本发明属于农药领域，具体涉及一种春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂及其制备方法。
背景技术
春尺蠖(apocheimacinerariuserschoff)又名杨尺蠖、沙枣尺蠖，主要危害杨、柳、榆、槐、桑、苹果、梨等。国内主要分布于新疆、青海、甘肃、陕西、宁夏、内蒙古、河北、天津、河南、山东等地区，国外主要分布于前苏联和中亚细亚地区。近年来，由于全球气候的变化，单树种人工林大面积种植，再加上不同地区间交流贸易日益频繁，春尺蠖相继在新疆、青海、内蒙古和西藏等地区大面积发生，严重威胁当地的自然景观和生态环境。
中国林业科学研究院森林保护研究所在河北坝上地区找到一种新病原，经室内分离及鉴定，确认为一种春尺蠖核型多角体病毒(acinpv)，该病毒杀虫剂国外未见报道，为国内首次发现。天津市卫生防疫站按联合国粮农组织农业研究报告no91(1973)的两个附件，参照我国农牧渔业部文件(82)农字第72号“关于农药登记规定和食品安全毒力学评价程序”对安全性进行了试验，证明该病毒是一种安全的生物杀虫剂。acinpv是寄生于林间春尺蠖各龄幼虫、且宿主专一的一种昆虫杆状病毒，它通过侵染寄主组织并在这些组织的细胞核内增殖，使被侵染组织细胞核内充满多角体而增大破裂，引起寄主死亡，是一种重要的无公害微生物农药。acinpv以其安全环保、长效可控、用量少的优点，是持久有效控制害虫的首选生物药剂。
球孢白僵菌(beaueriabassaria(balsamo)vuillemin)是一种昆虫病原真菌，作为活体生物农药，在寄主虫体内大量繁殖，使体液机能发生变化，新陈代谢紊乱以致死亡。由于白僵菌无毒、无味、无污染，已广泛用于农林害虫防治中。白僵菌可以用来防治松毛虫、蛴螬、家蝇、茶小绿叶蝉、介壳虫、白粉虱、蚜虫、蓟马、马铃薯叶甲、玉米螟、天牛、金龟子等40多种农林害虫。但是不同地理种群或不同株系的球孢白僵菌对害虫的毒力存在较大的差异，即使同一株系的球孢白僵菌对不同种类害虫的毒理也不相同，因此在真菌的生物防治中针对不同种类的害虫经常要筛选高毒力菌株；另外，白僵菌防治效果受环境湿度影响较大，在相对湿度较低时，防治效果并不理想，且杀虫速度相对较慢，影响了其在农林害虫防治上的积极性。
昆虫病毒是一种良好的生物杀虫剂，是生物防治的重要手段之一。昆虫病毒杀虫剂具有特异性强、致病力高、稳定性好、安全和不污染环境，用后能引起害虫群体病毒性疾病流行传播，可自然控制害虫消长，并导致相继世代流行病的死亡。但是昆虫病毒杀虫剂仍存在诸多问题，解决病毒增殖技术和降低生产成本是病毒商品化生产的关键问题之一。然而，尚未见报道春尺蠖核型多角体病毒与球孢白僵菌粉复配的生物杀虫悬浮剂。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂，包括有效活性成分的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1:12～2:1；更优选地，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：6～1：2；最优选地，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：3。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂中，所述春尺蠖核型多角体病毒悬液的浓度为200亿pib/ml。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂中，所述球孢白僵菌粉的浓度为400亿/克。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂中，所述杀虫悬浮剂还包括二氧化硅、苯丙氨酸、荧光增白剂ksn、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂中，所述杀虫悬浮剂包括以重量计的春尺蠖核型多角体病毒悬液5～20％；球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；苯丙氨酸0.1～0.15％；荧光增白剂ksn0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水。
本发明的另一方面为提供春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
1)制备春尺蠖核型多角体病毒悬液；
2)制备球孢白僵菌粉；
3)称量：按照质量百分比称量以下组分：春尺蠖核型多角体病毒悬液5～20％；球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；苯丙氨酸0.1～0.15％；荧光增白剂ksn0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水；
4)依次加入春尺蠖核型多角体病毒悬液、球孢白僵菌粉、二氧化硅、苯丙氨酸、荧光增白剂ksn、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水，再搅拌均匀分装，制备得到春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法中，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1:12～2:1；更优选地，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：3～2：1；最优选地，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：1。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法中，所述春尺蠖核型多角体病毒悬液的浓度为200亿pib/ml。
优选地，本发明所述的春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法中，所述球孢白僵菌粉的浓度为400亿/克。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1)春尺蠖核型多角体病毒和球孢白僵菌杀虫悬浮剂是一种新型的生物农药，由专一性的病毒、广谱性的白僵菌和化学助剂筛选研究复配而成，意外地，如本发明后续实施例所示，该复配杀虫悬浮剂显示出春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的协同作用防治春尺蠖的优势，克服了单纯用病毒潜伏期长和单独用球孢白僵菌防效期短的的缺点。
2)增加剂型中的光保护剂，使剂型组分更完善。本发明提供的春尺蠖核型多角体病毒和球孢白僵菌杀虫悬浮剂，同时添加微量无机纳米材料、芳香族氨基酸和少量精制荧光增白剂，使昆虫病毒杀虫剂的组分更完善，悬浮性更好，货架寿命更长，田间应用时对紫外光有较好的防护作用，病毒持续作用时间延长，防治效果提高。
3)核型多角体病毒和球孢白僵菌杀虫悬浮剂，对人畜、家禽、鱼类、植物无毒无害，不伤害天敌，有利于维护森林的生态平衡，对环境无不良影响，是一种安全无毒，不使害虫产生抗药性的高效生物农药。
具体实施方式
在本发明的一个实施例中，提供了一种春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂，包括有效活性成分的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1:12～2:1。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：3～2：1；最优选地在本发明的另一实施例中，，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：1。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述春尺蠖核型多角体病毒悬液的浓度为200亿pib/ml。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述球孢白僵菌粉的浓度为400亿/克。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述杀虫悬浮剂还包括二氧化硅、苯丙氨酸、荧光增白剂ksn、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述杀虫悬浮剂包括以重量计的春尺蠖核型多角体病毒悬液5～20％；球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；苯丙氨酸0.1～0.15％；荧光增白剂ksn0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水。
在本发明的再一实施例中还提供春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
1)制备春尺蠖核型多角体病毒悬液；
2)制备球孢白僵菌粉；
3)称量：按照质量百分比称量以下组分：春尺蠖核型多角体病毒悬液5～20％；球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；苯丙氨酸0.1～0.15％；荧光增白剂ksn0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水；
4)依次加入春尺蠖核型多角体病毒悬液、球孢白僵菌粉、二氧化硅、苯丙氨酸、荧光增白剂ksn、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水，再搅拌均匀分装，制备得到春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1:12～2:1；更优选地，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：3～2：1；最优选地，所述的春尺蠖核型多角体病毒悬液和球孢白僵菌粉的重量比为1：1。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述春尺蠖核型多角体病毒悬液的浓度为200亿pib/ml。
更优选地，在本发明的另一实施例中，所述球孢白僵菌粉的浓度为400亿/克。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1春尺蠖核型多角体病毒悬液的制备
春尺蠖核型多角体病毒，替代宿主为春尺蠖幼虫，用100万pib/ml病毒悬液感染人工饲料饲养的4龄春尺蠖幼虫，生产春尺蠖核型多角体病毒；按重量计，该春尺蠖幼虫的人工饲料配方是：11.2～13.4％麦胚，2～5％干酪素，0.5～1.8％韦氏盐，0.2～0.43％山梨酸，0.1～0.35％尼泊金，0.4～0.77％维生素c，0.35～0.7％维生素b，1.2～1.8％琼脂，0.025～0.075％肌醇，余量为蒸馏水，以上质量百分含量总量为100％；病毒感染替代宿主后4到10天收集病毒致死虫尸处理，加工成200亿pib/ml的春尺蠖核型多角体病毒悬液。
实施例2球孢白僵菌粉的制备
取球孢白僵菌菌种在无菌条件下接入灭菌常用的产孢培养基固体平板进行活化处理；刮取活化好的菌种制成悬液，加入液体产孢培养基进行扩大菌种培养；48小时后，将其接于发酵罐内灭菌后的液体培养基中进行液体发酵；培养24h后，接于待料灭菌后的固体培养料中，混合均匀后，进行固体发酵，固体培养物产孢好后进干燥房进行烘干处理，待固体培养物彻底干燥后，在密闭的抽提机上进行球孢粉的提取，最终加工得到400亿/克白僵菌球孢粉。
实施例3春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备
称量：按照质量百分比称量以下组分：实施例1制备的春尺蠖核型多角体病毒悬液5～20％；实施例2制备的球孢白僵菌粉10～60％；纳米级二氧化硅0.1～0.5％；苯丙氨酸0.1～0.15％；荧光增白剂ksn0.5～1％；木质素磺酸钠0.1～1％；氟啶脲0.01～0.1％；甘油1.0～5.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
依次加入春尺蠖核型多角体病毒悬液、球孢白僵菌粉、二氧化硅、苯丙氨酸、荧光增白剂ksn、木质素磺酸钠、氟啶脲、甘油和无菌水，再搅拌均匀分装，制备得到春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂。
制备例1
按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，其中各组分的含量如下
春尺蠖核型多角体病毒悬液5％；实施例2制备的球孢白僵菌粉60％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.1％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠0.5％；氟啶脲0.1％；甘油5.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例2
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液5％；球孢白僵菌粉40％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.15％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠1.0％；氟啶脲0.1％；甘油4.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例3
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液5％；球孢白僵菌粉25％；纳米级二氧化硅0.5％；苯丙氨酸0.1％；荧光增白剂ksn0.5％；木质素磺酸钠0.5％；氟啶脲0.1％；甘油3.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例4
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液10％；球孢白僵菌粉30％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.1％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠0.1％；氟啶脲0.1％；甘油3.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例5
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液15％；球孢白僵菌粉15％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.15％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠0.5％；氟啶脲0.05％；甘油2.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例6
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液20％；球孢白僵菌粉10％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.1％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠1.0％；氟啶脲0.1％；甘油1.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例7
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液5％；球孢白僵菌粉5％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.1％；荧光增白剂ksn0.5％；木质素磺酸钠0.1％；氟啶脲0.01％；甘油1.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例8
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液10％；球孢白僵菌粉10％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.1％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠0.1％；氟啶脲0.1％；甘油1.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
制备例9
同制备例1，按照实施例3所述方法，进行春尺蠖核型多角体病毒与白僵菌的杀虫悬浮剂的制备，区别仅在于春尺蠖核型多角体病毒悬液20％；球孢白僵菌粉20％；纳米级二氧化硅0.1％；苯丙氨酸0.15％；荧光增白剂ksn1％；木质素磺酸钠0.5％；氟啶脲0.1％；甘油2.0％；余量为无菌水，以上质量百分比总量为100％；
实施例4室内毒力测定
此试验目的是为了测定复配剂的共毒系数(ctc)，ctc＜80为拮抗作用，80≤ctc≤120为相加作用，ctc＞120为增效作用。试验时分别将各混配剂的母液稀释成五个系列浓度，分别置于烧杯中备用。采用先浸叶后接虫的方法，将未接触任何药剂的大小一致的叶片在配置好的药液中浸泡5s后取出、自然晾干，放入养虫盒中，然后接上供试幼虫，在25℃条件下饲养，每处理3次重复，每重复所用试虫数为50头，同时设空白对照，于72h检查死虫数，计算死亡率和校正死亡率，求得毒力回归方程并计算lc50值。若对照死亡率大于10％，则视为无效试验。计算公式如下：
将害虫校正死亡率换算成机率值(y)，处理浓度(μg/ml)转换成对数值(x)，以最小二乘法得出毒力回归方程，并由此计算出每种药剂的半致死浓度值。按照孙云沛公式法计算出共毒系数ctc。计算公式如下(以acinpv为标准药剂，其毒力指数为100)：
m的理论毒力指数(tti)＝acinpv的ti×pacinpv+有效白僵菌粉的ti×p有效白僵菌粉
式中：m为不同配比的混合物；
p有效白僵菌粉为有效白僵菌粉在组合物中所占的比例；
pacinpv为acinpv在组合物中所占的比例；
b为白僵菌粉。
试验设计：经过预备试验确定acinpv与白僵菌及二者不同配比混剂的有效致死浓度范围。
毒力测定结果见表1：
表1acinpv与白僵菌粉复配对春尺蠖幼虫的毒力测定结果分析表
由表1可知，acinpv与白僵菌复配防治春尺蠖幼虫的配比在1：12～2：1时，共毒系数均大于180，说明两者在1：12～2：1范围内混配均表现出增效作用，当acinpv与白僵菌的配比在1：3～2：1时，增效作用更为突出，共毒系数均大于200，其中当acinpv与白僵菌重量比为1：1时共毒系数最大，增效作用最为明显。
实施例5田间试验
本试验药前调查春尺蠖幼虫虫害指数，在虫害发生初期施药，施药后3天、7天、15天、30天调查虫害指数并计算防效。试验结果如下所示。
表2acinpv与白僵菌及其复配防治春尺蠖幼虫药效试验
由表3可知，对施药后3天、7天、15天、30天的防效，运用spss软件采用方差分析法进行差异显著性检验。
药剂评价：
(1)春尺蠖核型多角体病毒和球孢白僵菌处理与ck相比均具有明显的防治效果；
(2)春尺蠖核型多角体病毒和球孢白僵菌复配剂，要比核型多角体病毒或者球孢白僵菌单独使用效果要好；
(3)春尺蠖核型多角体病毒与球孢白僵菌复配的不同剂量之间在致死率上有一定差异，在施药30天后，制备例5和制备例9的防效差异不显著，均达98％以上，从杀虫速度和节约成本的综合考量，我们认为选择制备例5作为杀虫最佳剂量。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。