及固定在PVC衬板上的样品垫、探针固定垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫搭接在探针固定垫上，所述探针固定垫和吸水纸分别搭接在所述硝酸纤维素膜两侧，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和控制线，所述检测线内包被有血清淀粉样蛋白A单克隆抗体，所述控制线内包被有羊抗兔IgG;所述探针固定垫为由血清淀粉样蛋白A单克隆抗体荧光胶乳微粒和羊抗兔IgG荧光胶乳微粒的混合荧光胶乳微粒干燥制得，在所述稀释液瓶中存放有样品稀释液。
[0024]本发明进一步地，所述免疫层析检测卡还包括壳体，所述壳体上设置有加样孔、检测窗口、编码区域和把手，所述加样孔位于所述样品垫处，所述检测窗口位于所述检测线和控制线处，所述编码区域位于检测窗口和把手之间，所述把手位于所述壳体上位于靠近吸水纸的一侧。
[0025]借由上述方案，本发明至少具有以下优点:
[0026]①采用本发明荧光免疫层析方法，实现血清淀粉样蛋白A体外灵敏度高、准确度高、操作简单、成本低的定量检测。
[0027]②本发明荧光免疫层析方法，检测线区域采用能与血清淀粉样蛋白A形成复合物的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体，配套探针则使用荧光胶乳微粒标记的血清淀粉样蛋白A单克隆抗体;控制线区域包被有兔IgG抗体，配套探针使用羊抗兔IgG抗体标记的荧光胶乳微粒。该控制线与检测线独立反应，互不影响和干扰。利用控制线信号可以准确判定探针分散在混合液体中的质量，用于校正检测线信号。
[0028]③本发明荧光免疫层析方法，荧光乳胶微粒需要先与白蛋白进行偶联，然后再与血清淀粉样蛋白A单克隆抗体进行偶联，减少检测过程中双夹心结构的空间阻力，使其能检测更低浓度的血清淀粉样蛋白A。
[0029]④本发明制备的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，储存方便、检测灵敏度高，可检测血液样本中浓度低至0.5mg/L的血清淀粉样蛋白A，使用的检测仪器简单，操作简单，无需专业操作人员，同时具有检测快速的优点，10?20分钟即可得到检测结果。
[0030]⑤本发明制备的血清淀粉样蛋白A检测试剂盒，由于预先对样品垫的特殊处理和样品稀释液的改进，适用范围广，对血清、血浆和全血都能进行检测。
[0031]上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
【附图说明】
[0032]图1是本发明中免疫层析试纸条的结构示意图；
[0033]图2是本发明中试剂卡的结构示意图。
[0034]图中各附图标记的含义如下。
[0035]I PVC衬板2样品垫
[0036]3探针固定垫4硝酸纤维素膜
[0037]5检测线6控制线
[0038]7吸水纸8加样孔
[0039]9壳体10检测窗口
[0040]11编码区域12把手
【具体实施方式】
[0041]下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，不用来限制本发明的范围。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0042]本发明的血清淀粉样蛋白A的荧光免疫层析检测方法，包括以下步骤:
[0043]步骤I)探针固定垫制备:将发射光波长为500?590nm的带有羧基或氨基的荧光胶乳微粒溶液加入活化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)室温下反应0.5?lh，其中，N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)与
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的重量比为1:1?6:1，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)与荧光胶乳微粒的重量比为1:100?5:100，离心、洗涤后得到活化荧光胶乳微粒。
[0044]应当说明的是⑴本发明上述发射光波长为500?590nm荧光胶乳在市面上容易获得，因而在保证检测精度的前提下，经济性和适用性较高；⑵EDC与荧光胶乳微粒的重量比小于1:100时，胶乳微粒的活化率很低，偶联微球上抗体的结合很少，检测时的灵敏度低；EDC与荧光胶乳微粒的重量比大于5:100时，胶乳微粒的活化率随EDC量增加而增加的幅度有限，成本升高，最佳比例为1:100; (3)EDC与Sulfo-NHS的重量比小于1:1，活化的胶乳微粒易水解，降低了活化效率;EDC与Sulfo-NHS的重量比大于6:1，胶乳微粒的活化率已达到饱和，成本上升，最佳比例为1:3;⑷活化时间小于0.5h，活化的效率不高，浪费原材料;活化时间大于2h，活化的速度小于活化物质水解的速度，降低了活化效率，最佳活化时间lh。
[0045]本发明将白蛋白与活化荧光胶乳微粒的按比例0.05:100?0.2:100混合，室温下偶联反应2?5h，得到白蛋白荧光胶乳微粒。将羊抗兔IgG与活化荧光胶乳微粒按比例0.05:100?0.2:100混合，室温下偶联反应2?5h，得到羊抗兔IgG荧光胶乳微粒。血清淀粉样蛋白A单克隆抗体与活化的白蛋白荧光胶乳微粒的混合比例为0.05:100?0.2:100，混合后室温下偶联反应I?5h。
[0046]应当说明的是⑴血清淀粉样蛋白A单克隆抗体与荧光胶乳微粒的重量比小于
0.05:100时，偶联效率高，但是浪费胶乳微粒，胶乳微粒的大部分活化点未结合抗体，而大于0.2:100时，胶乳微粒的大部分的活化点已被结合，继续增加血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的量对偶联效率无明显影响，原料浪费，最佳比例为0.12:100;(2)反应时间与偶联率有关，时间过短小于I小时，则抗体与胶乳微粒的结合较少，不经济，时间过长大于5小时，则偶联率增加有限，浪费时间，最佳反应时间3h。
[0047]本发明按2:1?6:1的比例混合血清淀粉样蛋白A单克隆抗体荧光胶乳微粒和羊抗兔IgG荧光胶乳微粒，得到混合荧光胶乳微粒，将混合荧光胶乳微粒用荧光探针微球稀释液稀释2?6倍，以2?6ul/cm的速度均匀喷在宽度为0.7?1.3cm的玻璃纤维上，在30?55°C下干燥2?24h。荧光探针微球稀释液为含有蔗糖、牛血清白蛋白和表面活性剂的缓冲液，所述缓冲液包括PBS缓冲液、Tr i s缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或几种，所述表面活性剂为吐温20、吐温80。
[0048]应当说明的是⑴探针保存在样品稀释液中易团聚，将其用荧光探针微球稀释液稀释喷在玻璃纤维上干燥制成探针固定垫，荧光探针微球稀释液的组分可以使得探针均匀分散，避免探针之间的团聚;探针固定垫上的探针在缓慢释放时，能够减缓免疫反应，让反应时间更长，检测信号更强；⑵喷金速度过慢会导致探针溶液过少，在玻璃纤维上分散不均匀，喷金速度过快会导致玻璃纤维过早饱和，探针溶液渗透到喷金平台上，造成实验误差，放大批内差;⑶探针固定垫的干燥时间不易过长，在制成免疫层析试纸条后还需要继续干燥，本步骤只需要将水分充分干燥。
[0049]步骤2)免疫层析试纸条制备:将样品垫、探针固定垫、层析膜、吸水纸依次贴在PVC衬板上，采用划膜喷金机将血清淀粉样蛋白A单克隆抗体和兔IgG分别包被在层析试纸的检测线(T线)和控制线(C线)上，37°C干燥12?36h后经切条机切割得到3?5mm宽度的免疫层析试纸条，上述层析膜优选硝酸纤维素。
[0050]应当说明的是⑴传统的定性免疫层析技术采用包被羊抗鼠抗体作为控制线，随着血清中血清淀粉样蛋白A或一些抗鼠源抗体阻断剂的增加，控制线上的信号随之降低，其信号值就不能用于计算，测试线的信号的准确性也没有了参考依据。本发明羊抗兔IgG抗体采用兔IgG抗体和羊抗鸡抗体作为控制线配对，C线与T线的反应独立进行，无交叉影响，从而能避免C线与T线彼此竞争探针微粒而产生的重复性偏差;⑵干燥时间小于12h，抗体在硝酸纤维素膜上的结合效率低，产品检测信号会随保存时间的