一种愈伤组织专用愈合剂及其制备方法与流程

文档序号:14259864阅读:745来源:国知局

技术领域
】本发明涉及愈合剂加工
技术领域
,特别涉及一种愈伤组织专用愈合剂及其制备方法。
背景技术
:植物的无性繁殖能使繁殖的植株保持其母本全部优良遗传形状,因此,无性繁殖方法被广泛应用于林木良种的繁育,目前,无性繁殖常用的方法主要有扦插、嫁接和组织培养,然而不管是扦插、嫁接还是组织培养都需要从母本中截取繁殖材料,而繁殖材料中有缺口,容易造成伤口感染,会影响繁殖材料的成活率,目前,在处理这些繁殖材料的过程中,多是应用激素类生根促进剂来处理繁殖材料,虽然对繁殖材料的成活率有一定程度的提高,但仍然不理想,这是因为激素类生根剂并没有杀菌消毒的效果,不能抑制病原菌的生长,而且多用的消毒剂为hg消毒剂,会导致植物中hg残留,而且也不适合某些植物的生长,为此,有必要找出一种适合植物愈伤组织生长的愈合剂,不会造成hg等化学物质残留,能促进植物伤口愈合,细胞分化,提高伤口的抗氧化能力,防止植物缺口被氧化而造成发芽率低的技术缺陷。技术实现要素:鉴于上述内容,有必要找出一种适合植物愈伤组织生长的愈合剂,不会造成hg等化学物质残留,能促进植物伤口愈合,细胞分化,提高伤口的抗氧化能力,防止植物缺口被氧化而造成发芽率低的技术缺陷。为达到上述目的,本发明所采用的技术方案是:一种愈伤组织专用愈合剂,所述专用愈合剂由如下重量份的成分组成:11份-13份的马铃薯复合精油、12份-18份的辣椒提取物、15份-25份的花椒提取物、20份-25份的艾叶提取物、5份-7份的硼砂和110份-120份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。进一步的,所述马铃薯复合精油由重量百分比为70%-90%的马铃薯精油和重量百分比为10%-30%的辅料精油组成。进一步的,所述马铃薯精油由马铃薯制得;所述辅料精油由如下重量份的成分制得:17份-29份的椿木皮、13份-31份的藿香叶、24份-32份的黑芝麻和34份-46份的竹叶。进一步的,所述马铃薯复合精油制备方法包括马铃薯精油提取、辅料精油提取和精油混合三个步骤制得,具体步骤如下:(一)马铃薯精油提取:步骤s1:马铃薯膨化:将马铃薯切成厚度为1-3mm的马铃薯片,再将马铃薯片放入温度为0-2℃的冰水中浸泡1-2h,将马铃薯片取出沥干完全浸没到菜籽油中保持1-2s后取出,放入蒸锅中蒸熟、捣碎成泥,然后将马铃薯泥放入压力条件为9mpa-10mpa,温度为100℃-105℃的热风中保持10min-15min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为0mpa-2mpa,温度为0℃-5℃的冷风中保持5min-10min完成马铃薯膨化;步骤s2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的马铃薯与生物酶i溶液按照固液质量比为1:1-2混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置20min-30min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到马铃薯干粉;其中,生物酶i溶液由如下重量份的原料制成:30份-35份的淀粉酶、20份-25份的糖化酶、5份-10份的米曲霉、10份-20份的芦荟甙和250份-300份质量百分数为1%的氢氧化钠溶液;所述淀粉酶的酶活力为800u/g-1000u/g;所述糖化酶的酶活力为1000u/g-1200u/g;所述米曲霉的有效活菌数为3.1×107~6.7×107cfu/g;步骤s3:微波处理:将步骤s2的马铃薯干粉冷却到室温后,平铺于平皿中,平铺厚度为1mm-3mm,放置在微波炉转盘上进行微波处理,所述微波处理的频率为2300mhz,功率为1000w,总时长为180s;步骤s4:超临界co2萃取:将步骤s3微波处理后的马铃薯干粉投入萃取釜中,在压力为15-20mpa时,用液态co2静态萃取30-40min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到40-50℃时,对系统进行加压,压力达到40-50mpa后,调节co2流量为15-25l/min,保持恒温恒压进行循环萃取2-4h后出料,在800-1000r/min的条件下进行离心分离得到马铃薯精油。(二)辅料精油提取:步骤a1:辅料膨化:按上述重量份称取各原料分别进行粉碎,经过30目-50目筛网筛选,然后将椿木皮粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:2混合;将藿香叶粉末与体积百分数为10%的丁醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将黑芝麻粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将竹叶粉末与水按照固液质量比为1:1混合;然后将各粉末浸泡液置于温度为-2℃~0℃的冰柜中冷藏24h-26h;过滤,取各粉末混合,放入菜籽油中浸润后将混合粉末放入压力条件为8mpa-9mpa,温度为110℃-120℃的热风中保持20min-25min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为0mpa-2mpa,温度为0℃-5℃的冷风中保持15min-20min完成辅料膨化;步骤a2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的辅料与生物酶ii溶液按照固液质量比为1:1-2混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置20min-30min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到辅料干粉;其中,生物酶ii溶液由如下重量份的原料制成:15份-25份的果胶酶、30份-50份的纤维素酶、20份-30份的淀粉酶、10份-20份的黄曲霉和300份-350份质量百分数为2%的氯化钠溶液;所述果胶酶的酶活力为1200u/g-1500u/g;所述纤维素酶的酶活力为1500u/g-2000u/g;所述淀粉酶的酶活力为900u/g-1200u/g;所述黄曲霉的有效活菌数为3.9×108~6.7×108cfu/g;步骤a3:超临界co2萃取:将步骤s2的辅料干粉投入萃取釜中,在压力为15-20mpa时,用液态co2静态萃取20-30min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到50-60℃时,对系统进行加压,压力达到30-40mpa后,调节co2流量为15-25l/min,保持恒温恒压进行循环萃取3-5h后出料,在800-1000r/min的条件下进行离心分离得到辅料精油。(三)精油混合:按照重量百分比称取马铃薯精油和辅料精油,将马铃薯精油与体积百分数为75%的乙醇溶液按照2:1进行混合,在500-800r/min的转速条件下搅拌5min-7min,然后再加入辅料精油,继续搅拌6min-8min,旋转蒸发浓缩去除水分制得本申请所述的马铃薯复合精油。本申请还提供了一种制备愈伤组织专用愈合剂的制备方法,该方法包括如下步骤:(1)按重量份称取各原料成分;(2)将马铃薯复合精油与质量浓度为2%的氯化钠混合后,放入高速搅拌机中搅拌制成乳化液,并将乳化液的ph值调节为6.8-7.5,放置在温度为-2℃~0℃的冰柜中冷藏30min-50min得到马铃薯复合精油乳化液,所述搅拌时间为20min-30min;搅拌转速为400r/min-600r/min;(3)向步骤(2)的马铃薯复合精油乳化液中添加硼砂,并将ph值调节为5.2-5.9然后再加入辣椒提取物、花椒提取物和艾叶提取物充分搅拌后,放入超声仪中进行超声处理,超声处理的时间为40min-50min,超声处理温度为40℃~50℃,得到所述愈伤组织专用愈合剂。本发明具有如下有益效果:1、本申请的愈伤组织专用愈合剂由马铃薯复合精油、辣椒提取物、花椒提取物、艾叶提取物、硼砂和质量浓度为2%的氯化钠溶液组成,愈合剂中,马铃薯复合精油包括从马铃薯中提取的精油成分和从辅料中提取的辅料精油成分,通过马铃薯精油与辅料精油复配使用,能提高马铃薯精油成分的dpph自由基清除率,提高精油的抗氧化性。马铃薯精油中提取的精油含有丰富的酯类成分,能有效提高精油香气椿木皮中提取的精油较富集含氧化合物,能提高精油的抗氧化能力;藿香叶中提取的精油较富集烃类化合物,能提高精油的杀菌能力,从而提高抗氧化能力;黑芝麻中提取的精油较富集含氧化合物成分,从而提高抗氧化能力;竹叶中提取的精油较富集含氧化合物成分,从而提高抗氧化能力。当辅料精油成分中含有椿木皮、黑芝麻和竹叶几种成分相互配合使用后,能明显提高精油的含氧化合物成分提高精油的抗氧化能力;辣椒提取物中含有丰富的辣椒素和辣椒碱有消炎、灭菌和促进细胞分化、新陈代谢的效果;花椒提取物中含有丰富的花椒油、α-亚麻酸等不饱和脂肪酸,其中花椒油能起到杀菌消炎的效果,不饱和脂肪酸可为伤口提供一层油状保护膜,能有效阻止有害菌的重复感染问题;艾叶提取物中含有丰富的黄酮类物质可促进植物的细胞分化,促进植物生根,桉叶烷类物质和三萜类物质可杀灭炭疽病等致病菌,具有广谱杀菌效果。2、本申请马铃薯在提取精油的过程中,先进行膨化、微波处理和生物酶处理,由于本申请的马铃薯其精油和维生素c含量比淀粉和蛋白质含量成分低,而且淀粉、蛋白质物质具有粘性,精油和维生素c等小分子物质不能有效析出,如果,不能对其马铃薯进行预处理将会大大影响精油的产出率,马铃薯现在冰水中进行浸泡,可去除大部分的淀粉物质,马铃薯片经过高压、低压膨化后将使得大部分的淀粉链和蛋白质氢键断裂,经过粉碎后用生物酶和微波进行处理,将能有效去除淀粉含量,破坏淀粉和蛋白质的分子结构,而此温度、压力又不会破坏精油成分,将能有效促进精油的析出效率,提高马铃薯的精油产量;同时,本申请使用的超临界co2萃取法制备马铃薯精油,该方法操作简单、成熟,而且制备率高、纯度高杂少;本申请针对马铃薯中淀粉、蛋白质含量多的特点配置了生物酶i溶液,酶溶液中淀粉酶可有效分解淀粉、糖化酶可将淀粉分解为小分子的葡萄糖、米曲霉中含有丰富活菌成分,可有效分解蛋白质,芦荟甙能有效提高米曲霉活性,氢氧化钠溶液可为生物酶i溶液提供更适宜的酶解环境;本申请针对辅料中多为植物成分,纤维素含量高的特点配置了生物酶ii溶液,酶溶液中果胶酶可有效分解植物中的果胶成分,纤维素酶可有效分解植物中的纤维素成分,淀粉酶可有效分解植物中的淀粉酶成分、黄曲霉中含有丰富活菌成分,可有效促进纤维素的分解,氯化钠溶液可为生物酶ii溶液提供更适宜的酶解环境。【具体实施方式】本说明书中公开的所有特征,或公开的所有方法或过程中的步骤,除了互相排斥的特征和/或步骤以外,均可以以任何方式组合。本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征,除非特别叙述,每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。实施例1:本实施例愈伤组织专用愈合剂由如下重量份的成分组成:11份的马铃薯复合精油、12份的辣椒提取物、15份的花椒提取物、20份的艾叶提取物、5份的硼砂和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。本实施例中辣椒提取物的提取方法为:将含水率为5%的干辣椒果实去籽后捣碎,然后与1000mg/g的丙酮溶液按照固液质量比为1:4进行混合,在60℃的水浴中温浸4次,每次1h,过滤,合并滤液,减压回收丙酮,至稠膏状,稠膏物的相对密度为2.76g/cm3得到所述辣椒提取物,提取物中辣椒素的含量为143.76mg/g,辣椒碱的含量为95.65mg/g。本实施例中花椒提取物的提取方法为:将含水率为5%的干花椒捣碎后与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比1:2进行混合,在温度为115℃的回流提取器中进行回流提取,回流提取5h,过滤取滤液进行减压蒸馏至膏状,膏状物的相对密度为2.54g/cm3得到所述花椒提取物,提取物中花椒油的含量为128.07mg/g,α-亚麻酸含量为83.09mg/g。本实施例中艾叶提取物的提取方法为:将含水率为5%的干艾叶与480mg/g的石油醚按照质量比为1:3进行混合,在温度为55℃的恒温水浴中浸提4h,之后过滤取滤液进行减压蒸馏浓缩至膏状,膏状物的相对密度为1.98g/cm3得到所述艾叶提取物,提取物中黄酮类物质含量为90.83mg/g,桉叶烷类物质含量为67.92mg/g,三萜类物质含量为123.09mg/g。其中,马铃薯复合精油由重量百分比为70%的马铃薯精油和重量百分比为30%的辅料精油组成,本实施例的马铃薯精油由马铃薯制得;辅料精油由如下重量份的成分制得:17份的椿木皮、13份的藿香叶、24份的黑芝麻和34份的竹叶。本实施例中,马铃薯复合精油制备方法包括马铃薯精油提取、辅料精油提取和精油混合三个步骤制得,具体步骤如下:(一)马铃薯精油提取:步骤s1:马铃薯膨化:将马铃薯切成厚度为1mm的马铃薯片,再将马铃薯片放入温度为0℃的冰水中浸泡1h,将马铃薯片取出沥干完全浸没到菜籽油中保持1s后取出,放入蒸锅中蒸熟、捣碎成泥,然后将马铃薯泥放入压力条件为9mpa,温度为100℃的热风中保持10min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为0mpa,温度为0℃的冷风中保持5min完成马铃薯膨化;步骤s2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的马铃薯与生物酶i溶液按照固液质量比为1:1混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置20min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到马铃薯干粉;其中,生物酶i溶液由如下重量份的原料制成:30份的淀粉酶、20份的糖化酶、5份的米曲霉、10份的芦荟甙和250份质量百分数为1%的氢氧化钠溶液;所述淀粉酶的酶活力为800u/g;所述糖化酶的酶活力为1000u/g;所述米曲霉的有效活菌数为3.1×107;步骤s3:微波处理:将步骤s2的马铃薯干粉冷却到室温后,平铺于平皿中,平铺厚度为1mm,放置在微波炉转盘上进行微波处理,所述微波处理的频率为2300mhz,功率为1000w,总时长为180s;步骤s4:超临界co2萃取:将步骤s3微波处理后的马铃薯干粉投入萃取釜中,在压力为15-20mpa时,用液态co2静态萃取30min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到40℃时,对系统进行加压,压力达到40mpa后,调节co2流量为15l/min,保持恒温恒压进行循环萃取2h后出料,在800r/min的条件下进行离心分离得到马铃薯精油。(二)辅料精油提取:步骤a1:辅料膨化:按上述重量份称取各原料分别进行粉碎,经过30目筛网筛选,然后将椿木皮粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:2混合;将藿香叶粉末与体积百分数为10%的丁醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将黑芝麻粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将竹叶粉末与水按照固液质量比为1:1混合;然后将各粉末浸泡液置于温度为-2℃的冰柜中冷藏24h;过滤,取各粉末混合,放入菜籽油中浸润后将混合粉末放入压力条件为8mpa,温度为110℃的热风中保持20min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为0mpa,温度为0℃的冷风中保持15min完成辅料膨化;步骤a2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的辅料与生物酶ii溶液按照固液质量比为1:1混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置20min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到辅料干粉;其中,生物酶ii溶液由如下重量份的原料制成:15份的果胶酶、30份的纤维素酶、20份的淀粉酶、10份的黄曲霉和300份质量百分数为2%的氯化钠溶液;所述果胶酶的酶活力为1200u/g;所述纤维素酶的酶活力为1500u/g;所述淀粉酶的酶活力为900u/g;所述黄曲霉的有效活菌数为3.9×108;步骤a3:超临界co2萃取:将步骤s2的辅料干粉投入萃取釜中,在压力为15mpa时,用液态co2静态萃取20min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到50℃时,对系统进行加压,压力达到30mpa后,调节co2流量为15l/min,保持恒温恒压进行循环萃取3h后出料,在800r/min的条件下进行离心分离得到辅料精油。(三)精油混合:按照重量百分比称取马铃薯精油和辅料精油,将马铃薯精油与体积百分数为75%的乙醇溶液按照2:1进行混合,在500r/min的转速条件下搅拌5min,然后再加入辅料精油,继续搅拌6min,旋转蒸发浓缩去除水分制得。本实施例愈伤组织专用愈合剂的制备方法包括如下步骤:(1)按重量份称取各原料成分;(2)将马铃薯复合精油与质量浓度为2%的氯化钠混合后,放入高速搅拌机中搅拌制成乳化液,并将乳化液的ph值调节为6.8,放置在温度为-2℃的冰柜中冷藏30min得到马铃薯复合精油乳化液,所述搅拌时间为20min;搅拌转速为400r/min;(3)向步骤(2)的马铃薯复合精油乳化液中添加硼砂,并将ph值调节为5.2然后再加入辣椒提取物、花椒提取物和艾叶提取物充分搅拌后,放入超声仪中进行超声处理,超声处理的时间为40min,超声处理温度为40℃,得到所述愈伤组织专用愈合剂。实施例2:本实施例愈伤组织专用愈合剂由如下重量份的成分组成:13份的马铃薯复合精油、18份的辣椒提取物、15份-25份的花椒提取物、25份的艾叶提取物、7份的硼砂和120份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。本实施例中辣椒提取物的提取方法、花椒提取物的提取方法、艾叶提取物的提取方法与实施例1完全一致。其中,马铃薯复合精油由重量百分比为90%的马铃薯精油和重量百分比为10%的辅料精油组成,本实施例的马铃薯精油由马铃薯制得;本实施例的辅料精油由如下重量份的成分制得:29份的椿木皮、31份的藿香叶、32份的黑芝麻和46份的竹叶。本实施例中,马铃薯复合精油制备方法包括马铃薯精油提取、辅料精油提取和精油混合三个步骤制得,具体步骤如下:(一)马铃薯精油提取:步骤s1:马铃薯膨化:将马铃薯切成厚度为3mm的马铃薯片,再将马铃薯片放入温度为2℃的冰水中浸泡2h,将马铃薯片取出沥干完全浸没到菜籽油中保持2s后取出,放入蒸锅中蒸熟、捣碎成泥,然后将马铃薯泥放入压力条件为10mpa,温度为105℃的热风中保持15min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为2mpa,温度为5℃的冷风中保持5min-10min完成马铃薯膨化;步骤s2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的马铃薯与生物酶i溶液按照固液质量比为1:2混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置30min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到马铃薯干粉;其中,生物酶i溶液由如下重量份的原料制成:35份的淀粉酶、25份的糖化酶、10份的米曲霉、20份的芦荟甙和300份质量百分数为1%的氢氧化钠溶液;所述淀粉酶的酶活力为1000u/g;所述糖化酶的酶活力为1200u/g;所述米曲霉的有效活菌数为6.7×107cfu/g;步骤s3:微波处理:将步骤s2的马铃薯干粉冷却到室温后,平铺于平皿中,平铺厚度为3mm,放置在微波炉转盘上进行微波处理,所述微波处理的频率为2300mhz,功率为1000w,总时长为180s;步骤s4:超临界co2萃取:将步骤s3微波处理后的马铃薯干粉投入萃取釜中,在压力为20mpa时,用液态co2静态萃取40min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到50℃时,对系统进行加压,压力达到50mpa后,调节co2流量为25l/min,保持恒温恒压进行循环萃取4h后出料,在1000r/min的条件下进行离心分离得到马铃薯精油。(二)辅料精油提取:步骤a1:辅料膨化:按上述重量份称取各原料分别进行粉碎,经过50目筛网筛选,然后将椿木皮粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:2混合;将藿香叶粉末与体积百分数为10%的丁醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将黑芝麻粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将竹叶粉末与水按照固液质量比为1:1混合;然后将各粉末浸泡液置于温度为0℃的冰柜中冷藏26h;过滤,取各粉末混合,放入菜籽油中浸润后将混合粉末放入压力条件为9mpa,温度为120℃的热风中保持25min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为2mpa,温度为5℃的冷风中保持20min完成辅料膨化;步骤a2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的辅料与生物酶ii溶液按照固液质量比为1:2混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置30min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到辅料干粉;其中,生物酶ii溶液由如下重量份的原料制成:25份的果胶酶、50份的纤维素酶、30份的淀粉酶、20份的黄曲霉和350份质量百分数为2%的氯化钠溶液;所述果胶酶的酶活力为1500u/g;所述纤维素酶的酶活力为2000u/g;所述淀粉酶的酶活力为1200u/g;所述黄曲霉的有效活菌数为6.7×108cfu/g;步骤a3:超临界co2萃取:将步骤s2的辅料干粉投入萃取釜中,在压力为20mpa时,用液态co2静态萃取30min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到60℃时,对系统进行加压,压力达到40mpa后,调节co2流量为25l/min,保持恒温恒压进行循环萃取5h后出料,在1000r/min的条件下进行离心分离得到辅料精油。(三)精油混合:按照重量百分比称取马铃薯精油和辅料精油,将马铃薯精油与体积百分数为75%的乙醇溶液按照2:1进行混合,在800r/min的转速条件下搅拌7min,然后再加入辅料精油,继续搅拌8min,旋转蒸发浓缩去除水分制得。本实施例愈伤组织专用愈合剂的制备方法包括如下步骤:(1)按重量份称取各原料成分;(2)将马铃薯复合精油与质量浓度为2%的氯化钠混合后,放入高速搅拌机中搅拌制成乳化液,并将乳化液的ph值调节为7.5,放置在温度为0℃的冰柜中冷藏50min得到马铃薯复合精油乳化液,所述搅拌时间为30min;搅拌转速为600r/min;(3)向步骤(2)的马铃薯复合精油乳化液中添加硼砂,并将ph值调节为5.9然后再加入辣椒提取物、花椒提取物和艾叶提取物充分搅拌后,放入超声仪中进行超声处理,超声处理的时间为50min,超声处理温度为50℃,得到所述愈伤组织专用愈合剂。实施例3:本实施例愈伤组织专用愈合剂由如下重量份的成分组成:12份的马铃薯复合精油、15份的辣椒提取物、20份的花椒提取物、22份的艾叶提取物、6份的硼砂和115份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。本实施例中辣椒提取物的提取方法、花椒提取物的提取方法、艾叶提取物的提取方法与实施例1完全一致。其中,马铃薯复合精油由重量百分比为80%的马铃薯精油和重量百分比为20%的辅料精油组成,本实施例的马铃薯精油由马铃薯制得;本实施例的辅料精油由如下重量份的成分制得:21份的椿木皮、21份的藿香叶、24份的黑芝麻和40份的竹叶。本实施例中,马铃薯复合精油制备方法包括马铃薯精油提取、辅料精油提取和精油混合三个步骤制得,具体步骤如下:(一)马铃薯精油提取:步骤s1:马铃薯膨化:将马铃薯切成厚度为2mm的马铃薯片,再将马铃薯片放入温度为1℃的冰水中浸泡1.5h,将马铃薯片取出沥干完全浸没到菜籽油中保持2s后取出,放入蒸锅中蒸熟、捣碎成泥,然后将马铃薯泥放入压力条件为9mpa,温度为103℃的热风中保持12min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为1mpa,温度为2℃的冷风中保持8min完成马铃薯膨化;步骤s2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的马铃薯与生物酶i溶液按照固液质量比为1:2混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置25min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到马铃薯干粉;其中,生物酶i溶液由如下重量份的原料制成:32份的淀粉酶、22份的糖化酶、8份的米曲霉、15份的芦荟甙和270份质量百分数为1%的氢氧化钠溶液;所述淀粉酶的酶活力为900u/g;所述糖化酶的酶活力为1100u/g;所述米曲霉的有效活菌数为4.7×107cfu/g;步骤s3:微波处理:将步骤s2的马铃薯干粉冷却到室温后,平铺于平皿中,平铺厚度为2mm,放置在微波炉转盘上进行微波处理,所述微波处理的频率为2300mhz,功率为1000w,总时长为180s;步骤s4:超临界co2萃取:将步骤s3微波处理后的马铃薯干粉投入萃取釜中,在压力为18mpa时,用液态co2静态萃取35min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到45℃时,对系统进行加压,压力达到45mpa后,调节co2流量为20l/min,保持恒温恒压进行循环萃取3h后出料,在900r/min的条件下进行离心分离得到马铃薯精油。(二)辅料精油提取:步骤a1:辅料膨化:按上述重量份称取各原料分别进行粉碎,经过40目筛网筛选,然后将椿木皮粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:2混合;将藿香叶粉末与体积百分数为10%的丁醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将黑芝麻粉末与体积百分数为75%的乙醇溶液按照固液质量比为1:1混合;将竹叶粉末与水按照固液质量比为1:1混合;然后将各粉末浸泡液置于温度为-1℃的冰柜中冷藏25h;过滤,取各粉末混合,放入菜籽油中浸润后将混合粉末放入压力条件为9mpa,温度为115℃的热风中保持23min,泄压,再将马铃薯泥放入压力条件为1mpa,温度为3℃的冷风中保持18min完成辅料膨化;步骤a2:生物酶处理:将步骤s1膨化之后的辅料与生物酶ii溶液按照固液质量比为1:1混合浸泡,在温度为27℃的恒温箱中静置25min,然后进行浓缩、干燥去除水分得到辅料干粉;其中,生物酶ii溶液由如下重量份的原料制成:20份的果胶酶、40份的纤维素酶、25份的淀粉酶、15份的黄曲霉和330份质量百分数为2%的氯化钠溶液;所述果胶酶的酶活力为1300u/g;所述纤维素酶的酶活力为1800u/g;所述淀粉酶的酶活力为1100u/g;所述黄曲霉的有效活菌数为5.7×108cfu/g;步骤a3:超临界co2萃取:将步骤s2的辅料干粉投入萃取釜中,在压力为17mpa时,用液态co2静态萃取25min,然后逐步释放压力,进行超临界co2动态萃取,动态萃取工艺参数为:当温度加热到55℃时,对系统进行加压,压力达到35mpa后,调节co2流量为20l/min,保持恒温恒压进行循环萃取4h后出料,在900r/min的条件下进行离心分离得到辅料精油。(三)精油混合:按照重量百分比称取马铃薯精油和辅料精油,将马铃薯精油与体积百分数为75%的乙醇溶液按照2:1进行混合,在700r/min的转速条件下搅拌6min,然后再加入辅料精油,继续搅拌7min,旋转蒸发浓缩去除水分制得。本实施例愈伤组织专用愈合剂的制备方法包括如下步骤:(1)按重量份称取各原料成分;(2)将马铃薯复合精油与质量浓度为2%的氯化钠混合后,放入高速搅拌机中搅拌制成乳化液,并将乳化液的ph值调节为7.0,放置在温度为-1℃的冰柜中冷藏40min得到马铃薯复合精油乳化液,所述搅拌时间为25min;搅拌转速为500r/min;(3)向步骤(2)的马铃薯复合精油乳化液中添加硼砂,并将ph值调节为5.5然后再加入辣椒提取物、花椒提取物和艾叶提取物充分搅拌后,放入超声仪中进行超声处理,超声处理的时间为45min,超声处理温度为45℃,得到所述愈伤组织专用愈合剂。(1)马铃薯复合精油特性的研究对照实验:对照组1:本对照组的马铃薯复合精油仅含马铃薯精油,不使用辅料精油,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组2:本对照组的马铃薯复合精油仅含辅料精油,不含马铃薯精油,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组3:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油仅含有藿香叶、黑芝麻和竹叶几种成分,即本对照组的马铃薯精油由重量百分比为70%的马铃薯精油和重量百分比为30%的辅料精油组成,其中,马铃薯精油由马铃薯制得;辅料精油由如下重量份的成分制得:13份的藿香叶、24份的黑芝麻和34份的竹叶组成,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组4:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油仅含有椿木皮、黑芝麻和竹叶几种成分,即本对照组的马铃薯精油由重量百分比为70%的马铃薯精油和重量百分比为30%的辅料精油组成,其中,马铃薯精油由马铃薯制得;辅料精油由如下重量份的成分制得:17份的椿木皮、24份的黑芝麻和34份的竹叶组成,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组5:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油仅含有椿木皮、藿香叶和竹叶几种成分,即本对照组的马铃薯精油由重量百分比为70%的马铃薯精油和重量百分比为30%的辅料精油组成,其中,马铃薯精油由马铃薯制得;辅料精油由如下重量份的成分制得:17份的椿木皮、13份的藿香叶和34份的竹叶组成,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组6:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油仅含有椿木皮、藿香叶和黑芝麻几种成分,即本对照组的马铃薯精油由重量百分比为70%的马铃薯精油和重量百分比为30%的辅料精油组成,其中,马铃薯精油由马铃薯制得;辅料精油由如下重量份的成分制得:17份的椿木皮、13份的藿香叶和24份的黑芝麻组成,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组7:本对照组马铃薯复合精油的马铃薯精油制取过程中不经过膨化处理,而是直接将马铃薯干粉进行酶解、超临界co2萃取,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组8:本对照组马铃薯复合精油的马铃薯精油制取过程中不经过酶解,而是进行马铃薯膨化、超临界co2萃取,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组9:本对照组马铃薯复合精油的马铃薯精油制取过程中仅通过超临界co2萃取,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组10:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油制取过程中不经过膨化处理,而是直接将辅料粉末进行酶解、超临界co2萃取,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组11:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油制取过程中不经过酶解,而是进行辅料粉末经膨化、超临界co2萃取,其它制备方法与实施例1完全相同。对照组12:本对照组马铃薯复合精油的辅料精油制取过程中仅通过超临界co2萃取,其它制备方法与实施例1完全相同。测试实验1:测定实施例1-3和对照组1-12中,制备的马铃薯复合精油的产率、维生素c含量以及dpph自由基清除能力,具体情况见表1:表1组别精油产率(%)维生素c含量(%)dpph自由基清除率(%)实施例178.3618.2287.36实施例279.3217.3688.94实施例376.3517.3190.16对照组176.520.2261.03对照组277.4812.3638.26对照组374.5113.0272.36对照组475.2612.0371.02对照组576.1113.2173.06对照组675.0312.0268.26对照组751.028.3645.61对照组853.216.3238.56对照组955.317.2536.14对照组1047.2617.0346.98对照组1141.0617.2237.68对照组1250.4417.3034.16由上表可知,实施例1-3的精油产率高于对照组7-12与对照组1-6相当,说明本申请精油提取方法中膨化、生物酶解、超临界co2萃取相结合能有效提高精油产率:实施例1-3中维生素c的含量明显高于对照组1,说明马铃薯精油中含有较丰富的维生素c成分;实施例1-3的维生素c含量明显高于对照组7-9与对照组10-12,说明马铃薯精油提取方法中膨化、生物酶解、超临界co2萃取相结合能有效提高维生素c含量;实施例1-3的dpph自由基清除率明显高于对照组1-12,说明本申请的精油配方和精油提取方法能有效清除dpph自由基提高精油的抗氧化率。测试实验2:测定实施例1和对照组1-12中,马铃薯复合精油的油类物质成分含量,具体情况见表2:表2组别萜类化合物(%)酮类化合物(%)酯类化合物(%)烃类化合物(%)含氧化合物(%)实施例116.259.3654.3611.068.97对照组117.2611.3648.3613.259.77对照组219.4046.3513.2512.368.64对照组323.0216.2547.158.255.33对照组421.2517.2646.295.369.84对照组526.3517.0645.989.361.25对照组624.2516.3446.0910.033.29对照组726.3516.9731.028.6417.02对照组824.1917.3633.069.1316.26对照组923.1417.0931.0211.3117.44对照组1026.3516.8832.549.2614.97对照组1128.3516.4617.2523.2514.69对照组1230.2514.2813.2524.2617.96由上表可知,实施例1的酯类化合物成分均高于对照组1-12,酮类化合物成分均低于对照组1-12,说明,本申请的马铃薯精油含酯量高,含酮量低,说明本申请的马铃薯精油其香味没有其它对照组刺鼻。(2)愈伤组织专用愈合剂特性测试实验:测试实验:按照如下试验组配置的愈合剂应用于香蕉组织培养中的愈伤组织培养的培养基中、应用于番石榴组织培养中的愈伤组织培养的培养基中、应用于浸泡葡萄扦插过程剪取的葡萄枝条,并测定愈伤组织和扦插枝条的5d生根率、5d根长、30d成活率,具体见表3:试验组1:按照实施例1的方法生产愈合剂。试验组2:按照如下组分配置愈合剂:11份的马铃薯复合精油(本试验组的马铃薯复合精油不含辅料精油成分,仅由马铃薯精油组成)、12份的辣椒提取物、15份的花椒提取物、20份的艾叶提取物、5份的硼砂和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。其他制备方法与实施例1完全一致。试验组3:按照如下组分配置愈合剂:12份的辣椒提取物、15份的花椒提取物、20份的艾叶提取物、5份的硼砂和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。其他制备方法与实施例1完全一致。试验组4:按照如下组分配置愈合剂:11份的马铃薯复合精油、15份的花椒提取物、20份的艾叶提取物、5份的硼砂和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。其他制备方法与实施例1完全一致。试验组5:按照如下组分配置愈合剂:11份的马铃薯复合精油、12份的辣椒提取物、20份的艾叶提取物、5份的硼砂和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。其他制备方法与实施例1完全一致。试验组6:按照如下组分配置愈合剂:11份的马铃薯复合精油、12份的辣椒提取物、15份的花椒提取物、5份的硼砂和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。其他制备方法与实施例1完全一致。试验组7:按照如下组分配置愈合剂:11份的马铃薯复合精油、12份的辣椒提取物、15份的花椒提取物、20份的艾叶提取物和110份的质量浓度为2%的氯化钠溶液。其他制备方法与实施例1完全一致。对照组:不使用任何愈合剂。表3由上表可知,试验组的5d生根率、5d根长、30d成活率均大于试验组2-7,大于对照组,说明使用本申请的愈合剂能有效提高组织培养愈伤组织和扦插苗的生根率、根长和成活率。综上所述,使用本发明的方法制备马铃薯复合精油能提高精油产率、提高精油抗氧化能力,而且其香味更舒心;同时,愈合剂中使用马铃薯复合精油能促进植物伤口的愈合,从而提升愈伤组织和扦插苗的生根率、根长和成活率。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12
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