存活率方面以及在基于其的累 积复发率或累积存活率方面都有明显差异，因此，所述标志物的表达模式可以作为显示出 患者的复发可能性或存活可能性的指数。
[0285] 此外，显著性检验以下述方式进行：通过计算每个复发点或死亡点处的观察值和 预期值，对每种标记物及其组合进行时序检验，从而获得P值。其结果示于下表38~45中。 仅使用一种标记物的结果示于表38中，两种标记物组合的结果示于表39中，三种标记物组 合的结果示于表40中，四种标记物组合的结果示于表41中，五种标记物组合的结果示于表 42中，六种标记物组合的结果示于表43中，七种标记物组合的结果示于表44中，八种标记 物组合的结果示于表45中。
[0286][表 38]
[0309] 从以上表中可以确定，在复发、存活和无病存活方面，每种标志物或其组合都显示 出了足够低以至于可以认为具有显著性的P值。特别而言，在两种以上标志物组合的情况 中，针对复发、存活和无病存活的所有P值都较低。特别而言，发现了这种情况：单基因的P 值相对高，但是当将该标志物与其他标志物组合使用时P值有所下降。P值越低，统计学显 著性就越高。因此，低P值意味着，利用每种标志物或其组合对肝癌预后进行的预估是非常 准确的。
[0310] 这意味着，所组合的本发明的标记物越多，所显示出的p值就越低，即显著性就越 高，换言之，在基于这些标志物的组合对预后进行预估时，所获得的准确性会提高更多。
[0311] 因此发现，表38~45中的标志物和/或标志物组合在预测B组的肝癌预后（复 发、存活和无病存活）时有效，利用针对这些标志物的核酸和抗体可以有效地预测B组的肝 癌预后。此外可以发现，使用本发明的针对这些标志物的预测肝癌预后的方法，可以有效地 预测B组的肝癌预后。
[0312] 此外，对认为具有统计学显著性的标志物组合进行了交叉验证。将每个患者组的 患者随机分为两组（阳性组：39位患者；测试组：39位患者）。在阳性组结果（以与实施例 1相同的方式获得）中的认为具有统计学显著性的参照值固定的情况下，对于测试组，经计 算，对复发、存活和无病存活的预估准确性在P〈〇. 05或p〈0. 001的水平。
[0313] 在对B组的存活预测进行的交叉验证结果中，在各方面都显示出优异的预后准确 性的代表性实例如下：
[0314] 存活：DIABL0_BECN1_SIRT1 (79. 7%在 p〈0. 05 的水平）
[0315] 实施例5 :在C组中预测肝癌预后
[0316] 以与实施例1中相同的方式进行实验，不同之处在于：对经确定属于C组{门静 脉侵袭阳性患者组，不论肿瘤尺寸和数量如何}的患者（69位患者）进行实验。绘制了 Kaplan-Meier曲线来预测复发、存活和无病存活，其结果示于图86~106中。针对复发的 Kaplan-Meier曲线不于图86~92中，针对存活的Kaplan-Meier曲线不于图93~99中， 针对无病存活的Kaplan-Meier曲线示于图100~106中。
[0317] 从这些图中可以看出，在针对复发、存活和无病存活而完成的Kaplan-Meier曲线 中，上述标志物形成了高表达情形和低表达情形彼此明显区分开的曲线。这意味着，在所述 标志物为高表达和低表达的情形之间，在区间复发率或区间存活率方面以及在基于其的累 积复发率或累积存活率方面都有明显差异，因此，所述标志物的表达模式可以作为显示出 患者的复发可能性或存活可能性的指数。
[0318] 此外，显著性检验以下述方式进行：通过计算每个复发点或死亡点处的观察值和 预期值，对每种标记物及其组合进行时序检验，从而获得P值。其结果示于下表46~53中。 仅使用一种标记物的结果示于表46中，两种标记物组合的结果示于表47中，三种标记物组 合的结果示于表48中，四种标记物组合的结果示于表49中，五种标记物组合的结果示于表 50中，六种标记物组合的结果示于表51中，七种标记物组合的结果示于表52中，八种标记 物组合的结果示于表53中。
[0319] [表 46]
[0320]
[0342] 以上各表呈现了每种基因及其组合的p值。
[0343] 从以上表中可以确定，在复发、存活和无病存活方面，每种标志物或其组合都显示 出了足够低以至于可以认为具有显著性的P值。特别而言，在两种以上标志物组合的情况 中，针对复发、存活和无病存活的所有P值都较低。特别而言，发现了这种情况：单基因的P 值相对高，但是当将该标志物与其他标志物组合使用时P值有所下降。P值越低，统计学显 著性就越高。因此，低P值意味着，利用每种标志物或其组合对肝癌预后进行的预估是非常 准确的。
[0344] 这意味着，所组合的本发明的标记物越多，所显示出的p值就越低，即显著性就越 高，也就是说，在基于这些标志物的组合对预后进行估计时，所获得的准确性会提高更多。
[0345] 因此发现，表41~48中的标志物和/或标志物组合在预测C组的肝癌预后（复 发、存活和无病存活）时有效，利用针对这些标志物的核酸和抗体可以有效地预测C组的肝 癌预后。此外可以发现，使用本发明的针对这些标志物的预测肝癌预后的方法，可以有效地 预测C组的肝癌预后。
[0346] 此外，对认为具有统计学显著性的标志物组合进行了交叉验证。将每个患者组的 患者随机分为两组（阳性组：35位患者；测试组：34位患者）。在阳性组结果（以与实施例 1相同的方式获得）中的认为具有统计学显著性的参照值固定的情况下，对于测试组，经计 算，对复发、存活和无病存活的预估准确性在P〈〇. 05或p〈0.OOl的水平。
[0347] 在对C组的复发、存活和无病存活预测进行的交叉验证结果中，在各方面都显示 出优异的预后准确性的代表性实例如下：
[0348] 复发：FAS_TCF3_FASLG_RPS19BP1 (69. 0%在 p〈0. 05 的水平）
[0349] 存活：CASP3_CDH2_CIAP2 (77. 0%在 p〈0. 05 的水平）
[0350] 无病存活：FAS_TCF3_FASLG (75. 0 %在 p〈0. 05 的水平）
[0351] 【工业应用性】
[0352] 本发明提供用于预测肝癌预后的标志物、用于预测肝癌预后的组合物或试剂盒 (优选为用于根据分期来预测肝癌的肝癌预后预测用组合物或试剂盒）以及用于预测肝癌 预后的方法。本发明的标志物、组合物或试剂盒以及方法使得可以有效地预测肝癌预后、优 选根据分期来有效地预测肝癌预后。
【主权项】
1. 一种用于预测肝癌预后的组合物，所述组合物包含： 用于特异性检测肝癌预后标志物的表达水平和/或表达模式的核酸，所述肝癌预后标 志物包括由SEQIDNO. 16表示的HMGB2,即高迀移率族蛋白B2。2. 如权利要求1所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中所述肝癌预后标志物还包括 由选自下表的基因组成的组中的至少一种基因： [表1]〇3. 如权利要求1所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中，所述核酸是引物或探针。4. 如权利要求1或2所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中，所述预测肝癌预后是对 癌症肝脏切除术后的预后的预测。5. 如权利要求1或2所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中，肝癌预后标志5物的表 达水平和/或表达模式的特异性检测通过选自由以下方法组成的组中的至少一种来进行： RT-PCR、竞争性RT-PCR、实时RT-PCR、RNA酶保护测定、RNA印迹和DNA微阵列。6. -种用于预测肝癌预后的组合物，所述组合物包含： 用于特异性检测肝癌预后标志物的表达水平和/或表达模式的蛋白标志物的抗10体， 所述肝癌预后标志物包括由SEQIDNO. 16表示的HMGB2,即高迀移率族蛋白B2。7. 如权利要求6所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中所述肝癌预后标志物还包括 由选自下表的基因组成的组中的至少一种基因： [表1]。：8. 如权利要求6或7所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中，所述预测肝癌预后是对 癌症肝脏切除术后的预后的预测。9. 如权利要求6或7所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中，肝癌预后标志物的表达 水平和/或表达模式的特异性检测通过选自由以下方法组成的组中的至少一种来进行：蛋 白质印迹、ELISA(酶联免疫吸附测定）、放射免疫测定、放射免疫扩散、Ouchterlony免疫扩 散、火箭免疫电泳、组织免疫染色、免疫沉淀测定、补体结合测定、FACS或蛋白芯片。10. -种用于预测肝癌预后的试剂盒，所述试剂盒包含： 用于特异性检测肝癌预后标志物的表达水平和/或表达模式的核酸，所述肝癌预后标 志物包括由SEQIDNO. 16表示的HMGB2,即高迀移率族蛋白B2。11. 如权利要求10所述的用于预测肝癌预后的试剂盒，其中所述肝癌预后标志物还包 括由选自下表的基因组成的组中的至少一种基因： [表1]P'12. 如权利要求10或11所述的用于预测肝癌预后的试剂盒，其中，所述核酸是引物或 探针。13. 如权利要求10或11所述的用于预测肝癌预后的试剂盒，其中，所述预测肝癌预后 是对癌症肝脏切除术后的预后的预测。14. 如权利要求10或11所述的用于预测肝癌预后的试剂盒，其中，肝癌预后标志物的 表达水平和/或表达模式的特异性检测通过选自由以下方法组成的组中的至少一种来进 行：RT-PCR、竞争性RT-PCR、实时RT-PCR、RNA酶保护测定、RNA印迹和DNA微阵列。15. -种用于预测肝癌预后的试剂盒，所述试剂盒包含： 用于特异性检测肝癌预后标志物的表达水平和/或表达模式的蛋白标志物的抗体，所 述肝癌预后标志物包括由SEQIDNO. 16表示的HMGB2,即高迀移率族蛋白B2。16. 如权利要求15所述的用于预测肝癌预后的组合物，其中所述肝癌预后标志物还包 括由选自下表的基因组成的组中的至少一种基因： [表1]〇17. 如权利要求15或16所述的用于预测肝癌预后的试剂盒，其中，所述预测肝癌预后 是对癌症肝脏切除术后的预后的预测。18. 如权利要求15或16所述的用于预测肝癌预后的试剂盒，其中，肝癌预后标志物的 表达水平和/或表达模式的特异性检测通过选自由以下方法组成的组中的至少一种来进 行：蛋白质印迹、ELISA(酶联免疫吸附测定）、放射免疫测定、放射免疫扩散、Ouchterlony 免疫扩散、火箭免疫电泳、组织免疫染色、免疫沉淀测定、补体结合测定、FACS或蛋白芯片。
【专利摘要】本发明提供一种用于预测肝癌预后的组合物和试剂盒，所述组合物包含：用于特异性检测肝癌预后标志物的表达水平和/或表达模式的核酸，所述肝癌预后标志物包括由SEQ？ID？NO.16表示的HMGB2，即高迁移率族蛋白B2。本发明组合物或试剂盒能够有效地获得肝癌预后、优选在各个分期有效地获得肝癌预后。
【IPC分类】G01N33/574
【公开号】CN105223357
【申请号】CN201510633969
【发明人】朴真永, 洪锡珠, 金种旻
【申请人】Cbs生物科学有限公司, 朴真永
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2010年9月16日
【公告号】CN103562404A, US20140162889, WO2012036329A1