所述化妆品配制物是本发明 的代表但是仅仅是举例，不应理解为限制本发明。
[0086] 实施例1 :证实肽SEQIDNO:1、SEQIDN0 :2和SEQIDN0 :3对培养的成纤维细 胞中Clock蛋白的表达的激活作用
[0087] 通过在培养的成纤维细胞中经western印迹评估Clock蛋白的表达而进行肽SEQ IDNO:1、SEQIDN0 :2和SEQIDN0 :3的激活作用研究。Western印迹技术是半定量方法， 其使得可以评估细胞中的Clock蛋白水平。
[0088] 方案：
[0089] 在（从 10-4M溶液）稀释至 1% 的肽SEQIDN0 :1、SEQIDN0 :2 和SEQIDN0 : 3的存在或不存在下，将培养的成纤维细胞在直径100mm的容器中在含有5 %C02的湿 润空气中在37°C培养18小时。漂洗细胞，然后用提取缓冲液（20mMTRIS，150mMNaCl， 10mMEDTA，0. 2%tritonX10)在蛋白酶抑制剂混合物（Sigma)存在下从支持物上取下。 由此提取的蛋白质在4°ClOOOOrpm离心10分钟，之后用BCA蛋白定量（dosing)试剂盒 (Pierce)定量。细胞裂解物与变性缓冲液混合并进行SDS-PAGE电泳。所用凝胶是4-12% Nupage(Invitrogen)。蛋白质然后转移到硝酸纤维素膜（Palcorporation)。膜在环境温 度下于5%PBS-乳和(λ1%tween20中饱和2小时，然后在4°C与1/1000稀释的抗Clock 一抗（Abeam)保温过夜，之后与稀释1/5000的抗兔二抗Iggy-过氧化物酶保温。经化学发 光底物进行观测。细胞中存在的蛋白质的定量评估用chemiimager软件（Alphainnotech CorporationUSA)进行。蛋白质的量表示为与未接受处理的对照条件相比的发光强度百分 比。
[0090] 结果：
[0091]Western印迹获得的结果显示用稀释至1%的肽SEQIDNO:1、SEQIDN0 :2和SEQ IDNO:3处理显著增加培养的成纤维细胞中的Clock蛋白的量。结果总结于下表1。
[0092] 表 1
[0093]
[0094] 结论：
[0095] 肽SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3使得可以增加培养的真皮细胞中 的Clock蛋白的表达。
[0096] 实施例2 :证实肽SEQIDN0 :1、SEQIDN0 :2和SEQIDN0 :3对皮肤活组织检 查样品中的Clock、Per-Ι和BMAL-1蛋白的表达的激活作用
[0097] 通过评估离体皮肤活检样品中Clock、Per-l和BMAL-1蛋白的表达进行肽SEQID NO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的激活作用的研究。
[0098] 方案：
[0099] 通过免疫标记的离体研究使得可以显示皮肤样品中的Clock、Per-Ι和BMAL-1蛋 白的表达。人类皮肤样品在气/液界面培养。稀释至1 % (从10-4M溶液）的肽SEQID NO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3局部施加于这些样品48小时。
[0100] 未用肽SEQIDN0:1、SEQIDN0:2和SEQIDN0:3处理的皮肤样品用作对照。皮 肤样品用10%甲醛固定并包埋在石蜡中。用切片机制备3μπι切片。在除去石蜡并暴露抗 原位点之后进行免疫标记。通过稀释1/250的抗体（Abeam)和稀释1/50并偶联于荧光染 料的二抗进行Clock蛋白的免疫标记。
[0101] 通过稀释1/100的多克隆抗体（Cosmobio)和稀释1/50并偶联于荧光染料的二抗 进行Per-Ι蛋白的免疫标记。
[0102] 通过稀释1/120的多克隆抗体（AvivaSystemsBiology)和稀释1/50并偶联于 荧光染料的第二抗体进行BMAL-1蛋白的免疫标记。
[0103] 玻片然后在合适介质中封固并在表面焚光显微镜（NikonEclipseE600)下观测。
[0104] 结果：
[0105] 获得的结果显示用肽SEQIDN0 :1、SEQIDN0 :2和SEQIDN0 :3处理的皮肤 Clock、PER-l和BMAL-1蛋白的表达量大于未处理皮肤的表达量。
[0106] 标记的半定量评估通过显微镜观测进行并总结于下表2。
[0107] 表 2
[0108]
[0109] 结论：
[0110] 施用肽SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3可以增加被照射和处理的皮 肤中Clock、PER-l和BMAL-1蛋白的表达。
[0111] 实施例3 :证实肽SEQIDNO:1、SEQIDN0 :2和SEQIDN0 :3对衰老过程中皮肤 生物活组织检查样品中的Clock蛋白的表达的激活作用
[0112] 通过评估在培养期间人工老化的皮肤模型中的Clock蛋白的表达进行肽SEQID NO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的激活作用研究。在培养65小时和138小时之后进行 分析。
[0113] 方案：
[0114] 通过免疫标记的离体研究使得可