专利名称：水飞蓟素口服固体制剂质量控制方法
技术领域：
本发明涉及以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是以水飞蓟素为主要成分的益肝灵滴丸质量控制方法，其特征是采用高效液相色谱法检测水飞蓟素含量，以乙醇溶液或稀盐酸溶液为溶出介质、紫外分光光度法检测水飞蓟素溶出度。
背景技术：
水飞蓟素系由菊科植物水飞蓟属水飞蓟Silybum marianum(L)Gaertn的果实经提取精制所得的黄酮类化合物，主要成分为水飞蓟宾，在稀碱溶液中易溶，溶于丙酮，在热甲醇中溶解，略溶于乙醇，在醋酸乙酯中微溶，在水中不溶。以水飞蓟素为主要成分的口服固体制剂有益肝灵滴丸、益肝灵片、益肝灵胶囊、益肝灵颗粒、益肝灵丸等，具有改善肝功能、保护肝细胞膜的作用，用于急、慢性肝炎。
由于水飞蓟素不溶于水，因此溶出度和含量控制成为评价水飞蓟素口服固体制剂处方工艺和质量稳定性的重要指标。但是，目前尚未见水飞蓟素口服固体制剂溶出度检测方法的报道，含量测定主要采用紫外分光光度法。
发明内容
本发明提供一种专属性强、准确度及精确度和灵敏度高，操作简便的含量和溶出度检测方法，为客观评价和有效控制以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是益肝灵滴丸的工艺质量提供依据。
为达到上述目的，本发明提供了一种检测以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是益肝灵滴丸中水飞蓟素含量和溶出度质量控制方法，具体实施方法如下1.含量测定方法照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸调节pH值至4.0)为流动相；检测波长为288nm。理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取在105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 取样品适量(约相当于水飞蓟素24mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率为120W，频率为40KHZ)20min使溶解，加甲醇稀释至刻度，滤过，精密吸取续滤液，5ml置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，依法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
2.溶出度检测方法取样品，照溶出度测定法(中国药典2005年版药典二部附录XC)，以稀盐酸溶液或乙醇溶液为溶出介质，转速为每分钟50/100转，依法操作。经30分钟时，取溶液滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取3ml置50ml量瓶中，加稀盐酸溶液或乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在288nm波长处测定吸收度，计算溶出量，即得。
具体实施例方式
实施例1高效液相法测定含量的流动相、测定波长选择及系统适用性试验流动相选择以甲醇∶水∶0.5mol/L磷酸二氢钾溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸调节pH4.0)。
测定波长选择水飞蓟宾的流动相溶液在288nm波长处有最大吸收。
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇∶水∶0.5mol/L磷酸二氢钾溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸调节pH4.0)为流动相，检测波长为288nm，检测理论板数按水飞蓟宾计算为5894。
实施例2高效液相法测定含量的线性试验及最低检测限试验线性试验取水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，并稀释至刻度。精密吸取上述溶液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml分别置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的标准溶液，分别精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1。
表1.含量测定线性试验结果(n＝5)
以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程得A＝27300.52C-1405.57，r＝0.9999。表明在24.41～56.95μg/ml范围内浓度与色谱峰面积线性良好。
最低检测限试验当信噪比为2∶1时，最低检测浓度为0.24μg/ml。
实施例3高效液相法含量测定溶液的稳定性试验取线性试验项下浓度为40μg/ml的溶液，在上述色谱条件下分别于0、2、4、6、8小时进行测定，测定溶液放置8小时内稳定，结果见表2。
表2.含量测定溶液稳定性试验结果
实施例4高效液相法含量测定重现性试验取益肝灵滴丸一批，照含量测定项下方法检测水飞蓟素含量，表明方法重现性良好，结果见表3。
表3.含量测定重现性试验(n＝6)
实施例5高效液相法含量测定精密度试验取益肝灵滴丸一批分5次不同时间重复上述操作，表明方法精确度良好，结果见表4。
表4.含量测定精密度试验结果(n＝5)
实施例6高效液相法含量测定回收率试验按处方比例准确称取一定量的水飞蓟宾对照品与辅料混合，照含量测定方法操作，进行回收率试验，表明方法准确度良好，结果见表5。
表5.含量测定回收率试验结果
实施例7高效液相色谱法检测益肝灵滴丸中水飞蓟素含量取益肝灵滴丸样品三批，照含量测定方法检测水飞蓟素含量，结果见表6。
表6.益肝灵滴丸含量测定结果
实施例8溶出度检测溶出介质筛选试验对照品溶液制备取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(1)。
取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液3.0ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(2)。
试验方法与结果取样品，照溶出度测定法(中国药典2005年版二部附录XC第三法)，分别以0.1mol/L盐酸溶液、5％乙醇溶液250ml～400ml为溶出介质，转速为每分钟50/100转，依法操作，分别经15、30、45、60分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在288nm的波长处测定吸收度，计算溶出量，结果见表7。
表7.溶出介质筛选试验结果 实施例9溶出度检测波长选择试验取水飞蓟宾对照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取3ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)在200～400nm波长范围内扫描，结果在288nm波长处有最大吸收，故确定检测波长为288nm。
实施例10溶出度检测线性试验取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加10ml乙醇，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，加水稀释至刻度，精密量取0.5ml，1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀释至刻度，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在288nm波长处测定吸收度，计算回归方程式及相关系数，结果见表8。
表8.溶出度检测线性试验结果
以溶液浓度为横坐标、吸收度为纵坐标，进行线性回归，线性方程为A＝0.039c-0.0357，r＝0.9999表明在2.16μg/ml～21.04μg/ml范围内浓度与吸收度呈良好线性关系。
实施例11溶出度检测测定溶液稳定性试验取上述浓度为12μg/ml对照品溶液，照上述方法分别于0、2、4、6、8小时测定吸收度，表明测定溶液在8小时内稳定，结果见表9。
表9.溶出度检测溶液稳定性试验结果
实施例12溶出度检查方法选择试验对照品溶液制备取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取3ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
方法 取样品，分别照溶出度测定法[中国药典2005年版二部附录XC第一法(篮法)和第二法(浆法)]，以5％乙醇溶液为溶出介质400ml，转速为每分钟50/100转，经30分钟时，取溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)在288nm波长处测吸收度(A)，计算溶出量，结果见表10。
表10.溶出度检查方法试验结果
实施例13溶出度检测方法回收率试验按处方比例准确称取水飞蓟宾对照品与辅料，混匀，制成模拟样品，照上述溶出度检查方法测定水飞蓟宾含量，进行回收率试验，表明方法准确度良好，结果见表11。
表11.溶出度检测方法回收率试验结果(n＝9)
实施例14溶出均一性试验取益肝灵滴丸，照溶出度测定法(中国药典2005年版药典二部附录XC第一法)，以5％乙醇溶液400ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，分别经2、5、10、20、30、45、60分钟时，取溶液10ml(及时补液)，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取3.0ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在288nm波长处测定吸收度，计算溶出率，表明溶出均一性良好，结果见表12。
表12.益肝灵滴丸溶出均一性试验结果
实施例15溶出试验取益肝灵滴丸三批与益肝灵片一批照上述溶出度检查方法进行溶出试验，结果见表13。
表13.益肝灵滴丸与益肝灵片溶出试验结果
实施例16溶出度检测取益肝灵滴丸五批，照溶出度测定(中国药典2005年版二部附录X C第一法)，以5％乙醇溶液400ml为溶出介质，转速为每分钟50/100转，依法操作，经30分钟时，取溶液滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取3ml，置50ml量瓶中，加5％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在288nm波长处测定吸收度，计算每丸的溶出量，结果见表14。
表14.益肝灵滴丸溶出度检测结果
权利要求
1.以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是以水飞蓟素为主要成分的益肝灵滴丸质量控制方法，其特征在于它是采用高效液相色谱法检测水飞蓟素含量，以乙醇溶液或稀盐酸溶液为溶出介质、紫外分光光度法检测水飞蓟素溶出度的方法。
2.权利要求1所述的以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是以水飞蓟素为主要成分的益肝灵滴丸质量控制方法，其特征是照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法检测水飞蓟素含量的方法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-0.5mol/L磷酸二氢钾溶液(10∶10∶1)(用0.2mol/L磷酸调节pH值至4.0)为流动相，检测波长为288nm，理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备 取在105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得；供试品溶液的制备 取样品适量(约相当于水飞蓟素24mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率为120W，频率为40KHZ)20min使溶解，加甲醇稀释至刻度，滤过，精密吸取续滤液，5ml置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，依法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
3.权利要求所述的以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是以水飞蓟素为主要成分的益肝灵滴丸质量控制方法，其特征是照中国药典2005年版二部附录X C溶出度测定法检测水飞蓟素溶出度的方法取样品，照溶出度测定法(中国药典2005年版药典二部附录X C)，以稀盐酸溶液或乙醇溶液为溶出介质，转速为每分钟50/100转，依法操作；经30分钟时，取溶液滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取经105℃干燥至恒重的水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(频率为40KHZ，功率为120W)20min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取3ml置50ml量瓶中，加稀盐酸溶液或乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取供试品溶液与对照品溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在288nm波长处测定吸收度，计算溶出量，即得。
全文摘要
本发明涉及以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂尤其是以水飞蓟素为主要成分的益肝灵滴丸质量控制方法，其特征是采用高效液相法检测水飞蓟素含量，以乙醇溶液或稀盐酸溶液为溶出介质、紫外分光光度法检测水飞蓟素溶出度；该方法具有专属性强、准确度及精确度和灵敏度高、操作简便的特点，对有效控制以水飞蓟素为主要成分的益肝灵口服固体制剂工艺质量具有重要意义。
文档编号A61P1/16GK101062031SQ20071010662
公开日2007年10月31日 申请日期2007年5月22日 优先权日2007年5月22日
发明者钱进, 陶琳, 林亚伦, 刘冬梅, 邝振英, 刘孝乐 申请人:南昌弘益科技有限公司