层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒。
[0064]本实施例试剂盒储存在4~8 °C环境下。
[0065] 实施例4
[0066] 上述实施例1~3提供的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒的使用方法， 具体操作步骤为：
[0067] I:肝素结合蛋白标准品预处理:取Uig肝素结合蛋白标准品加入lml的无肝素结合 蛋白的正常人血清中，制成lμg/ml的母液;用无肝素结合蛋白的血清将该母液分别稀释成 200yg/L、150yg/L、100yg/L、50yg/L、25yg/L、10yg/L、5yg/L、2 · 5yg/L、0 · 5yg/L 的肝素结合 蛋白标准溶液；
[0068] Π :取第一缓冲液，静置平衡10~15分钟后，取步骤I制备的不同浓度的肝素结合 蛋白标准溶液各1〇〇μ1分别加入到60μ1平衡后的第一缓冲液中，然后再分别加入?ομL第二 缓冲液，混合均匀后分别通过血样孔加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置15min后，将 试剂卡插入荧光免疫读数仪，设定激发光波长为494nm，发射光波长为518nm，读取不同浓度 肝素结合蛋白标准溶液的荧光值，每个浓度的肝素结合蛋白标准溶液检测五次，并计算荧 光值的平均值；以每种荧光值的平均值为纵坐标，分别对应的肝素结合蛋白标准溶液的浓 度值为横坐标做回归曲线，得出回归曲线方程，得到荧光值与肝素结合蛋白浓度关系式；
[0069] ΙΠ :取60μ1第一缓冲液，静置平衡15分钟后，加入100μΙ待测样品，然后再加入10μ1 第二缓冲液，混合均匀后通过试剂卡的血样孔加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置15 分钟，然后把试剂卡插入免疫荧光读数仪，设定激发光波长为494nm，发射光波长为518nm， 读取待测样品的荧光值，将该荧光值带入步骤Π 得到的关系式中，计算得到待测样品肝素 结合蛋白浓度。
[0070] 试验例
[0071] 1、使用实施例1提供的试剂盒采用实施例4所述的方法分别测定浓度为35yg/L、 100yg/L、150yg/L的肝素结合蛋白标准品的浓度，每个标准品重复测试5次，计算得到实施 例1提供的试剂盒检测肝素结合蛋白浓度的相对偏差<10%，同一标准品重复测试所得结 果的变异系数CV < 8%，表明本发明试剂盒准确度高、重复性好。
[0072] 2、使用实施例1提供的试剂盒采用实施例4所述的方法分别测定从医院取来的15 例健康人的血清样本和15例病人血清样本中肝素结合蛋白的浓度(yg/L)，其结果如下表1 所示：
[0073] 表 1
[0074]
【主权项】
1. 一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于，包括第一缓冲液、第 二缓冲液和试剂卡； 所述第一缓冲液为含有0.83~2ngAil兔抗人肝素结合蛋白抗体的磷酸盐缓冲液;所述 第二缓冲液为含有〇. 05~0.2yg/yl荧光标记的鸡抗兔二抗的磷酸盐缓冲液； 所述试剂卡包括试纸条，所述试纸条包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝酸纤维素膜，硝 酸纤维素膜上左右间隔设置检测线和质控线，检测线左侧硝酸纤维素膜上设置玻璃纤维素 膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸，玻璃纤维素膜上设置滤血膜;所述检测线上包 被鼠抗人肝素结合蛋白抗体;所述质控线上包被羊抗兔抗体。2. 如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述 试剂卡还包括外壳，所述外壳包括连接在一起的上盖和下盖，所述上盖上设置有血样孔和 检测窗;所述血样孔的位置对应滤血膜的位置;所述检测窗的位置对应检测线和质控线的 位置，使检测线和质控线处在检测窗中。3. 如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 所述检测线上鼠抗人肝素结合蛋白抗体的包被量为0.2~0.8yg/cm。4. 如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 所述质控线上羊抗兔抗体的包被量为〇. 5~1.4yg/cm。5. 如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 所述荧光标记的鸡抗兔二抗为异硫氰酸荧光素标记的鸡抗兔二抗。6. 如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 所述检测线和质控线之间的间隔距离为5_~10_。7. 如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 所述试纸条的宽度为3~6mm。8. 如权利要求1或2所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 所述磷酸盐缓冲液的pH=6.5~7.3，磷酸盐浓度为30~80mmol/L。9. 如权利要求5所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述 试剂盒的使用方法的操作步骤包括： I:取不同浓度的肝素结合蛋白标准品加入到第一缓冲液中，然后再加入第二缓冲液， 混合均匀后加入到试剂卡的滤血膜上，室温水平放置10~15min后，将试剂卡插入荧光免疫 读数仪，设定激发光为494nm，发射光为518nm，读取不同浓度肝素结合蛋白标准品的荧光 值，并将荧光值与肝素结合蛋白的标准品的浓度值进行线性分析，绘制荧光值和肝素结合 蛋白浓度值标准曲线，得到荧光值和肝素结合蛋白浓度关系式； Π :取待测样品加入到第一缓冲液中，然后再加入第二缓冲液，混合均匀，加入到试剂 卡的滤血膜上，室温水平放置10~15min，将试剂卡插入荧光免疫读数仪，设定激发光波长 为494nm，发射光波长为518nm，读取待测样品的荧光值，将该荧光值带入步骤I得到的关系 式中，计算得到待测样品肝素结合蛋白的浓度。10. -种如权利要求1所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒的制备方法， 其特征在于，包括以下操作步骤： 1)制备第一缓冲液:取兔抗人肝素结合蛋白抗体加入磷酸盐缓冲液中，混合均匀，即得 第一缓冲液； 2) 制备第二缓冲液:取荧光标记的鸡抗兔二抗加入磷酸盐缓冲液中，混合均匀，即得第 一缓冲液； 3) 制备试剂卡:取硝酸纤维素膜，标记出检测线和质控线，然后在检测线上喷点包被鼠 抗人肝素结合蛋白抗体，在质控线上喷点包被羊抗兔抗体，然后将硝酸纤维素膜、玻璃纤维 素膜、吸水纸、滤血膜依次搭接在塑料垫板上，并切割成所需宽度的试剂卡； 4) 将步骤1)制备的第一缓冲液、步骤2)制备的第二缓冲液、步骤3)制备的试剂卡，组 装，即得所述的免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒。
【专利摘要】本发明涉及医疗用品技术领域，具体公开了一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括第一缓冲液、第二缓冲液和试剂卡；第一缓冲液为含有0.83～2ng/μl兔抗人肝素结合蛋白抗体的磷酸盐缓冲液；第二缓冲液为含有0.05～0.2μg/μl荧光标记的鸡抗兔二抗的磷酸盐缓冲液；试剂卡包括塑料垫板，塑料垫板上设置硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上左右间隔设置检测线和质控线，检测线左侧硝酸纤维素膜上设置玻璃纤维素膜，质控线右侧硝酸纤维素膜上设置吸水纸，玻璃纤维素膜上设置滤血膜；检测线上包被鼠抗人肝素结合蛋白抗体；质控线上包被羊抗兔抗体。该试剂盒具有好的线性范围、灵敏度和准确度高。
【IPC分类】G01N33/531, G01N33/68
【公开号】CN105572386
【申请号】CN201610050605
【发明人】王嘎, 程自卿, 王辉武
【申请人】河南生生医疗器械有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月26日