；
[0054] 洗脱液为含l_2mg/ml木瓜蛋白酶的PH为8. 0的0. lmol/L Tris-HCL缓冲液；
[0055] 酸化剂为硝酸；
[0056] 上样缓冲液为含有 IM Tris-HCUpH 6.8)15. 5mL、l% 溴酚蓝 2. 5mL、ddH207mL、甘氨 酸 25mL 的 Sample buffer (5X);
[0057] 电泳缓冲液为含Tris 3mg/ml、甘氨酸14. 4mg/ml的PH为6· 8的ddH20溶液。
[0058] 本发明还提供一种汞-IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：
[0059] Α)汞与IgG的螯合反应：在人源的IgG或按照生物学方法重组的IgG中加入汞离 子进行螯合反应，得到反应溶液；
[0060] Β)纯化汞-IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的 IgG以及多余的汞离子，即得汞-IgG螯合物，具体步骤如下：
[0061] (1)溶解样品：向经过步骤Α)得到的反应溶液中加入生理盐水，使汞-IgG螯合物 复溶
[0062] (2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特 异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；
[0063] (3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)中样品，然后上柱，IgG与 填料特异性结合；
[0064] (4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0. lmol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱；
[0065] (5)收集：收集经过步骤（4)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；
[0066] (6)透析：将步骤（5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用CldH2O透析除盐，换水三次 后，4°C透析过夜，收集样本；
[0067] (7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与汞特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；
[0068] (8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱；
[0069] (9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1. Omol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱；
[0070] (10)收集：收集经过步骤（9)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；
[0071] (11)透析：将步骤（10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用CldH2O透析除盐，换水三 次后，4°C透析过夜，收集样本，即得汞-IgG螯合物；
[0072] C)对汞-IgG螯合物的鉴定，具体步骤如下：
[0073] (1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；
[0074] (2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的汞-IgG螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀， 然后加样于样品槽中；
[0075] (3)电泳：连接电泳板，进行电泳；
[0076] (4)检测：在胶床上找出含汞的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带复溶， 然后再采用ICP-MS法、AAS法或ELISA法检测是否含有汞以及检测汞的含量。
[0077] 本发明还提供一种至少包括如上述的汞-IgG螯合物作为对照品的试剂盒。
[0078] 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有可捕获IgG的蛋白或可捕获金 属汞的物质。
[0079] 在本发明中，能实现本发明目的的试剂盒可以列出以下几种，但并不限于此。
[0080] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 封闭液、洗涤液、作为二抗的可捕获汞的物质、酶标抗体、底物、终止液、稀释缓冲液、上样缓 冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0081] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 封闭液、洗涤液、洗脱液、上样缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0082] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 封闭液、洗涤液、洗脱液、上样缓冲液、酸化剂、过氧化氢、标准品、阴性对照等。
[0083] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、复溶液、含有可捕获汞的物质的包被液、封闭液、洗涤液、酶标抗体、底物、终止液、稀释 缓冲液、上样缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0084] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、复溶液、上样缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0085] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、上样缓冲液、复溶液、酸化剂、过氧化氢、阳性对照、阴性对照等。
[0086] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：含有可捕获IgG的蛋白的包被液、 胶床介质、复溶液、上样缓冲液、溶解胶床上含汞的蛋白条带所需液体、含有可捕获汞的物 质的包被液、封闭液、洗涤液、酶标抗体、底物、终止液、稀释缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0087] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、胶床介质、复溶液、上样缓冲液、溶解胶床上含汞的蛋白条带所需液体、阳性对照、阴性 对照等。
[0088] -种检测血样中汞-IgG螯合物的试剂盒，包括：作为提纯全血中IgG所需提取试 剂、胶床介质、复溶液、上样缓冲液、溶解胶床上含汞的蛋白条带所需液体、酸化剂、过氧化 氢、阳性对照、阴性对照等。
[0089] 上述几种试剂盒中，所述阳性对照为标准品，即螯合有重金属汞的IgG螯合物或 螯合有重金属汞的BSA螯合物；所述阴性对照为稀释缓冲液。
[0090] 上述试剂盒用于检测螯合汞的IgG，以提高检测的准确性，重复性，并使之在临床 中得到推广。
[0091] 本发明还提供一种定量检测汞-IgG螯合物的方法，以已知含量的上述的汞-IgG 螯合物作为对照品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收 光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯汞-IgG螯合物与酶联免疫结 合法、提纯汞-IgG螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯汞-IgG螯合物与电感耦合等离子体 质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。在本发明 中，用检测汞螯合型免疫复合物的方法可以列出的有以下几种，但并不限于以下几种。
[0092] 其中，上述定量检测汞-IgG螯合物的方法中采用的试剂如下：
[0093] 方法一：酶联免疫法(ELISA法）检测汞-IgG螯合物，按照如下步骤检测：
[0094] 1)将能够捕获IgG的物质，如人IgG抗体包被于固相载体上：用稀释缓冲液稀释 抗IgG Ab至500000-4000000倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴 1-3小时，储存冰箱；
[0095] 2)从循环系统取全血，作待检样品，1000 rmp离心5-8分钟，离心弃去沉淀；
[0096] 3)封闭：移去稀释缓冲液，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入以1% -5% 牛血清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗涤液进行洗 涤，洗涤完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0097] 4)加待检样品，并且温育：加入步骤2)中的待检样品、以已知含量的汞-IgG螯合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；
[0098] 5)加入可以捕获汞的物质，并且温育：移去待检样品，并用洗涤液进行洗涤，待洗 涤完成后，加入用稀释缓冲液稀释与可以捕获汞的物质或能与汞反应形成抗原抗体复合物 的抗Hg Ab，37°C作用1-2小时，使抗Hg Ab与IgG上的金属汞反应；
[0099] 6)酶结合物温育：移去抗汞抗体，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入用稀 释缓冲液稀释的酶标抗体，使稀释的酶标抗体的浓度为2 μ g/ml，37°C作用1-2小时，使其 与酶标抗体反应；
[0100] 7)底物温育：移去酶标抗体，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入底物， 37°C避光作用30分钟；
[0101] 8)终止反应：滴加终止液至每一微孔；
[0102] 9)取波长405nm，加完终止液后，将ELISA板置于酶标仪上分别读取待检样品组和 标准品的OD值，通过标准品绘制标准曲线，求得待检样品的含量（也可不使用酶标仪，直接 通过染色情况进行定性检测）。
[0103] 该方法利用ELISA原理，可以将全血中的特异性IgG提取出来，提取出来的IgG上 部分螯合有重金属汞，而这部分IgG上的汞可以被抗汞的特异性抗体所捕获，之后可以再 被辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等酶标记的抗体所捕获（该抗体不识别包被蛋白），捕获上 的抗体在显色剂及终止液的作用下，可以在仪器下读出OD值，而不含有螯合金属汞的IgG， 则不会被抗汞的特异性抗体所捕获，也不会与辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等酶标记的抗 体所捕获，而所用试剂中也不含有金属汞（阴性对照组结果为阴性），因而当所读取的OD值 结果显示为阳性时，即可证明检测出IgG上螯合的金属汞。
[0104] 方法二：酶联免疫与原子吸收光谱结合法(ELISA法+AAS法）检测汞-IgG螯合物 按照如下步骤检测：
[0105] 1)将能够捕获IgG的物质，如人IgG抗体包被于固相载体上：用稀释缓冲液稀释 抗IgG Ab至500000-4000000倍，加入ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴 1-3小时，储存冰箱；
[0106] 2)从循环系统取全血，作待检样品，1000 rpm离心5-8分钟，离心弃去沉淀；
[0107] 3)封闭：移去包被液，并用洗涤液进行洗涤，待洗涤完成后，加入以1% -5%牛血 清白蛋白或脱脂奶粉作为封闭液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗涤液进行洗涤，洗 涤完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小时；
[0108] 4)加待检样品，并且温育：加入步骤2)中的待检样品、以已知含量的汞-IgG螯合 物作标准品；用稀释缓冲液稀释待检样品稀释至相应倍数，即稀释10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小时；