伤 程度评分。
[0167] 表8: CMDI评分表
[0168] 建模型考察结果DSS溶度5 %溶液最为合适。
[0169] 2. X4_g的急性和慢性药效观察
[0170] 2.1实验材料
[0171] 2.1.1实验仪器
[0172] 12号灌胃针、Iml注射器、移液枪头、试管、微孔板、酶标仪、紫外可见分光光度计、 电热恒温培养箱、电子天平、96微孔板、移液枪、倒置显微镜、镊子等工具等。
[0173] 2.1.2试剂及药品
[0174] 葡聚糖硫酸钠(50000,购于MP Biomedicals公司）;ΜΡ0试剂盒、隐血试剂盒、MDA试 剂盒、SOD试剂盒购于南京建成生物研究所。
[0175] 2.1.3 动物
[0176] BALB/C小鼠56只，SPF级，雄性，7-8周龄，体重20 ± 2g，购自广东省医学实验动物中 心，合格证号:SYXK (粵)2012-0125，于广东药学院动物实验中心饲养。
[0177] 2.1.4 药物
[0178] 5种药物，小檗碱(BBR，96 % );黄芩苷(g，96 % );黄芩素 (s，96 % ); X4_g (实施例1中 制得的双黄苷，纯度95 % ); X4-s (自制，小檗碱与黄芩素-6位连接的多核分子，纯度95 % )。 其中，小檗碱、黄芩苷和黄芩素均购于武汉远城科技发展有限公司。
[0179] 2.2实验方法
[0180] 2.2. IDSS的配制
[0181] 称取DSS 5g，以蒸馏水定容至1000 mU配置成5%DSS溶液。
[0182] 2.2.2药液配制
[0183] 2.2.2.1小檗碱样品液的配制
[0184] 精确称取小檗碱试样300.0 Omg，以0.5 %阿拉伯树胶水溶液定容至300mL，配置成 lmg/mL的溶液。
[0185] 2.2.2.2黄芩苷样品液的配制
[0186] 精确称取黄芩苷试样300.0 Omg，以0.5 %阿拉伯树胶水溶液定容至300mL，配置成 lmg/mL的溶液。
[0187] 2.2.2.3黄芩素样品液的配制
[0188] 精确称取黄芩素试样300.0 Omg，以0.5 %阿拉伯树胶水溶液定容至300mL，配置成 lmg/mL的溶液。
[0189] 2.2.2.4X4_g样品液的配制
[0190] 精确称取X4-g试样300.0 Omg，以0.5 %阿拉伯树胶水溶液定容至300mL，配置成多 核分子双黄苷、双黄素的合成及其抗菌、抗炎活性研究
[0191] 911mg/mL 的溶液。
[0192] 2.2.2.5X4-S样品液的配制
[0193] 精确称取X4-s试样300.0 Omg，以0.5 %阿拉伯树胶水溶液定容至300mL，配置成 lmg/mL的溶液。
[0194] 2.2.3动物分组
[0195] 分为7组，每组8只小鼠，分别是正常组（即N组）、模型组（即M组）、小檗碱组（即B 组）、黄芩苷组（即G组）、黄芩素组（即S组）、X4-g组（即XG组）、X4-s组（即XS组）。
[0196] 2.2.4UC急性期和慢性期的药效试验
[0197]造模前小鼠适应性饲养2周，参考MeIgar和Cooper等方法建立结肠炎模型。
[0198] 除正常组正常饮用水外，模型组及给药组均饮用5%溶液7天，造模同时给予动物 药物干预，药物组灌胃给药，灌胃剂量量为〇.lml/10g，正常组及模型组则灌以0.5%阿拉伯 树胶水溶液代替。每日进行DAI评分。
[0199] 急性期:持续14天后，并于给药第15天处死动物，进行CMDI评分，并计算结肠指数。
[0200] 慢性期:持续24天后，并于给药第25天处死动物，进行CMDI评分，计算各脏器系数、 结肠指数，并测定相应的生化指标。
[0201 ] 2.2.5检测指标
[0202] 2.2.5.1疾病活动指数(DAI)及结肠黏膜损伤指数(CMDI)及结肠指数DAI及CMDI的 测定参照1的"1.4"、"1.5"项下方法进行。
[0203]急性期DAI结果如图5所示。由图5可见，XG组的DAI最低，恢复得较好，与模型组有 显著差异，其他组效果不佳。其中，B组，S组，XG组各出现1只小鼠死亡;XS组出现2只小鼠死 亡，死亡小鼠均为便血严重，肛门口严重带血，体重减轻较大，排除灌胃所致。
[0204]慢性期DAI结果如图6所示。由图6可见，XG组及B组的DAI在急性期下降得较快，慢 性期用药组的下降速度基本一致，用药组总体上均比模型组的得分较低。其中，M组出现2只 小鼠死亡，B组出现3只小鼠死亡，XS组出现2只小鼠死亡。
[0205]急性期CMDI结果如图7所示。由图7可见，XG组的CMDI得分最低，与模型组有显著性 差异，p〈0.01; S组与模型组有差异，
[0206] p<〇.〇5〇
[0207] 慢性期CMDI结果如图8所示。由图8可见，给药25天后，模型组及小檗碱组的结肠粘 膜肉眼观察还有明显的炎症，较严重的溃疡仍然存在，少量充血，肠壁增厚;XG组及XS组的 炎症较轻，肠壁较薄。
[0208] 2·2· 5.2病理组织学评分(HS)
[0209] 肉眼观察结肠炎症情况，进行CMDI评分后，截取每只小鼠直肠上Icm肠段约l-2cm， 以中性甲醛固定、石蜡切片、HE染色，光镜检查，进行病理组织切片观察并参照参考Melgar 和Cooper研究的方法进行病理组织学评分，HS评分标准见下表其余结肠段以中端及近端分 别以液氮保存。急性药效观察HS评分标准如表9所示，慢性药效观察HS评分如表10所示。
[0212] 表9 (急性)病理切片组织学评分标准
[0214] 表10 (慢性)病理切片组织学评分标准
[0215] 急性期药效观察HS评分结果如图9所示。由图9可见，病理切片结果与DAI、CMDI得 分并不一致，除N组外，HS结果以B组的炎症最轻。正常组粘膜完整无损伤，腺体排列有序，隐 窝完整。造模组M结肠粘膜表面上皮部分脱落，不同程度被在破坏，隐窝不同程度被破坏，粘 膜固有层腺体部分破坏或消失，炎症细胞浸润情况(大量中性粒细胞，淋巴细胞，浆细胞）， 炎症主要累及黏膜和黏膜下层，累及的层面包括（黏膜、黏膜下层、浅肌层，深肌层，浆膜 层），溃疡较严重。一半病例中性粒细胞浸润至深肌层，及大量炎细胞(淋巴、浆细胞)浸润全 层，肠周脂肪组织内淋巴细胞浸润明显。B组炎症累及深肌层，个别累及浅肌层，粘膜层内中 性粒细胞浸润明显。G组炎症累及深肌层，粘膜层内中性粒细胞浸润明显；一半病例的部分 区域隐窝完全破坏。S组、XG组、XS组粘膜层内中性粒细胞浸润明显，一半病例的部分区域隐 窝完全破坏。个别病例部分区域隐窝完全破坏，累及全层。注:所有病倒均未见出血现象。
[0216] 慢性期药效观察HS评分结果如图10所示。由图10可见，模型组的炎症主要累及黏 膜、黏膜下层至肌层，浸润的炎症细胞以淋巴、浆细胞慢性炎症细胞为主，特别是淋巴细胞， 大量地分布在粘膜下层到肌层间，极少见有中性粒细胞，部分基底2/3隐窝被破坏，炎症范 围较广，少部分区域尚可观察到黏膜组织正常，慢性炎症较严重。B组的炎症情况与模型组 的相似，但炎症范围较广，并没起到药效作用。XG组炎症总体比较轻，炎症主要累及黏膜、黏 膜下层至肌层，一部分只累及至黏膜下层，但炎症细胞较少，隐窝破坏程度轻，大部分隐窝 基本完整，部分约基底1/3隐窝被破坏，炎症范围少，大部分区域尚可观察到黏膜组织正常。 XS组炎症中等，炎症累及层面同XG组，但炎症细胞数量较多，一部分炎症细胞较少，隐窝破 坏程度轻，大部分隐窝基本完整，部分约基底2/3隐窝被破坏，炎症范围较M组小，部分区域 尚可观察到黏膜组织正常。
[0217] 2.2.5.3血清中MDA的测定
[0218] 眼眶取血后，血液室温静置lh，3500rmp离心制备血清，按照试剂盒说明进行操作 测定。
[0219]急性期药效观察MDA评分结果如图11所示。由图11可见，测定模型组的MDA较正常 组显著降低，XG组较模型组有显著差异。其测定结果与文献报到的并不一致。在UC模型当 中，MDA-般是增大，而本实验测定的MDA数值明显偏小，可能与反应温度90°C用的是恒温 箱，而非水浴锅，加热效果不佳，导致显色反应不充分所致;也可能是小鼠体内MDA的真实水 平。
[0220] 2.2.5.4结肠组织MPO的测定
[0221] 并截取每只小鼠直肠上3cm肠段约l-2cm，以重量体积比为1:19加入匀浆介质，
[0222] 在冰浴中，制备5%的组织匀浆后，按照试剂盒进行测定，计算MPO活力。
[0223]计算公式:MPO活力(U/g)=(测定OD值-对照OD值)/(11.3 X取样量(g))
[0224]