出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法。包括提取、净化、浓缩和UPLC-MS/MS测定等步骤，该方法可同时测定抑霉唑、毒死蜱、多菌灵、噻菌灵、咪鲜胺、嘧霉胺、腈菌唑、氟硅唑、丙环唑、三唑酮、异菌脲、腈苯唑、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙萘酚、对苯基苯酚十八种保鲜剂。本发明提供的出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法具有步骤简便、准确度和精密度高的优点。
【专利说明】出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学分析检测领域，具体涉及一种出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定 方法。
【背景技术】
[0002] 蔬菜是人们日常饮食中必不可少的食物之一，可以提供人体所必需的多种维生素 和矿物质，在居民饮食中扮演着重要的角色。多吃蔬菜具有保健防病、防癌治癌、增强营养、 促进消化、软化血管等多种功效。但蔬菜在田间生产期间由于经常受到真菌和病原菌等微 生物的感染，导致采摘后易霉变腐败，因此保鲜剂在蔬菜采摘后发挥着重要的作用。保鲜剂 常被制成各类制剂或喷洒于蔬菜表面，或直接将蔬菜浸泡于其中，或添加到蔬菜包装材 料中，但这些措施都易造成蔬菜及其加工制品的保鲜剂残留。
[0003] 蔬菜保鲜剂主要分为天然保鲜剂和化学保鲜剂，天然保鲜剂包含茶多酚、甲壳素 及其衍生物、溶菌酶、香辛料抗菌制剂等。相对于天然保鲜剂，化学保鲜剂具有设备简单、投 资小、成本低等优点，因此在蔬菜生产和蔬菜贮藏中使用最为广泛。但化学保鲜剂大多有毒 性和残留，对人体健康产生不利影响，其使用量与残留量需要保持在一定的范围之内才能 够保证食品安全。人们评价保鲜剂不再局限于它对农产品的防腐效果和提高销量的经济效 益上，而更着重于无损害环境和健康的社会效益。因此，蔬菜中保鲜剂残留的检测有着极其 重要的意义。国标中对于蔬菜保鲜剂残留定量的种类不多，且定量限相对较高。由此，更多 种类蔬菜的检测、低定量限、多种保鲜剂同时检测成了发展的需求，这不仅可以保障蔬菜的 进食健康，还可以减少人力、物力的大量损耗等。
[0004] 重庆产蔬菜除满足本地需求外，还远销中国香港和台湾、韩国、日本等地。内陆蔬 菜出口长距离运输容易腐败霉变，不规范使用或滥用蔬菜保鲜剂可能导致该类药物超标， 危害人们的身体健康。众多的检测项目和较长的检测周期不仅给新鲜蔬菜原料收购、出口 通关带来不便，还导致蔬菜保鲜品质下降以及经济损失等。如何缩短蔬菜检验的周期，对快 速检测提出了新的要求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，该方法可同时 检测出待测蔬菜中的十八种保鲜剂，包括抑霉唑、毒死蜱、多菌灵、噻菌灵、咪鲜胺、嘧霉胺、 腈菌唑、氟硅唑、丙环唑、三唑酮、异菌脲、腈苯唑、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、 对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、乙萘酚、对苯基苯酚。
[0006] 本发明方法具体包括如下步骤： 1)提取 按每Ig蔬菜匀浆与2mL正己烷-乙酸乙酯溶液的比例，加入蔬菜匀浆与正己烷-乙酸 乙酯溶液于离心管中，涡旋混匀2min，水平振荡5min，再按每Ig蔬菜匀浆加入0. 5g氯化钠 的比例加入氯化钠于离心管中，再次润旋混勻lmin, 5000r/min离心3min,吸取上清液I于 离心管中，待净化； 2) 净化样本 将乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸钠按重量比1:5加入所述装有上清液I的离心管 中，润旋混勻2min，5000r/min离心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中； 3) 浓缩 将旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入ImL乙腈-水，涡旋振荡，溶解旋 蒸瓶中残渣，过滤膜过滤后，供UPLC-MS/MS测定； 4) UPLC-MS/MS测定，测定条件如下： 色谱柱：C18; 流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱； 各化合物保留时间和质谱参数见表1，其中带*的代表定性离子和定量离子； 柱温：40°C ; 流速：〇· 3mL/min ; 进样量：lyL; 预运行时间：3. Omin ; 总运行时间：IOmin ; 表1十八种保鲜剂的参考保留时间及质谱参数
【权利要求】
1.出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 提取 按每Ig蔬菜匀浆与2mL正己烷-乙酸乙酯溶液的比例，加入蔬菜匀浆与正己烷-乙酸 乙酯溶液于离心管中，涡旋混匀2min，水平振荡5min，再按每Ig蔬菜匀浆加入0. 5g氯化钠 的比例加入氯化钠于离心管中，再次润旋混勻lmin, 5000r/min离心3min,吸取上清液I于 离心管中，待净化； 2) 净化样本 将乙二胺-N-丙基硅烷和无水硫酸钠按重量比1:5加入所述装有上清液I的离心管 中，润旋混勻2min，5000r/min离心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中； 3) 浓缩 将旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸浓缩至净干，加入ImL乙腈-水，涡旋振荡，溶解旋 蒸瓶中残渣，过滤膜过滤后，供UPLC-MS/MS测定； 4)UPLC-MS/MS测定，测定条件如下： 色谱柱：C18; 流动相：乙腈-2mmol/L乙酸铵缓冲液，梯度洗脱； 各化合物保留时间和质谱参数见表1，其中带*的代表定性离子和定量离子； 柱温：40°C; 流速：〇· 3mL/min; 进样量：lyL; 预运行时间：3.Omin; 总运行时间：IOmin; 表1
获得超高效液相色谱串联质谱图； 5)结果计算 用色谱数据处理机或按公式（1)计算试样中保鲜剂的含量，计算结果须扣除空白值； tr CixfrXlOOO … M=- (1) X1000 式中： Xi--待测试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克； d--从超高效液相色谱串联质谱图上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫 升； V-样液最终定容体积，单位为毫升；m--最终样液所代表的待测试样质量，单位为克。
2. 根据权利要求1所述出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，其特征在于：步骤3) 中所述过滤膜为〇.22μm亲油性尼龙66膜。
3. 根据权利要求1所述出口蔬菜中多种保鲜剂的同时测定方法，其特征在于：步骤4) 中所述梯度洗脱的洗脱程序如下： 时间/min 乙腈/% 2mmol/L乙酸铵缓冲液/% 0 5 95 1 5 95 7 90 10 9 90 10 9. 5 5 95 10 5 95。
【文档编号】G01N30/02GK104316614SQ201410591934
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】李贤良, 曹淑瑞, 郗存显, 唐柏彬, 周雪, 张雷, 王国民 申请人:重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心