NHS(200mM)溶解在PBS缓冲液中(PH=7.4，0.05M)中，并用0.2M的盐酸调解PH至4。把上述溶液加入到6ml 2mg/ml的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs中，并超声10分钟，室温下反应。将混合物用PBS缓冲液(PH=7.4，0.01M)磁分离洗涤3次以除去多余的EDC和NHS，将活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs重新分散在I3BS缓冲液中。进一步地，把0.5ml 2mg/ml c(RGDyk)加入到以上活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs溶液中，室温反应过夜。混合物用PBS缓冲液(PH=7.4，0.01M)磁分离洗涤3次以除去多余的游离c(RGDyk)，然后重悬于PBS中，即可得到靶向磁性纳米材料。
[0023]经表征DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs的水和动力学半径为22nm，Zeta电势为_30mV;RGD -Zn0.4Fe2.6O4 NPs水和动力学半径为25nm，Zeta电势为-39mV。
[0024]
实施例3
1.DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs的制备
首先把FeSO4.(NH4)2SO4.6H2O和ZnSO4溶解在20ml的水里，使得前体达到1.73X 10一3mo I Fe2+and 2.67X10—4 mo I Zn2+ 的目的。其次，把 1ml 油酸、1ml 水和 Ig NaOH 混合，在常温下磁力搅拌直到得到均匀的溶液。再者，把前体Fe2+和Zn2+溶液倒进该均匀溶液中，搅拌几分钟以后，混合溶液变成深棕色。最后把该溶液转移进50ml反应釜中，密封，230度加热15个小时。反应结束以后，冷却至室温。产品沉积在釜底，用环己烷溶解取出纳米颗粒。再把乙醇加入容有纳米颗粒的环己烷中，沉淀出纳米颗粒，最后纳米颗粒再用乙醇反复洗数次。颗粒表面的有机表面活性剂用二巯基丁二酸(DMSA)在60°C水浴机械搅拌12小时，重复两次交换，得到DMSA包裹的锌掺杂的超顺磁四氧化三铁纳米颗粒。该纳米颗粒能够彻底溶解在水相中。
[0025]2.C(RGDyK)-DMSA- Zn0.4Fe2.6O4 NPs的制备
取6ml EDC(40mM)和NHS(200mM)溶解在PBS缓冲液中(PH=7.4，0.05M)中，并用0.2M的盐酸调解PH至4。把上述溶液加入到6ml 2mg/ml的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs中，并超声10分钟，室温下反应。将混合物用PBS缓冲液(PH=7.4，0.01M)磁分离洗涤3次以除去多余的EDC和NHS，将活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs重新分散在I3BS缓冲液中。进一步地，把33ul乙二胺和0.5ml 2mg/ml c(RGDyk)加入到以上活化后的DMSA-ZnuFe2.6(k NPs溶液中，室温反应过夜。混合物用I3BS缓冲液(PH=7.4，0.01M)磁分离洗涤3次以除去多余的游离c(RGDyk)和乙二胺，然后重悬于PBS中，并将10ul lmg/ml FITC加入其中进行反应过夜。用H2O/二甲基亚砜(DMSO) (1:4，v/v)超滤离心洗去多余的游离荧光物质。即可得到荧光/靶向磁性纳米材料。
[0026]经表征DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs的水和动力学半径为22nm，Zeta电势为-30mV;NH2 -Zn0.4Fe2.6O4 NPs-RGD水和动力学半径为28nm，Zeta电势为-25mV;FITC-NH2-Zn0.4Fe2.604NPs-R⑶水和动力学半径为31nm，Zeta电势为-33mV。
[0027]实施例4:
1.DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs的制备
首先把FeSO4.(NH4)2SO4.6H2O和ZnSO4溶解在20ml的水里，使得前体达到1.73X 10一3mo I Fe2+and 2.67X10—4 mo I Zn2+ 的目的。其次，把 1ml 油酸、1ml 水和 Ig NaOH 混合，在常温下磁力搅拌直到得到均匀的溶液。再者，把前体Fe2+和Zn2+溶液倒进该均匀溶液中，搅拌几分钟以后，混合溶液变成深棕色。最后把该溶液转移进50ml反应釜中，密封，230度加热15个小时。反应结束以后，冷却至室温。产品沉积在釜底，用环己烷溶解取出纳米颗粒。再把乙醇加入容有纳米颗粒的环己烷中，沉淀出纳米颗粒，最后纳米颗粒再用乙醇反复洗数次。颗粒表面的有机表面活性剂用二巯基丁二酸(DMSA)在60°C水浴机械搅拌12小时，重复两次交换，得到DMSA包裹的锌掺杂的超顺磁四氧化三铁纳米颗粒。该纳米颗粒能够彻底溶解在水相中。
[0028]2.C(RGDyK)-DMSA- Zn0.4Fe2.6O4 NPs的制备
取6ml EDC(40mM)和NHS(200mM)溶解在PBS缓冲液中(PH=7.4，0.05M)中，并用0.2M的盐酸调解PH至4。把上述溶液加入到6ml 2mg/ml的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs中，并超声10分钟，室温下反应。将混合物用PBS缓冲液(PH=7.4，0.01M)磁分离洗涤3次以除去多余的EDC和NHS，将活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs重新分散在I3BS缓冲液中。进一步地，把44ul乙二胺和0.5ml 2mg/ml c(RGDyk)加入到以上活化后的DMSA-ZnuFe2.6(k NPs溶液中，室温反应过夜。混合物用I3BS缓冲液(PH=7.4，0.01M)磁分离洗涤3次以除去多余的游离c(RGDyk)和乙二胺，然后重悬于PBS中，并将10ul lmg/ml FITC加入其中进行反应过夜。用H2O/二甲基亚砜(DMSO)(1:4，v/v)溶液进行超滤离心洗去多余的游离荧光物质。即可得到荧光/靶向磁性纳米材料。
[0029]经表征DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs的水和动力学半径为22nm，Zeta电势为-30mV;NH2 -Zn0.4Fe2.6O4 NPs-RGD水和动力学半径为26nm，Zeta电势为-14mV;FITC-NH2-Zn0.4Fe2.604NPs-R⑶水和动力学半径为33nm，Zeta电势为-37mV。
【主权项】
1.一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 首先把FeS04.(NH4)2SO4.6H2O和ZnSO4溶解在20ml的水里，使得前体达到1.73 X 10一3mo I Fe2+and 2.67X10—4 mo I Zn2+ 的目的；其次，把 1ml 油酸、1ml 水和 Ig NaOH 混合，在常温下磁力搅拌直到得到均匀的溶液;再者，把前体Fe2+和Zn2+溶液倒进该均匀溶液中，搅拌几分钟以后，混合溶液变成深棕色;最后把该溶液转移进50ml反应釜中，密封，230度加热15个小时;反应结束以后，冷却至室温，产品沉积在釜底，用环己烷溶解取出纳米颗粒，再把乙醇加入容有纳米颗粒的环己烷中，沉淀出纳米颗粒，最后纳米颗粒再用乙醇反复洗数次，颗粒表面的有机表面活性剂用二巯基丁二酸(DMSA)在60°C水浴机械搅拌12小时，重复两次交换，得到DMSA包裹的锌掺杂的超顺磁四氧化三铁纳米颗粒;该纳米颗粒能够彻底溶解在水相中； 取EDC和NHS溶解在I3BS缓冲液中(PH=7.4, 0.05M)中，并用0.2M的盐酸调解PH，把上述溶液加入到DMSA-Zn0.4Fe2.604 NPs中，并超声10分钟，室温下反应，将混合物用I3BS缓冲液(ΡΗ=7.4，0.01Μ)磁分离洗涤3次以除去多余的EDC和NHS，将活化后的DMSA-Znoie2.6〇4NPs重新分散在PBS缓冲液中，把乙二胺和c(RGDyK)溶解在PBS缓冲液中，并加入到以上活化后的DMSA-Zn0.4Fe2.6O4 NPs溶液中，室温反应过夜，混合物用PBS缓冲液(ΡΗ=7.4，0.01Μ)磁分离洗涤3次以除去多余的游离乙二胺和抗体分子，然后重悬于PBS中，并将荧光物质加入其中进行反应过夜，用H2O/二甲基亚砜(DMS0)(1:4，V/V)溶液进行超滤离心洗去多余的游离荧光物质，即可得到荧光/靶向磁性纳米材料。2.根据权利要求1所述一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的荧光物质可以为荧光素异硫氰酸酯或罗丹明异硫氰酸酯。3.根据权利要求1所述一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的洗去多余的游离荧光物质用的是H2O/二甲基亚砜(DMS0)(1:4，V/V)溶液并进行超滤离心。4.根据权利要求1所述一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的乙二胺和抗体分子是以酰胺键的形式标记到纳米颗粒上。5.根据权利要求1所述一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的锌掺杂的超顺磁纳米颗粒的粒径为10-20nm。6.根据权利要求1所述一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的多肽抗体分子的序列为cyclo (Arg-Gly-Asp-d-Tyr-Lys)。7.根据权利要求1所述一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的抗体分子能特异性识别脑胶质瘤、肺癌或乳腺癌细胞上高表达的整合素(⑴&Β)相关受体。8.—种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒，其特征在于，根据权利要求1-7任一所述方法制备得到，具有良好的磁性能、荧光示踪功能及靶向性能。
【专利摘要】本发明涉及一种荧光/靶向的锌掺杂四氧化三铁纳米颗粒，利用水热合成法通过控制反应条件制备出11nm的锌掺杂的超顺磁四氧化三铁纳米颗粒，并在其表面连接荧光分子（荧光素异硫氰酸酯，FITC）及靶向抗体分子（环状的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，c(RGDyK)），从而得到荧光/靶向/多功能的磁性纳米复合材料。本发明反应条件温和，成本低廉，操作方法简单，制备的磁性荧光复合纳米颗粒具有良好的磁性能、荧光示踪功能及靶向性能。除此之外该纳米颗粒还具有良好的生物相容性和亲水性，在药物载体、磁共振成像、生物标记、生物分离、免疫检测、等领域具有广泛应用前景。
【IPC分类】C09K11/02, B82Y20/00, B82Y30/00, C09K11/60, B82Y25/00
【公开号】CN105462580
【申请号】CN201510802882
【发明人】何丹农, 祝闪闪, 王萍, 金彩虹
【申请人】上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月19日