化合物Simplicissin的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物来源杀菌剂，具体的说是化合物Simplicissin的应用。
【背景技术】
[0002] 核桃在我国栽培历史悠久，具有养神、健胃与润肺等功效。随着核桃的营养与药用 价值逐渐被人们重视，其种植面积也越来越大，但随之而来的是病害发生越来越严重。核桃 枝枯病作为主要病害之一，发病率高，能够引起核桃枝条枯死，严重影响核桃的产量。目前 防治手段主要依靠甲基托布津、多菌灵等化学合成农药，虽然能够取得一定的防治效果，但 也易于带来环境污染、农药残留超标等问题。与传统的化学合成农药相比，微生物来源杀菌 剂具有对人畜和非靶标生物安全，环境兼容性好，不易产生抗性等优点。因此，微生物来源 农药的开发与应用对人类健康、环境保护和农业的可持续发展具有重要的意义。
[0003]式（一）所不的化合物Simplicissin是由青霉菌Penicilliumcf.Simplicissimum(Oadaiians) ThanNa410绘发酵培养、提取分离而获得（kusanoM5etal.Simplicissin,anewpollengrowthinhibitor producedbythefungus,Penicilliumcf.Simplicissimum(Oudemans)ThomNo. 410.Biosci.Biotech. Biochan，1997,61 (12)，2153 _ 2155) 〇在上述文献中通过试验证明：该化合物具有抑制花粉生长的活性。
[0004]
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供化合物Simplicissin在制备防治核桃枝枯病菌的农用杀 菌剂方面的应用。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：化合物Simplicissin的应用，所述 化合物Simplicissin对核桃枝枯病菌（Melanconiumoblongum)具有较好抑制效果，可用 于制备农用杀菌剂；所述化合物Simplicissin的结构如式（一）所示。
[0007]
[0008] 所述的农用杀菌剂为：以式（一）所示的化合物为活性成分，加入农业上常用的助 剂制备成可湿性粉剂、颗粒剂或缓释剂等。
[0009] 本发明所具有的优点：式（一）所示化合物可由肉桂紫正青霉经发酵培养、提取分 离而获得，其对核桃枝枯病菌具有较好抑制活性，最小抑制浓度（MIC)为8yg/mL，表明化 合物Simplicissin对核桃枝枯病菌具有较好抑制效果，可以作为具有杀菌作用的新农药 成分或先导化合物。
[0010] 本发明所涉及的化合物SimpliCissin可以利用微生物进行规模发酵，具有生产 工艺简单，周期短、产品成本低等特点；且只含有碳、氢和氧三种元素，在环境中易于降解， 对人畜毒性较低。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1 :化合物Simplicissin的制备
[0012] 式（一）所不的化合物Simplicissin的制备参见文献kusanoM5etal.Simplicissin,anew pollengrowthinhibitorproducedbythefungus,Penicilliumcf.Siiiplicissimm((Iidefflans)ThaiiNo. 410. Biosci.Biotech*Biochan，1997,61 (12)，2153 - 2155。
[0013] 实施例2:抑菌活性试验
[0014] 采用微量稀释法，测定式（一）所示化合物对核桃枝枯病菌（Melanconium oblongum)的抑菌活性（《从天然产物到新农药创制-原理方法》，吴文君，2006,化学工业 出版社）。
[0015] 1)菌悬液的制备
[0016] 将供试真菌接种于PDA培养基表面于28°C培养72h后，吸取2mL无菌0. 85%NaCl 溶液（含〇. 25%吐温-20)洗涤培养物，并用玻璃刮刀将菌落轻轻刮下。吸取适量菌悬液于 无菌试管中，调至0.5麦氏比浊（相当于1.5X108CFU/mL)备用；
[0017] 2)样品的配制
[0018] 分别取Img待测样品（式（一）化合物）和阳性对照（两性霉素B)，溶解于IOOyL DMSO中，充分混匀后，吸取50yL样品溶液到另一只离心管中，接着加入50yLDMS0,得到 浓度减半的样品溶液。按照此方法，得到12组浓度依次减半的样品溶液。
[0019]3)MIC测定方法
[0020] (1)采用无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的样品溶液分别加到无菌的96孔聚苯 乙烯板中，第1至第12孔各加5yL的样品溶液，并以不加样品孔作为空白对照，加5yL DMSO溶液孔为溶剂对照。
[0021] (2)将相当于0.5麦氏比浊度的指示菌悬液，经沙氏培养基稀释1000倍后，取 95yL依次加入到96孔板中，使得第1至第12孔的样品浓度依次为512、256、128、64、32、 16、8、4、2、1、0. 5和0. 25yg/mL。以上所有样品均重复三次。轻轻震荡混匀后，将96孔板 密封置于28°C生化培养箱中培养72h。
[0022] (3)在600nm波长下使用酶标仪测定每孔的吸光值，以在小孔内完全抑制指示菌 生长的最低样品浓度为该化合物的MIC。（注意：当阴性对照孔内指示菌明显生长实验才有 意义；当实验出现单一的跳孔时，应记录抑制菌株生长的最高药物浓度；如出现多处跳孔， 则不应报告结果，需重复实验。）
[0023] 试验结果为：式（一）所示化合物对核桃枝枯病菌（Melanconiumoblongum)的 MIC值为8yg/mL，具有较好抑菌活性。
[0024] 上述实验结果证明本发明所涉及的化合物具有较好抑菌活性，可用于制备农用杀 菌剂。
[0025] 实施例3可湿性粉剂
[0026] 由肉桂紫正青霉经发酵培养（发酵培养过程可参见上述文献）；将发酵液进行压 滤和沉淀，将上清液浓缩，使式（一）所示化合物的含量为I. 5-2.Owt%，以浓缩上清液质量 为基数，加入25-35 %白炭黑进行吸附，然后添加3-8 %十二烷基硫酸钠，0. 8-1. 2 %CMC和 2-4%拉开粉，再加入凹凸棒土制成式（一）所示化合物的含量为0.5wt%的可湿性粉剂。
[0027] 使用方法：500倍液喷雾在核桃枝条上。
【主权项】
1. 式（一）所示的化合物Simplicissin在制备防治核桃枝枯病菌的农用杀菌剂方面 的应用，2. 如权利要求1所述的应用，其特征是，所述农用杀菌剂为可湿性粉剂、颗粒剂或缓释 剂。
【专利摘要】本发明公开了化合物Simplicissin的应用。该化合物的结构如式(一)所示，该化合物对核桃枝枯病菌具有较好抑制活性，最小抑制浓度(MIC)为8μg/mL，表明化合物Simplicissin对核桃枝枯病菌具有较好抑制效果，可以作为具有杀菌作用的新农药成分或先导化合物。该化合物为微生物来源天然产物，与传统的化学合成杀菌剂相比，在环境中易于降解，且易于规模化生产。
【IPC分类】A01P3/00, A01N43/12
【公开号】CN104970018
【申请号】CN201510329921
【发明人】牛赡光, 栾守业, 崔凤云, 杜丰玉, 张淑静
【申请人】青岛中达生物技术有限公司
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2015年6月15日