本发明涉及组织培养技术领域，特别涉及一种枸杞的组织培养方法。
背景技术：
枸杞是茄科枸杞属的多分枝灌木植物，枸杞全身是宝，既可作为药用植物，也可作为食用植物，还可用于园林，其用途广泛，经济价值较高。
枸杞的药用价值：果实(中药称枸杞子)，性味甘、平，具有养肝、滋肾、润肺的功效；根皮(中药称地骨皮)，有解热止咳之效用；枸杞叶味苦、甘，性凉，具有补虚益精、清热明目的功效。
枸杞的林业价值：由于枸杞耐干旱，可生长在沙地，因此可作为水土保持的灌木，而且由于其耐盐碱，成为盐碱地开树先锋。
枸杞的观赏价值：宁夏枸杞树形婀娜，叶翠绿，花淡紫，果实鲜红，是很好的盆景观赏植物，现已有部分枸杞观赏栽培，但由于其耐寒耐旱不耐涝，所以在江南多雨多涝地区很难种植宁夏枸杞。
枸杞的枸杞食用价值：嫩叶可作蔬菜，在广东、广西等地，枸杞芽菜已经非常流行，可在菜市场买到枸杞芽菜，但南方基本为中华枸杞，没有宁夏枸杞。在宁夏等西北地区，使用枸杞嫩叶作蔬菜较少。枸杞子被卫生部列为“药食两用”品种，枸杞子可以加工成各种食品、饮料、保健酒、保健品等等。在煲汤或者煮粥的时候也经常加入枸杞。种子油可制润滑油或食用油，还有加工成保健品，枸杞子油。
由于枸杞具有的各种保健功效，逐年来为人们追捧，其高昂的价格令很多人进行了破坏性的疯狂采摘，野生资源遭受到相当大程度的破坏。因此，需要繁育大量的枸杞种苗。但枸杞常规育苗种子发芽率很低。组织培养是在人为创造的无菌条件下将生活的离体器官(如根、茎、叶、茎段、原生质体)、组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养以获得细胞、组织或个体的技术。这种技术可在短时间内获得大量的再生植株，已广泛应用于农业和生物、医药的研究。
传统的枸杞组织培养方式分为两步：1.诱导愈伤组织；2.再将愈伤组织转接至分化培养基分化成苗。该传统培养方式暗培养8天，光培养25天形成愈伤组织，培养周期较长；而且传统的组织培养方式的增殖系数较低，仅为4.68。因此，需要提供一种可缩短成苗时间、提高增殖系数的枸杞组织培养方法。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种枸杞的组织培养方法。该组织培养方法可大大缩短成苗时间，提高增殖系数。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种枸杞的组织培养方法，包括：将枸杞组织接种于诱导培养基中，先暗培养7～9天，再光照培养30～40天，然后将诱导出的枸杞苗转接入生根培养基进行生根培养，得到枸杞组培苗；诱导培养基包括6-ba(6-苄氨基腺嘌呤)、naa(萘乙酸)、琼脂、蔗糖和ms培养基。
采用本发明的枸杞组织培养方法可大大缩短成苗时间，可明显提高枸杞组织的增殖系数。同时，采用本发明方法诱导愈伤组织，诱导愈伤组织和分化培养所采用的培养基为同一培养基，诱导出极少愈伤组织后直接分化萌发成苗，即一步成苗，简化了操作，大大节省了成本和人力。
作为优选，6-ba在诱导培养基中的浓度为1.0～2.0mg/l。
优选地，6-ba在诱导培养基中的浓度为1.5mg/l。
作为优选，naa在诱导培养基中的浓度为0.2～0.4mg/l。
优选地，naa在诱导培养基中的浓度为0.3mg/l。
作为优选，琼脂在诱导培养基中的浓度为4.5～6g/l。
在本发明提供的实施例中，琼脂在诱导培养基中的浓度为5.5g/l。
作为优选，蔗糖在诱导培养基中的浓度为30g/l。
在本发明提供的实施例中，在诱导培养过程中，先暗培养8天，再光照培养30天。
作为优选，诱导培养基的ph值为5.8～6.2。
优选地，诱导培养基的ph值为5.8。
作为优选，光照培养的光照周期为14～16h/天，光照强度为1500lx，温度为24～26℃。
优选地，光照培养的光照周期为16h/天，光照强度为1500lx，温度为24℃。
作为优选，生根培养基包括iba、琼脂、蔗糖和1/2ms培养基。
作为优选，iba在生根培养基中的浓度为0.4～0.6mg/l。
优选地，iba在生根培养基中的浓度为0.5mg/l。
作为优选，琼脂在生根培养基中的浓度为5.5g/l。
作为优选，蔗糖在生根培养基中的浓度为30g/l。
作为优选，生根培养基的ph值为5.8～6.5。
优选地，生根培养基的ph值为6.0。
作为优选，生根培养的光照周期为14～16h/天，光照强度为1500lx，温度为24～26℃。
优选地，生根培养的光照周期为16h/天，光照强度为1500lx，温度为24℃。
在本发明提供的实施例中，生根培养的时间为18～22天。
作为优选，生根培养后还包括炼苗的步骤。
在本发明中，枸杞组织为枸杞叶片或枸杞叶柄。
在本发明中，将枸杞组织接种于诱导培养基中之前还包括对枸杞组织进行消毒处理的步骤。
本发明提供了一种枸杞的组织培养方法。该组织培养方法包括：将枸杞组织接种于诱导培养基中，先暗培养7～9天，再光照培养30～40天，然后将诱导出的枸杞苗转接入生根培养基进行生根培养，得到枸杞组培苗；诱导培养基包括6-ba(6-苄氨基腺嘌呤)、naa(萘乙酸)和ms培养基。本发明至少具有如下优势之一：
1、采用本发明的枸杞组织培养方法可大大缩短成苗时间：暗培养8天，光培养10天后即可形成少量愈伤组织；而传统的枸杞组织培养方法需要暗培养8天，光培养25天后才形成愈伤组织；
2、采用本发明的枸杞组织培养方法可明显提高枸杞组织的增殖系数，增殖系数在5.5～6之间，传统组织培养方式的增殖系数仅为4.68；
3、采用本发明方法诱导愈伤组织，诱导愈伤组织和分化培养所采用的培养基为同一培养基，诱导出极少愈伤组织后直接分化萌发成苗，即一步成苗，简化了操作，大大节省了成本和人力。
附图说明
图1示接种入培养基y1中诱导3天的叶柄生长情况；
图2示接种入培养基y1中诱导3天的叶片生长情况；
图3示暗培养8天后光照培养30天的叶片生长情况；
图4示将诱导叶片诱导出的小苗转接至培养基h1中光照培养18天的芽生长情况。
具体实施方式
本发明公开了一种枸杞的组织培养方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
术语解释：
6-ba是6-苄氨基腺嘌呤，别名：6-苄氨基嘌呤、细胞分裂素，英文通用名：6-benzylaminopurine，分子式：c12h11n5。6-ba具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点，因而被广泛采用，并且是组织培养者最喜爱的细胞分裂素。ba的主要作用是促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生。可用于提高茶叶、烟草的质量及产量，蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育，明显提高果品及叶片的品质。
萘乙酸(1-naphthylaceticacid)，简称naa，是一种有机化合物，是一种易溶于有机溶剂的无色固体。它的结构为萘的1号位置以羧甲基取代。它是植物生长调节剂中的生长素类似物，常用于商用的发根粉或发根剂中，在植物使用扦插法繁殖时使用。它也可用于植物组织培养。
在本发明实施例中，光照培养和生根培养的光照周期为16h/天，光照强度为1500lx，温度为24℃。
本发明实施例中ms培养基和1/2ms培养基为常规市售产品。
本发明提供的枸杞的组织培养方法中所用培养基组分均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
选取枸杞无菌组培苗，将叶片切成0.5cm×0.5cm小块，正面向上接于培养基y1(ms+1.5mg/l6-ba+0.3mg/lnaa+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中，叶柄切成0.5cm的小段，接种于诱导愈伤组织的培养基y1(ms+1.5mg/l6-ba+0.3mg/lnaa+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中，先暗培养8天，再光照培养，光照培养10天左右，形成少量愈伤，并在愈伤上有黑色的小点出现，光照培养30天左右，黑色的小点长成2cm左右的小苗，再将诱导出的小苗接入生根培养基h1(1/2ms+0.5mg/liba+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值6.0)中进行生根培养，转入h1中光照培养20天左右，得到完整的组培苗。在诱导培养过程中记录了叶柄和叶片的生长情况，见图1～图4。其中，图1示接种入培养基y1中诱导3天的叶柄生长情况；图2示接种入培养基y1中诱导3天的叶片生长情况；图3示暗培养8天后光照培养30天的叶片生长情况；图4示将诱导叶片诱导出的小苗转接至培养基h1中光照培养18天的芽生长情况。在诱导培养结束后计算枸杞组织培养的增殖系数，计算方法为：增殖系数＝芽萌发数/接种数*100％。
由实验结果可知，先暗培养8天再光照培养10天即可形成少量的愈伤组织，并有黑色芽点出现。采用本实施例方法，枸杞组织培养的增殖系数为6。
实施例2
选取枸杞无菌组培苗，将叶片切成0.5cm×0.5cm小块，正面向上接于培养基y1(ms+1.0mg/l6-ba+0.4mg/lnaa+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中，叶柄切成0.5cm的小段，接种于诱导愈伤组织的培养基y1(ms+1.0mg/l6-ba+0.4mg/lnaa+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中，先暗培养8天，再光照培养，光照培养10天左右，形成少量愈伤，并在愈伤上有黑色的小点出现，光照培养30天左右，黑色的小点长成2cm左右的小苗，再将诱导出的小苗接入生根培养基h1(1/2ms+0.4mg/liba+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值6.0)中进行生根培养，转入h1中光照培养20天左右，得到完整的组培苗。在诱导培养过程中记录了叶柄和叶片的生长情况，在诱导培养结束后计算枸杞组织培养的增殖系数。
由实验结果可知，先暗培养8天再光照培养10天即可形成少量的愈伤组织，并有黑色芽点出现。采用本实施例方法，枸杞组织培养的增殖系数为5.5。
实施例3
选取枸杞无菌组培苗，将叶片切成0.5cm×0.5cm小块，正面向上接于培养基y1(ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中，叶柄切成0.5cm的小段，接种于诱导愈伤组织的培养基y1(ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中，先暗培养8天，再光照培养，光照培养10天左右，形成少量愈伤，并在愈伤上有黑色的小点出现，光照培养30天左右，黑色的小点长成2cm左右的小苗，再将诱导出的小苗接入生根培养基h1(1/2ms+0.6mg/liba+5.5g/l琼脂+30g/l蔗糖，ph值5.8)中进行生根培养，转入h1中光照培养20天左右，得到完整的组培苗。在诱导培养过程中记录了叶柄和叶片的生长情况，在诱导培养结束后计算枸杞组织培养的增殖系数。
由实验结果可知，先暗培养8天再光照培养10天即可形成少量的愈伤组织，并有黑色芽点出现。采用本实施例方法，枸杞组织培养的增殖系数为5.8。
对比例1
传统组培方法具体操作如下：
选取枸杞无菌组培苗，将叶片切成0.5cm×0.5cm小块，正面向上接于愈伤组织诱导培养基中，先暗培养8天，再光照培养，光照培养28天左右，开始生成少量愈伤并开始分化出芽点，光照培养35-45天，芽点开始大量分化生长。
由实验结果可知，先暗培养8天再光照培养25天形成少量的愈伤组织，40天左右才大量分化芽点。采用本对比例方法，枸杞组织培养的增殖系数为4.68。
根据本对比例的实验结果可知，采用本实施例1至3的枸杞组织培养方法可大大缩短成苗时间，可明显提高枸杞组织的增殖系数。同时，采用本发明方法诱导愈伤组织，诱导愈伤组织和分化培养所采用的培养基为同一培养基，只诱导出极少愈伤组织后直接分化萌发成苗，可一步成苗，简化了操作，大大节省了成本和人力。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。