图说明】
[0015] 图1为本发明具体实施例中的5种化哇类杀菌剂结构图，（A.戊苯化菌胺；B.化 咪哇；C.化哇蔡菌胺；D.巧化菌胺；E.氣哇菌醜胺）； 图2为本发明具体实施例中5种化哇类杀菌剂标准溶液巧0. 0 ng/mL)MRM色谱图，图 2中，（2-1)为化咪哇；（2-2)为戊苯化菌胺，（2-3)为化哇蔡菌胺；（2-4)为巧化菌胺； (2-5)为氣哇菌醜胺； 图3为本发明具体实施例中5种化哇类杀菌剂扫描二级质谱图；图3中，（3-1)为化咪 哇；（3-2)为戊苯化菌胺，（3-3)为化哇蔡菌胺；（3-4)为巧化菌胺；（3-5)为氣哇菌醜 胺； 图4为本发明具体实施例中标准工作曲线，图4中，（4-1)为化咪哇；（4-2)为戊苯化 菌胺，（4-3)为化哇蔡菌胺；（4-4)为巧化菌胺；（4-5)为氣哇菌醜胺。
【具体实施方式】
[0016] 下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不 能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明 作出一些非本质的改进和调整。
[0017] 实施例1 包括W下步骤： (一） 待测样品的制备：称取葡萄酒样品5. Og，加入3 mL超纯水混匀得到待检液； (二） 固相萃取净化：取HLB SPE柱，依次用甲醇和水活化SPE柱，取全部待检液至SPE 柱，再依次用4?6mL水和4?6mL甲醇/水混合溶液（v/v, 2/3)淋洗SPE柱，将SPE柱 真空抽干，用6?8mL的甲醇对SPE柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液浓缩后，用2 mL甲 醇稀释过微孔滤膜后得到待测样品溶液； (H)标准溶液的配置；取戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺标准 品，用甲醇分别配制成质量浓度为200 mg/L的单标储备液，进行测定使用时，用甲醇稀释上 述标准储备液，将戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺分别配制成1. 0， 5. 0，10. 0，20. 0，50. 0，100. 0 ng/mL 的混合标准工作溶液； (四）待测样品的检测：将步骤(二）（H)中的待测样品溶液和标准工作溶液在气相色 谱-串联质谱仪上分别进样，获得W标准溶液中戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、口比 咪哇、巧化菌胺等5种化哇类杀菌剂的浓度为横坐标，再W标准溶液中戊苯化菌胺、氣哇菌 醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺等5种化哇类杀菌剂的的峰面积为纵坐标的工作曲 线，结果表明，5种化哇类杀菌剂在1. 0-100 ng/mL范围内具有良好的线性关系，R2> 0. 99， W 10倍信噪比（S/N)为方法定量限即LOQ，经样品添加试验确定5种化哇类杀菌剂的定量 限均为0.5 ng/g。还有获得可W确定母离子的戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪 哇、巧化菌胺等5种化哇类杀菌剂的一级质谱图，确定母离子后，采用子离子扫描获得二级 质谱图，然后从二级质谱图中选取定量离子和定性离子，然后用工作曲线对定量离子进行 定量计算获得待测样品溶液中戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺等5 种化哇类杀菌剂的浓度。
[001引参见表1，其为5种化哇类杀菌剂LC-MS/MS检测条件 ?火1各个化作物I.C-MS MS怜测《件
【主权项】
1. 一种葡萄酒中吡唑类杀菌剂的固相萃取-气相色谱-串联质谱检测方法，其特征在 于该方法包括以下步骤： 待测样品的制备：称取4. 7-5. 3g葡萄酒样品，葡萄酒中加入超纯水，混匀后得到待检 液； 待测样品的净化：将固定相萃取柱进行预处理，将步骤(一）制备的待检液上萃取柱，经 水和甲醇/水溶液淋洗除去杂质，再用洗脱溶剂洗脱固定相萃取柱上的戊苯吡菌胺、氟唑 菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺得到洗脱液，将洗脱液浓缩富集后，用甲醇溶剂稀释 并经0. 22 μ m微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液； 待测样品的检测：配制戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺溶液阶 梯浓度的混合标准工作溶液（1.0，5.0，10.0，20.0，50.0，100.0 ng/mL)，将步骤(二） 中的待测样品溶液和混合标准工作溶液在气相色谱-串联质谱仪上分别进样，获得以标准 溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺的浓度为横坐标，再以混合 标准工作溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺的峰面积为纵坐 标的工作曲线，还有获得可以确定母离子的戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、 呋吡菌胺的一级质谱图，确定母离子后，采用子离子扫描获得二级质谱图，然后从二级质谱 图中选取定量离子和定性离子，然后用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶 液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、批唑萘菌胺、批咪唑、呋吡菌胺的浓度。
2. 根据权利要求1所述的一种葡萄酒中吡唑类杀菌剂的固相萃取-气相色谱-串联质 谱检测方法，其特征在于：所述步骤(二）中的固定相萃取柱为Waters Oasis HLB SPE柱， 并通过甲醇、水对Waters Oasis HLB SPE柱进行活化处理。
3. 根据权利要求1所述的一种葡萄酒中吡唑类杀菌剂的固相萃取-气相色谱-串联质 谱检测方法，其特征在于：所述步骤(二）中的淋洗溶剂为水和体积比为2/3的甲醇水混合 溶液，洗脱溶剂为甲醇。
4. 根据权利要求1所述的一种葡萄酒中吡唑类杀菌剂的固相萃取-气相色谱-串联质 谱检测方法，其特征在于：所述的步骤(三）中气相色谱和串联质谱的参数条件如下： 色谱柱：SGE 公司 BPX35 ;30 mXO. 25 mmXO. 25 μπι 流速：1. 〇ml/min高纯氦 仪器：Agilent 7890A-7000B 碰撞气：高纯氮：1. 5ml/min，粹灭流量：2. 25ml/min高纯氦 升温程序：50°C (Imin)-290°C (8min)40°C/min 多模式进样口（MMI) :50°C (0· lmin)-300°C ;600°C /min 1分钟打开分流阀，流量60ml/min 离子化：EI源。
【专利摘要】本发明公开了一种葡萄酒中吡唑类杀菌剂的固相萃取-气相色谱-串联质谱检测方法，本发明能够同时测定葡萄酒中样品中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺5种吡唑类杀菌剂。在葡萄酒样品中加入超纯水稀释得到待检液，待检液经HLB固相萃取柱净化，使用C18反相柱分离；目标分析物在多反应监测模式下以保留时间和离子对信息比较进行定性分析，外标法定量，本方法分析速度快、灵敏度高、重现性和准确度好，为评价葡萄酒样品质量提供了新的检测方法。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104569271
【申请号】CN201510013362
【发明人】韩超, 陈祥准, 夏碧琪, 周永芳, 刘滨, 刘翠平
【申请人】韩超
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月9日