作为抗血管生成剂的羟胺类化合物和衍生物的制作方法

专利名称：：作为抗血管生成剂的羟胺类化合物和衍生物的制作方法作为抗血管生成剂的羟胺类化合物和衍生物相关申请的交叉引用本申请要求2007年1月31日提交的美国申请11/669,885的优先权，该申请要求2006年2月2日提交的美国临时申请60/764,432的优先权，所述公开以全文并入本文作为参考。
背景技术：
：本文引用了各种专利和其它出版物。这些专利和出版物的每篇内容以全文并入本文作为参考。共同拥有的待决美国公开2004/0002461、2005/0130906和2005/0131025的全部内容作为参考并入本文。血管生成是新血管发展和形成的复杂过程。血管生成响应于特定信号而发生，并且包括以如下为特征的复杂过程血管内皮细胞响应血管生成生长信号对基层的浸润，细胞外基质的降解和内皮细胞向信号源的移动，和随后的毛细管的增殖和形成。在内皮细胞与先前存在的毛细管接触并结合后，血液流过新形成的毛细管被启动了。血管生成受到高度调控并且牵涉多种血管生成刺激物和抑制剂之间的平衡。一般地，对于成熟个体，没有太多的新血管形成，这是指在血管生成的内源性刺激物和抑制剂之间天然存在的平衡着重地倾向于抑制剂。Rastinejad等人，1989,Cell56:345-355。然而，存在其中在正常生理条件下发生新血管形成的一些情况，诸如伤口愈合、器官再生、胚胎发育和雌性生殖过程，但是血管生成经过严格地调控并且在空间上被暂时地划定界限。另一方面，在病理性血管生成条件下，诸如以实体瘤生长为特征的血管生成，这些调控性控制失败。当调控性控制被破坏并且未经调控的血管生成变得具有致病性时，这可以导致许多赘生性和非赘生性疾病的进展。许多严重的疾病受到异常新血管形成的支配并且包括实体瘤生长和转移、关节炎、一些类型的眼病、和银屑病。参见例如以下等人的综述Moses等人，1991,Biotech.9:630-634;Folkman等人，1995,N.Engl.J.Med.,333:1757-1763;Auerbach等人，1985,J.Microvasc.Res.29:401-411;Folkman,1985，AdvancesinCancerResearch,Klein禾口Weinhouse编，AcademicPress,NewYork,第175-203页；Patz，1982，Am.J.Opthalmol.94:715-743;和Folkman等人，1983，Science221:719-725。正如健康组织的情况一样，肿瘤需要血管以维持基础细胞。在许多病理疾病中，血管生成过程甚至可以促进疾病状态。实际上，一些研究者已经暗示了实体瘤的生长依赖于血管生成。Folkman和Klagsbrun，1987，Science235:442-447。活性氧物质(ROS)，诸如超氧化物和过氧化氢，已被报导在体内诱导血管生成，可能通过诱导型氧化氮合酶的上调和内源性一氧化氮的生成增力口进行。Polytarchou&Papadimitriou,2005，Eur.J.Pharmacol.510:31-38。还报导了ROS刺激血管内皮细胞生长因子(VEGF)释放，并介导VEGF的MAP激酶(促分裂原活化蛋白激酶)信号路径的活化。Kuroki等人，1996，J.Clin.Invest.98:1667-1675;Cho等人，2001,Am.J.Physiol.HeartCirc.Physiol.280:H2357-H2363。某些抗氧化剂还表现出具有血管生成抑制活性，例如超氧化物岐化酶和氮氧化物TEMPOL，但是并非TEMPOL的还原产物羟胺TEMPOL-H。其它抗血管生成剂包括VEGF拮抗剂、bFGF拮抗剂、或氧化氮合酶(NOS)拮抗剂、诸如N"-硝基-l-精氨酸甲酯(L-NAME)和地塞米松。氮氧化物诸如TEMPOL更令人感兴趣，因为它们的自由基清除性质和在氧化性损伤和炎症的多种动物模型中发挥抗炎作用。Nilsson等人在WO88/05044中公开了氮氧化物及其相应的羟胺类可用于预防和治疗缺血性细胞损伤，大概是由抗氧作用所致。Paolini等人(美国专利5，981,548)公开了N-羟基哌啶化合物以及它们在治疗由于氧自由基导致的病害中的潜在的一般实用性并且用作食物和美容剂的添加剂。Hsia等人(美国专利6，45S，758,5，840，701，5，824，781，5,817,632，5，807，831，5,804,561'5,767,089，5，741，893，5，725，839和5,591,710)公开了稳定的氮氧化物和羟胺类(例如TEMPOL及其羟胺对应物，TEMPOL-H)与各种生物相容的大分子组合用于缓解血液和血液组分中的自由基毒性。Hahn等人(1998,Int.J.RadialOnco，Bio.Physics42:839-842;2000,FreeRad.Bio!.Med.28:953-958)报告了稳定的自由基氮氧化物和某些羟胺对应物的体内辐射保护作用和对血压的作用。由于羟胺相对缺乏毒性，它们优选是作为治疗剂的氮氧化物。Matier和Patil的公开的美国专利申请2004/0002461，2005/0130906和2005/0131025公开了羟胺类和相关化合物及其在治疗各种其中牵涉氧化性损伤或炎症的眼病中的用途。这些化合物具有众多的有利性质，包括稳固的抗炎和抗氧化活性，以及在有些情况下的眼渗透性。然而，尽管一些氮氧化物例如TEMPOL显示出一些抗血管生成活性，但是目前为止还没有报导羟胺类具有任何抗血管生成活性。发明概述本公开详述了通过对患者给用使得病理性血管生成得以抑制的治疗足够量的羟胺化合物或其酯衍生物抑制患者的病理性血管生成的方法。羟胺类的酯衍生物具有下式I所示结构其中R,和R2独立地是H或Q-C3烷基；113和R4独立地是C,-C3烷基；并且其中R,和R2—起，或者R3和R4—起，或者二组都是环垸基；Rs是H，OH，或C,-C6烷基；R6是C,-C6垸基、烯基、炔基，或取代的垸基或烯基；R7是CVC6烷基、烯基、炔基，或取代的烷基或烯基；其中R(5与R7—起，或者Rs、R6与R7—起，形成具有3-7个环原子的碳环或杂环。另外，本公开提供了通过对患者给用使得病理性血管生成得以抑制的治疗足够量的羟胺化合物或其酯衍生物治疗罹患牵涉病理性血管生成的疾病状态的患者的方法。羟胺的酯衍生物具有式I所示结构。在一些实施方案中，这些方法另外包括共同给用其它药剂，诸如抗氧化剂、还原剂、另外的抗血管生成剂或抗肿瘤剂。根据本发明的其它方面，提供了药物组合物，该药物组合物包含上述被提供用于治疗其中牵涉血管生成的疾病状态的羟胺或酯衍生物。本发明的其它特征和优点将参考以下的附图、详细说明和实施例得以理解。图1.在大鼠、兔、狗和人的血浆中在标准化培养条件下化合物l(环丙垸羧酸l-羟基-2，2，6，6-四甲基-哌啶-4-基酯)的消除，作为培养时间的函数。图2.在大鼠、兔、狗和人的血浆中在标准化培养条件下TPH的出现，作为化合物1的培养时间的函数。图3.在大鼠的血浆中化合物1的消除和TPH的出现，作为培养时间的函数。图4.在兔的血浆中化合物1的消除和TPH的出现，作为培养时间的函数。图5.在狗的血浆中化合物1的消除和TPH的出现，作为培养时间的函数。图6.在人的血浆中化合物1的消除和TPH的出现，作为培养时间的函数。图7.在Sprague-Dawley大鼠(n=5-6)中，在单次10分钟静脉内输注化合物l之后，化合物1的平均值士SD血浆浓度，作为时间的函数。图8.在Sprague-Dawley大鼠(n=5-6)中，在单次IO分钟静脉内输注化合物1之后，TPH的平均值士SD血浆浓度，作为时间的函数。示例性实施方案的详细说明本发明提供了治疗或预防许多其中致病性血管生成是基础病因的疾病和疾病的方法。该方法包括给药使得一种或多种血管生成相关疾病或病况的症状的发展得以预防、阻止或所述症状得以减轻的治疗足够量的组合物，该组合物包含可药用的载体或稀释剂以及羟胺化合物或其酯衍生物。本文使用的术语"血管生成"是指新血管生成进入组织或器官。在正常生理条件下，人或动物仅仅在非常特定的受限位置经历血管生成。例如，血管生成一般在伤口愈合、胎儿和胚胎发育以及卵巢黄体、子宫内膜和胎盘形成过程中被观察到。本文将术语"内皮"定义为薄的扁平细胞层，其作为浆液腔、淋巴管和血管的衬里。这些细胞在本文中被定义为是"内皮细胞"。术语"内皮抑制活性"是指分子阻止一般血管生成的能力。在各种阶段下的内皮细胞增殖的抑制还导致血管生成的抑制(Albo等人，2004,CurrPharmDes.10(1):27-37)。许多疾病或有害病况与血管生成有关。这些疾病或病症的例子包括但不限于(l)赘生性疾病，诸如乳癌、头癌、直肠癌、胃肠道癌、肺癌、支气管癌、胰腺癌、甲状腺癌、睾丸癌或卵巢癌，白血病(例如急性髓性白血病)，鼻窦自然杀伤细胞/T细胞淋巴瘤，恶性黑素瘤，腺样囊性癌，血管肉瘤，间变性大细胞淋巴瘤，子宫内膜癌，或前列腺癌(2)高度增殖性疾病，例如由响应特定生长因子而过度产生的非癌性(即非瘤性)细胞导致的疾病，诸如，子宫内膜异位症，动脉粥样硬化，系统性红斑狼疮，和良性生长障碍如前列腺膨大和脂肪瘤(3)由于感染性疾病如单纯性疱疹感染、带状疱疹感染、原虫感染和巴尔通体感染(Bartoncllosis)(在南美洲发现的细菌感染)导致的细胞增殖；(4)关节炎，包括类风湿性关节炎和骨关节炎；(5)慢性炎性疾病，包括溃疡性结肠炎和克隆病；和(6)其它病况，包括幼儿疾病，血管瘤，以及遗传性疾病诸如奥-韦-朗病，或遗传性出血性毛细血管扩张症。本发明人已经确定了血管生成以及牵涉血管生成的疾病或病症可以通过给用羟胺化合物诸如TEMPOL-H(TPH)以及可水解形成羟胺化合物的这些化合物的酯衍生物得以缓解。这一确定部分地通过使用血管生成的鸡尿囊绒膜(CAM)模型进行，其实验规程如实施例中描述。尽管在一些情况中已经显示了氮氧化物TEMPOL抑制过氧化氢诱导的血管生成，但是在本发明之前还没有阐述羟胺的抗血管生成活性。另夕卜，在此以前一直没有暗示氮氧化物或羟胺类能预防VEGF或bFGF生长因子诱导的血管生成。也没有预测羟胺的这些活性，因为氮氧化物诸如TEMPOL及其羟胺对应物诸如TEMPOL-H具有悬殊的分子结构外观、物理常数和化学特性。例如，已经报导了小鼠V79细胞的TEMPOL介导的辐射保护作用是浓度依赖性的，但是羟胺TEMPOL-H不提供任何的辐射保护作用(Mitchell等人，2000，Radiation,Radicals,andImages;ArnialsoftheNewYorkAcademyofSciences899:28-43)。另外，TEMPOL在体外预防X射线辐射对晶状体内皮细胞的损害，而TEMPOL-H无此作用(Sasaki等人，1998，InvestOphthalmolVisSci.39(3):544-52)。同样地，已经发现TEMPOL在小鼠中预防透石膏诱导的白内障中不是有效的，但是TEMPOL-H在该模型中是有效的。另夕卜，已经发现氮氧化物诸如TEMPOL具有细胞毒性，并且有时代替抗氧化剂用作氧化强化剂(Glebska等人，2003，FreeRadicalBiol.Med.35:310-316)。出于这些和其它原因，TEMPOL对抗&02诱导的血管生成的抗血管生成作用不能预示羟胺也具有这些活性。另外，如上所述，没有通过TEMPOL或者羟胺类预防生长因子诱导的血管生成的先例。适用于本发明的羟胺化合物类型的优选例子是TEMPOL-H(TPH，氮氧化物4-羟基-2，2，6,6-四甲基哌啶-l-基氧基的羟胺还原形式)，TEMPO-H(氮氧化物2,2，6，6-四甲基哌啶-l-基氧基的羟胺还原形式)和OXANO-H(2-乙基-2,4，4-三甲基-瞎唑烷-3-醇，其从OXANO，即2-乙基-2，4,4-三甲基螺唑烷-3-基氧基还原得到)。适用于本发明的其它羟胺化合物包括但不限于以下公开Hahn等人(1998，出处同上；2000，出处同上)，Samuni等人(20C)1,出处同上)；和Paolini等人的美国专利5，981,548(公开了某些N-羟基脈啶酯以及它们在许多环境下作用抗氧化剂的用途)；G叩ta等人的美国专利4,404,302(公开了某些N-羟基胺在塑料制剂中作为光稳定剂)；Behrens等人的美国专利4,691，015(描述了从位阻胺得到的羟胺类以及它们中的某些用于聚烯烃稳定化的用途)；在几个前述的Hsia等人的美国专利中公开的羟胺化合物；和在Mitchell等人的美国专利5,462,946和6,605,619中公开的氮氧化物的羟胺对应物，g卩(l)式R3-N(R4)(Rs)的化合物，其中R3是-0H并且114和Rs与氮结合形成杂环基，或者其中R4和R5自身包括取代或未取代的环基或杂环基；(2)式R3-N(R4)(R5)的金属非依赖性羟胺类，其中R3是-OH并且R4和R5与它们所连接的氮原子一起形成5元或6元杂环基，其除了所述氮原子之外还包含一个或多个选自氧、氮和硫的杂原子，或者R4和R5分别地各自包含取代或未取代的5元或6元环基或取代或未取代的5元或6元杂环基，其包括一个或多个选自氧、氮和硫的杂原子；或(3)下式表示的螺唑垸化合物.-sxa其中R,是-CH3，和R2是-C2H"-C3H7、-C4H9、-C5HU、-C6HI3、-CH2CH(CH3)2、-CHCH3C2H5，KCH2)7CH3，并且R3是-0H,或者其中R,和R2—起形成螺环戊烷、螺环己垸、螺环庚烷、螺环辛烷、5-胆甾烷或降冰片垸；以及上述化合物的可药用的盐。根据已知的，迄今为止未使用上述化合物来抑制血管生成。适用于本发明的羟胺的酯衍生物包括式I的化合物或其可药用的盐，其例子在美国公开的申请2004/0002461中详细描述<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中R,和R2独立地是H或d-C3烷基；R3和R4独立地为C,-C3烷基；或者其中R,和R2—起，或者R3和R4—起，或者二组都是环烷基；Rs是H，OH，或Q-C6烷基；Re是Q-C6烷基、烯基、炔基，或取代的垸基或烯基；R7是d-Ce烷基、烯基、炔基，取代的烷基、烯基、环烷基或杂环；或者其中R6和R7—起，或者Rs、R6和R7—起，形成含3-7个环原子的碳环或杂环。本发明的方法还可使用包含可药用的载体或稀释剂和羟胺化合物的组合物，所述羟胺化合物具有与溶解度改性部分结合的N-羟基哌啶部分，该化合物在25'C的水中的溶解度为至少约0.25重量％并且在25'C下的水/正辛醇分配系数为至少约5。该组合物可具有在生物组织中诸如眼中的条件下可从化合物裂解的N-羟基哌啶部分。N-羟基哌啶部分可酶促裂解。该组合物还可以其中N-羟基哌啶部分是l-烃氧基-4-羟基-2，2,6，6-四甲基哌啶基的形式存在。本发明使用的术语"Ci-CJ完基、烯基或炔基"是指在其中含l-n个碳原子的烃基，其中n是1到约20的整数，优选1到约10，更优选l到约6，甚至更优选1到约3。因此该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基，以及戊基、己基的多种异构形式等。同样地，该术语包括乙烯基、乙炔基、丙烯基、丙炔基，和类似的含至多n个碳原子的支链和非支链的不饱和烃基。如果情况许可，这些基团可被诸如以下的一种或多种基团官能化羟基，垸氧基，烷硫基，烷基氨基，二烷基氨基，芳基氧基，芳基氨基，苄氧基，苄基氨基，杂环，或YCO-Z，其中Y是O、N、或S并且Z是烷基、环垸基、杂环或芳基取代基。术语"碳环"被定义为环状结构或环，其中所有的成环原子是碳。其例子是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。环丙基是优选物质。杂环被定义为其中至少一个环原子不是碳的环状结构。这一广泛类别的例子包括呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、吡喃、瞎唑、嗯唑啉、嚼唑烷、咪唑及其它，特别是在环中含氧原子的那些。在环中含有至少一个氧或氮原子的5元、6元和7元环是优选的杂环。其中呋喃基和四氢呋喃基是优选的。对于某些实施方案，优选&到R4中的每个是C,-C3烷基的低级烷基。优选地，为了合成方便起见和由于在这些位置具有这种取代的部分的已知功效，所有这些基团是甲基。然而，也可使用其它取代基。在某些实施方案中，使用其中R6是被至少一个CVCV烷氧基或苄氧基取代的C,-C6垸基。在这些化合物中优选具有乙氧基或苄氧基取代基的化合物。在优选化合物中，是那些其中R,到R4中的每个是甲基，Rs是H或甲基，R6是被苄氧基或CVCV烷氧基取代的甲基，且R7是甲基或者其中R6和R7形成环丙基的化合物，以及其中R,到R4中的每个是甲基，Rs是甲基，R6是乙氧基甲基或苄氧基甲基，且R7是甲基的化合物。另外的优选化合物是其中R,到R4中的每个是甲基，Rs是甲基，R6是羟基甲基，且R7是甲基的化合物。其它有用的化合物是那些其中R,到R4中的每个是甲基，R5、R6和R7形成呋喃基，或者其中Re和R7形成四氢呋喃基的化合物。进一步优选其中R,到R4是甲基，Rs是H,以及R6和R7形成环丙基的化合物。可用于本发明方法中的化合物的例子包括但不限于在美国专利公开2004/0002461Al中公幵的那些，诸如l-烃氧基-4-(3'-乙氧基-2',2'-二甲基)丙烷羰氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶；l-羟基-4-(3'-乙氧基-2',2'-二甲基)丙烷羰基氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶盐酸盐；l-烃氧基-4-环丙烷羰基氧基-2，2，6,6-四甲基哌啶；1-羟基-4-环丙垸羰基氧基-2，2,6,6-四甲基哌啶盐酸盐；l-烃氧基-4-(3'-苄基氧基-2'，2'-二甲基)丙烷羰氧基-2，2，6,6-四甲基哌啶；l-羟基-4-(3'-节氧基-2'，2'-二甲基)丙垸羰基氧基-2，2,6,6-四甲基哌啶盐酸盐；l-羟基-4-(3'-羟基-2'，2'-二甲基)丙烷羰基氧基-2,2,6，6-四甲基哌症盐酸盐；1-烃氧基-4-(1-甲基-环丙烷)羰基氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶；卜羟基-4-(l-甲基-环丙垸)羰基氧基-2,2,6，6-四甲基哌啶盐酸盐；1-烃氧基_4-(2-呋喃)羰基氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶；l-羟基-4-(2'-呋喃)羰基氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶盐酸盐；1-烃氧基-4-(3'-四氢呋喃)羰基氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶；l-羟基-4-(3'-四氢呋喃)羰基氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶盐酸盐。l-羟基-4-环丙烷羰基氧基-2,2,6，6-四甲基哌啶盐酸盐，在本文中被称作化合物l，是特别优选的。不希望束缚于理论，申请人相信化合物l(式I的化合物，其中R,、R2、&和114是甲基，R5是H，以及R6和R7—起形成环丙烷环的化合物)和其它的式I化合物以两种方式发挥它们的抗血管生成作用和其它治疗作用。首先，酯化合物原地水解形成发挥治疗活性的羟胺组分。其次，酯化化合物自身具有抗氧化活性，因此可具有抗血管生成活性，从而支持了包含该化合物的药物制剂的治疗效力。关于I化合物的活性的第一个理论基础，目卩，裂解释放羟胺组分，已知在身体的多种组织和器官中存在众多的酯酶，特别是在眼组织内，尤其是在角膜内。为了实践本发明，不必识别使本发明的酯系列裂解的特定酯酶。当对兔眼给用化合物时，酯的裂解迅速地并且实质上完全地发生。这通过在局部剂量给药后在眼房水中在全部时间内(30、60、90和120分钟)都检测到TEMPOL-H的存在所证明。相比之下，酯在这种酯酶缺乏时在含水溶液中是稳定的。酯的裂解也在多种动物的血浆中被证明。如实施例5所述，测量了TEMPOL-H(TPH)的酯衍生物在大鼠、兔、狗、和人的血浆中的体外半衰期。衍生物的消除通过TEMPOL-H的形成以摩尔基础进行定量说明。根据本发明方法的组合物经过配制和给用使得以在目标组织内有效发挥抗血管生成作用的剂量被施用。羟胺或衍生物的量，以重量/体积比计，可为制剂的约0.1%到约25%，或者按相应的重量计算。在一些实施方案中，优选活性药物的浓度为0.25%到约25%。羟胺组分的浓度优选为在组织和体液中为约O.ljiM到约10mM。在一些实施方案中，该范围为liam到5mM，在其它实施方案中，该范围为约10pM到2.5mM。在其它实施方案中，该范围为约50(iM到lmM。最优选地，羟胺浓度的范围为l-100pM。在包括还原剂的实施方案中，它们在制剂内给用或分开给用。还原剂的浓度在组织和体液中为1(aM到5mM，优选lO[iM到2mM。组合物的各组分的浓度可根据给药途径通过典型的药代动力学和稀释计算法进行适当地调整，从而实现这种局部浓度。根据本发明方法使用的组合物可包含超过一种的羟胺化合物。在一些实施方案中，两种或多种羟胺同时给用。在其它实施方案中，它们可按序给用。另外，本发明的方法包括联合治疗。在本发明的一些实施方案中，羟胺或衍生物与本领域已知的其它的可用于治疗与致病性血管生成有关的疾病或病症的化合物给用。本领域己知的其它的化合物可与羟胺化合物同时给用，或者按序给用。例如，羟胺化合物可与一种或多种另外的抗血管生成剂联合给用。通常，抗血管生成剂可以是任何己知的血管生成药的抑制剂或下调物，或由血管生成药促进的细胞信号传导途径的抑制剂，包括但不限于软骨由来因子，血管生成抑制性(angiostatic)甾族化合物，血管生成抑制性维生素D类似物，血管抑素(angiostatin)，血管内皮抑素，和verostatin。存在一些被认为影响特定的血管生成因子例如血管生成因子血管生成素的抗血管生成剂。对血管生成素特异性的抗血管生成剂包括与血管生成素结合的单克隆抗体，人胎盘核糖核酸酶抑制剂，肌动蛋白，和与血管生成素的C末端区域对应的合成肽。微生物由来的抗血管生成剂还被涵盖在本文内。这种药剂包括小红莓类，15-去氧精胍菌素，D-青霉胺，eponemycin,烟曲霉素，杀草霉素A，雷帕霉素和新霉素。术语"新霉素"是指由新霉素A、B和C组成的抗生素复合物，其一起又被称作Mycifradin、Myacync、Fradiomycin、Neomin、Neomas、Nivemycin、Pimavecort、Vonamycin、PowderV、及其类似物。该组合物可以另外包括一种或多种抗氧化剂。示例性的还原剂包括巯基丙酰基甘氨酸，N-酰半胱氨酸，fJ-巯基乙胺，谷胱甘肽，抗坏血酸及其盐，亚硫酸盐，或焦亚硫酸钠，或类似物质。另外，抗氧化剂还可包括天然抗氧化剂诸如维生素E、C、蛋黄色素(leutein)、黄嘌呤、P胡萝卜素，和矿物质诸如锌和硒。本发明的药物组合物可任选地包括一种或多种抗癌药剂，其包括但不限于生物碱类，如多西他赛，依托泊苷，创替坎(trontecan)，紫杉醇，替尼泊苷，拓扑替康，长春碱，长春新碱，和长春地辛；烷化剂，诸如白消安，英丙舒凡，脈泊舒凡，氮丙啶，苯佐替派，卡波醌，美妥替哌，乌瑞替派，六甲蜜胺，三亚乙基三聚氰胺，三乙烯磷酰胺，三乙烯硫代磷酰胺，苯丁酸氮芥，萘氮芥，环磷酰胺，雌莫司汀，异环磷酰胺，氮芥，氧化氮芥盐酸盐，美法仑，新恩比兴，培磷酰胺，胆甾醇对苯乙酸氮芥，泼尼莫司汀，曲磷胺，乌拉莫司汀，卡莫司汀,吡葡亚硝脲，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀，雷莫司汀，达卡巴嗪，甘露莫司汀，二溴甘露醇，二溴卫矛醇，哌泊溴垸，替莫唑胺；抗生素类和类似物，诸如阿克拉霉素放线菌素Fp氨茴霉素，偶氮丝氨酸，博来霉素，放线菌素C，卡柔比星，嗜癌菌素，色霉素，放线菌素D，柔红霉素，6-二偶氮-5-氧代-L-正亮氨酸，多柔比星，表柔比星，伊达比星，美诺立尔，丝裂霉素，霉酚酸，诺拉霉素，橄榄霉素，培洛霉素，吡柔比星，普卡霉素，泊非霉素，嘌罗霉素，链黑霉素，链佐星，杀结核菌素，净司他丁，佐柔比星；抗代谢物药物，诸如den叩terin，依达曲沙，甲氨蝶呤，吡曲克辛，蝶罗呤，雷替曲塞@，三甲曲沙，克拉屈滨，氟达拉滨，6-巯基嘌呤，thiamiprine，硫鸟嘌呤，安西他滨，阿扎胞苷，6-氮尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，去氧氟尿苷，乙嘧替氟，依诺他滨，氮尿苷，氟尿嘧啶，吉西他滨，替加氟；L-门冬酰胺酶；免疫调节剂诸如干扰素-a，干扰素-P，干扰素-Y，白细胞介素-2，蘑菇多糖，丙帕锗，PSK,罗喹美克，西佐糖，乌苯美司；铂复合物如卡铂，顺铂，米帕，奥沙利铂；醋葡醛内酯；安吖啶；比生群；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；芬维A胺；硝酸镓；羟基脲；氯尼达明；米替福新；米托胍腙；米托蔥醌；莫哌达醇；硝嗪；pentostain;芬那美特；鬼臼酸2-乙基-酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；索布佐生；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"三氯三乙胺；氨基甲酸酯；抗肿瘤激素或类似物诸如卡普睾酮，屈他雄酮，环硫雄醇，美雄烷，睾内酯，氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦，比卡鲁胺，氟他胺，尼鲁米特，屈洛昔芬，他莫昔芬，托瑞米芬，氨鲁米特，阿那曲唑，法倔唑，福美坦，来曲唑，磷雌酚，己垸雌酚，聚磷酸雌二醇，布舍瑞林，戈舍瑞林，利普安醋酸亮内瑞林，曲普瑞林，氯地孕酮，甲羟孕酮，甲地孕酮，美仑孕酮；卟吩姆钠；巴马司他；和亚叶酸。关于其它的可包括在本发明药物组合物中的这些和其它抗肿瘤剂的描述，参见TheMerckIndex第12版。内皮细胞的病理性血管生成或增殖己经与许多疾病或病况有关，包括高度增殖性和赘生性疾病和炎性疾病和病症，如上所详述的。本发明的方法可适合于治疗其中血管生成是病因的任何病况。组合物可通过被常规用于给药的任何途径给药。这些途径包括但不限于口服、局部非肠道和吸入给药。非肠道递送可以为腹膜内、静脉内、口周、皮下、肌肉内、动脉内等途径。本文公开的组合物可以常规的剂型给药，所述剂型根据本领域已知过程与标准的可药用载体结合制备。这种组合可包括诸如混合、制粒、压縮、和溶解适当的组分的过程。可药用载体的形式和性质通过与其组合的活性成分的量、给药途径、和其它公知变量来控制。活性成分可以是本发明的化合物即羟胺类或其酯衍生物中的一种。本文使用的术语"载体"是指用于制备药物组合物的混合物的稀释剂、赋形剂等。术语"可药用的"是指由联邦或州政府的管理当局批准的或在美国药典或其它通常认可的药典中所列举的供动物中使用的，特别是供人使用的。这种可药用的载体或稀释剂以及制备方法是本领域公知的(例如参见Remington'sPharmaceuticalSciences,MeadePublishingCoL,Eastern,Pa.,最近一版；theHandbookofPharmaceuticalExcipients，APhApublications,1986)。可药用载体可为例如液体或固体。液体载体包括但不限于水，盐水，缓冲盐水，葡萄糖溶液，优选诸如Hank's液或林格氏液，生理盐水，由盐水和葡萄糖组成的混合物，和肝素化钠-柠檬酸盐-枸橼酸-葡萄糖溶液等的生理相容性缓冲液，优选为无菌的形式。示例性的固体载体包括琼脂、阿拉伯胶、明胶、乳糖、硬脂酸镁、果胶、滑石等。在一些实施方案中，组合物可经口给药。对于这种给药，药物组合物可为液体形式，例如溶液剂、糖桨剂或悬浮剂，或者可为在使用前用于与水或其它适当的媒介物重构的药物产品。这种液体制剂可通过常规方法与诸如以下的可药用添加剂制备助悬剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用的脂肪或油)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水媒介物(例如杏仁油、油性酯、或分级植物油)；和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。药物组合物可采取例如片剂、胶囊或小球的形式，其通过常规方法与诸如以下的可药用赋形剂制备粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯基卩比咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢f丐)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸钠)；或润湿剂(例如十二垸基硫酸钠)。片剂可通过本领域公知的方法进行包衣。对于经颊给药，组合物可采取以常规方式配制的片剂、糖锭(troche)或锭剂(lozenge)的形式。用于经口或经颊给药的组合物可经过配制以控制释放活性化合物。这种制剂可包括本领域已知的一种或多种持续释放试剂，诸如甘油基一硬脂酸酯，甘油基二硬脂酸酯和蜡。组合物可局部施用。这种给药包括将组合物外部施用于表皮、口腔、眼、耳和鼻上。这与通过经口、静脉内、腹膜内和肌肉内递送而实现的系统给药形成对照。用于局部给药的组合物包括例如适合渗透通过皮肤的液体或制剂，诸如霜剂、搽剂、洗液、膏剂或糊剂，和适于向眼、耳或鼻递送的滴剂。在一些实施方案中，本发明的组合物包括霜剂，滴剂，搽剂，洗液，膏剂和糊剂，是供外用的液体或半固体组合物。这种组合物可通过将粉未形式的活性成分单独地或在含水或不含水液体中的溶液或悬浮液中与油脂基质或非油脂基质混合而制备。基质可包括复合烃类如甘油，各种形式的石蜡，蜂蜡；胶浆；矿物油或食用油或脂肪酸；或大粒凝胶。这种组合物可另外包括适当的表面活性试剂诸如表面活性剂，和助悬剂诸如琼脂，植物树胶类，纤维素衍生物，和其它组分诸如防腐剂、抗氧化剂等。另外，本发明的组合物可经鼻或通过吸入给药。对于经鼻或吸入给药，该组合物可以方便地以由加压包装或喷雾器呈现的气溶胶喷射形式被递送，借助于适当的推进剂例如二氯二氟甲垸、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适当的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门以递送计量的量而确定。供吸入器或吹药器用的如明胶的胶囊和药囊可配制为含有化合物和适当的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。本发明的一些组合物可配制为储库型制剂。这种长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内植入)或通过肌肉内注射给药。因此，例如，该化合物可与适当的聚合物材料或疏水性材料进行配制(例如作为在可接受的油中的乳剂)或与离子交换树脂进行配制，或者作为微溶的衍生物，例如作为微溶性盐。脂质体和乳剂是用于亲水性药物的递送媒介物或载体的公知例子。用于给用上述组合物的技术和制剂可见于Remington'sPharmaceuticalSciences,MeadePublishingCoL,Eastern,Pa.,最近一版。上述羟胺类及其衍生物中的任一种在抑制血管生成方面的有效性可通过本领域已知的若干被接受的生物检验法之一被测定。一种优选方法是鸡尿囊绒膜(CAM)试验。在CAM生物实验中，在陪替氏培养皿培养受精的鸡胚胎。在发育的第6天，将一碟释放聚合物诸如甲基纤维素(其浸渍有受试样品或适当对照物质)放置到血管膜的前沿上。在发育的第8天，观察和评价植入物周围区域。受试植入物周围的无血管区表明存在胚胎新血管形成的抑制剂。Moses等人，19卯，Science,248:1408-1410和Taylor等人，1982,Nature,297:307-312。用于前述CAM试验中的单独的受试血管生成抑制剂的报导剂量是50jig的鱼精蛋白(Taybr等人(1982))，200(ig的牛玻璃体提取物(Lutty等人，1983，Invest.Opthalmol.Vis.Sci.24:53-56),禾卩10|ig的血小板因子IV(Taylor等人(19S2))。作为组合有效的血管生成抑制剂的最低报导剂量包括肝素(50pg)和氢化可的松(60ng)，以及(3-环糊精十四硫酸酯(14ng)和氢化可的松(60吗)，由Folkman等人，1989,Science243:1490报导。提供以下实施例用于更详细地描述本发明。它们意在说明而非限制本发明。实施例1:用于血管生成研究的鸡尿囊絨膜(CAM)模型通过前述方法检测新血管形成(参见实施例5结尾的参考文献)。将10天大的受精鸡蛋在37匸和55%相对湿度下培养。在黑暗中，借助烛形灯并使用皮下注射针，在覆盖气囊的蛋壳内刺出小孔。在胚胎膜的无血管区域上方的鸡蛋较宽侧刺出第二个小孔。使用小型橡胶挤压灯泡通过向第一个孔施加温和的真空在第二个孔下方制造出一个人工气囊。真空使尿囊绒膜(CAM)与蛋壳分离。借助于微型钻在下降的CAM上方的蛋壳内切割约1.0平方厘米的窗口。通过该小窗口可触及下方的CAM。使用小型穿孔器从1号滤纸(WhatmanInternational,UnitedKingdom)沖压出滤纸片。滤纸片浸有3毫克/毫升的醋酸可的松溶液(95%乙醇和水)并在无菌条件下进行空气干燥。为了诱导血管生成，将无菌滤纸片用bFGF(l(ig/ml)或其它的促血管生成因子饱和，对照滤纸片片用不含钙和镁的PBS饱和。使用无菌钳从窗口将一个滤纸片/CAM放置。窗口用商标为Highland的透明带密封。24小时后，将10-25|il的受试药物(抑制齐lj)静脉内注射到或局部添加到bFGF的CAM膜内或其它促血管生成因子刺激的CAM内。对照滤纸片接受不含钙和镁的PBS。48小时后，收获位于滤纸片正下方的CAM组织，并置于35毫米的陪替氏培养皿中。每个试验组使用8-10个鸡蛋。加入促血管生成药(参见以下的实施例)以诱导新血管在10天大胚胎的CAM上分枝。将1号滤纸的无菌滤纸片(WhatmanInternational,UnitedKingdom)用3毫克/毫升的醋酸可的松预处理，并在无菌条件下进行空气干燥。然后将滤纸片悬浮在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中并置于生长的CAM上。在第一天将用TPH(TEMPOL-H)或TEMPOL禾口/或H202或TPH禾卩/或bFGF或VEGF处理的滤纸片置于3天的培养物上。CAM切片的数字图象和显微镜分析使用SV6立体显微镜(KarlZeiss)在50倍放大率下检查得自陪替氏培养皿的CAM切片。使用3-CCD彩色摄像机系统(ToshibaAmerica,NewYork,NY)获得数字图象。使用Image-ProPlus软件(MediaCybernetics)对这些图像进行分析。计算每个切片的与滤纸片区域重叠的环形区域内的血管的分枝点的数目。在37'C和55%相对湿度下孵育3天后，从对照的和处理的CAM样品中切除每个滤纸片正下方的CAM组织。组织用PBS洗涤3次。将切片置于35毫米的陪替氏培养皿(NalgeNunc;Rochester,NY)中，并使用SV6立体显微镜(KarlZeiss;Thornwood,NY)在50倍放大率下进行观察。使用3-CCD彩色摄像机系统(ToshibaAmerica;NewYork,NY)收集与滤纸片邻接的CAM切片的数字图像并使用Image-ProPlus软件(MediaCybernetics;SilverSpring,MD)进行分析。计算每个切片的与滤纸片区域相等的环形区域内包含的血管分枝点的数目。抑制％数据用实验值减去阴性对照值除以阳性对照值和阴性对照值之间的差的商来表示。计算每个CAM制备物的一个图象，并从得自八个CAM制备物的发现结果分析每个处理条件。另外，每个实验进行三次。得到的血管生成指数是每组处理中新分支点的平均值土SEM(测量的标准误差)。统计分析通过单向方差分析(ANOVA)比较实验组和相应的对照组进行血管分枝图形的统计分析。统计显著性差异在P值〈0.05评估。实施例2:TPH和Tempol对H202诱导的血管生成的影响根据实施例1所提供的材料和方法，将TPH(TEMPOL-H，氮氧化物4-羟基-2,2,6，6-四甲基哌啶-l-基氧基的羟胺还原形式)或TEMPOL(4-羟基-2，2，6,6-四甲基哌啶-N-烃氧基)施用于CAM模型研究中以测定其各自的抗血管生成作用。在CAM模型中使用&02诱导血管生成。CAM模型研究得到的结果在表1A和表IB中示出。表1A:在CAM模型中，在H202诱导的血管生成中，TPH相对于TEMPOL在100-200fig下的抗血管生成功效<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>数据代表平均值土SD，n-8/组，*P<0.05,与^[202比较。表IB:在CAM模型中，在11202诱导的血管生成中，TPH相对于TEMPOL在400-800jag下的抗血管生成功效<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>数据代表平均值士SD，n-8/组，*P<0.05和"P〈0.01，与H20:比较。从上表可见，在CAM模型中TPH或TEMPOL有效地抑制由超最大浓度的&02诱导的血管生成。实施例3:TPH对bFGF诱导的血管生成的影响根据实施例1所提供的材料和方法，.将TPH施用于CAM模型研究中以测定其各自的抗血管生成作用。使用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在CAM模型中诱导血管生成。CAM模型研究得到的结果在表2中示出。表2:在CAM模型中，TPH在抑制bFGF诱导的血管生成中的抗血管生成功效<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>数据代表平均值士SD,n-8/组，*P<0.05fn**P<0.01，与bFGF比较。TPH导致在CAM模型中对bFGF诱导的血管生成的剂量依赖性抑制(l00-400jig)(表2)。实施例4:TPH对VEGF诱导的血管生成的影响根据实施例1所提供的材料和方法，将TPH施用于CAM模型研究中以测定其各自的抗血管生成作用。在CAM模型中使用VEGF诱导血管生成，结果在表3中示出。表3:在CAM模型中，TPH在抑制VEGF诱导的血管生成中的抗血管生成功效<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>数据代表平均值土SD，n-8/组，**P<0.01，与VEGF比较。TPH在CAM模型中表现出对VEGF诱导的血管生成的剂量依赖性抑制(表3)。观察到的TPH对VEGF诱导的血管生成的抗血管生成功效比对bFGF诱导的血管生成的抗血管生成功效更大(表2和3)。实施例5:注射的化合物l(环丙烷羧酸l-羟基-2，2,6,6-四甲基-哌啶-4-基酯)在bFGF-刺激的CAM模型中的功效根据实施例i提供的材料和方法，通过注射将化合物1引入到CAM模型硏究中以测定其各自的抗血管生成作用。使用bFGF在CAM模型中诱导血管生成。结果在表4中示出。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>实施例1-5的参考文献1.Powell,J.A.，Mohamed，S.，Kerr,J.,Mousa，S.A.:J.CellularBiochemistry80:104-114;2000.2.AuerbachR,KubaiL，KnightonD,FolkmanJ.DevBiol.1974;41:391-394.3.MarcinMewiczC，Weinreb，PH，Calvete,JJ，Kisiel，DG，Mousa，SA，Tuszynski，GP,Lobb，RR.Obtustatin:CancerRes.63(9):2020-2023;2003.4.Colman,RW,Pixley,RA,Sainz，IM,Song，JS，Isordia-Salas，MohamedS，Powell,J，Mousa，SA:JThrombosisHaemostasis1(1);164-173;2003.5.DupontE，FalardeauP，MousaSA，DimitriadouV,PepinMC，WangT,AIaoui-JamaliMA.GlinExpMetastasis.2002;19:145-153.6.KimS,BellK3MousaSA,VarnerJAAmJPath.2000;156:1345-1362.7.MousaSA，MousaAS.CurrentPharmaceuticalDesign2004;10(l):l-9.8.PolytarchouCandPapadimitriouE:FreeRadicalResearch38(5):501-50S.9.MousaSA,O'ConnorL.DavisFB，DavisPJ.:甲状腺激素类似物3,5-二碘甲状腺丙酸(DITPA)的促血管生成作用在细胞表面启动并通过整联蛋白介导(Proangiogenesisactionofthethyroidhormoneanalog3，5-diiodothyropropionicacid(DITPA)isinitiatedatthecellsurfaceandisintegrhimediated).Endocrinology.2006;147(4):1602-7.10.MousaSA:av整联蛋白亲合性/特异性和新型的四氮杂环肽衍生物的抗血管生成作用(Alphavintegrinaffinity/specificityandanti-angiogenesiseffectofanoveltetraazacyclicpeptidederivative).SU015,invariousspecies.JCardiovascularPharmacology2005;45(5》462-467.11.DavisFB,MousaSA，O'ConnorL，MohamedS,LinHY，CaoHJ,DavisPJ.:甲状腺激素的促血管生成作用是成纤维细胞生长因子依赖性的并且在细胞表面启动(Proangiogenicactionofthyroidhormoneisfibroblastgrowthfactor-dependentandisinitiatedatthecellsurface).CirculationResearch2004;94(11):1500-1506.12.MousaSA.MohamedS.WexlerEJ.KerrJS.TA138,一种新型的ap3拮抗剂的抗血管生成和抗癌功效(Anti-angiogenesisandanticancerefficacyofTA138,.anovelalphavbeta3antagonist).AnticancerRes.2005;25(1A):197-206.13.CezaryMarcinkiewicz,PaulH.Weinreb,JuanJ.Calvete，DariuszG.Kicbel，ShakerA.Mousa,GeorgeP.Tuszynski，RoyR.LobbL:Obtustatin:体外a/(31整联蛋白和体内血管生成的的一种强力的选择性抑制剂(Obtustatin,apotentselectiveinhibitorofalphal/Betaintegrininvitroandangiogenesisinvivo).CancerResearch63:2020-2023，2003.14.Colman,R.W.,Pixley，R.A.，Sainz，I.M.，Song，J.S.,Isordia-Salas:MohamedS.,Powell,J.，Mousa,S.A.:通过促学光生成的高分子量激肽原的抗体锁结的血管生成抑制(Inhibitionofangiogenesisbyantibodyblockingtheactionofproangiogenichigh-molecular-weightkininogen).JThrombosisHaemostasis1(1);164-173,2003.15.Dupont,E.，Falardeau，P.，Mousa,S.A.，Dimitriadou，V.，Pepin,M.C.，Wang,T.,Alaoui-Jamali，M.A.:新伐司他(AE-941)，一种口服活性提取物的抗血管生成和抗新陈代谢性质(AntiangiogenicandantimetastaticpropertiesofNeovastat(AE-941)，anorallyactiveextract).ClinExpMetastasis19(2):145-153,2002.实施例6:化合物1在大鼠、兔、狗和人的血浆中的体外稳定性分析化合物l(环丙垸羧酸l-羟基-2,2，6,6-四甲基-哌啶-4-基酯)的活性代谢物是TPH。本分析的目标是测定化合物1在大鼠、兔、狗和人的血浆中在标准化培养条件下的体外半衰期。将化合物1与汇集的大鼠、兔、狗、和人血浆在标准化培养条件下培养不同的时间段。将含有得自大鼠、兔、狗和人的汇集血浆的预标记管在振动的37X:水浴中预培养。将化合物1的溶液以1000ng/毫升的最终浓度添加到管中。立刻取出0时间点样品(n-5)并转移到含有稳定剂溶液(DTPA、乙酰半胱氨酸和抗坏血酸)，LC/MS/MS试验内标和甲醇的管中。已经表明稳定剂溶液使得化合物1在得自大鼠、兔、狗和人的血浆的存在下是稳定的。将管涡流，置于冰上，然后离心。将IOO微升的小份的上清液转移到HPLC样品小瓶中。将另外的管(在每个时间点n-5)在37'C培养5、10、20、30、60、120和240分钟，然后进行处理。在每个培养的样品中的化合物1和TPH的量使用校正的LC/MS/MS试验进行定量测定。化合物1的消除和TPH的出现作为与大鼠、兔、狗和人的血浆的培养时间的函数，分别概括在表5和6中，并且分别如图1和2所示。图3-6表示在大鼠、兔、狗和人的血浆中化合物1的消除和TPH的出现之间的暂时的关系。表5.在标准化培养条件下在大鼠、兔、狗和人的血浆中的化合物1a的浓度(ng/mL)作为培养时间的函数。时间(分钟)大鼠兔狗人0806.50±86.77502.75±74.66771.12±21.68775.47±22.50770.32±20.6614.56±3,35804.93±17.45593.43±7,5510745.77±15.500.00±0.00811.14±21.06503.18±20.卯20682.88±16.940.00±0.00809.01±18.58394.69±6.7230613.79±25.840.00±0.00789.53±13.73316.37±7.6760480.48±10.690.00±0.00717.22±25.73162.41±9.77120277.94±5.550.00±0.00608.14±25.9632.22±2.6324080.70±2.020.00±0.00428.20±12.030.00±0-00T1/2(min)69.540.98239.6027.78数据表示为平均值iSD(r^5)a)环丙垸羧酸l-羟基-2，2,6,6-四甲基-哌啶-4-基酯表6.在标准化培养条件下在大鼠、兔、狗和人的血浆中的TPH的浓度(ng/mL)作为化合物1培养时间的函数。时间(分钟)大鼠兔狗..人010.23±1.59270.55±35.450.00±0.0048.76±2.8430.47土1.65587.17±21.995.85±0.73186.71±4.581050.91±2.11604.21±21.998.77±0.65241.99±8.052086.30±3.305卯.06土40.972.79±0.743!0.:i0i8.5430119.63±7.08533.01±117.4016.22±0.67365.53±14.4460201.94±4.19569.19±32.9625.68±1.04449.85±9.73120304.66±7.27525.63±10.3139.31±1.09519.12±19.52240362.66±7.50477.54±40,9553.92±1.6850U9±11.33数据表示为平均值iSD(n-5)化合物l(环丙垸羧酸l-羟基-2,2,6,6-四甲基-哌啶-4-基酯)的水解速率随物种的不同而异。化合物1在狗血浆中相当稳定，体外半衰期平均为4小时。相比之下，化合物1在兔血浆中迅速水解，体外半衰期平均仅为1分钟。人和大鼠血浆中的酯酶的活性适中。化合物1在人和大鼠血浆中的体外半衰期平均分别是28分钟和70分钟。化合物1的消除与TPH的形成一致。在实验限度内，化合物l在培养混合物中的消除可以被认为是以摩尔为基础形成了TPH。这些结果暗示了在标准化培养条件下，化合物1中酯官能度的水解形成TPH是化合物1新陈代谢的首要途径，并且TPH在240分钟的培养期内是稳定的。实施例7:对Sprague-Dawley大鼠给药的化合物1盐酸盐的单剂量静脉内毒性分析本分析的目标是测定化合物1和活性代谢物TPH的毒性动力学参数，作为在Sprague-Dawley大鼠中化合物1以单次IO分钟静脉内输注的毒性分析的一部分。对每个动物通过静脉内输注进入侧尾静脉内，以O(盐水)、10、30、100或200毫克/千克(10分钟内30毫升/千克)的剂量水平一次给药化合物1。在输注之前和输注期间在预定时间点收集血液用于毒性代谢学评价。使用校正的LC/MS/MS试验分析血浆样品的化合物1和TPH。基于血浆浓度-时间数据，通过标准模型独立方法(Gilbaldi和Perrier，1982)测定了叙述性的毒性代谢学参数。使用Kinetica,4.2版本(Irmaphase,Philadelphia,PA)进行全部的药代动力学分析。C自x是观察到的最大血浆浓度T,是达到C,的时间AUC((M.,67h。是从起始10分钟输注到在输注终止后4小时的血浆浓度-时间曲线下面积AUC是从起始10分钟输注到无限时间的血浆浓度-时间曲线下面积丁1/2是消除半衰期血浆浓度在计算之前近似为是ng/mL的小数点后第1位。浓度低于可以计量限度的血浆样品(对于化合物1，<50ng/mL，对于TPH,<20ng/mL)在药代动力学分析和生成平均值和SD时认为是0。使用标称时间点用于所有计算。因为化合物1和TPH的血浆浓度没有表观性别差异，在每个取样时间点收集雌性和雄性大鼠的数据。化合物1和TPH在10分钟静脉内输注结束时和在输注终止后若干时间点的平均浓度分别概括在表7和8中。图7和图8分别表示化合物l和TPH的血浆浓度-时间曲线。表7.在Sprague-Dawley大鼠(n=5-6)中在单次IO分钟静脉内输注化合物1后，化合物1的平均值土SD血浆浓度(ng/mL)和毒性代谢学参数。01030b100200Cmax(ng/mL)NA980.53487.129020.089740,8丁max(hr)_NA0.167_0.167_0.167_0.167a:相对于静脉内输注起始时的时间；b:n=5NS:没有样品表8.在Sprague-Dawley大鼠(n=5-6)中在单次10分钟静脉内输注化合物1后，TPH的平均值土SD血浆浓度(ng/mL)和毒性代谢学参数<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>a:相对于静脉内输注起始时的时间；、n=5NS:没有样品；NA:不适用在10到200mg/kg的剂量范围内，在10分钟输注终止后立刻观察到化合物1的血浆水平呈剂量相关性增加。在10、30、100和200毫克/千克的输注结束时的峰浓度分别平均为980.5、3487.1、29020.0和89740.8ng/mL。化合物1在10毫克/千克的输注终止后1小时不可计量。在三种更高剂量的30、100和200毫克/千克下，在输注终止后4小时收集的样品中的化合物1的血浆水平不可计量。基于获得的数据不能测定化合物1的消除半衰期，但是所述结果暗示了化合物1在大鼠中的消除非常迅速。在10分钟输注化合物1终止后还立刻观察到TPH的血浆水平呈剂量相关性增加。在10、30、100和200毫克/千克之后，在化合物1输注结束时观察到的峰浓度分别平均为2481.7、8337.7、29020.8和60802.1ng/mL。与化合物1类似，在10毫克/千克剂量输注化合物1结束时TPH的血浆水平迅速降低，但是在10毫克/千克剂量输注后4小时仍可计量。在10毫克/千克剂量后TPH的极限消除半衰期估计是0.4小时。在30、100和200毫克/千克后TPH的消除半衰期基于获得的数据不能确定，但是在三种更高的化合物1剂量的输注终止后4小时收集的血浆样品显示TPH水平低于在化合物1输注终止后立刻观察到的浓度的1%。实施例8:TPH在人内皮三维芽殖模型中的抗血管生成功效和机理进行以下规程以测定TPH在使用人内皮细胞(微血管内皮细胞、视网膜内皮细胞和choriodal内皮细胞)的三维芽殖试验中的抗血管生成功效，并进一步测定响应氧化压力、b-FGF、VEGF、TNF-a、单核细胞和脂多糖(LPS)的抗血管生成功效。实验设计三维血管生成试验在用纤维蛋白涂覆的微载体小珠上培养的人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)的体外三维芽殖血管生成将铺满的HDMEC(5-10代)与用明胶涂覆的Cytodex-3小珠以每个小珠40个细胞的比率混合。将细胞和小珠(对于24孔板，每孔为150-200个小珠诉5ml的内皮基础培养基(EBM)+15Q/。的正常人血清(HS)悬浮，前4个小时每小时轻轻地混合，然后在C02培育箱中培养过夜。第二天，添加10ml的新鲜的EBM+5。/。HS，然后将混合物培养另外的3小时。在实验之前，检查EC-小珠的培养物，然后，向24孔板的孔中添加500pi的磷酸缓冲盐水(PBS),向PBS中添加100)il的EC-小珠培养液。计算小珠的数目，并计算EC/小珠的浓度。制备了有或者没有血管生成因子或受试因子的在EBM培养基中的纤维蛋白原溶液(lmg/ml)。对于阳性对照，使用30ng/mlVEGF+25ng/mlFGF2。EC-小珠用EBM培养基洗涤两次，并将EC-小珠加入到纤维蛋白原溶液中。对于每种条件所述实验进行三次。将EC-小珠在纤维蛋白原溶液中轻轻地混合，并加入在1毫升纤维蛋白原溶液中的2.5(_L的人凝血酶(0.05U/pl);将300fil立刻转移到24孔板的每个孔内。纤维蛋白原溶液在5-10分钟内聚合；20分钟后，添加EBM+20。/。的正常人血清+10ng/ml的抑肽酶，将板在C02培育箱中培养。HDMEC需要约24-48小时侵入纤维蛋白凝胶并形成管。对先前设计用于研究牛纤维蛋白凝胶中的牛肺动脉内皮细胞血管生成行为的微载体体外血管生成试验(Nehls&Drenkhahn,1995,MicrovascularResearch50:311-322;Nehls&Drenkhahn，1995,Histochem.&Cell.Biol.104:459-466)进行改进，用于研究在三维ECM(胞外基质)环境中人的微血管内皮细胞血管生成。简要地，将如前所述进行分离的人纤维蛋白酶原(Feng等人，1999，J.Invest.Dermatol.113:913-919:Mousa等人，2005,EndocrinologyDec.29，2005:1390)以1mg/ml的浓度溶于M199介质中(pH7.4)并过滤通过0.22微孔过滤器进行灭菌处理。通过将无菌的Vitrogen100在5XM199培养基和蒸馏水中混合而制备等渗的1.5mg/ml的胶原蛋白溶液。使用INNaOH调节pH到7.4。在某些实验中，向纤维蛋白原或胶原蛋白溶液中添加生长因子和ECM蛋白质(诸如VEGF、bFGF、PDGF(血小板衍生生长因子)、血清、明胶和纤连蛋白)。然后将约500个EC-小珠加入到1mg/ml的纤维蛋白原或1.5mg/ml的胶原蛋白溶液中。随后，将EC-小珠-胶原蛋白或EC-小珠-纤维蛋白原悬浮液(500个EC-小珠/毫升)以每孔300fil铺板在24孔板上。在37'C培养EC-小珠-胶原蛋白培养物以形成凝胶。EC-小珠-纤维蛋白培养物的胶凝在室温下添加凝血酶到最终浓度0.5U/ml后在不到5分钟内发生。胶凝后，向每个孔中添加1ml新鲜的试验培养基(补充有20%正常人血清的EBM用于HDMEC，或补充有10%胎牛血清的EBM用于BAEC(牛主动脉内皮细胞))。视测血管生成应答并通过视频图像捕捉进行记录。具体地说，毛细管芽殖形成使用NikonDiaphot-TMD倒置显微镜(NikonInc.;Melville,NY)进行观察和记录，该倒置显微镜配备有孵育室，其含NikonNP-2恒温箱和Sheldon#2004二氧化碳流体混合器。将显微镜直接联接于与MacintoshG3电脑连接的视频系统上，所述视频系统由Dage-MTICCD-72S摄影机和Sony12"PVM-122视频监视器组成。使用AdobePhotoshop在不同的放大率下捕捉图像。通过测定带有毛细管芽殖的EC-小珠的数量和百分数目测定量血管生成因子对芽殖血管生成的作用。对于每个试验条件，计算一式三份的每孔的100个小珠(五到六个随机的低倍视野)。所有的实验重复至少三次。通过单向方差分析比较实验组和各自的对照组进行统计分析，并基于PO.05计算统计显著性。尽管已经参考本发明的优选方案特别描述了本发明，但是可以理解，本发明不限于本文具体公开和举例说明的实施方案。可对本发明的优选方案进行多种的变化和修改而不脱离由权利要求所限定的本发明的范围和精神。权利要求1.抑制患者的血管生成的方法，包括对患者给用使得血管生成得以抑制的治疗足够量的羟胺化合物或其酯衍生物，其中酯衍生物包含式I；其中式I是其中R1和R2独立地为H或C1-C3烷基；R3和R4独立地是C1-C3烷基；R5是H、OH、或C1-C6烷基；R6是C1-C6烷基、烯基、炔基，或取代的烷基或烯基；R7是C1-C6烷基、烯基、炔基，或取代的烷基或烯基；其中R1和R2一起，或者R3和R4一起，或者二组都是环烷基；其中R6和R7一起，或者R5、R6和R7一起，形成包含3-7个环原子的碳环或杂环。2.权利要求l所述的方法，其中羟胺化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3.权利要求l所述的方法，其中羟胺化合物是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>4.权利要求l所述的方法，其中R,、R2、Ro和114是C,-C3烷基。5.权利要求l所述的方法，其中R,、R2、113和114是乙基。6.权利要求l所述的方法，其中R,、R2、R3和R4是甲基。7.权利要求6所述的方法，其中Rs是H或甲基；R6是被苄氧基或C,-Q3垸氧基取代的甲基；和R7是甲基。8.权利要求6所述的方法，其中R5是H或甲基；和R6和R7—起是环丙基。9.权利要求6所述的方法，其中R5、Rs和R7—起是呋喃基。10.权利要求6所述的方法，其中Rs是H:和R6和R7—起是四氢呋喃基。11.权利要求6所述的方法，其中R,-是H;和R6和R7—起是环丙基。12.权利要求l所述的方法，其中患者是哺乳动物。13.权利要求l所述的方法，其中患者是人。14.权利要求1所述的方法，进一步包括给用抗氧化剂或还原剂之一或二者。15.权利要求l所述的方法，进一步包括给用抗肿瘤药。16.权利要求1所述的方法，进一步包括给用另外的抗血管生成剂。17.权利要求16所述的方法，其中抗血管生成剂是抗氧化剂，VEGF拮抗剂，bFGF拮抗剂，NOS拮抗剂，或其组合。18.治疗罹患牵涉血管生成的疾病状态的患者的方法，包括对患者给用使得病理性血管生成得以抑制的治疗足够量的羟胺化合物或式I所示的其酯衍生物，其中式I是其中R,和R2独立地为H或C广C3烷基；R3和R4独立地是C,-C3垸基；Rs是H、OH、或Q-Ce垸基;R6是q-C6烷基、烯基、炔基，或取代的垸基或烯基；R7是C,-C6垸基、烯基、炔基，或取代的烷基或烯基；其中R,和R2—起，或者R3和R4—起，或者二组都是环烷基；其中R6和R7—起，或者Rs、R6和R7—起，形成包含3-7个环原子的碳环或杂环。19.权利要求18所述的方法，其中羟胺化合物是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>20.权利要求18所述的方法，其中羟胺化合物是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>21.权利要求l所述的方法，其中R1、R2、R3和R4是C1-C3烷基。22.权利要求l所述的方法，其中R1、R2、R3和R4是乙基。23.权利要求l所述的方法，其中R1、R2、R3和R4是甲基。24.权利要求23所述的方法，其中R5是H或甲基；R6是被苄氧基或C1-C6烷氧基取代的甲基；和R7是甲基。25.权利要求23所述的方法，其中Rs是H或甲基；和R6和R7—起是环丙基。26.权利要求23所述的方法，其中R5、116和117—起是呋喃基。27.权利要求23所述的方法，其中R5是H;和R6和R7—起是四氢呋喃基。28.权利要求23所述的方法，其中.-Rs是H;和R6和R7—起是环丙基。29.权利要求18所述的方法，其中患者是哺乳动物。30.权利要求18所述的方法，其中患者是人。31.权利要求18所述的方法，其中疾病状态以瘤为特征。32.权利要求31所述的方法，其中疾病状态是癌。33.权利要求32所述的方法，其中疾病状态是纤维肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，软骨肉瘤，成骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，内皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管内皮肉瘤，滑膜瘤，间皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，横纹肌肉瘤，结肠癌，胰腺癌，乳癌，卵巢癌，前列腺癌，鳞状细胞癌，基底细胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳头状癌，乳头状腺癌，囊腺癌，髓样癌，支气管癌，肾细胞癌，肝细胞瘤，胆管癌，绒膜癌，精原细胞瘤，胚胎性癌，维尔姆斯瘤，子宫颈癌，睾丸癌，肺癌，小细胞肺癌，膀胱癌，上皮癌，神经胶质瘤，星形细胞瘤，成神经管细胞瘤，颅咽管瘤，室管膜瘤，松果体瘤，成血管细胞瘤，听神经瘤，少突胶质瘤，脑膜瘤，黑素瘤，神经母细胞瘤，视网膜母细胞瘤，听神经瘤，纤维神经瘤，沙眼或脓性肉芽肿。34.权利要求18所述的方法，进一步包括给用抗氧化剂或还原剂。35.权利要求31所述的方法，进一步包括给用抗肿瘤药。36.权利要求18所述的方法，进一步包括给用另外的抗血管生成剂。37.权利要求36所述的方法，其中另外的抗血管生成剂是抗氧化剂，VEGF拮抗剂，bFGF拮抗剂，NOS拮抗剂，或其组合。全文摘要本发明提供了包含羟胺类及其酯衍生物的化合物及使用它们治疗血管生成和相关疾病的方法。文档编号A01N43/40GK101378755SQ200780004404公开日2009年3月4日申请日期2007年2月1日优先权日2006年2月2日发明者威廉·L·马蒂尔,甘希亚姆·帕蒂尔申请人:奥特拉控股公司