对显示出对于由成纤维细胞生长因子受体或其变体介导的信号调节敏感的细胞进行鉴定...的制作方法

专利名称：：对显示出对于由成纤维细胞生长因子受体或其变体介导的信号调节敏感的细胞进行鉴定...的制作方法对显示出对于由成纤维细胞生长因子受体或其变体介导的信号调节敏感的细胞进行鉴定的方法本发明涉及测定FGFR或其变体的体内活化或抑制的方法和/或鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节有敏感性(例如抑制或活化)的细胞(如肿瘤细胞，例如作为肿瘤样本)的方法、用于所述目的的生物反应性识别剂的应用、包括它们的试剂盒、检测它们用于鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节(尤其是抑制)敏感的细胞的试剂、和所述在制造此类试剂盒中的应用，以及提及的其他应用、方法和发明性实施方案。成纤维细胞生长因子(FGF)组成在多种组织或器官中得到发育性调控并表达的超过20种结构相关的多肽的家族。FGF刺激生殖、细胞迁移和分化并且在骨骼和肢体发育、伤口治愈、组织修复、血细胞生成、血管发生和肿瘤发生中起主要作用(综述见于Ornitz，NovartisFoundSvmp232:63-76;讨论76-80,272-82(2001))。由属于蛋白激酶的受体酪氨酸激酶(RTK)家族的特异性细胞表面受体介导FGF的生物作用。这些蛋白质由细胞外配体结合结构域、单个跨膜结构域和在结合FGF时经历磷酸化的细胞内酪氨酸激酶结构域组成。目前鉴定了四种FGF國R:FGF-R1(也称作Flg,fms样基因，flt-2，bFGF-R，N-bFGF-R或Cekl)、FGF-R2(也称作Bek-细菌表达激酶-，KGFR，Ksam,Ksaml和Cek3)、FGF-R3(也称作Cek2)和FGF-R4。所有成熟的FGF-R都享有由氨基末端信号肽、三个细胞外免疫球蛋白样结构域(Ig结构域I、Ig结构域II、Ig结构域III，Ig结构域之间有酸性区("酸性框"结构域))、跨膜结构域和细胞内、激酶结构域组成的共同结构(UHrich和Schlessinger，Cell61:203,1990;Johnson和Williams(1992)Adv.CancerRes.60:1-41)。不同的FGF-R同工型对于不同的FGF配体具有不同的结合亲和性，因而FGF8(雄激素诱导的生长因子)和FGF9(胶质细胞活化因子)似乎对FGF-R3具有增加的选择性(Chellaiah等人，JBiol.Chem1994;269:11620)。近来的发现显示出由于FGF-R的突变而增加骨骼异常(包括软骨发育不全这一人类侏儒症的最常见形式)的数量。FGF-R1、FGF-R2和FGF-R3的不同结构域的特异性位点突变与常染色体显性人类骨骼发育异常相关，将该骨骼发育异常分类为颅缝早闭综合征和侏儒综合征(Coumoul和Deng，BirthDefectsResearch69:286-304(2003)。FGF-R3突变相关的骨骼发育异常包括软骨发育不良、具有发育延迟的严重软骨发育不全和黑棘皮病(SADDAN)以及致死性发育不全(TD)(Webster等人，TrendsGenetics13(5):178-182(1997);Tavormina等人，Am.J.Hum.Genet"64:722-731(1999))。也在两种颅缝早闭表型Muenke冠状烦缝早闭(Bellus等人，NatureGenetics,14:174-176(1996);Muenke等人，Am.J.Hum.Genet.，60:555-564(1997))和Crouzon综合征伴黑棘皮病(Meyers等人，NatureGenetics,11:462-464(1995))中描述了FGF画R3突变。Crouzon综合征与FGF-R2中的特异性位点突变相关而Pfeiffer综合征的家族性和散发性形式都与FGF-R1和FGF-R2中的突变相关(Galvin等人，PNASUSA,93:7894-7899(1996);Schell等人，HumMolGen，4:323-328(1995))。FGF-R中的突变导致突变受体的组成型活化和增加的受体蛋白酪氨酸激酶活性，导致细胞和组织不能分化。特别地，软骨发育不全突变导致突变受体增强的稳定性，从下调解离受体活化，导致受限制的软骨细胞突变和骨生长抑制(综述见于Vajo等人，EndocrineReviews,21(1):23-39(2000))。存在正在累积的关于在多种类型癌症中有突变的活化FGF-R3的证据。在两种常见上皮癌症(膀胱癌和子宫颈癌)以及在多发性骨髓瘤中组成型活化的FGF-R3是FGF-R3在癌中致癌作用的最初证据。此外，最近的研究报道了在很大比例的良性皮肤肿瘤中存在FGF-R3活化的突变(Logie等人，HumMolGenet2005)。FGF-R3似乎是目前膀胱癌症中最频繁突变的癌基因，其在全部膀胱癌病例的几乎50%和在具有表性膀胱肺瘤的约70%的病例中都突变(Cappellen等人，NatureGenetics1999，23;19-20;vanRhijn等人，CancerResearch2001，61:1265-1268;Billerey等人，Am.丄Pathol.2001，158:1955-1959，WO2004/085676)。另外，在膀胱癌(表性和侵润性)中报道了FGF-R3的过表达(Gomez-Roman等人，ClinicalCancerResearch2005)。在10-25%的多发性骨髓瘤病例中报道了作为t(4,14)染色体易位结果的FGF-R3异常过表达(Chesi等人，NatureGenetics1997,16:260-264;Richelda等人，Blood1997，90:4061画4070;Sibley等人，BJH2002,118:514-520;Santra等人，Blood2003，101:2374-2476)。在5-10。/。的具有t(4，14)染色体易位的多发性骨髓瘤中观察到FGF-R3活化突变并且它与肺瘤it^相关(Chesi等人，NatureGenetics1997，16:260-264;Chesi等人，Blood,97(3):729-736(2001);Intini等人，BJH2001，114:362-364)。在上下文中，FGF-R3发信号的结果似乎是细胞类型特异的。在软骨细胞中，FGF-R3极度活跃导致生长抑制(综述见于Omitz,2001)，而在骨髓瘤细胞中，其作用于肿瘤逸艮(Chesi等人，2001)。发现FGF-R3活性的抑制代表了治疗T细胞介导的炎症或自身免疫疾病的方法，如在T细胞介导的炎症或自身免疫疾病的治疗中，该疾病包括但不限于类风湿性关节炎(RA)、II型胶原关节炎、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疾(SLE)、银屑病、幼年型糖尿病、干燥综合征、曱状腺疾病、肉状瘤病、自身免疫性葡萄膜炎、炎症性肠病(节段性回肠炎和溃疡性结肠炎)、乳糜泻和重症肌无力。参见WO2004/110487。WO03/023004和WO02/102972也描述了FGF-R3突变导致的紊乱。在由FGF-R3以及也由其他FGF-R(尤其是与诸如异常FGF23血清水平相联的)所引起的疾病中，进一步应提及常染色体显性低血磷性询偻病(ADHR)、X染色体连锁的低血磷性佝偻病(XLH)、肺瘤诱导的软骨病(TIO)、骨纤维性发育不良(FH)(也参见X.Yii等人，Cytokine&GrowthFactorReviews16，221-232(2005),和X.Yu等人，TherapeuticApheresisandDialysis9(4)，308-312(2005))。在乳腺癌中牵涉了FGF-R1、FGF-R2和FGF-R4的基因扩增和/或过表达(Penault國Llorca等人，IntJCancer1995;Theillet等人，GenesChrom.Cancer1993;Adnane等人，Oncogene1991;Jaakola等人，IntJCancer1993;Yamada等人，NeuroRes2002)。FGF画R1和FGF-R4的it^达也与胰腺癌和星形细胞瘤相关(Kobrin等人，CancerResearch1993;Yamanaka等人,CancerResearch1993;Shah等人，Oncogene2002;Yamaguchi等人，PNAS1994;Yamada等人，NeuroRes2002)。前列腺癌也与FGF-Rlit4J^目关(Giri等人，ClinCancerRes1999)。血管发生也涉及FGF/FGF-R。因此，也将把向FGF-R体系预见为抗血管发生疗法以治疗原发肿瘤以及转移(参见例如Presta等人，Cytokine&GrowthFactorsReviews16,159-178(2005))。在口腔鳞状细胞癌的情形下，也描述了突变，尤其是在FGF-R3(例如FGF-R3b)中的突变对这些受体的组成型活化起主要作用(参见例如Y.Zhang等人，Int.J.Cancer117，166-168(2005)。报道了FGF-R,尤其是FGF-R1的增强的(尤其是支气管的)表达与慢性阻塞性肺病(COPD)相关(参见例如A.Kranenburg等人，J.Pathol.206，28-38(2005))。也描述了抗拮FGF-R,尤其是FGF-R1或FGF-R4的方法可用于治疗肥胖、糖尿病和/或与其相关的疾病，例如代谢综合征、心血管病、高血压、异常胆固醇和甘油三酯水平、皮肤病学紊乱(例如感染、静脉曲张、黑棘皮病、湿疹、运动耐受不良、2型糖尿病、胰岛素耐受性、高胆固醇血症、胆石症、整形外科损伤、血栓栓塞性疾病病、冠脉或血管限制(例如动脉粥样硬化)、日间嗜睡、睡眠呼吸暂停、晚期肾病、胆嚢疾病、痛风、热失调、受损性免疫应答、受损性呼吸功能、创伤后感染、不育症、肝病、下腰痛、妇产科并发症、胰腺炎、中风、手术并发症、压迫性尿失禁和/或胃肠疾病(参见例如WO2005/037235A2)。也描述了在视网膜母细胞瘤的异常发信号中涉及酸性成纤维细胞生长因子(尤其是FGF-1)和FGF-R1，导致在FGF-1结合时的增殖(参见例如S.Siffroi-Fernandez等人，Arch.Ophthalmology123，368-376(2005))。显示了滑膜肉瘤的生长被成纤维细胞生长因子信号途径的打断所抑制(参见例如T.Ishibe等人，Clin.CancerRes.11(7)，2702-2712(2005))。此外，也可以在甲状腺癌的情形下阐明FGF-R的参与。在上面提及的所有情形下，可以合理地期望调节FGF-R信号的异常活性(尤其是此种激酶活性的抑制)可用于所提及疾病的治疗。无论如何，可以期望具有何时使用药物进行治疗可以预期是有用的指示，该药物调节(例如抑制或活化)FGF-R信号，并且进一步期望具有标记以允许监控FGF-R调节以及用该调节化合物治疗是否有效。尤其希望当用抑制FGF-R信号的药物治疗时具有指示。FRS-2(也称作SNT1)是用作FGF-R活化和细胞内信号途径之间主要联系的脂锚定连接物蛋白质(Lin等人，Mol.CellBiol.18:3762-3770，1998;Xu等人，J.Biol.Chem.273:17987-17990，1998;Dhalluin等人，Mol.Cell6:921-929，2000;Ong等人，Mol.CellBiol.20:979-89，2000)。FRS-2包括与FGF-R的近膜区组成型地相关联的磷酸酪氨酸结合类别(PTB)的受体识别序列，以及具有多个酪氨酸和丝氨酸磷酸化位点的效应结构域。FGF-R活化导致FRS-2酪氨酸残基磷酸化，其随后募集Grb2和酪氨酸磷酸酶Shp2而起始MAPK和P13K信号通鋭Xu等人，1998，loc.cit.;Ong等人，2000，loc.cit.;Hadari等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA98:8578-83,2001)。在破坏FRS-2基因后的小鼠发育期间观察到的胚致死表型反应了FRS-2在FGF信号中的重要性。此外，FRS-2-缺陷小鼠胚胎成纤维细胞显示了FGF-诱导的迁移、增殖和MAK活化的损伤(Hadari等人，2001)。发明概迷出人意料地，现在发现了FRS-2的磷酸化(尤其是酪氨酸磷酸化)状10态可以作为生物标记用于此类针对所提及(尤其是增殖性)疾病和紊乱的调节化合物的效力尤其显示了在此类对于FGF-R信号的抑制敏感的细胞中而非在增殖不依赖于FGF-R的那些细胞系中，FRS-2是高度酪氨酸磷酸化的。因此本发明是基于通过FGFR调节物的FGFR抑制导致磷酸化的FRS-2水平降低的发现。在增殖(例如肿瘤)细胞中，对FGF-R信号抑制进行应答的细胞中的FRS-2酪氨酸磷酸化程度当存在FGF-R信号抑制剂时减小，而在不应答抑制的细胞中，没有检测到酪氨酸磷酸化水平，也就是非常低至零一一或者更通常是不易于通过增加调节物(尤其是抑制剂)而改变，并且可以期望只有显示出FRS-2酪氨酸磷酸化的细胞才显示对于FGF-R信号的抑制有敏感性。或者，想要FGF-R信号活化时(例如在伤口愈合的情形下)，也可能检测激活剂(例如FGF衍生物等)是否导致FRS-2、其变体或其包括磷酸酪氨酸的片段的磷酸化的增加，因此指示(于K可期望的)FGF-R信号的活化。因此，在增殖细胞中FRS-2的酪氨酸磷酸化程度(尤其是酪氨酸磷酸化的存在)可以用于区分在用FGF-R信号调节物(尤其是抑制剂)治疗时能够反应的细胞与对于此种治疗不应答的细胞。因此，细胞中FRS-2酪氨酸磷酸化状态是针对通过FGF-R信号的抑制剂调节(尤其是抑制)(例如不期望的)细胞增殖的可能性的生物标记。FRS-2酪氨酸磷酸化的水平也可以用于离体确定FGFR及其变体的调节物的活性。此外，FRS-2酪氨酸磷酸化(或者FRS-2、其变体或者其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的同义词)的测定尤其在鉴定调节FGF-R活性(尤其是涉及其活性)的化合物/药物中是有用的，并且也可用于鉴定可能受益于用FGF-R调节物(尤其是抑制剂)治疗的患者的诊断方法，以及用于监控该治疗的效力。第一实施方案中，本发明涉及鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节(尤其是抑制)敏感的细胞(优选分离的，例如在细胞培养物或细胞悬液中，包括分离的细胞，或者来自分离的组织和/或器官，通常来自生物样品，最优选来自患者的细胞)的方法，包括测定在生物样品中FGF-R底物2(FRS-2)、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化状态，其作为针对此类对抑制的敏感性的生物标记。再一实施方案中，本发明涉及使用在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中鉴定的磷酸化(尤其是磷酸酪氨酸)作为用于细胞或组织或器官(尤其是来自患者的生物样品的)的生物标记的方法或者涉及在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中鉴定的磷酸化(尤其是磷酸酪氨酸)的应用，所述细胞或组织或器官显示异常活跃，尤其是組成型活化的FGF-R信号，尤其是可用FGF-R或其变体的抑制剂治疗和对于此种抑制剂有应答，所述方法或应用包括通过能够识别FRS-2中磷酸酪氨酸的生物特异性识别剂，测定来自生物样品的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中磷酸酪氨酸的存在，FRS-2中磷酸化的阳性发现表明异常活跃，尤其是组成型活化的FGF-R信号，并且优选地，为了将对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的抑制剂有应答的细胞或组织或器官与不应答的此类细胞或组织或器官区分，比较在缺乏和存在由FGF-R或其变体介导的信号的抑制剂时的磷酸化状态，在存在抑制剂时的磷酸化降低表示此种应答性。本发明也涉及鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节(尤其是抑制)有敏感性的细胞(优选分离的，例如在细胞培养物或细胞悬液中的细胞，包括分离的细胞，或者来自分离的組织和/或器官，通常来自生物样品，尤其来自患者的细胞)的方法，包括a)将生物样品与能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂接触，和b)用能够识别磷酸4匕状态的生物特异性识别剂来测定所述FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中酪氨酸的磷酸化状态，和c)将磷酸化状态与涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体(尤其是异常活跃，例如组成型活化形式)的信号的抑制的敏感性和/或症状状态和/或治疗效力相关联，再一实施方案中，本发明也涉及用于鉴定对于涉及FGF-R或其变体的信号调节(尤其是抑制)敏感的生物样品(尤其来自患者)的试剂盒，尤其是用于鉴定用FGF-R抑制剂治疗有用的患者的试剂盒，包括用于测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的礴酸化状态的工具，尤其是用于鉴定生物样品(优选来自患者)中磷酸化的，更尤其是酪氨酸磷酸化的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的工具，作为用于此种对调节(尤其是抑制)有敏感性的生物标记；其中优选如果该试剂盒允许在缺乏调节，更优选在缺乏FGF刺激下，更确切地说更优选在FGF-R信号的組成型活化的情形下，发现磷酸化的阳性，这表明对于抑制的敏感性，尤其是相比于没有抑制剂治疗的样品，如果用抑制剂治疗的样品中磷酸化减少。本发明的又再一实施方案涉及能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式(尤其是识别其中的磷酸酪氨酸)的生物特异性识别剂(尤其是抗磷酸酪氨酸抗体)的应用，或者涉及所述生物特异性识别剂用于鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节(尤其是抑制)敏感的细胞，尤其是来自生物样品，尤其是来自患者，(更尤其是用于鉴定用FGF-R抑制剂治疗有用的患者)，其中所述应用优选包括测定所述FRS-2或其变体或片段的磷酸化状态；其中在不存在调节下的磷酸化的发现优选意味着可以期望对所述抑制有敏感性；优选用于鉴定异常活跃，尤其是非FGF-依赖的活化，更尤其是FGF-R信号的组成型活化。优选的是生物特异性识别剂在对于用FGF-R信号抑制剂治疗有应答的患者的症状鉴定中的应用或者用于其的生物特异性识别剂，包括鉴定来自所述患者的生物样品中FRS-2、其变体或其包括磷酸酪氨酸的片段的磷酸化，尤其是酪氨酸磷酸化。本发明的另一实施方案涉及测定FRS-2磷酸化(或FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的同义词)以用于鉴定涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节物(调节活性的化合物或药品)的方法，包括测定在此种调节物存在及不存在下FRS-2磷酸化状态，并且分别地，如果在加入所述(可能的)调节物的情形下发现所述磷酸化减少，则将该调节物指定为信号抑制剂的类别，如果在加入所述调节物的情形下发现所述磷酸化增加，将该调节物指定为信号活化物的类别；尤其是用于鉴定显示出FGF-R信号异常活跃，尤其是非FGF-依赖的活化，更尤其是组成型活化的细胞。本发明另一实施方案涉及鉴定可受益于FGF-R调节物(尤其是抑制剂)治疗的患者的诊断方法，或能够识别FRS-2、其变体或者其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂(特别是抗磷酸酪氨酸抗体)在其中的应用，或者在鉴定可受益于FGF-R调节物(尤其是抑制剂)治疗的患者中使用的所述生物特异性识别剂，尤其包括测定没有抑制剂时来自该患者的生物样品中是否存在此磷酸化(尤其是表明患者可能受益于抑制剂治疗的此种抑制剂的阳性发现)以及优选地在存在抑制剂时其在来自此患者的生物样品中是否减少，或者监控用此种FGF-R调节物(尤其是抑制剂)治疗的效力的方法和应用，治疗，包括测定来自该患者的生物样品中，在没有治疗而有阳性发现时，此种磷酸化是否改变，尤其是存在调节物(尤其是抑制剂)时的减少；优选地在鉴定该患者的生物样品中FGF-R信号的异常活跃，尤其是非FGF-依赖的活化，更尤其是组成型活化的应用。本发明又另一实施方案涉及i貪断对用FGF-R信号的抑制剂治疗有应答的(尤其是增殖性)疾病(或患者)的方法，包括鉴定来自患者的生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的(优选酪氨酸)磷酸化形式，优选地用能够识别FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂，或者涉及所述生物特异性识别剂在所述诊断方法中的应用；其优选地在鉴定FGF-R信号的异常活跃，尤其是非FGF-依赖的活化，更尤其是组成型活化中的应用。本发明的又另一实施方案涉及i^断对于用FGF-R信号的抑制剂治疗14不敏感的增殖性疾病的方法，包括鉴定生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的缺乏，优选地用能够识别FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂，或者涉及所述生物特异性识别剂在所述诊断方法中的应用。本发明另一实施方案涉及监控患者对于依赖于FGF-R信号的紊乱的治疗疗法进行应答的方法，包括在所述疗法前获得所述患者的生物样品，分别测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的存在，尤其是磷酸化的程度，并在开始所述疗法后获得一个或多个进一步的生物才羊品并测定所述FRS-2、所述其变体或所述其包括酪氨酸的片段的磷酸化程度是否改变，尤其AA否减少，其中磷酸化程度的减少表明成功的治疗。本发明的又进一步的实施方案涉及能够识别磷酸化的FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂在制造诊断物中的应用，该诊断物用于从生物样品的细胞或组织中鉴定对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节敏感的细胞，所述鉴定包括测定FGF-R底物2(FRS-2)、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态。又进一步的实施方案中，本发明涉及能够识别磷酸化的FRS-2或其变体或其片段的生物特异性识别剂鉴定细胞的应用，该细胞对于鉴定调节FGF-R信号的化合物有用。本发明进一步的实施方案涉及鉴定增殖需要用于增殖的FGF受体活化，尤其是其组成型活化的并且应答FGF-R信号抑制的细胞的方法，包括a)将分离细胞或组织的样品加入缺乏FGF-R抑制剂的培养基，以及将平行样品加入缺乏FGF，存在FGF-R受体抑制剂的培养基，b)从所述样品中至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段；c)测定所述样品中FRS-2的磷酸化状态；和d)比较被抑制剂处理的样品和没有被处理的样品中的磷酸化状态，存在抑制剂下的磷酸化减少表明适于鉴定可用于治疗包括FGF-R信号异常活跃的症状的抑制剂的细胞。过FGF依赖的或非FGF依赖的用于增殖的FGF受体活化(尤其是组成型活化)而增殖。本发明的再又一实施方案涉及使用能够识别磷酸化的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂鉴定FGF-R依赖型信号的潜在抑制剂的方法或该生物特异性识别剂的应用，包括用所述识别剂从生物样品中测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，并且在发现磷酸化的情形下，将存在检测化合物和其不存在下的磷酸化程度进行比较，磷酸化的降〗氐表明该检测化合物作为FGF-R依赖型信号的抑制剂的可用性。所有前述方法、应用、试剂、试剂盒和本发明的其他实施方案优选地允许鉴定具有可以期望为对于用FGF-R信号调节物治疗有应答的症状，尤其是紊乱或疾病的患者，尤其是在FRS-2、其变体、其包括酪氨酸的片段中磷酸-酪氨酸的阳性鉴定的情形下。除非另有指明，否则此处之前以及此处之后使用的一般术语优选地在本公开内容的上下文中具有下面的含义一一此处使用(尤其是在权利要求中)的多种一般表达中任何一种或多种可以独立于其他术语而被下面提供的更具体的定义所代替，因而限定了本发明的优选实施方案显示出"对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节敏感的"细胞优选地指对用所述信号的调节物(尤其是抑制剂)治疗有应答的细胞，并且其包括在来自患者的生物样品中。这些细胞显示出在FGF-R调节物存在下，FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化相比于缺乏调节物下的磷酸化有改变，尤其是在调节物是抑制剂的情形下，发现磷酸化增加，或者更优选地，调节物是抑制剂时发现磷酸化降低。调节物(优选抑制剂)优选是与FGF-R或其变体结合的分子，并且优选地抑制关于FRS-2或其变体的其蛋白激酶活性，优选酪氨酸蛋白激酶活性。"磷酸化状态"(或者"磷酸化程度")指在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的一级M酸序列中不存在或者部分或完全存在磷酸化的丝氨酸、苏氨酸和/或(优选且只有)酪氨酸分子。根据本发明，磷酸化状态是例如将来自罹患依赖于(例如組成型)FGF-R信号(可以显示存在磷酸化)的诸如疾病或紊乱的症状的患者的生物样品从没有给出此种依赖性的样品(可以显示缺乏或只存在微弱磷酸化)中区分开的手段。尤其地，在存在和缺乏FGF-R信号调节物(尤其是抑制剂)下孵育后，通过比较生物样品的磷酸化状态，能够将其中可以调节(尤其是抑制)FGF-R信号的生物样品(并且其因而对于此种调节物，尤其是抑制剂的治疗有应答，在抑制剂的情形下，其如果是在没有抑制剂时发现磷酸化的情形则在存在抑制剂时此磷酸化得到减少或消除)与其中该调节(尤其是抑制)不影响磷酸化状态(也就是在抑制剂的情形下，其中存在或缺乏抑制剂时都不存在磷酸化，或者相比于有或没有抑制剂的样品，没有观察到给定磷酸化的改变)的生物样品区分开。更优选地，本发明允许鉴定这样的细胞，其尤其由于FGF-R信号异常活跃并且最尤其是由于FGF-R信号的组成型活化，过度增殖并且因此显示出FRS-2或其变体中酪氨酸磷酸化并因而期望为对于用FGF-R信号抑制剂治疗是有应答的(如可以通过检测在FGF-R信号抑制剂存在和不存在下它们的磷酸化状态来进一步区分)，允许将它们从不存在此种磷酸化并且因此不期望FGF-R信号抑制剂治疗在其中会成功的细胞中区分。通常，对于不存在FGF刺激下或在生物样品中也存在的FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化(尤其是酪氨酸磷酸化)的发现因而是根据本发明高度优选的生物标记，并且所有的发明实施方案都极其最特别地涉l义现显示出FGF-R或其变体这一类型的异常活跃，尤其是组成型活性的此种细胞。如果该生物样品来自患者，在存在和不存在调节物(尤其是抑制剂)下的磷酸化状态(本文中该术语也可以由术语"磷酸化程度"代替)和磷酸化的存在或者变异的缺乏因而允许确定患者是否可以受益于调节物(尤其是抑制剂)的治疗(可以将在存在抑制剂时发现磷酸化减小或无磷酸化，而在不存在抑制剂时发现较高的磷酸化的那些患者预测为受益于此种抑制剂的治疗)。无论用于本文何处，"磷酸化"优选地指酪氨酸磷酸化。患者优选温血动物，更优选哺乳动物，更优选人类，其易于罹患或正在罹患(至少部分)取决于FGF-R信号过活性，尤其是由于FGF-R信号异常活跃，尤其是由于FGF-R信号组成型活化，或者因为其他原因(例如对于FGF增大的敏感性和/或增加的FGF水平，增加的FGF-R生物合成等)的症状或紊乱。症状，特别是选自下面的疾病或紊乱很重要人类侏儒症的最常见形式的骨骼异常(包括软骨发育不全)、分类为颅缝早闭综合征和侏儒综合征的骨骼发育不良，例如软骨发育不良、伴有发育延迟的严重软骨发育不全以及黑棘皮病(SADDAN)和致死性发育不全、Miienke冠状颅缝早闭、Crouzonz综合征伴黑棘皮病、常染色体显性〗^fir磷性佝偻病、X染色体连锁的低血磷性钩偻病(XLH)、肿瘤诱导的软骨病、骨纤维性发育不良。自免疫疾病，例如类风湿性关节炎、II型胶原关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼瘠、银屑病、幼年型糖尿病、干燥综合征、曱状腺疾病、肉状瘤病、自身免疫性葡萄膜炎、炎症性肠病(节段性回肠炎和溃疡性结肠炎)、乳糜泻和重症肌无力、口腔鳞状细胞癌。慢性阻塞性肺病、肥胖、糖尿病和/或涉及其的疾病，例如代谢综合征、心血管病、高血压、异常胆固醇和甘油三酯水平、皮肤病学紊乱(例如感染、静脉曲张、黑棘皮病、湿疹、运动耐受不良、2型糖尿病、胰島素耐受性、高胆固醇血症、胆石症、整形外科损伤、血栓栓塞性疾病、冠脉或血管限制(例如，动脉粥样硬化)、日间嗜睡、睡眠呼吸暂停、晚期肾病、胆嚢疾病、痛风、热失调、受损性免疫应答、受损性呼吸功能、创伤后感染、不育症、肝病、下腰痛、妇产科并发症、胰腺炎、中风、手术并发症、压迫性尿失禁和/或胃肠疾病。特别重要的是增殖型紊乱，尤其是组织、器官或血细胞的癌症或肿瘤疾病，例如膀胱或子宫颈的上皮癌症、多发性骨髓瘤、皮肤肿瘤、乳腺癌、胰腺癌、星形细胞瘤、前列腺癌、其中血管发生起作用的实体肿瘤、视网膜母细胞瘤、滑膜肉瘤、甲状腺癌、进一步的黑素瘤、恶性淋巴瘤、胃肠癌、其它胰脏癌、肺癌、食道癌、肝癌、卵巢癌、子宫癌、前列腺癌、脑瘤、卡波西肉瘤、血管瘤、骨肉瘤、肌肉瘤、M母细胞瘤、8pll骨髓增生性紊乱或白血病；等。FGF-R是FGF(其也具有变体，例如多于20个基因和若干同工型)的高亲和性受体，可以发现其多种变体。如此处所4吏用，术语"FGF-R，，尤其是FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3和FGF-R4包括所有能够磷酸化FRS2以产生其磷酸酪氨酸形式的这些变体，尤其是组成型活化的或者由于与22种已知的成纤维细胞生长因子(FGF)中一种或多种结合(优选具有解离常数为10—3或更强，更优选1(T5或更强，还更优选10-7或更强)而活化的、仍旧能够磷酸化FRS-2以产生其磷酸酪氨酸形式(如用抗磷酸酪氨酸抗体(例如4G10)，或者尤其是通过实施例中的检测法所阐述)，或者在与WO2006/000420(其因此通过参考这些检测法而被包括败及的那些作为FGF-R3(细胞检测法)或FGF-R3(S^l检测法)相对应的检测法中显示出活性(酪氨酸磷酸化)的那些。优选地，变体包括约(意味着在使用"约，，时，向各数值特别地赋予土10%，或优选准确地为该数值)70%或更高同一性，更优选至少约85%或更高同一性，还更优选约90%或更高同一性，又更优选约95%或更高同一性，非常优选98%或更高同一性的序列(以氛基酸为准)，优选由该序列组成。FGF-R(尤其是FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3或FGF-R4)与其变体之间序列同一性(也称作同源性)的百分数优选通过普遍用于这一目的使用的计算机程序来确定，例如Gap程序(WisconsinSequenceAnalysisPackage,用于Unix的笫8版,GeneticsCmputerGroup,UniversityReseachPark,MadisonWisconsin,USA,其4吏用SmithandWaterman算法(Adv.Appl.Math.2:482-489(1981)，尤其是使用具有空位开放罚分为12和空位延伸罚分为1的仿射空位检索。除了FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3和FGF-R4的原始序列以外，用于比较上面给出的所有序列变体的同一性的优选M为对于FGF-R1，蛋白质序列给出于http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgival=M34185;(登录号No.M34185);对于FGF-R2,蛋白质序列给出于http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgidb=nucleotide&val=l08773805(登录号No.NM—022970NM—022969);对于FGF-R3，蛋白质序列给出于http:〃www.ncbi.nlm.nih,gov/entrez/viewer.fcgidb=nucleotide&val=13112047(登录号No.NM_022965);以及对于FGF-R4，蛋白质序列给出于http:〃www.ncbi.nlm,nih.gov/entrez/viewer.fcgidb=nuccore&val=47524176(登录号No.NM_022963)。术语"变体"包括多种形式，例如尤其是同工型，突变体(非保守的或尤其是保守的，例如替代、缺失和/或添加一个或多个，例如至多10个氨基酸，也包括倒位)，等位变体，基于多态性的变体，融合蛋白，截短形式(例如相比于全长序列缺少10至50个氛基酸)等。尤其优选的是具体在下面段落中提及的突变体、同工型、易位变体对于FGF-R有四种常规基因，即FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3和FGF-R4，每种包括若干同工型(例如FGF-R1:a，b，c;FGF-R2:b，c;FGF-R3:b，c;FGF-R4:截短形式)。考虑到多态性，存在变体(例如对于FGF-R3:R248C(#)、S249C(#)、P250R、N328I、G370/372C(#)、S371/373C、Y373/375C(#)、G375/377C、G380/382R(#)、A391/393E(#)、I538/540V*、N540/542K、T、S或V、K650/652E(#)、K650/652M(#)、K650/652Q(#)、K650/652N、K650/652T(#)、X807/809C、G、L、R、W等，它们中的许多都参与疾病，例如癌症形成，例如由#标记的那些可以发现于，例如膀胱癌，和/或骨骼发育不良，对于FGF-R1和FGF-R2也存在相当的突变；作为易位的结果存在融合蛋白，例如FGF-R1:Bcr-FGF画R1、ZNF198-FGF-R1、CEP110-FGF-R1、FOP画FGF國Rl、Trim-FGF國R1、MY018A-FGF-R1、TIF1國FGF-R1;FGF曙R2:Tel-FGF-R3(参见例如Eswarakumat等人，J.Cytokine&GrowthFactorReviews16(2005)，139-149)。因此，通常也包括突变体(包括替代、缺失、插入)、同工型、多态性变体和融合蛋白，例如FGF-R蛋白质下述部分的一或多种Ig结构域I、酸性盒、IG结构域II、Ig结构域III、跨膜结构域、激酶l、激酶插入物和/或激酶2。也发现了不同的FRS-2类型，也称作SNT(Suc-相关的神经营养因子诱导的酪氨酸-磷酸化靶标)。蛋白质的FRS-2家族基本上由FRS-2a(SNT1)和FRS-2p(SNT2)组成，它们是募集含有SH2结构域的蛋白质Grbl和含有SH2的蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP)SHP-2的脂锚定的多底物连接物分子。FRS-2a的酪氨酰磷酸化对于FGF-R信号的起始是至关重要的。本公开内容中提及FRS-2处，这也涉及仍旧能结合FGF-R1、FGF-R2、FGF画R3和/或FGF陽R4的FRS-2-a(SNT1)和FRS画2(5(SNT2)的变体，也即尤其是那种与FRS-2a或FRS-2卩具有70%或更高同一性，更优选至少约85%或更高同一性，又更优选约90%或更高同一性，还更优选约95%或更高同一性，非常优选98%或更高同一性的FRS-2变体。FRS-2a或FRS-2P与其变体之间序列同一性(也称作同源性)的百分数优选通过普遍用于这一目的使用的计算机程序来确定，例如Gap程序(WisconsinSequenceAnalysisPackage,用于Unix的第8版，GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,MadisonWisconsin,USA,其使用SmithandWaterman算法(Adv.Appl.Math.2:482-489(1981)，尤其是使用具有空位开放罚分为12和空位延伸罚分为1的仿射空位检索。因此，FRS-2(FRS-2a或FRS-2p)的变体尤其包括同工型，突变体(非保守的或尤其是保守的，例如替代、缺失和/或添加一个或多个，例如至多10个氨基酸，也包括倒位)，等位变体，基于多态性的变体，融合蛋白，截短形式(例如相比于全长序列缺少10至50个氛基酸)等。尤其优选的是FRS-2a和FRS-2p;任何变体必须包括至少一个可进行磷酸化(尤其是酪氨酸磷酸化)的位点。包括酪氨酸的FRS-2片段或其变体是这样的肽，其具有可以在其链上被磷酸化并且仍可以被生物特异性识别剂所识别的一个或多个酪氨酸部分，该部分例如通过诸如S"6柳o^/w附蛋白酶、金黄色葡萄球菌(Sto尸/^;/oc0cc"sflwe"s,蛋白酶、胃蛋白酶、Asp-N画蛋白酶、月夷凝孚L蛋白酶或胰蛋白酶的蛋白酶的位点特异性蛋白水解切割或通过诸如用bromocyan的化学切割获得，优选地每种是对获自生物样品，尤其是细胞或组织或器官，特別尤其是肿瘤的FRS-2或其变体通过蛋白水解或化学切割而获得，该识别剂能够区分这些肽的未磷酸化和磷酸化形式，尤其是也能够从其他肽，例如从其他蛋白质区分这些肽。优选地，该片段具有,皮切割的FRS-2原始序列中5个或更多，更优选10个或更多个连续氨基酸，还更优选20个或更多，尤其是50个或更多个连续氨基酸。优选地，FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的"磷酸化形式"是在所述FRS-2、变体或片段的一级J^酸结构中一个或多个丝氨酸、苏氨酸或(尤其是)酪氨酸部分磷酸化的形式。术语"生物样品"可以例如指体液，例如唾液、血液、血浆、血清、滑液、腹腔积液、肺内液或尿，或者更优选指细胞、细胞组分或组织或器官样本(包括来自器官或尤其是肺瘤的样品)，或其两种或更多种的混合物，例如组织或器官样品或者细胞或来自待检测的细胞、器官或组织的细胞裂解物(例如来自受影响的或推测受影响的细胞、肿瘤或其他组织或器官)。优选地，指分离的生物样品。这些可源于培养物或者可优选地获自患者。在根据本发明的方法和应用中，通常使用分离的生物样品，就是说该方法和应用优选地在不存在患者时进行，例如在分离的实验室中等等。因此，获得生物样品以及其检验的步骤可以并且优选地为分离的，这种情形下，根据本发明的方法或应用与取样或者样品类型无关。当本文使用术语"细胞，，时，这指来自如刚刚定义的生物样品的细胞、细胞片段或细胞裂解物。一个优选实施方案中，根据本发明的方法或应用不包括从患者获得样品的步骤，也就是纯粹的体外方法或应用，也就是体外和缺乏患者的方法或应用。另一方面，也包括这一获得样品步骤的那些实施方案也是本发明允许的优选的实施方案。"生物特异性识别剂"可以是抗体，在特别的情形下，(尤其是作为二级或三级标记的生物特异性识别分子的情形下)，其也可以是抗体结合蛋白(例如，来自细菌的蛋白A或蛋白G)，或者它可以是适配体(其包可以被选择为期望的蛋白并且可以是，例如从组合蛋白质文库中分离的多肽的蛋白质)。如果未特别说明，本公开内容中的上位术语"抗体"旨在包括多克隆或单克隆抗体、双特异性抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体、或者下述这些形式中的任何一种或多种的片段其仍旧识别，尤其是显示出对于FRS-2和/或其变体和/或其包括酪氨酸的片段，包括与构象或(优选地)一级结构之一或两者都相关的(例如包括磷酸酪氨酸)表位有(实质上或全部选择性的)结合亲和性，该结合亲和性优选具有为10"或者更低的解离常数K，更优选具有10"或者更低的解离常数K，仍然更优选具有10-8或者更低的解离常数K。因此，"抗体"尤其指这样的蛋白质，其功能上限定为结合蛋白(能够与抗原上(与构象和/或一级结构相关)的特异表位结合的分子)而结构上限定为包括本领域技术人员识别为源自免疫球蛋白编码基因的框架区的氨基酸序列。结构上，天然发生的最简单的抗体(例如IgG)包括四条多肽链、两个重链(H)拷贝和两个轻链(L)拷贝，全部通过二硫键共价连接。在H和L链的可变(V)区发现对于结合表位的特异性。主要构成结构的抗体区是恒定区(C)。术语"抗体"包括整个抗体、还有抗体的结合片段、修饰或衍生物。其也可以是重组产物，或者双特异性抗体或者嵌合抗体，例如人源化抗体。抗体可以是多克隆混合物或(一种以上或尤其是一种)单克隆。他们可以是源自天然来源的完整免疫球蛋白以及可以是完整免疫球蛋白的免疫反应性(结合)部分。抗体可以显示多种形式(矛汴生物)，包括例如，Fv(由Vi^和VH结构域组成)、dAB片段(由VH结构域组成；参见Ward等人，Nature341:544-546，1989)、分离的互补决定区(CDR)、Fab(由VL、VH、CL和Cm结构域组成)、以及F(ab)2(包括在铰链区由二石雄连接的两个Fab片段的二价片段)以及单链，也可使用单链抗体(SCA)，其中重链和轻链基因组合成单个编码序列。一些SCA是含有轻链可变区、重链可变区以及连接它们的合适的多肽接头的重组分子。识别尤其指与各目的分子以高亲和性结合(优选特异的，例如以比样品中任何其他分子高100倍，优选1000倍，更优选IO，OOO倍地结合，或者在每种情形下，以比样品中任何其他分子更低的解离常数结合)，例如解离常数为io-4，更优选10—6,还更优选10-8或者在每种情形下更低。FRS-2(无论何时使用这一术语，其都包括FRS-2、其变体(尤其如状态的测定可例如包括从生物样品(例如包括组织裂解液、细胞或细胞片段)(至少部分)纯化FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段以及一或多个富集步骤，例如通过传统色谱法或快速蛋白液相色谱法(FPLC)和/或电泳技术，例如双相电泳或特别是十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，更优选通过对FRS-2特异的生物特异性识别剂(例如抗体，更优选多克隆抗体)的免疫沉淀，随后通过SDS-PAGE，或者通过此类技术中两种或更多种的任何适当的組合，随后用识别磷酸化的FRS-2、变体或片段(尤其是其中包括磷酸酪氨酸)的(自身未标记或标记的)生物特异性识别剂对磷酸化的FRS-2、其变体或片段进行筛选来测定磚酸化的(尤其是酪氨酸磷酸化的)FRS-2、其变体或片段的存在或定量的量，或者在FRS-2或变体或片段中的磷酸酪氨酸含量。"部分纯化"意指相比于样品中原始存在的其他蛋白质，产生了至少两倍，更优选至少5倍，还更优选至少10倍，最优选至少25倍的FRS-2、其变体或片段的富集。或者，识别FRS-2的生物特异性识别剂也可结合固体支撑物(例如膜或反应容器，例如多孔板)，例如共价地或通过吸附，与包括待评估的FRS-2的介质(例如组织或细胞裂解物)接触，然后可通过能够识别并标记磷酸化的FRS-2，尤其其中包括磷酸酪氨酸的生物特异性识别剂来测定结合了的磷酸化(尤其是酪氨酸磷酸化的)FRS-2的量。24又或者，对于FRS-2的磷酸化形式，尤其是对于磷酸酪氨酸特异的生物特异性识别剂可结合到固体支撑物(参见下述段)，与包括待评估的FRS-2的介质接触，然后使用能够识别并标记该结合的FRS-2的生物特异性识别剂来测定结合的FRS-2。每种情形下，标记步骤优选地包括一种或多种能够与结合到其表位的抗体结合的进一步标记的特异性识别分子，例如标记的蛋白A、标记的蛋白G、标记的链亲和素、标记的进一步抗体，例如对于抗体的恒定区等特异的抗体。原则上，一步测定也是可能的，例如用对于FRS-2(包括其变体或片段)的磷酸化形式特异的生物特异性识别剂，并且允许标记和/或分离它。此外，也可能测定样品中磷酸化(例如，通过只与磷酸化形式结合的生物特异性识别剂)和未磷酸化(例如通过只与未磷酸化形式结合的生物特异性识别剂)形式的FRS-2(例如，以便获得它们的比率)并因此获得关于样品中微细差别的更详细的信息，包括量化的可能性。用于确定FRS-2的磷酸化状态的这些或者多种其他方法是可能的并因此是本发明的一部分。用于识别剂或FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段，或用于免疫沉淀物的固相支撑物可例如为细胞和免疫化学中常规的塑料或者玻璃容器或者平板或多孑L板，或者它们可以是膜，例如硝酸纤维素或PVDF膜。在测定步骤中，对于生物特异性识别剂或与其结合的进一步标记的特异性识别分子(如上面和下面所限定)，优选以常规方式标记，例如通过酶结合，例如用过氧化酶，例如^^根过氧化酶，从而允许用常规反应(例如与染料或其他试剂反应)测定结合了的过氧化酶缀合的识别剂的存在，例如4吏用SuperSignalWestDuraExtendedDurationSubstrate检测系统(Pierce,PierceBiotechnology,Inc.,Rockford，IL，USA;#34075，包括用于光密度的鲁米那和增强剂)，或用4-氯-l-萘酚和H202、碱性磷酸酶(使用砩酸酶/BCIP-NBT体系)、p-半乳糖苦酶；苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、3-5-类固醇异构酶、酵母醇脱氢酶、a-磷酸甘油脱氢酶、磷酸丙糖异构酶或葡糖淀粉酶染色，用生物素/链亲合素体系的组分(不与生物特异性识别剂结合的组分)、显色剂、荧光物(例如荧光铕螯合物或Cy5)、生物发光或化学发光标记(例如异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白、藻青蛋白、别藻蓝蛋白、o-酞醛、荧光胺)或发射荧光的金属原子(例如铕或其它镧系元素)或者放射性标记等来标记，每种情形下，允许已知的并且尤其是本领域公知的标准检测反应，从而允许例如基于酶、着色物、化学发光、荧光、生物发光或放射性(例如荧光)或其他检测和量化的方法。或者，代替直接标记与磷酸化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段结合的生物特异性识别分子，可使用进一步标记的生物特异性识别分子，例如标记的抗体或细菌蛋白质(例如蛋白A或蛋白G)(例如，如刚刚提及的标记)，其例如与已经结合了的生物特异性识别分子(例如抗体)的恒定区或寡糖结合(例如标记的抗鼠或抗兔AB)，并因此允许可以使用结合的抗体的测定，如本领域已知。在每种情形下，可以由生物特异性识别剂(尤其是抗体，尤其是抗磷酸酪氨酸抗体)来特异性识别磷酸化(尤其是酪氨酸磷酸化)FRS-2，其允许特异性识别磷酸化的FRS-2或其包括磷酸化基团的片段的基于构象和/或一级结构的表位。"识别，，优选指特异性结合，例如以针对生物特异性识别剂所指明的解离常数结合，例如，多种抗磷酸酪氨酸抗体可获自多种商售来源，适于本发明的方法。例如，PY國7E1、PY-1B2和PY20是获自Zymed(SanFrancisco,Calif.)的单克隆鼠抗磷酸酪氨酸抗体，其以商标PY-PLUS.TM.单个或作为混合物销售。Zymed也提供了亲和纯化的多克隆兔抗磷酸酪氨酸抗体Z-PYl。鼠抗磷酸酪氨酸抗体，克隆PT-66获自Sigma(St.Louis,Mo.)。此外，可产单克隆抗磷酸酪氨酸抗体的方法描迷于U.S.专利No.4，543，439，其内容，其也可以用于筛选其它抗磷酸酪氨酸抗体)，以及可获得的抗磷酸酪氨酸抗体在此通过引用作为参考。出于免疫沉淀目的，尤其优选可以使用的多克隆或者双特异性抗体(与抗原(尤其是FRS-2)上两不同表位结合)以允许形成大的抗体/抗原聚集物，对于结合固相支撑物，提及的任何抗体或其仍旧显示出(尤其是特异性的)结合活性的衍生物是可行的。一个优选的变化方法中，根据本发明的方法或应用包括首先从生物样品(至少部分)纯化(例如通过沉淀或结合)FRS-2、其变体或其包括(未磷酸化的或磷酸化的)酪氨酸的片段(此后将任何这些变体都称作"FRS-2x")，例如使用能够识别FRS-2x的第一生物特异性识别剂(例如抗体)，然后从该生物特异性识别剂通过诸如SDS-PAGE分离FRS-2x,固定FRS-2x，例如通过将FRS-2x印迹到膜上，然后结合能够识别磷酸化的FRS-2x(尤其是磷酸化的酪氨酸)的第二生物特异性识别剂(其自身可为标记的以致不需要进一步的标记反应，或者未标记的)，并且(如果第二生物特异性识别剂自身尚未标记)进一步将标记过的生物特异性识别剂(所述标记和标记的生物特异性识别剂可优选如上面所定义)与结合至FRS-2x的第二生物特异性识别剂结合，并且鉴定结合的标记过的生物特异性识别剂。因而可以看出样品中是否存在磷酸化的(尤其是酪氨酸磷酸化的)FRS-2x或者其磷酸化的(尤其是酪氨酸磷酸化的)程度。贯穿^^开内容所提及的"包括酪氨酸的片段，，，它们可以是未磷酸化和/或(优选)磷酸化的形式。此处使用的免疫沉淀、标记、印迹和其他方法可以推导自标准操作，例如Harlow等人,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,1988;Coligan等人，CurrentProtocolsinImmunology,WileyInterscience，1991;E.Bast:MikrobiologischeMethoden((MicrobiologicMethods))，第二版，SpektrumAkademischerVerlag,Heidelberg/Berlin,2001;HansGtinterGassen/GangolfSchrimpf(编)，GentechnischeMethoden,第二版,SpektrumAkademiseherVerlag,Heidelberg/Berlin1999),其全部优选地通过引用作为参考。根据本发明的特殊实施方案，方法或应用可包括将来自患者生物样品的FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的(尤其是酪氨酸)磷酸化状态与从没有显示出对涉及FGF-R的信号抑制有敏感性的患者和/或从显示出有此种敏感性的患者获得的样品中之前所测定的磷酸化范围相比较以便确定该磷酸化状态是否足以得到针对涉及FGF-R的信号抑制的敏感性。磷酸化比率越高，期望的对FGF-R信号抑制的敏感性越高。当提及时，解离常数优选在pH7.4的磷酸緩冲盐中测量，该緩冲盐可以按下面制备可以通过将800gNaCl，20gKC1，144gNa2HP04和24gKH2P04溶解在8L蒸馏水中，并加满至10L来制备10L的10xPBS母液。pH为6.8，但当稀释至1xPBS时，其应变为7.4。稀释时，生成的1xPBS将具有终浓度137mMNaCl，lOmM磷酸盐，2.7mMKCl，pH7.4。如此处所理解，术语"生物标记"(或"标记")指其存在和/或浓度可以被检测并且与已知症状(尤其是取决于涉及FGF-R的信号和/或显示出敏感性的疾病或紊乱状况)相关的生物分子(此处尤其是未磷酸化的或磷酸化的FRS-2，或其变体或其包括酪氨酸的片段)。其也包括还允许测定FRS-2或其变体的磷酸化状态(尤其包括磷酸酪氨酸)的片段(其例如可通过对FRS-2进行蛋白酶处理(例如用位点特异性蛋白酶)等获得)。该生物标记差异存在于罹患对于涉及FGF-R或其变体的信号抑制有应答的症状(例如疾病或紊乱)的患者以及患有对于此种抑制不应答的疾病的患者中。本发明也涉及允许显示出对于涉及FGF-R或其变体的信号抑制敏感的试剂盒，包括作为对于此种抑制敏感性的生物标记而在生物样品中用于测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态的工具，尤其是鉴定磷酸化的，尤其是用于鉴定酪氨酸磷酸化的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的工具。根据本发明的试剂盒可以，例如是用于夹心免疫检测法(ELISA，包括夹心ELISA或竟争性ELISA),用于基于荧光的免疫检测法或用于其它免疫检测法或酶免疫检测法，例如基于表面增强激光解吸/离子化(SELDI)的免疫检测法、Western印迹、免疫沉淀、免疫组化、免疫荧光、放射免疫(RIA)和/或免疫放射分析(IRMA)的试剂盒。此种检测法需要的组分和成分是本领域已知的，并且根据本发明的试剂盒包括至少两种此组分，其允许鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态。试剂盒可包括生物芯片，例如适于捕获蛋白质的蛋白质生物芯片，例如来自CiphergenBiosystems，Inc.(Fremont,CA，USA)、PackardBioscienceCo.(Meriden，CT，USA)、Zyomyx(Hayward，CA，USA)、Phylos(Lexington,MA，USA)或Biacore(Uppsala,Sweden)，其例如描述于US6,225,047;WO99/51773;US6,329,209;WO00/56934;或US5,242,828中。优选地，根据本发明的试剂盒包括一一作为测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态的工具一一能够识别，尤其是结合磷酸化的FRS-2、其变体或其包括(优选磷酸化)酪氨酸的片段的生物特异性识别剂，尤其是抗体，更尤其是抗磷酸酪氨酸抗体；以及更优选另外一一作为用于至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的工具一一能够识别，优选免疫沉淀FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂，以及用于鉴定所述能够识别，尤其是结合FRS-2、其变体或其包括(优选磷酸化)酪氨酸的片段的生物特异性识别剂的标记。该标记可以优选地是其他生物特异性识别分子的形式，例如如上面所定义，在能够识别(尤其是结合)磷酸化的FRS-2、其变体或其包括(磷酸化的)酪氨酸片段的生物特异性识别剂结合到磷酸化的FRS-2、其磷酸化的变体或其包括磷酸化的酪氨酸的片段的状态下，该标记识别(尤其是结合)该生物特异性识别剂，该标记是按上述标记的，例如标记的蛋白A、标记的蛋白G、标记的链亲和素、标记的其他抗体，例如特异性针对抗体恒定区的抗体等等。允许调节(尤其是抑制)涉及FGF-R或其变体的信号的化合物是特别的调节物，优选是特别的抑制剂，其可以例如选自下組(尤其是人源化的)抗体、其片段，单链抗体，或尤其是其他化学剂，尤其是抑制剂，例如US6,774,237(其在此通过引用作为参考，尤其对于落入权利要求的化合物(终产物)，更优选其中具体作为实例提及的化合物)中提及的那些中的一种或多种、3-(2，6-二氯-3，5-二曱絲苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基氨基]-嘧咬-4-基}-1-甲基脲(本文中也称作抑制剂1，参见实施例1)、其他落入WO2006/000420A(其通过引用作为参考，尤其是对于落入权利要求的化合物(终产物)，更优选其中具体作为实例提及的化合物)的权利要求，或尤其在其中提及的化合物、PD17307(抑制剂2)、或其他落入专利US5，733，913(其通过引用作为参考，尤其是对于落入权利要求的终产物，更优选其中具体作为实例提及的化合物)的权利要求，或尤其在其中提及的化合物(终产物)、PD166866(J.Med.Chem.40:2296-2303,1997)。贯穿本说明书的说明和权利要求，措词"包括"和"包含"和该措词的变化，例如"包括了"和"包括有"通常意指"包括但不限于"，并且不旨在(也不会)排除其他部分、添加物、组分、整体或步骤，相反，"含有，，及其变化如"含有了"意指该措词所修饰的组分或特征就限于所提及的那些。当使用"包括，，或"包括有"时，适当且合理时，可以用"由……組成"代替它。本公开内容中对于文章或参考文献的任何提及并不旨在意指所参考的材料为现有技术而负面影响本发明的可专利性及范围。附图i兌明图1:图中给出的细胞系中的FRS-2酪氨酸磷酸化。将指数生长期的细胞裂解(参见实施例1)并且用a-FRS-2抗体对全部细胞裂解物进行免疫沉淀，随后用抗-pTyr抗体或抗-FRS-2抗体免疫印迹，或者直接用实施例1中的表1给出的抗-pFRS2抗体进行免疫印迹。WB=Western印迹，IP=免疫沉淀。图2:在RT4细胞中，用FGF-R抑制剂PD173074(抑制剂1，参见30实施例l的方法)，在RT112的情形下，用TKI258/CHIR258,4-#j^-5-氟_3-[6-(4-甲基-1-p底噪基)-111-苯并咪唑-2-基]-2(1H)-查啉酮(抑制剂2，参见实施例1的方法)处理后的FRS-2磷酸化的比较分析。按所示处理示出的细胞系。通过用特异性FRS-2抗体免疫沉淀，然后通过抗FRS-2的Western印迹或通过使用检测FRS2上磷酸化Tyrl96的抗体的Western印迹来测定FRS-2酪氨酸磷酸化。注意FRS-2蛋白通常显示出由MAPK对丝氨^/苏氨酸残基磷酸化而造成的不同的电泳迁移率(Lax等人，Mol.Cell10:709-719，2004)。Inhib.1=抑制剂1，Inhib.2=抑制剂2，DMSO=二甲亚砜。(A)=膀胱癌细胞系RT4(B)=膀胱癌细胞系RT112图3:在生长因子刺激下，FRS-2酪氨酸磷酸化的比较分析用FGF/肝素(50ng/ml〃5ng/ml)，EGF(10ng/ml)(来自R&DSystems,Inc"Minneapolis,MN，USA;#236-EG-200)或胰岛素(5照/ml)(Sigma,Sigma-Aldrich，Inc.,St.Louis，MO，USA;#1882)刺激膀胱癌细胞系RT112以及RT2。裂解细胞并回收全部蛋白质裂解物。使用实施例l的表1提及的抗体，通过免疫沉淀然后通过抗pTyr抗体Western印迹来测定FRS-2酪氨酸磷酸化。通过用抗磷MAPK(实施例1的表1中的pMAPK抗体)的Western印迹对全部细胞裂解物检测MAPK活化。通过用a-MAPK(实施例1的表1中的MAPK)的Western印迹监控等量的MAPK蛋白。WB=Western印迹；IP-免疫沉淀；Untr.-未处理的；INS=胰岛素。图1-3中，参考实施例1的表1，当用PTyr抗体进行Western印迹时，将来自SantaCruz的抗体#sc-8318用于免疫沉淀，当用抗FRS-2抗体进行Western印迹时，将抗体#05-502用于免疫沉淀。对于FRS-2进行Western印迹的抗体是来自SantaCruz的弁Sc-8318。"#"表示目录号。发明的优选实施方案下面，提及本发明的一些优选的实施方案-如上面所提及，其他优选的实施方案可以通过用上面或实施例中给出的定义来替代描述该实施方案的一个或多个术语而获得。(Al)—个优选的实施方案中，本发明涉及鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节(尤其是抑制)敏感的细胞的方法，包括测定在生物样品中FGF-R底物2(FRS-2)、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，作为用于对此种抑制敏感的生物标记，其中将FRS-2的酪氨酸磷酸化状态用作生物标记。(A2)本发明另一优选的实施方案涉及才艮据(A2)的方法，其中将不存在调节物(尤其是FGF)下，FRS-2或其变体中(尤其是酪氨酸)磷酸化的阳性发现，用作对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的抑制可以有效影响信号，尤其是抑制该信号的指示。(A3)本发明另一优选的实施方案涉及根据(A2)或(A3)的方法，其中将存在和不存在涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的抑制剂下，孵育后的生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的将磷酸化抑制的发现当作期望的该应答的指示。(A4)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Al)-(A3)任一项的方法，其中术语FGF-R或变体包括由于结合(优选具有解离常数为10—3或更强，更优选为10—5或更强，还更优选为10—7或更强)一种或多种成纤维细胞生长因子而活化的，或者优选组成型活化的、仍旧能够磷酸化FRS-2以产生其磷酸酪氨酸形式(如用抗磷酸酪氨酸抗体所阐述)的FGF-R的所有那些形式或变体，并且其包括分别与FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3或FGF-R4之一相比时，有70%或更高同一性，更优选至少85%或更高同一性，还更优选90。/o或更高同一性，又更优选95%或更高同一性，非常优选98%或更高同一性的序列(优选由该序列组成)，并且其中术语FGF-R底物2(FRS-2)、其变体或其包括酪氨酸的片段包括还能够与FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3和/或FGF-R4结合的FRS-2的那些形式，尤其是与FRS-2a或FRS-2p具有70%或更高同一性，更优选至少约85%或更高同一性，还更优选约90%或更高同一性，又更优选约95。/。或更高同一性，非常优选98%或更高同一性的FRS-2变体，或其包括磷酸酪氨酸的片段。(A5)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Al)-(A4)任一项的方法，包括至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段，然后用能够识别FRS-2、其变体或其片段的磷酸化形式，尤其是其中包括的磷酸酪氨酸的生物特异性识别剂来测定磷酸化的，尤其是酪氨酸磷酸化的存在或量，其中标记并且给予所述生物特异性识别剂或者标记在给予后能够结合所述生物特异性识别剂的进一步的生物特异性识别分子，从而允许检测FRS-2或其变体或其片段的磷酸化形式。(A6)本发明另一优选的实施方案涉及(A5)的方法，其中生物特异性识别剂是抗体。(A7)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Al)-(A6)任一项的方法，其中将包括磷酸酪氨酸的FRS-2、其包括磷酸酪氨酸的变体，或者其包括磷酸酪氨酸的片段用作生物标记，其指示显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节(尤其是抑制)敏感的细胞，并且优选包括使用抗磷酸酪氨酸抗体形式的生物特异性识别剂来测定所述FRS-2、其变体或片段中酪氨酸磷酸化的存在或量。(A8)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Al)-(A7)任一项的方法，其中将对于FGF-R信号调节(尤其是抑制)敏感的细胞与非FGF-R依赖地增殖的那些细胞相区分，尤其是发现了对抑制敏感的细胞显示出非FGF依赖的，更尤其是组成型的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化，尤其是酪氨酸磷酸化。(A9)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Al)-(A8)任一项的方法，其中将不存在FRS-2的磷酸化，尤其是不存在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段下，不存在磷酸化当作不期望由FGF-R信号抑制剂来抑制FGF-R信号的证据。(Bl)或者，本发明优选地涉及将在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中鉴定的磷酸化(尤其是磷酸酪氨酸)用作用于细胞或组织或器官的生物标记的方法或在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中鉴定的磷酸化的应用，所述细胞或组织或器官显示出异常活跃，尤其是组成型活化的FGF-R信号，尤其是可用FGF-R或其变体的抑制剂治疗或者对于此种抑制剂有应答，所述方法或应用包括通过能够识别FRS-2中磷酸酪氨酸的生物特异的识别剂，测定来自生物样品的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中磷酸酪氨酸的存在，磷酸化的阳性发现表明异常活跃，尤其是组成型活化的FGF-R信号。(B2)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)的方法，进一步包括为了将对于涉及FGF-R或其变体的信号的抑制剂有应答的细胞或组织或器官与不应答的此类细胞或组织或器官区分，比较不存在以及存在由FGF-R或其变体介导的信号的抑制剂下酪氨酸磷酸化状态，存在抑制剂时，酪氨酸磷酸化的降低表示此类应答。(B3)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)或(B2)的方法，其中将在存在以及不存在涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的抑制剂下，孵育后的生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨细胞，其中将磷酸化部分或者全部抑制(也就是磷酸化减少)的发现当作期望的该应答的指示。(B4)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)-(B3)任一项的方法，其中术语FGF-R或变体包括由于结合(优选具有解离常数为10-3或更强，更优选为105或更强，还更优选为10—7或更强)一种或多种成纤维细胞生长因子而活化的，或者优选组成型活化的FGF-R的所有那些形式或变体、其仍旧能够磷酸化FRS-2以产生FRS-2的磷酸酪氨酸形式(如用抗磷酸酪氨酸抗体所阐述)，并且包括分别与FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3或FGF-R4之一相比时，有70%或更高同一性，更优选至少85%或更高同一性，还更优选90。/。或更高同一性，又更优选95%或更高同一性，非常优选98%或更高同一性的序列(优选由该序列组成)，34并且其中术语FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段包括还能够与FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3和/或FGF-R4结合的FRS-2的那些形式，尤其是与FRS-2a或FRS-2J5具有70%或更高同一性，更优选至少约85%或更高同一性，还更优选约90%或更高同一性，又更优选约95%或更高同一性，非常优选98。/。或更高同一性的FRS-2变体，或其包括磷酸酪氨酸的片段。(B5)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)-(B4)任一项的方法，包括至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段，然后用能够识别磷酸酪氨酸的生物特异性识别剂来测定所述FRS-2、所述变体或所述其包括酪氨酸的片段中磷酸酪氨酸的存在或量，其中标记并且给予所述生物特异性识别剂或者能够结合所述生物特异性识别剂的进一步的生物特异性识别分子，从而允许检测FRS-2或其变体或其片段的磷酸化形式。(B6)本发明另一优选的实施方案涉及(B6)的方法，其中生物特异性识别剂是抗磷酸酪氨酸抗体。(B7)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)-(B6)任一项的方法，其中将包括磷酸酪氨酸的FRS-2、其包括磷酸酪氨酸的变体，或者其包括磷酸酪氨酸的片段用作生物标记，其指示显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号抑制有敏感性的细胞，并且优选包括使用抗磷酸酪氨酸抗体形式的生物特异性识别剂来测定所迷FRS-2、其变体或片段中酪氨酸磷酸化的存在或量。(B8)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)-(B7)任一项的方法，其中将对于FGF-R信号调节(尤其是抑制)敏感的细胞与非FGF-R依赖地增殖的那些细胞相区分，发现其中尤其是非FGF依赖的，更尤其是组成型的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化，尤其是酪氨酸磷酸化。(B9)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Bl)-(B8)任一项的方法，其中将不存在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化当作不期望由FGF-R信号抑制剂来抑制FGF-R信号的证据。(B10)本发明另一优选实施方案涉及根据(Bl)-(B10)任一项的方法，包括a)将生物样品与能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂接触，和b)用磷酸酪氨酸生物特异性识别剂来测定酪氨酸的磷酸化状态，和c)将磷酸化状态与对涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)的信号抑制的敏感性和/或症状状态和/或治疗效力相关联。(CI)本发明进一步优选的实施方案涉及包括用于FGF-R或其变体的生物特异性识别剂以及能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂的试剂盒，用于从生物样品(尤其是细胞或组织或器官)鉴定对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)的信号的调节(尤其是抑制)敏感的细胞，所述试剂盒包括用于测定生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态(作为对抑制的此类敏感性的生物标记)的工具，包括能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂(尤其是抗磷酸酪氨酸抗体)作为确定磷酸化状态的工具以用于从细胞或组织或器官鉴定对涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)的信号的调节(尤其是抑制)敏感的细胞，包括测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，尤其是用于允许测定FGF-R信号的异常活跃，更尤其是FGF-R信号的组成型活化。(C2)本发明另一优选的实施方案涉及根据主张(CI)的试剂盒，其中能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂是抗磷酸酪氨酸抗体，并且用于FGF-R或其变体的生物特异性识别剂是单克隆或者多克隆抗体。(C3)本发明另一优选的实施方案涉及根据(CI)或(C2)的试剂盒，包括一一作为测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态的工具一一能够识别，尤其是结合磷酸化的FRS-2、其变体或包括(优选磷酸化)酪氨酸的片段的生物特异性识别剂，尤其是抗体，更尤其是抗磷酸酪氨酸抗体；以及此外——作为用于至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的工具一一能够识别，优选免疫沉淀FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂，以及用于鉴定所述能够识别，尤其是结合FRS-2、其变体或其包括磷酸化酪氨酸的片段的生物特异性识别剂的标记。(Dl)本发明另一优选的实施方案涉及能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂，以用于鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节(尤其是抑制)敏感的细胞(尤其是来自生物样品，更尤其是来自患者)，尤其是显示出FGF-R信号异常活跃，更尤其是组成型活化的细胞，其中所述应用优选包括测定所述FRS-2或其变体或其片段的磷酸化状态；其中在不存在调节下发现的磷酸化优选地表明可以期望对于所述抑制的敏感性。更优选地，该生物特异性识别剂用于鉴定患者对用FGF-R信号的抑制剂进行治疗有应答的症状。(D2)本发明另一优选的实施方案涉;s^艮据(Dl)的生物特异性识别剂，以用于鉴定显示出FGF-R信号的异常活跃，尤其是非FGF依赖的活化，更尤其是组成型活化的细胞。(D3)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Dl)-(D2)中任一项的生物特异性识别剂，其能够鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式，更优选其为抗磷酸酪氨酸抗体。(El)本发明进一步优选的实施方案涉及能够识别磷酸化的FRS-2或用，该诊断物用于从细胞或組织鉴定对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节敏感的细胞，所述鉴定包括测定FGF-R底物2(FRS-2)，其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，其中该生物特异性识别剂能够鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式，更优选抗磷酸酪氨酸抗体。(E2)本发明另一优选的实施方案涉及才艮据(El)的应用，用于鉴定显示出FGF-R信号的异常活跃，尤其是非FGF依赖的活化，更尤其是组37成型活化的细胞。(Fl)本发明又另一优选的实施方案涉及能够识别磷酸化的FRS-2、其变体或其片段的生物特异性识别剂的应用，以鉴定用于鉴别调节FGF-R信号的化合物的细胞，其中该生物特异性识别剂能够鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式，更优选为抗磷酸酪氨酸抗体。(F2)本发明另一优选的实施方案涉及根据(Fl)的应用，包括在存在和不存在已知的FGF-R信号抑制剂下，比较FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化程度，存在抑制剂时，磷酸化的减少表明细胞可用于鉴定其它抑制剂。(Gl)替代的优选实施方案中，本发明涉及鉴定增殖需要用于增殖的非FGF依赖的，(尤其是组成型)FGF受体活化并且应答FGF-R信号抑制的细胞的方法，包括a)将分离的细胞或组织样品加入不存在FGF-R抑制剂的培养基，以及在不存在FGF，存在FGF-R受体抑制剂的培养基中加入平行样品，b)从所述样品中至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段；c)测定所述样品中FRS-2的磷酸化状态；和d)比较被抑制剂处理的样品和没有被处理的样品中的磷酸化状态，存在抑制剂下的磷酸化减少表明适于鉴定可用于治疗包括FGF-R信号异常活跃的症状的抑制剂的细胞，其中步骤c)中磷酸化状态的测定通过能够鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式的生物特异性识别剂而进行，更优选通过抗磷酸酪氨酸抗体而进行。(Hl)本发明又进一步优选的实施方案涉及使用能够识别磷酸化的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂，以用于鉴定FGF-R依赖性^f言号的潜在抑制剂的方法或所述生物特异性识别剂的应用，包括用所述识别剂从生物样品中测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，在发现磷酸化的情形下，将存在检测化合物和其不存在下的磷酸化程度进行比较，磷酸化的降低表明该检测化合物作为FGF-R依赖型信号的抑制剂的用途，其中该生物特异性识别剂能够鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式，更优选为抗磷酸酪氨酸抗体。(H2)本发明另一优选的实施方案涉;^才艮据H1的方法或应用，其中该生物样品显示出FGF-R信号的异常活跃，尤其是非FGF依赖的活性，更尤其是组成型活性。(II)本发明进一步优选的实施方案涉及诊断对于用FGF-R信号抑制剂治疗有应答的疾病的方法，包括鉴定来自患者的生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式，其中所述鉴定优选以能够识别FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式的生物特异性识别剂，尤其是抗磷酸酪氨酸抗体进行。(12)更优选根据(II)的方法鉴定取自患者的生物样品中FGF-R信号的异常活跃，尤其是非FGF依赖的活化，更尤其是组成型活化，其优选地由鉴定酪氨酸磷酸化的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸部分的片段，尤其是也在EGF或其他FGF-R信号活化剂不存在下而显示。在所有前面以及下面的实施方案中，缺乏磷酸化的显示优选地用作从生物样品中鉴定可以期待为对于FGF-R信号抑制不应答的细胞，并且因此允许例如鉴定由于在该样品中获得的细胞或组织而具有症状的患者，并因此鉴定对于FGR-R信号抑制剂治疗不应答的以及不适于此种治疗的患者，并且因此避免该患者不必要地暴露于包括该抑制剂的治疗安排，而另一方面尤其允许鉴定基于取自患者的生物样品(其显示出优选FRS-2、其变体或其包括酪氨酸部分的片段的组成型磷酸化(指例如尽管缺乏FGF或其他FGF-R信号激活物仍然磷酸化)，尤其是酪氨酸磷酸化)的患者，并且鉴定尤其对于FGF-R信号抑制剂有应答的(生物样品在存在抑制剂时显示出减小的酪氨酸磷酸化)的患者，并且因此可以认为该患者可以适于FGF-R信号抑制剂作为药物的治疗。根据本发明最优选的所有的实施方案，其涉及在不存在FGF-R信号调节物(尤其是FGF)时生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中酪氨酸磷酸化的阳性鉴定，因为这意味着细胞显示出FGF-R信号活性(例如异常活跃或组成型活性)，其应当易受到FGF-R信号抑制的影响。当可以期待抑制剂对于待治疗的症状具有有益效果时，来自相应患者的生物样品将显示该患者在治疗时具有减小的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化程度。这是优选的情形。然而，反之也亦然，当活化物对于待治疗的症状具有有益效果时，来自相应患者的生物样品将显示该患者在治疗时具有增加的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化程度。用于本方发明的方法或应用之一的高度优选的是实施例中提到的方法和組分，以及其中提及的抗体。本发明也涉及摘要的内容，其因此通过引用作为参考。实施例下面的实施例用于il明本发明而非限制其范围。实施例l:免疫沉淀和Western印迹以区分细胞系中的FRS-2的磷酸化1方法1.1细胞系和细胞培养条件(ATCC:美国典型培养物保藏中心，通过LGCPromochemGmbH，Mercatorstr.51，Wesel，Germany或http:yVwww.lgcpromochem-atcc.com/叙；DSMZ:DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH=德国微生物和细胞培养物保藏中心，Braunschweig,Germany)。RT112:自原发性膀胱癌建立人类膀胱移行细胞癌，组织学分级G2，未记录时期(Masters等人，CancerRes.46:3630-6，1986)。细胞获自DSMZACC#418。RT4:自复发性膀胱癌建立的人类膀胱移行细胞癌，组织学分级Gl,T2期(Masters等人，1986，loc.cit.)。细胞获自ATCC#HTB-2。VMCUB-1:自原发性膀胱癌建立人类膀胱移行细胞癌。未记录时期以及组织学分级(Masters等人，1986，loc.cit.)。细胞获自DSMZACC#400。J82:自原发性膀胱癌建立的人类膀胱移行细胞癌，组织学分级G3，T3期(Masters等人，1986，loc.cit.)。细胞获自ATCC弁HTB-1。HT1197:自复发膀胱癌建立的人类膀胱移行细胞癌，组织学分级G4，T2期(Masters等人，1986,Ioc.cit.)。细胞获自ATCC#CRL-1473。在补充有1%L-谷氨酰胺(Amimed#5-10K00曙H),1%MEMNEAA(MEM非必需氨基酸溶液)(Amimed#5-13K00-H),1%丙酮酸钠(Amimed#5画60F00-H)和10%FCS(Gibco，InvitrogenAG，Basel，Schweiz，#10082-147的MEMEBS(具有Earls基本盐的最低基础培养基)(Amimed,Allschwil，Switzerland,#l-31F0-I)中生长膀胱癌细胞系。SUM52:源自乳腺癌患者的胸腔积液样本的人乳腺癌细胞系(Ethier等人，CancerRes.56:899-907，1996;Forozan等人，Br.J.Cancer81:132834，1999)。这一细胞系由Dr.NHynes，FriedrichMiescherInstitute,Basel,Switzerland提供。在补充有1。/。L-谷氨酰胺(Amimed#5-10K00-H)，2%FCS(Gibco#10082-147),0.1%BSA(Gibco#15260-037)，10mMHEPES(Gibco#15630-56),10拜T3(Sigma,Sigma-Aldrich，Inc.,St.Louis,MO,USA,#T6397)，l照/ml氢化可的松(Sigma#H0888)，胰岛素-转铁因子-硒补充剂(Gibco#51500-056)的HAM，SF12(Amimed#l-14F01隱I)中生长SUM52细胞。OPM2和KMSll:来自晚期疾病患者的人类多发性骨髓瘤(MM)细胞系。OPM2细胞获自DSMZACC#50。KMSll细胞由Dr.TOtsuki，KawasakiMedicalSchool,Okayama，Japan提供。报道了两种细胞系都携带t(4，14)易位并且表达FGF-IG的突变的、组成型活化形式。特别地，OPM2细胞在激酶结构域的ATP结合袋中带有突变，这导致笫650位赖氨酸改变成谷氨酸。KMSll细胞在受体的胞外结构域中带有突变，使第373位酪氨酸改变成半胱氨酸。在补充有1%L-谷氨酰胺(Amimed#5-10K00-H)和20%FCS(Gibco#10082-147)的RPMI1640(Gibco#21875)中生长两种细胞系。1.2抗体表1列出了用于这一报道中的抗体:表1:抗体一抗<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>WB:Western印迹;IP:免疫沉淀；P-tyr:磷酸酪氨酸SantaCruz:SantCruzBiotechnology,Inc.UpstateBiotechnology:UpstateBiotechnology,Inc.,nowpartofMilliporeCorp.,Billerica，MA，USA.CellSignaling:CellSignalingTechnology,Inc.,Boston,MA，USA.Amersham:Amershamplc，Buckinhamshire，UnitedKingdom,现在是GEHealthcare的一部分。1.3FGF-R抑制性化合物PD173074(此处也称作抑制剂1)，是来自ParkeDavis的FGF-R特异性抑制剂(参见Mohammadi等人，EMBOJ.17:5896-5卯4)，已经确认了其特异性和效能。其具有通式OMe(C2H5)2NOMe,、NNNNHH丄〇ANHTKI258/CHIR258(此处也称作抑制剂2)，是来自Chiron的FGF-R抑制剂，已经确认了其对抗FGFRl、FGFR2和FGFR3的活性。其具有通式H1.4免疫;冗淀/WB在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的1%Triton提M沖液("裂解緩冲43液"50mMTrispH7.5，150mMNaCl,ImMEGTA,5mMEDTA，1%Triton,2mM钒酸钠，ImMPMSF和来自Hoffmann陽LaRoche,Basel,Switzerland的蛋白酶抑制混合物，#1187358001)中溶解细胞。通过在12000xg离心15min使裂解物澄清并且使用DC蛋白质检测试剂(BioRad，Bio-RadLaboratories,Inc.,Hercules,CA，USA,#500-0116)(基于Bradford,M.的方法，参见Anal.Biochem.,72,248(1976)，利用CoomassieBlue,ICI的检测法)以及牛血清白蛋白(BSA)标准来测定蛋白质浓度。通过用l|Llg图的标题中所示的抗体于水上孵育等量蛋白质来进行免疫沉淀。用蛋白A画或蛋白G曙sepharose(Sigma,#P-9424;Sigma，#P-3296)收集免疫复合物并用裂解緩冲液冲洗3次。通过在2x样品緩沖液(20%SDS，20%甘油，160mMTrispH6.8,4%p-巯基乙醇，0.04%溴酚兰)中煮沸来释放结合的蛋白质。将样品(全部细胞裂解物或免疫复合物)进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)并且将蛋白质印迹在聚氟乙烯(PVDF)膜上。力口入一抗前，在20%马血清(inVitromex，Geilenkirchen，Germany;#S0921)中在封闭滤纸，或者在a-FGF-R3(抗-FGF-R3抗体，"a-X，，通常表示抗X抗体,X表示抗体靶标)，细胞周期蛋白Dl或微管蛋白Western印迹情形下，用5%奶封闭。4吏用SuperSignalWestDuraExtendedDurationSubstrate检测体系(Pierce,PierceBiotechnology,Inc.,Rockford，IL，USA;#34075，包括用于光强度的鲁米那和增强剂)，用过氧化酶偶联的抗鼠或抗兔AB使蛋白质可视化。于60。C，在62.5mMTris-HClpH6.8;2%SDS;1/125P-巯基乙醇中洗脱膜30min。2结果2.1在依赖于FGF-R信号用于增殖的癌细胞系中FRS-2是酪氨酸磷酸化的由于FRS-2是FGF-R的底物，检测了对于FGF-R抑制剂敏感的细胞系中FRS-2的磷酸酪氨酸水平，并且相对于抗性细胞系，推测具有高FGF-R活性。膀胱癌细胞系RT4和RT112，多发性骨髓瘤系OPM2和KMS11，以及乳腺癌系SUM52依赖于FGF-R之一并且它们的生长受到抑制剂1和/或抑制剂2的抑制。相反，膀胱癌系J82、VMCUB1或HT1197对于抑制剂1和抑制剂2的抑制有抗性。具体地，分别使用特异性抗体sc-121(SantaCruz)、sc-122(SantaCruz)和sc-124(SantaCruz)，通过Western印迹测定FGF-R1、FGF-R2和FGF-R4表达。为了测定FGF-R3的表达，首先用来自Sigma的抗体F-0425来免疫沉淀FGF-R3，然后使用来自Sigma的抗体F-0425对免疫复合物进行Western印迹。在96孔板中测量细胞增殖。在上面给出的生长培养基中以每孔lOOjil的体积接种细胞。对于RT112、RT4和SUM52,以8500个细胞/孑L接种，对于VMCUBl、J82、HT1197和KMSll，以5000个细胞/孔接种，对于OPM2,以30000个细胞/孔接种。接种24h后，分别加入含有FGF-R抑制剂1、FGFR抑制剂2或者(作为对照)DMSO的培养基。72h后，室温(RT)加入25pl/孔的戊二醛(20%)固定细胞10min。然后用200^1/孔H20洗涤细胞两次并加入lOO^il的亚甲基蓝(0.05%)。RT孵育10min后，用200pl/孔H20洗涤细胞3次。加入20(Vl/孔HC1(3%)并于RT在板振荡器上醉育30min，测量650nm处的光密度(OD)。使用Excel组件来计算提供50%增殖抑制的抑制剂l的浓度。表2总结了结果。对于每种给出的细胞系，如上面所示表征了FGF-R依赖性以^t抑制剂1和/或抑制剂2的敏感性。通过增殖检测的手段评估了抑制剂1和抑制剂2对于细胞生存力的影响；所示的IC50为若干独立检测法的平均IC50(以N给出他们的数量)。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>癌症类型细胞系抑制剂1IC50(nM)±SDn抑制剂2IC50(nM)±SDnRT11214±3760±205RT428±815134±584膀脱癌VMCUBl>30002>20003J82>30002>30002HT1197>30002>30002乳腺癌S画52NDl卯±584多发性OPM2148±319ND骨髓瘤KMS1150±144931SD:标准差ND:未测定在所有对FGF-R抑制剂敏感的细胞系中，FRS-2-磷酸酪氨酸水平都升高，但是在抗性细胞系J82、HT1197、VMCUBl中未检测到FRS-2-磷酸酪氨酸水平或者非常低(图1)。2.2FGF-R抑制阻断了FRS-2酪氨酸磷酸化特异性FGF-R-抑制剂抑制剂1和FGF-R抑制剂抑制剂2消除了在显示为由该化合物抑制生长的癌细胞系中的FRS-2酪氨酸磷酸化。这一结果表明这些细胞系中，FGF-R负责FRS-2磷酸化(图2)。按图2的标题以及图2所示处理所示出的癌细胞系。注意FRS-2蛋白经常显示出由于MAPK对丝氨^/苏氨酸残基的磷酸化而造成的不同的电泳迁移率(Lax等人，2002)。2.3FGF-R而非EGF-R或INS-R配体资导了FRS-2磷酸化检测了与FGF-R无关的其他RTK的活化是否也可以调节FRS-2磷酸46化。在RT112细胞中，EGF和胰岛素活化MAPK，然而，他们没有诱导磷酸-FRS-2。类似地，在RT4细胞中，EGF强烈地诱导pMAPK而非磷酸-FRS-2。如所期待的，aFGF有效地增加细胞系中的FRS-2磷酸酪氨酸(图3)。3讨论显示了FRS-2是FGF-R家族成员的下游底物并且作为用于FGF-R信号转导所涉及的多种蛋白质的对接分子起至关重要的作用。鉴定了一組呈现出显著升高的磷酸-FRS-2水平并且对于FGF-R抑制非常敏感的人类癌症细胞系，表明了在这些细胞系中有活化的FGF-R-FRS-2信号。作为对它的证明，特异性的FGF-R抑制剂抑制剂1彻底抑制了FRS-2鳞酸化。此外，只有FGF-R配体(aFGF)而非EGF-R或INS-R配体可以进一步增加FRS-2磷酸化。因此，这些结果证明磷酸-FRS-2作为生物标记来选择细胞类型，尤其是患者细胞类型是有用的，并且因此选择具有組成型FGF-R信号及因此具有潜能来应答FGF-R抑制剂的患者群体。此外，可以筛选用于对抑制剂进行实验的细胞系，因此允i午建立用于篩选潜在药物的适合的检测体系。权利要求1.一种鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号调节，尤其是抑制敏感的细胞的方法，包括测定在生物样品中FGF-R底物2(FRS-2)、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，作为针对此类对抑制的敏感性的生物标记。2.根据权利要求1的方法，其中将FRS-2的酪氨酸的磷酸化状态作为生物标记。3.根据权利要求1或2的方法，其中将不存在调节物时FRS-2或其变体中砩酸化，尤其是酪氨酸磷酸化的阳性发现用作涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的抑制可以有效地影响信号，尤其是有效地抑制信号的指示。4.才艮据权利要求3的方法，其中将存在和不存在涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的抑制剂时，孵育后的生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态进行比较以便鉴定对于给予该抑制剂有应答的细胞，其中将磷酸化的抑制的发现当作该可期望应答的指示。5艮据权利要求1-4任一项的方法，其中术语FGF-R或变体包括FGF-R的所有那些形式或变体，其由于结合一一优选具有解离常数为10-3或更强，更优选为It)—5或更强，还更优选为10-7或更强---种或多种成纤维细胞生长因子而活化，或者优选组成型活化，仍旧能够磷酸化FRS-2以产生其磷酸酪氨酸形式，如用抗磷酸酪氨酸抗体所阐述，并且其包括当分别与FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3或FGF-R4之一相比时，有70%或更高同一性，更优选至少85%或更高同一性，还更优选90%或更高同一性，又更优选95%或更高同一性，非常优选98。/。或更高同一性的序列，优选由该序列组成，并且其中术语FGF-R底物2(FRS-2)、其变体或其包括酪氨酸的片段包括还能够与FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3和/或FGF-R4结合的FRS-2的那些形式，尤其是与FRSJa或FRS-邻具有70%或更高同一性，更优选至少约85%或更高同一性，还更优选约90%或更高同一性，又更优选约95%或更高同一性，非常优选98。/。或更高同一性的FRS-2变体，或其包括磷酸酪氨酸的片段。6.根据权利要求l-5任一项的方法，包括至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段，然后用能够识别FRS-2、其变体或其片段的磷酸化形式，尤其是其中包括的磷酸酪氨酸的生物特异性识别剂来测定磷酸化的，尤其是酪氨酸磷酸化的存在或量，其中标记并且给予所述生物特异性识别剂或者在给予后能够结合所述生物特异性识别剂的进一步的生物特异性识别分子，从而允许检测FRS-2或其变体或其片段的磷酸化形式。7.根据权利要求1-6任一项的方法，其中将包括磷酸酪氨酸的FRS-2、其包括磷酸酪氨酸的变体，或者其包括磷酸酪氨酸的片段用作生物标记，其指示显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节，尤其是抑制敏感的细胞，并且优选包括使用抗磷酸酪氨酸抗体形式的生物特异性识别剂来测定所迷FRS-2、其变体或片段中酪氨酸磷酸化的存在或量。8.—种使用在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中鉴定的磷酸化作为用于细胞或组织或器官的生物标记的方法或在FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中鉴定的磷酸化的应用，所述细胞或组织或器官显示出异常活跃，尤其是组成型活化的FGF-R信号，尤其是可用FGF-R或其变体的抑制剂进行治疗并对于此种抑制剂有应答，所述方法或应用包括通过能够识别FRS-2中磷酸酪氨酸的生物特异性识别剂，测定来自生物样品的FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段中磷酸化酪氨酸的存在，磷酸化的阳性发现表明异常活跃，尤其是组成型活化的FGF-R信号。9.根据权利要求8的方法，进一步包括为了将对于涉及FGF-R或其变体的信号的抑制剂有应答的细胞或组织或器官与不应答的此类细胞或组织或器官区分，比较不存在以及存在由FGF-R或其变体介导的信号的抑制剂时酪氨酸磷酸化状态，存在抑制剂时，酪氨酸磷酸化的降低表示此种应答性。10.包括用于FGF-R或其变体的生物特异性识别剂以及能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂的试剂盒，用于从生物样品中鉴定对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)的信号的调节，尤其是抑制敏感的细胞，所述试剂盒包括用于测定生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态的工具，该磷酸化状态作为用于此种对抑制的敏感性的生物标记。11.根据权利要求10的试剂盒，包括能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂，尤其是抗磷酸酪氨酸抗体作为确定磷酸化状态的工具以用于从细胞或组织或器官鉴定对涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)的信号的调节，尤其是抑制敏感的细胞，包括测定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态，尤其是用于允许测定FGF-R信号的异常活跃，更尤其是FGF-R信号的组成型活化。12.—种能够识别FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式的生物特异性识别剂，用于鉴定显示出对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节，尤其是抑制有敏感性的细胞，尤其是显示出FGF-R信号异常活跃，更尤其是组成型活化的细胞。13.能够识别磷酸化的FRS-2或其变体或其包括酪氨酸的片段的生物特异性识别剂在制备诊断物中的应用，该诊断物用于从来自生物样品的细胞或组织中鉴定对于涉及成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)或其变体的信号的调节敏感的细胞，所述鉴定包括测定FGF-R底物2(FRS-2)，其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化状态。14.根据权利要求13的应用，其中生物特异性识别剂能够鉴定FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式，更优选为抗磷酸酪氨酸抗体。15.—种鉴定增殖需要针对增殖的FGF受体活化，尤其是组成型FGF受体活化，并且应答FGF-R信号抑制的细胞的方法，包括a)在不存在FGF-R抑制剂下，将分离的细胞或组织样品加入培养基，以及在不存在FGF，存在FGF-R受体抑制剂下将平行样品加入培养基，b)从所述样品中至少部分纯化FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段；c)测定所述样品中FRS-2的磷酸化状态；和d)比较受到抑制剂处理的样品和没有受到处理的样品中的磷酸化状态，存在抑制剂时的磷酸化减少表明适于鉴定可用于治疗包括FGF-R信号异常活跃的症状的抑制剂的细胞。16.—种诊断对于用FGF-R信号的抑制剂治疗有应答的疾病的方法，包括鉴定来自患者的生物样品中FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的磷酸化形式。17.根据权利要求16的方法，其中鉴定以能够识别FRS-2、其变体或其包括酪氨酸的片段的酪氨酸磷酸化形式的生物特异性识别剂，尤其是抗磷酸酪氨酸抗体进行。全文摘要本发明基于这样的发现，即显示出FGF-R底物2(FRS-2)(尤其是酪氨酸)磷酸化的细胞相比于缺乏此种磷酸化的细胞而言，允许在例如来自显示出此种磷酸化的患者的生物样品的细胞中，用成纤维细胞生长因子受体信号的调节物(尤其是抑制剂)进行治疗将会成功的预测。因此，FRS-2的磷酸化可以用作针对成功治疗可能性的生物标记。本发明涉及应用此生物标记的多种方法、应用、试剂盒和使用的试剂。文档编号G01N33/574GK101632021SQ200880006158公开日2010年1月20日申请日期2008年2月25日优先权日2007年2月27日发明者C·加西亚-埃切维里亚,D·格劳斯波塔,V·瓜格纳诺申请人:诺瓦提斯公司