一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其制备方法_2

文档序号:9809019阅读:来源:国知局
标记的鸡抗兔二抗的磷酸盐缓冲液;其中磷 酸盐缓冲液的pH=7.2,磷酸盐浓度为50mmol/L;
[0035] 所述试剂卡包括试纸条,所述试纸条如图1所示,宽度为5mm,包括塑料垫板1,塑料 垫板上设置硝酸纤维素膜2,硝酸纤维素膜2上左右间隔7mm设置检测线3和质控线4,检测线 3左侧硝酸纤维素膜2上设置玻璃纤维素膜5,质控线4右侧硝酸纤维素膜2上设置吸水纸6, 玻璃纤维素膜5上设置滤血膜7;所述检测线上包被0.5yg/cm鼠抗人肝素结合蛋白抗体;所 述质控线上包被1. Oyg/cm羊抗兔抗体;
[0036] 所述试剂卡还包括外壳,所述试纸条放置于所述外壳内,如图2所示,所述外壳包 括连接在一起的上盖和下盖,所述上盖上设置有血样孔8和检测窗9;所述血样孔8的位置对 应滤血膜的位置;所述检测窗9的位置对应检测线和质控线的位置,使检测线和质控线处在 检测窗中;所述外壳上盖检测窗右侧空白处可作为用于记录数据的记录面10。
[0037] 上述免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒的制备方法,具体操作步骤为:
[0038] 1)制备第一缓冲液:取60μ1,pH = 7.2、磷酸盐浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液,加 入90ng的兔抗人肝素结合蛋白抗体,混合均匀,即得第一缓冲液;
[0039] 2)制备第二缓冲液:取250μ1,ρΗ=7.2、磷酸盐浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液, 加入30yg异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗,混合均匀,即得第二缓冲液;
[0040] 3)制备试剂卡:取硝酸纤维素膜,标记出检测线和质控线,然后在检测线上喷点包 被鼠抗人肝素结合蛋白抗体,在质控线上喷点包被羊抗兔抗体,然后将硝酸纤维素膜、玻璃 纤维素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上,并切割成所需宽度,然后装入由上盖和 下盖连接在一起形成的外壳中,即得所述的试剂卡;其中外壳上盖上设置有血样孔和检测 窗,所述血样孔的位置对应滤血膜的位置,所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置, 使检测线和质控线处在检测窗中,所述外壳上盖检测窗右侧空白处可作为记录数据的记录 面;
[0041 ] 4)将步骤1)制备的第一缓冲液、步骤2)制备的第二缓冲液、步骤3)制备的试剂卡, 组装,即得所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒。
[0042]本实施例试剂盒储存在4~8°C环境下。
[0043] 实施例2
[0044] -种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒,包括第一缓冲液、第二缓冲液 和试剂卡;
[0045] 所述第一缓冲液为含有0.83ngAU兔抗人肝素结合蛋白抗体的磷酸盐缓冲液;所 述第二缓冲液为含有〇.〇5yg/yl异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗的磷酸盐缓冲液;其中 磷酸盐缓冲液的pH=6.5,磷酸盐浓度为80mmol/L;
[0046] 所述试剂卡包括试纸条,所述试纸条宽度为3mm,包括塑料垫板,塑料垫板上设置 硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜上左右间隔5_设置检测线和质控线,检测线左侧硝酸纤维素 膜上设置玻璃纤维素膜,质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸,玻璃纤维素膜上设置滤 血膜;所述检测线上包被〇. 2yg/cm鼠抗人肝素结合蛋白抗体;所述质控线上包被0.5yg/cm 羊抗兔抗体;
[0047] 所述试剂卡还包括外壳,所述试纸条放置与所述外壳内,所述外壳包括连接在一 起的上盖和下盖,所述上盖上设置有血样孔和检测窗;所述血样孔的位置对应滤血膜的位 置;所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置,使检测线和质控线处在检测窗中。
[0048] 上述免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒的制备方法,具体操作步骤为:
[0049] 1)制备第一缓冲液:取60μ1,pH = 6.5、磷酸盐浓度为80mmol/L的磷酸盐缓冲液,加 入50ng的兔抗人肝素结合蛋白抗体,混合均匀,即得第一缓冲液;
[0050] 2)制备第二缓冲液:取250μ1,ρΗ=6.5、磷酸盐浓度为80mmol/L的磷酸盐缓冲液, 加入12.5yg异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗,混合均匀,即得第二缓冲液;
[0051] 3)制备试剂卡:取硝酸纤维素膜,标记出检测线和质控线,然后在检测线上喷点包 被鼠抗人肝素结合蛋白抗体,在质控线上喷点包被羊抗兔抗体,然后将硝酸纤维素膜、玻璃 纤维素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上,并切割成所需宽度,然后装入由上盖和 下盖连接在一起形成的外壳中,即得所述的试剂卡;其中外壳上盖上设置有血样孔和检测 窗,所述血样孔的位置对应滤血膜的位置,所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置, 使检测线和质控线处在检测窗中,所述外壳上盖检测窗右侧空白处可作为记录数据的记录 面;
[0052 ] 4)将步骤1)制备的第一缓冲液、步骤2)制备的第二缓冲液、步骤3)制备的试剂卡, 组装,即得所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒。
[0053]本实施例试剂盒储存在4~8°C环境下。
[0054] 实施例3
[0055] -种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒,包括第一缓冲液、第二缓冲液 和试剂卡;
[0056] 所述第一缓冲液为含有2ng/yl兔抗人肝素结合蛋白抗体的磷酸盐缓冲液;所述第 二缓冲液为含有〇. 2yg/yl异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗的磷酸盐缓冲液;其中磷酸盐 缓冲液的pH=7.3,磷酸盐浓度为30mmol/L;
[0057] 所述试剂卡包括试纸条,所述试纸条宽度为6mm,包括塑料垫板,塑料垫板上设置 硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜上左右间隔l〇mm设置检测线和质控线,检测线左侧硝酸纤维 素膜上设置玻璃纤维素膜,质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸,玻璃纤维素膜上设置 滤血膜;所述检测线上包被〇. 8yg/cm鼠抗人肝素结合蛋白抗体;所述质控线上包被1.4yg/ cm羊抗兔抗体;
[0058] 所述试剂卡还包括外壳,所述试纸条放置在所述外壳内,所述外壳包括连接在一 起的上盖和下盖,所述上盖上设置有血样孔和检测窗;所述血样孔的位置对应滤血膜的位 置;所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置,使检测线和质控线处在检测窗中。
[0059] 上述免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒的制备方法,具体操作步骤为:
[0060] 1)制备第一缓冲液:取60μ1,pH = 7.3、磷酸盐浓度为30mmol/L的磷酸盐缓冲液,加 入120ng的兔抗人肝素结合蛋白抗体,混合均匀,即得第一缓冲液;
[0061 ] 2)制备第二缓冲液:取250μ1,ρΗ=7.3、磷酸盐浓度为30mmol/L的磷酸盐缓冲液, 加入50yg异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗,混合均匀,即得第二缓冲液;
[0062] 3)制备试剂卡:取硝酸纤维素膜,标记出检测线和质控线,然后在检测线上喷点包 被鼠抗人肝素结合蛋白抗体,在质控线上喷点包被羊抗兔抗体,然后将硝酸纤维素膜、玻璃 纤维素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上,并切割成所需宽度,然后装入由上盖和 下盖连接在一起形成的外壳中,即得所述的试剂卡;其中外壳上盖上设置有血样孔和检测 窗,所述血样孔的位置对应滤血膜的位置,所述检测窗的位置对应检测线和质控线的位置, 使检测线和质控线处在检测窗中,所述外壳上盖检测窗右侧空白处可作为记录数据的记录 面;
[0063] 4)将步骤1)制备的第一缓冲液、步骤2)制备的第二缓冲液、步骤3)制备的试剂卡, 组装,即得所述的免疫荧光
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