专利名称：注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种多烯磷脂酰胆碱制剂，尤其涉及注射用多烯磷脂酰胆碱制剂及其制备方法。
背景技术：
多烯磷脂酰胆碱(Polyene Phosphatidyl choline)是从大豆中提取的高度纯化的1，2-二亚油酰磷脂酰胆碱，又称之为必需磷脂(essentialphospholipids，EPL)，本品目前由德国利宝益(Lipoid)公司进口，产品质量符合注射用标准。多烯磷脂酰胆碱是细胞膜的主要组成部分，其在化学结构上与重要的内源性磷脂一致。主要进入肝细胞，并以完整的分子与肝细胞膜及细胞器膜相结合，调节细胞膜的形态和功能，对已破坏的肝细胞膜结构进行修复，增加膜的流动性和稳定性，纠正酶的细胞外逸脱，维持细胞内酶的活性，使受损的肝功能和酶活力恢复正常，起到保护肝细胞的作用。其次多烯磷脂酰胆碱作为脂蛋白的主要成分可影响脂类代谢、促进细胞可溶性质粒形成，加速体内脂肪分解、减少脂肪在体内积聚，所含有多不饱和胆碱，能阻止肝细胞内线粒体酶活性下降和增加浆膜中的膜蛋白酶活性、有效阻止肝细胞变性及炎症纤维化。因而临床上用于治疗各类急慢性肝炎、肝硬化和肝中毒等，为目前疗效最为肯定的一个保肝药物。
目前，市售的多烯磷脂酰胆碱制剂为注射液。多烯磷脂酰胆碱注射液贮藏温度低，要求在8℃以下，贮藏不便，此外运输包装也不方便。冻干剂型能克服这些缺点，具有稳定性好，运输方便的优点。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂及其制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明的多烯磷脂酰胆碱冻干剂，以重量百分计，多烯磷脂酰胆碱为30％～60％，药用辅料为40％～70％；所说的药用辅料包括增溶剂和骨架支持剂；药用辅料中，增溶剂的重量用量为40～60％，骨架支持剂的重量用量为0～10％；增溶剂是十分重要的，因为多烯磷脂酰胆碱难溶于水，需要增溶剂增大其水中的溶解度，增溶剂可选自去氧胆酸、去氧胆酸钠、去氢胆酸钠、胆酸钠或甘氨胆酸中的一种；所说的骨架支持剂选自甘露醇、山梨醇、尿素、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮或甘氨酸中的一种或其混合物，优选甘露醇。
为了提高制剂的抗氧化稳定性，可添加抗氧化剂，所说的抗氧化剂选自维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)、2，6-二特丁基对甲酚(BHT)中的一种或其混合物，抗氧化剂用量为0.02～1.0％。
为了提高制剂的防腐性，可添加防腐剂，所说的防腐剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、羟苯酯美、山梨酸中的一种或其混合物，防腐剂用量为0.5～1.0％。
本发明冻干剂的规格为每瓶含活性化合物多烯磷脂酰胆碱232.5mg。
本发明的多烯磷脂酰胆碱冻干剂的制备方法包括如下步骤将增溶剂溶解于水，获得增溶剂水溶液，用2mol/L NaOH溶液调节pH值为7.5～9.5，然后依次加入多烯磷脂酰胆碱、抗氧剂、防腐剂和骨架支持剂，搅拌使其溶解，再加水至规定体积，使溶液中多烯磷脂酰胆碱的浓度为0.0465g/ml，加入活性炭搅拌静置30分钟，过滤，灌装，冷冻干燥去除水分，即得多烯磷脂酰胆碱冻干剂。
本发明的有益效果是十分显著的，由稳定性试验结果表明，本发明的制剂具有良好的稳定性，可明显提高制剂的贮藏温度，贮藏温度可达25℃；并且方法简单易行，制品质量稳定可靠。
具体实施例方式
实施例1将50g去氧胆酸溶解于700ml注射用水，搅拌至均质，用2mol/L NaOH溶液调节pH至8.5，加入46.5g多烯磷脂酰胆碱、0.8g苯甲醇、2g亚硫酸氢钠、5g甘露醇，搅拌溶解，用2mol/L NaOH溶液调节pH至8.5，加水定容至1000ml，加入0.2g活性炭搅拌静置30分钟左右，过滤、灌装，采用本领域公知的方法冷冻干燥，即得。
实施例2将50g去氧胆酸溶解于700ml注射用水，搅拌至均质，用2mol/L NaOH溶液调节pH至7.5，加入46.5g多烯磷脂酰胆碱、0.8g苯甲醇、0.2g BHT、5g山梨醇，搅拌溶解，用2mol/L NaOH溶液调节pH至7.5，加水定容至1000ml，加入0.2g活性炭搅拌静置30分钟左右，过滤、灌装，采用本领域公知的方法冷冻干燥，即得。
实施例3将25g去氧胆酸溶解700ml注射用水，搅拌至均质，用2mol/L NaOH溶液调节pH至9.5，加入46.5g多烯磷脂酰胆碱、0.8g苯甲醇、2g亚硫酸氢钠、5g甘露醇，搅拌溶解，用2mol/L NaOH溶液调节pH至9.5；加水定容至1000ml，加入0.2g活性炭搅拌静置30分钟左右，过滤、灌装，采用本领域公知的方法冷冻干燥，即得。
实施例4将50g甘氨胆酸溶解于700ml注射用水，搅拌至均质，用2.0mol/L NaOH溶液调节pH至8.5，加入46.5g多烯磷脂酰胆碱、0.8g苯甲醇、2g亚硫酸氢钠、5g甘露醇，搅拌溶解，用2.0mol/L NaOH溶液调节pH至8.5，加水定容至1000ml，加入活性炭搅拌静置30分钟左右，过滤、灌装，采用本领域公知的方法冷冻干燥，即得。
实施例5采用实施例1的制剂，在温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月，进行长期稳定性考察，结果见表1。
表1 多烯磷脂酰胆碱冻干剂稳定性试验结果 结论以上结果表明，12月与0月比较，冻干制剂的各项指标均无明显变化，而注射液的有关物质增加，含量下降较多，说明多烯磷脂酰胆碱冻干剂比多烯磷脂酰胆碱注射液的质量更稳定，贮藏温度可以从注射液的2-8℃提高到25℃。
实施例6采用实施例1的制剂进行的全身过敏性、溶血性和血管刺激性试验。
一、注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂全身过敏性试验1、试验方法将豚鼠40只，雌雄各半，随即分为4组，每组10只，各组分别给予注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂232.5mg(溶于5ml注射用水)、进口多烯磷脂酰胆碱注射液5ml232.5mg(上市产品)、卵蛋白和5％葡萄糖注射液。隔日腹腔注射一次，每次0.5ml，共三次，以达到致敏效果。每组各取5只豚鼠，于首次注射后的第14天分别腹腔注射多烯磷脂酰胆碱注射液5ml232.5mg(上市产品)、卵蛋白和5％葡萄糖注射液各1ml，攻击一次；其余豚鼠于首次注射后第21天同样攻击一次。每次攻击后，立即观察豚鼠有无用爪搔鼻、喷嚏、竖毛、抽搐、呼吸困难、环转运动、休克和死亡等过敏现象。如无上述症状发生，则表明该药无致敏作用。
2、结果在每次攻击注射后，卵蛋白组豚鼠，均出现喷嚏、竖毛、无目的环转运动、抽搐、呼吸困难和第二天死亡的现象；注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂、进口多烯磷脂酰胆碱注射液(上市产品)和5％葡萄糖注射液豚鼠一样，均未出现明显的上述过敏现象。
3、结论注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂全身过敏性试验表明，该药无致敏作用，临床注射使用是安全的。
二、注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂溶血试验1、试验方法从兔耳静脉取血数毫升，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，加约10倍量的氯化钠注射液，摇匀，离心(2000转/min)，除去上清液，沉淀的红细胞再用氯化钠注射液如法洗涤3次，至上清液不显红色为止。将得红细胞用氯化钠注射液配成2％(ml/ml)的混悬液备用。
取试管12支，按下表配比量依次加入2％的红细胞混悬液和氯化钠注射液(或蒸馏水)，混匀后，于37℃恒温箱放置0.5hr。然后加入不同量的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂232.5mg(溶于5ml注射用水)、进口多烯磷脂酰胆碱注射液5ml232.5mg(上市产品)，摇匀后，置37℃恒温箱中。第6管作为阴性对照，加氯化钠注射液；第7管作为完全溶血(或阳性)对照，也不加受试药液，但用蒸馏水代替氯化钠注射液，分别于37℃恒温后15min、30min、45min、1hr、2hr、3hr、4hr各观察一次。
2、结果判断如果溶液呈透明红色，即表示溶血；如果红细胞全部下沉，上层溶液无色透明，且振摇后均匀分散，表示不溶血；如果溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。
(1)一般以0.3ml注射剂(第3管)在2hr内不产生溶血作用者，认为可供注射用。
(2)如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振摇后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴氯化钠注射液，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床使用。若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚，供试品不宜供临床使用。
3、结果在本试验中，阴性对照管(6管)为阴性，红细胞全部下沉，上层溶液无色透明，且振摇后均匀分散，即不溶血；完全溶血对照管(7管)为阳性，溶液呈透明红色，即溶血。各给药管(包括第3管)在4hr内均与阴性对照管一致，即不溶血。
4、结论本试验结果表明注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂无溶血作用，可供临床注射用。
三、注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂血管刺激性试验1、试验方法注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂232.5mg(溶于5ml注射用水)临床最大用量为8瓶/天，根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表，确定多烯磷脂酰胆碱兔给药剂量为1.9ml/kg；空白对照组给予5％葡萄糖注射液，给药容积为1.9ml/kg。
取日本大耳白兔4只，随机分为2组，每日一次，从兔耳缘静脉缓慢推注一定量的受试药和5％葡萄糖注射液，连续三天后，先肉眼观察命脉注射局部有无充血、水肿、发紫、坏死等刺激现象，然后解剖动物左右两侧耳缘静脉血管作病理切片观察。
2、结果注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂和空白对照组兔耳缘静脉注射局部均无充血、水肿、发紫、坏死等刺激现象。病理检查组织切片显示空白对照组静脉血管壁及周围组织结构正常；给药组静脉血管壁及周围组织结构正常，未见炎细胞浸润及变性、水肿、坏死。
3、结论本试验表明注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂临床用药量对血管无显著刺激反应。
权利要求
1.注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂，其特征在于，以重量百分计，多烯磷脂酰胆碱为30％～60％，药用辅料为40％～70％；所说的药用辅料包括增溶剂和骨架支持剂；增溶剂可自去氧胆酸、去氧胆酸钠、去氢胆酸钠、胆酸钠或甘氨胆酸中的一种；骨架支持剂选自甘露醇、山梨醇、尿素、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮或甘氨酸中的一种或其混合物。
2.根据权利要求1所述的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂，其特征在于，骨架支持剂为甘露醇。
3.根据权利要求1所述的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂，其特征在于，药用辅料中，增溶剂的重量用量40～60％，骨架支持剂的重量用量为0～10％。
4.根据权利要求1所述的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂，其特征在于，制剂中添加抗氧化剂。
5.根据权利要求4所述的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂，其特征在于，所说的抗氧化剂选自维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)、2，6-二特丁基对甲酚(BHT)中的一种或其混合物，抗氧化剂用量为0.02～1.0％。
6.根据权利要求1所述的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂，其特征在于，制剂中添加防腐剂，所说的防腐剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、羟苯酯美、山梨酸中的一种或其混合物，防腐剂用量为0.5～1.0％。
7.根据权利要求1～6任一项所述的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤将增溶剂溶解于水，用NaOH溶液调节pH值为7.5～9.5，然后依次加入多烯磷脂酰胆碱、抗氧剂、防腐剂和骨架支持剂，搅拌使其溶解，再加水至规定体积，加入活性炭搅拌静置30分钟，过滤，灌装，即得多烯磷脂酰胆碱冻干剂。
全文摘要
本发明公开了一种注射用多烯磷脂酰胆碱冻干剂及其制备方法。以重量百分计，多烯磷脂酰胆碱为30％～60％，药用辅料为40％～70％。由稳定性试验结果表明，本发明的制剂具有良好的稳定性，可明显提高制剂的贮藏温度，贮藏温度可达25℃；并且方法简单易行，制品质量稳定可靠。
文档编号A61P1/16GK1820757SQ20051005745
公开日2006年8月23日 申请日期2005年12月21日 优先权日2005年12月21日
发明者张旭, 龙泉, 李静, 贾琳 申请人:重庆药友制药有限责任公司