一种miR-182转录抑制因子及其在骨肉瘤中的应用

一种miR-182转录抑制因子及其在骨肉瘤中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医疗技术领域，尤其涉及一种miR-182转录抑制因子及其在骨肉瘤中 的应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤的英文名为Tumor，癌症的英文名为Cancer。这两个词语常常被人混用。然而 从严格意义上讲，肿瘤与癌症的意义并不相同。实际上，肿瘤不一定是癌症。从词意上讲，月中 瘤指的是细胞团。在英文中肿瘤(Tumor)与赘生物(Neoplasm)意义更为接近，意即异常增生 的一团细胞。这类细胞的增殖显著快于普通的正常细胞。如果不加以治疗，常会持续增生， 引发机体的异常。根据增殖细胞的有害程度，肿瘤/赘生物可以分为两大类：良性肿瘤和恶 性肿瘤。顾名思义，良性肿瘤即无害/轻微有害的肿瘤，它们通常局部发作，不会扩散和转 移，而且容易治疗。当然，如果放任不管，部分良性肿瘤也会持续增殖而引发严重疾病。恶性 肿瘤，自然大有害于机体。实际上，癌症与恶性肿瘤的意义是相近甚至相通的，癌症/恶性肿 瘤难以治疗，会扩散，侵袭机体的其它组织;哪怕治疗之后癌症都有可能复发。
[0003] 肿瘤既然是异常增生的一团细胞，而细胞又是机体的基本组成单位，这意味着肿 瘤可以发生于机体的任何部位，而作为肿瘤中的恶性瘤，癌症也几乎会在机体的任何部位 发生。根据现有的分类标准，癌症的种类超过100种。癌症的分类依据通常是癌症最初发生 的器官/组织:如肺癌，脑癌，血癌，胃癌等等。
[0004] 在英文中，除了根据器官/组织命名的癌症，我们要对更为基本的癌症类别加以了 解，第一类便是上皮细胞癌(Carcinoma)，顾名思义，便是发生在上皮细胞/组织中的癌症， 这是最为常见的癌症类别。当然上皮细胞癌又可细分为腺癌，基底细胞癌等类别;第二类则 是结缔组织癌/肉瘤(Sarcoma)，发生于骨骼及其他结缔组织如肌肉，脂肪，血管，淋巴管等 等；而骨肉瘤（Osteosarcoma)便是最常见的骨癌。此外还有白血病（Leukemia)，淋巴瘤 (Lymphoma)，多发性骨髓瘤(multiple myeloma)，黑素瘤(Melanoma)，脑瘤和脊髓瘤等等多 种类别;本文将不加详谈。
[0005] 骨骼肿瘤包括一系列源自骨骼细胞及骨骼前体细胞的细胞团，这是原发性骨骼肿 瘤，而源自其它非骨组织的肿瘤，则称作骨转移肿瘤，发生骨转移的肿瘤有乳腺癌，前列腺 癌和肾癌等等(Yarber and Agulnik，2011)。虽然骨转移肿瘤主要由上皮来源的细胞组成， 原发性骨骼肿瘤则是非上皮肿瘤，根据恶性程度又可分为良性和恶性骨骼肿瘤;转移性和 非转移性骨骼肿瘤。这些骨骼肿瘤中，某些类别是纯粹的溶骨性瘤，如骨巨细胞瘤;而另外 的则会形成基质钙化区，如骨肉瘤(osteosarcoma)，或软骨外基质区（软骨肉瘤)或溶骨/成 骨性缺陷。骨骼肿瘤的一大主要特征是其异质性，这也使得骨骼肿瘤的分类非常复杂 (Ferrari et al·，2013;Heymann and Redini,2011;von Mehren,2011)〇
[0006] 从分类上讲，骨骼肿瘤可分为三大类：骨肉瘤，尤因氏肉瘤和软骨肉瘤。其中约 50%的骨骼肿瘤是骨肉瘤。尤因氏肉瘤是第二大类原发性骨骼肿瘤，它主要影响15岁左右 的青少年，在15岁以下的儿童中，其发病率高达2.9例/年/100万人群(Desandes et al.， 2004;Ries et al.，1999)。这两类骨骼肿瘤中，当发生骨转移或肺转移时，其预后很差。与 这两类肿瘤不同的是，软骨肉瘤主要影响30-60岁的人群，其发病率约为1.8例/年/百万人 群。软骨肉瘤对化疗，放疗和手术疗法都有相当强的耐受性，因而复发率也相当高(David et al.，2011;Lee et al.，1999)。
[0007] 从细胞类别上讲，骨肉瘤的细胞是有着间叶细胞形态的非上皮细胞（图1)。实际 上，骨肉瘤与软骨肉瘤类似，都是起源于结缔组织，因而也是起源于中胚层。还有研究称，这 两类肿瘤源自被称作间叶干细胞的多能细胞，这类多能细胞有能力分化为成纤维母细胞， 成骨细胞，软骨细胞和脂肪细胞（Deschaseaux et al.，2009;Mohseny and Hogendoorn, 2011)。在发育的过程中，特定的转录因子会形成层次分明的调控网，驱动细胞分化。比如 转录因子Sox9对软骨形成非常重要（Akiyama，2008)，而Runx2则驱动成骨细胞的产生 (Kar Senty，2008;Tang et al.，2010)。与成骨细胞和软骨细胞类似的是，骨肉瘤和软骨肉 瘤分别表达Runx2和Sox9,这证实它们很可能起源于间叶细胞（Tang et al.，2010;Wagner et al.，2011)。此外，成骨细胞/骨肉瘤细胞会表达特定的细胞标记物如碱性磷酸酶，骨钙 素和骨唾液蛋白；而软骨细胞/软骨肉瘤则表达聚集蛋白聚糖(aggrecan)，II型和X型胶原 蛋白。
[0008] 骨肉瘤，从定义上讲，是骨骼上的肿瘤;从起源上讲，形成骨肉瘤的异常增殖细胞 源自间叶细胞。在正常的骨骼形成中，成骨细胞负责骨基质的合成，分泌和矿化;一旦异常 增生，它们便形成了骨肉瘤。从研究历史上讲，骨肉瘤是最早被发现和研究的骨骼肿瘤。 1804年结缔组织癌/肉瘤(Sarcoma)被英国医生John Abernathy最先使用;在1805年法国医 生Alexis Boyer便创造了骨肉瘤（osteosarcoma)这一名称。而且Boyer还意识到骨肉瘤与 其它的骨豁异常如骨软骨瘤(osteochondromas)并不相同。
[0009] 从流行病学的角度而言，骨肉瘤是高发于儿童和年青人的一种高致死性恶性骨 瘤，在20岁之前的所有恶性骨瘤中60%左右的都是骨肉瘤。从发病率来看，骨肉瘤堪称最为 常见的恶性骨骼肿瘤，发病率高达4.8例/百万人/年（Desandes et al.，2004;RieS et al.，1999)。除儿童和青少年之外，骨肉瘤在>50岁的人群中也有较高的发病率(2013)。研究 者经过多年的研究发现了多项与骨肉瘤发生相关的风险因子，这其中包括骨骼的更新速率 和快速生长、年龄、身高和性别（(：〇?6^11，2004 ;?4丨(^^-加1168,2006);此外环境因素 也是骨肉瘤发生的重要风险因子，其中绝大多数的后天性骨肉瘤都与骨骼的辐射损伤有 关，目前认为3%的骨肉瘤都与辐射损伤密切相关(Le Vu，1998;Logue and Cairnduff， 1991)。研究者还发现骨骼疾病及其它多种遗传性疾病的患者也是骨肉瘤的高危人群，比如 佩吉特氏病患者中有1%可能会患上骨肉瘤(Smith，1984)，而12%的李佛美尼综合症患者 也会患上骨肉瘤(Gokgoz ,2001; Srivastava, 1993)，此外生殖细胞中措书出现的RB1突变 会让骨肉瘤的发病风险增加数百倍(Hansen，1985)，RECQL4突变导致的色素沉着综合症 (Rothmund-Thomson syndrome)患者中有32%的个体会患上骨肉瘤（Larsen and Hickson, 2013;Wang，2001)。除此之外，10%的沃纳综合征患者、3%的布卢姆综合症患者和约13%的 RAPADILIN0综合症患者也会患上骨肉瘤(German，1997; Lauper，2013; Siitonen，2003)。从 发病部位而言，骨肉瘤主要发生于四肢的长骨，靠近骨骺生长板处，此外其它常见的发病部 位还包括股骨、胫骨和肱骨，而颅骨、骨盆和下颂骨则偶有发生。骨肉瘤主要由恶性成骨细 胞形成的未成熟骨和骨样组织
[0010] 骨肉瘤治疗的常规方法是手术，患者经单纯的手术治疗后存活率为15%-17% (Bernthal，2012;Link，1986)，此后研究者又开发出化疗辅助手术治疗的方法，这让骨肉瘤 的存活率大大提高。而今化疗辅助手术治疗的策略可以治愈70%左右的患者（Collins， 2013)。然而依然有大量的患者接受化疗后的效果极差；哪怕接受手术切除，辅助化疗和放 疗后，骨肉瘤的远距离转移和局部复发的风险依然很高。而且在最近的三十年里，转移性骨 肉瘤患者和复发性骨肉瘤患者的五年存活率未有明显改变，仅仅为20%左右(Meyers， 2011)。为更好的治疗骨肉瘤患者，探索新的治疗靶点和策略都显得势在必行。
[0011]目前而言，对尤因氏肉瘤的发病机制有比较清楚的认识，而对于其他大多数的骨 骼肿瘤的发病机制依然所知甚少。大多数骨肉瘤患者的发病原因依然不清楚。当前对于骨 肉瘤的解释依然是19世纪Stephen Paget提出的"种子与土壤"假说，该假说引出了一个新 的概念"生境"，它指代的是特化的肿瘤微环境，这种微环境能够促进肿瘤干细胞的出现，并 为它们的生存和发育提供所有必要的因子。在骨转移肿瘤和原发性骨骼肿瘤的发生和发展 过程中，骨豁的微环境和癌细胞之间有密切的联系(David et al.，2011;Gomez-Brouchet et al.，2010;Lamoureux et al.，2010;Wittrant et al.，2004;Zhang et al.,2003)。对 微环境与生境的研究最先开始于造血过程的研究中。实际上，研究者发现，BMP信号通路会 通过BMP 1A受体调节生境的大小进而调控造血干细胞的数目。与此相似的是，骨骼中生长 的癌细胞会改变骨细胞的活性，调节血管生成并改变局部的免疫，从而为自身的存活、生长 和脱落提供保证。肉瘤细胞则会分泌成骨细胞活化因子如细胞因子（IL-l，IL-6和TNF-alpha)，荷尔蒙(PTHrP)，葡糖氨基葡聚糖和/或促成骨细胞因子如BMPs、IGF或Wnts信号，这 会导致骨骼重塑平衡的破坏，此后成骨细胞和破骨细胞会分泌可溶性促肿瘤因子，这些因 子会进入细胞外基质。尽管骨骼的微生境在肿瘤的生长中发挥着关键性的功能，骨骼微环 境还会增强肿瘤对治疗的抵抗病让癌细胞处于静默状态(Heymann and 1^(1;[11；[，2011)。骨 骼肿瘤和"种子与土壤"理论。骨骼生境是一种特化的微环境，为骨肉瘤细胞的生长提供所 有必须的因子。骨骼微环境和骨骼肿瘤细胞存在着一种特殊的循环。实际上，骨骼肿瘤细胞 会破坏骨骼细胞(成骨细胞和破骨细胞）的活性，改变血管新生并改变局部的免疫功能，从 而为自身的存活，生长和脱落提供必要的保护。
[0012]骨肉瘤是儿童和青少年中最为常见的恶性骨骼肿瘤，而且骨肉瘤几乎均会恶化并 引发严重后果。随着技术的进步，对骨肉瘤有了越来越深入的认识。然而骨肉瘤发生和恶化 的分子机制依然有待进一步的探索。越来越多的证据表明，miRNAs表达异常与多种肿瘤如 胃癌、乳腺癌、干细胞癌和骨肉瘤的发生、发展和恶化有着密切的联系。本发明所尝试探索 和研究的正是骨肉瘤中miRNAs表达异常与骨肉瘤发生发展的分子关联。发现骨肉瘤患者的 组织中以及骨肉瘤细胞系中miR-182的表达均显著减少。而在骨肉瘤细胞系MG-63中过表达 miR-182能够明显抑制骨肉瘤细胞的增殖、迀移和侵袭能力，这提示miR-182可能是骨肉瘤 发生发展的抑制因子。通过Targetscan软件分析、荧光素酶实验及过表达/抑制实验发现 TIAM1是miR-182在骨肉瘤细胞中的靶基因。TIAM1的全称为细胞骨架受T淋巴瘤侵袭转移诱 导因子 1(T lymphoma invasion and metastas is inducing factor 1)，它是Rac特异性 的鸟核苷酸交换因子，已知与多种癌症的发生发展有密切关系。在TIAM1基因敲除的小鼠 中，致癌物诱导的HRAS活化和皮肤鳞状细胞癌的发生均明显受阻;此外，在结肠腺瘤性息肉 病基因(APC)诱导的结肠癌和ERBB2诱导的乳腺癌小鼠模型中，TIAM1缺失会显著抑制两种 肿瘤的形成；研究者还在多种癌症中发现TIAM1的突变或过表达；这一系列研究均提示 TIAM1是促癌基因。本发明中，当TIAM1过表达时，骨肉瘤细胞MG-63的增殖能力明显增强，而 且MG-63的细胞周期也发生了明显的改变，细胞的侵袭和迀移能力也显著增强。与此相对的 是，过表达miR-182能够抑制TIAM1诱导的骨肉瘤细胞增殖加速和侵袭能力增强。此外，对骨 肉瘤患者的组织样本进行表达分析后发现，TIAM1的表达与miR-182呈显著负相关，这提示 miR-182或许是骨肉瘤发生过程中的抑癌基因，它能通过靶向并抑制TIAM1的表达限制骨肉 瘤的发生和发展。
[0013]之前的研究指出，多种癌症中均有miR-182的表达异常，这包括胃癌、恶性胸膜间 皮瘤、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、子宫内膜癌、结肠癌、乳腺癌、红细胞增多症、小儿急 性白血病和黑素瘤。在不同的肿瘤发生过程中，miR-182扮演着不同甚至完全相反的角色， 比如在肺腺癌细胞中，miR-182是一种肿瘤抑制因子，它可以通过调控CTTN的表达而抑制肺 腺癌细胞的增殖和侵袭。还有研究指出，miR-182能通过靶向抑制RGS17而抑制肺癌的发生； 在胶质母细胞瘤(GBM)中，miR-182同样扮演着肿瘤抑制因子的角色，它能够靶向癌基因如 Bcl2L12、c-Met和HIF2A从而调控胶质母细胞瘤的生长、分化、化疗敏感性和肿瘤的恶化。然 而在其它类型的癌症中，miR-182的表达会显著增加并扮演促癌因子的角色。比如研究者发 现，在部分胶质瘤患者中，TGF-beta会促进miR-182的过表达，从而导致NF-kappaB的持续活 化，最终促进胶质瘤的恶化;在前列腺癌细胞中过表达miR-182能够通过抑制下游基因如 F0XF2、RECK、MTSS1和NDRG1促进细胞的增殖；而在黑素瘤中，miR-182能够促进锚定非依赖 的生长、侵袭和转移。而在乳腺癌中，miR-182能与miR-27a和miR-96共同作用于F0X01基因 促进肿瘤的发生和发展;在卵巢癌中，miR-182能通过靶向抑制程序性细胞死亡因子4促进 肿瘤细胞的增殖、侵袭和化疗耐受性。在结肠直肠癌中miR-182的表达同样明显增加，而且 miR-182表达的升高与临床症状的恶化及不良预后密切相关;在肝细胞癌中，研究者则发 现miR-182的高表达与肿瘤的转移能力密切相关。本研究中，发现miR-182在四种不同的骨 肉瘤细胞系中均显著下调，并且在骨肉瘤患者的组织中同样显著下调，这提示miR-182在骨 肉瘤发生中可能扮演着肿瘤抑制因子的角色，与此相吻合的是，发现，恢复miR-182在骨肉 瘤细胞中的表达可以明显抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。这些研究均表明，在骨肉瘤的发生 发展中，miR-182可能扮演着肿瘤抑制因子的角色，它的表达下降或许是骨肉瘤恶化和转移 的重要诱因之一。
[0014] miR-182与癌症的关系已被众多研究所证实，而且在不同的癌症研究中，研究者们 发现了多种miR-182的下游靶基因。而本研究中借助于不同的实验手段发现了miR-182新的 靶基因：通过Targetscan软件预测我们在TIAM1基因的3末端非编码区域(UTR)找到了潜在 的miR-182识别位点，而荧光素酶实验证实，miR-182能够有效的结合该识别位点，从而抑制 TIAM1的表达。我们在骨肉瘤细胞系MG-63中过表达miR-182同样抑制了 TIAM1在mRNA水平和 蛋白水平的表达。因此我们的研究提示，miR-182表达水平的降低可能会导致TIAM1表达的 异常和骨肉瘤细胞增殖的异常。在此之前，并无研究将miR-182与TIAM1联系在一起，因此研 究揭示出一条新的由miR-182介导的癌细胞增殖调控通路。然而，miR-182对TIAM1的调控是 否同样存在于其他类型的癌症中仍有待进一步的研究。
[0015] TIAM1基因位于人类的21号染色体上，隶属于鸟核苷酸交换因子(GNEF)家族。之前 的研究指出TIAM1在多种细胞功能中均扮演重要橘色，如细胞增殖、细胞黏附、细胞迀移、细 胞侵袭和细胞转移等等。研究还指出，TIAM1的表达在多种癌症中都显著增加如T细胞淋巴 癌、Β细胞淋巴癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌和肺癌等等。ΤΙΑΜ1的表达量增加是一种潜在的新的 预后因子，对癌症患者的预后有重要的指导意义。此外，有研究者指出ΤΙΑΜ1过表达与鼻咽 癌之间存在着相关性;有研究还发现ΤΙΑΜ1在前列腺癌患者的肿瘤组织中表达显著增加并 可作为不良预后的指示因子。此外，研究者曾在骨肉瘤研究中发现miR-218能够通过下调 TIAM1、MMP2和MMP9的表达抑制肿瘤的发生。然而与此相关的详细的分子机制依然有待深 入的研究。本发明中TIAM1是miR-182的直接靶基因。我们还通过体外实验证实TIAM1过表达 能够促进骨肉瘤细胞的增殖及侵袭。而miR-182对TIAM1表达调控依赖于TIAM1的3末端UTR 区域。而且TIAM1诱导的细胞增殖和侵袭能够被miR-182抑制。综上所述，研究证实miR-182 能够通过靶向TIAM1而阻碍骨肉瘤瘤的转移。miR-182对TIAM1的调控或许是TIAM1转录后调 控的一种重要机制。
[0016] 本发明研究在骨肉瘤中，miR-182能通过抑制TIAM1的表达，是一种转录抑制因子。 而本发明的miR-182-TIAM1信号轴值得在将来的研究中加以深入的探索和分析，或许能够 为骨肉瘤的治疗提供重要线索。

【发明内容】

[0017] 本发明的目的在于提供一种miR-182转录抑制因子及其在骨肉瘤中的应用，旨在 研究通过miRNA表达芯片和高通量测序等技术研究在骨肉瘤样本中多种miRNAs的表达发生 异常，多种miRNAs的功能对骨肉瘤的细胞周期有重要的调控作用，探索和研究的骨肉瘤中 miRNAs表达异常与骨肉瘤发生发展的分子关联的问题。
[0018] 本发明是这样实现的，一种miR-182转录抑制因子，该miR-182转录抑制因子序列 SEQ ID NO：
[0019] 本发明另一目的在于提供一种miR-182转录抑制因子在骨肉瘤中的应用，该miR-182转录抑制因 子在骨 肉瘤中 的应用 包括: 在骨肉 瘤细胞系中的 应用、 在骨肉 瘤患者组织中 的应用、在细胞增殖标记基因 Ki-67和PCNA的应用和在骨肉瘤细胞中TIAM1基因的应用。
[0020] 所述在骨肉瘤细胞中TIAM1基因的应用，在TIAM1基因的3末端UTR非编码区域miR-18 2与该识别位点结合。
[0021 ]进一步，所述TIAM1基因的3末端UTR非编码区域识别位点的构建方法包括：
[0022] 根据人源TIAM1的mRNA编码序列设计引物，采用Promega的高保真酶Pfu DNA聚合 酶PCR扩增，PCR反应结束后，加入lul普通Taq酶和lul 10mM的dNTPs，72°C反应10分钟，扩增 产物进行琼脂糖凝胶电泳，出现单一的5Kb长度的条带，割胶回收后采用QIAEX II胶回收纯 化试剂盒进行纯化；
[0023] 将回收的TIAM1片段连接入T-eay载体中，体系为10x T4buffer lul，T4连接酶 lul，T-easy载体0.5ul，TIAM1产物7.5ul (10ul总体系），连接程序16°C过夜;采用大肠杆菌 感受态细胞ToplO转化连接产物，取10ul小枪头挑选单克隆菌落加入装有2-3ml氨苄抗性的 LB培养基的小玻璃摇菌管中，37°C220rpm培养10-12小时，之后进行质粒小量抽提，质粒提 取成功后经酶切鉴定，阳性质粒送测序分别采用正向、反向测序引物SP6与T7测序，最终得 到阳性克隆；
[0024] 设计带有Sail和Notl酶切位点的PCR引物，以pT-easy-TIAMl为模板克隆TIAM1基 因的3 ' UTR区域并连接进入荧光素酶表达载体得到表达荧光素酶并带有TIAM13 ' UTR区域的 载体；
[0025] 进一步，所述根据人源TIAM1的mRNA编码序列设计引物，所述引物序列为：
[0026] TIAM1 for:atggagaa aagcatgcca gcctggg；
[0027] TIAM1 rev:CTCTACGGGGCAGGTGACGC〇
[0028] 进一步，所述PCR扩增采用两步法:95°C预变性2分钟，95°C变性30秒，
[0029] 55°C退火30秒，72°C延伸5分钟，然后重复变性、退火和延伸步骤35个 [0030] 循环。72°C继续延伸5分钟，10°C保持。
[0031 ]进一步，所述TIAM1基因的3末端UTR非编码区域识别位点的构建前需进行：
[0032]感受态细菌制备，载体DNA经细菌转化引入感受态的大肠杆菌中，携带有载体DNA 的大肠杆菌经增殖后大量复制载体DNA;DNA凝胶电泳，在灭菌的1.5ml离心管中进行限制性 内切酶酶切；
[0033]选取人源细胞系H293细胞提取RNA，H293细胞接种于6孔培养板中，在37度二氧化 碳培养箱中培养2天，加入lml Trizol后采用苯酚/氯仿法提取人源RNA，制备好人源RNA后， 采用Bio-Rad公司的iScript cDNA Synthes is试剂盒进行逆转录实验制备cDNA模板。 [0034]进一步，所述TIAM1基因的3末端UTR非编码区域miR-182与该识别位点结合的构建 方法包括：
[0035]根据人源TIAM1的mRNA编码序列设计引物，以荧光素酶-3'UTR质粒为模板，进行 PCR扩增，PCR扩增为:94°C预变性2分钟，98°C变性10秒，68°C退火及lkb/分钟速度延伸7分 30秒，之后变性到退火延伸步骤设定为10个循环重复，4°C保存样品；
[0036] Dpnl消化，在T0P10大肠杆菌感受态细胞中表达的质粒上发生甲基化修饰，向PCR 产物中加入lul Dpnl，轻弹混匀后短暂离心放入37°C水浴锅孵育1小时；
[0037] Dpn頂每切消化结束后，取5-10ul样品进行琼脂糖凝胶电泳；
[0038] 连接反应于16°C过夜，然后用于转化大肠杆菌感受态细胞ToplO,并挑取克隆进行 测序鉴定。
[0039] 本发明提供的miR-182转录抑制因子及其在骨肉瘤中的应用，骨肉瘤细胞系miR-182 表达显著下调 ，骨肉瘤患者组织中 miR-182 表达显著下调， miR-182 表达量与骨肉瘤患者 的存活时间呈显著正相关，miR-182过表达显著抑制肿瘤生长，miR-182调控细胞增殖标记 物Ki-67和PCNA的表达水平显著升高，miR-182是MG-63骨肉瘤细胞增殖的负向调控因子； miR-182调控骨肉瘤细胞的细胞周期，miR-182对细胞增殖的调控与其对细胞周期的影响有 密切的关系;miR-182过表达促进MG-63骨肉瘤细胞凋亡，miR-182过表达抑制MG-63骨肉瘤 细胞的迀移与侵袭有影响，miR-182能抑制MG-63骨肉瘤细胞的迀移和侵袭能力，它的低表 达与骨肉瘤细胞的恶