专利名称：一类含有吡唑环的噻唑类衍生物及其制法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新型含有吡唑环的噻唑类衍生物(又名2-[3，5-二苯基-4，5-二氢-1H-1-吡唑基-4-苯基噻唑)及其制备方法与作为抗癌药物的用途。
背景技术：
含有吡唑环的化合物存在广泛而且具有多样的生物活性，在农药上应用广泛，其中许多可用作除草剂、杀虫剂和植物生长调节剂等。在医药、生物领域中也具有十分重要的地位，现有上市的含吡咯环药物可乐定(clonidine)为中枢性降压药，通过抑制血管运动中枢，使外周交感神经的功能降低从而引起降压。对多数高血压病有效，对原发性高血压疗效较好。此外，吡唑环衍生物还具有广谱的抗菌活性，而且对白血病、肿瘤也有很好的药效。因此，含有吡唑环的化合物是具有开发潜力的生物靶标，开展合理分子设计以及从天然生物活性物质中寻找更高或更广谱的生物活性、更高的选择性、更低的毒性，对生物医药产业具有重要的意义。
因此，对含有吡唑环的化合物进行深入研究具有一定的理论和实际价值，尤其是在合成系列新型含有吡唑环的噻唑类衍生物的基础上对它们的生物活性进行系统的研究具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一类新型的含有吡唑环的噻唑类衍生物及其制备方法与用途。
本发明的技术方案如下 一类含有吡唑环的噻唑类衍生物，它有如下通式
式中R3＝F、Cl、Br、CH3、OCH3、OH或NO2；R4＝Cl或H；当R1＝CH3，则R2＝CH3；当R1＝Br，R2＝H。
一种制备上述含有吡唑环的噻唑类衍生物的方法，它包括如下步骤 步骤1.在无水乙醇中依次加入相应的取代苯乙酮酮和相应的取代苯甲醛，待溶解以后，逐滴加入40％氢氧化钠溶液，室温反应4-8h，取代苯乙酮和取代苯甲醛的物质的量之比为1∶1.1-1.3。待反应完全后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，先用水洗，再用乙醇重结晶，待干燥后得到固体；
步骤2.将步骤1得到的固体与氨基硫脲溶于无水乙醇中，完全溶解后，缓慢加入20％氢氧化钠溶液，加热回流8-12h，步骤1得到的固体与氨基硫脲的物质的量之比为1∶1.1-1.2，待反应物完全后，加入冰水中，不断搅拌，静置4-6h，析出固体，水洗后，用乙醇重结晶，干燥后得到含吡唑环的硫脲衍生物；
步骤3.将步骤2得到的固体与相应的取代-α-溴代苯乙酮溶于无水异丙醇中，室温搅拌4-6h，步骤2得到的固体与取代-α-溴代苯乙酮的物质的量之比为1∶1.05-1.1，待反应物完全反应后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，水洗后，用乙醇重结晶，干燥后得到含有吡唑环的噻唑类衍生物。
上述的制法，步骤1中，所述的无水乙醇的用量为每毫摩尔取代苯乙酮用4-5ml无水乙醇。
上述的制法，步骤1中，所述的氢氧化钠溶液的用量为每毫摩尔取代苯乙酮用0.5-1.5ml 40％氢氧化钠溶液。
上述的制法，步骤2中，所述的无水乙醇的用量为每毫摩尔氨基硫脲用4-5ml无水乙醇。
上述的制法，步骤2中，所述的氢氧化钠溶液的用量为每毫摩尔氨基硫脲用1-2ml 20％氢氧化钠溶液。
上述的制法，步骤3中，所述的无水异丙醇的用量为每毫摩尔取代-α-溴代苯乙酮用4-5ml无水异丙醇。
实验结果表明，本发明的含有吡唑环的噻唑类衍生物对人体口腔上表皮癌细胞株(KB)和人白血病细胞株(K562)有明显的抑制生长作用，因此可以用于制备抗肿瘤的药物。
具体实施例方式 通过以下实施例进一步详细说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。
实施例一2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-氟苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物1)的制备
1.于100ml单口圆底烧瓶中加入40ml无水乙醇，依次加入3，4-二甲基苯乙酮(1.48g，10mmol)和对氟苯甲醛(1.36g，11mmol)，待溶解以后，逐滴加入5ml 40％氢氧化钠溶液，室温反应4-8h。待反应完全后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，先用水洗(各100ml)两遍后再用乙醇重结晶，待干燥后得到查尔酮；将得到的固体查尔酮(2.54g，10mmol)与氨基硫脲(1.01g，11mmol)溶于40ml无水乙醇溶液中，完全溶解后，缓慢加入20ml 20％氢氧化钠溶液，80℃下加热回流8-12h。待反应物完全反应后，加入冰水中，不断搅拌，静置4-6h，析出固体，水洗(各100ml)两遍后，用乙醇重结晶，干燥后得到含吡唑环的硫脲类化合物。将得到的含吡唑环的硫脲类化合物(3.27g，10mmol)和α-溴代苯乙酮(2.17g，11mmol)溶于50ml无水异丙醇中，室温搅拌6h。待反应物完全反应后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，水洗(各100ml)两遍后，用乙醇重结晶，干燥后得到目标化合物1。产率76％，mp185-187℃ 1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(m，6H)；3.22-3.31(dd，J1＝6.59Hz，J2＝17.37Hz，1H)；3.82-3.93(dd，J1＝12.07Hz，J2＝17.56Hz，1H)；5.62-5.67(dd，J1＝6.59Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.81(m，1H)；7.13-7.22(m，2H)；7.27-7.34(m，4H)；7.43-7.46(m，3H)；7.55(s，1H)；7.64-7.68(m，2H).MS(ESI)427.2(C26H22FN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22FN3SC，73.04；H，5.19；N，9.83％；FoundC，72.86；H，5.21；N，9.97％. 2.于100ml单口圆底烧瓶中加入50ml无水乙醇，依次加入3，4-二甲基苯乙酮(1.48g，10mmol)和对氟苯甲醛(1.61g，13mmol)，待溶解以后，逐滴加入15ml 40％氢氧化钠溶液，室温反应4-8h。待反应完全后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，先用水洗(各100ml)两遍后再用乙醇重结晶，待干燥后得到查尔酮；将得到的固体查尔酮(2.54g，10mmol)与氨基硫脲(1.10g，12mmol)溶于50ml无水乙醇溶液中，完全溶解后，缓慢加入10ml 20％氢氧化钠溶液，80℃下加热回流8-12h。待反应物完全反应后，加入冰水中，不断搅拌，静置4-6h，析出固体，水洗(各100ml)两遍后，用乙醇重结晶，干燥后得到含吡唑环的硫脲类化合物。将得到的含吡唑环的硫脲类化合物(3.27g，10mmol)和α-溴代苯乙酮(2.07g，10.5mmol)溶于40ml无水异丙醇中，室温搅拌6h。待反应物完全反应后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，水洗(各100ml)两遍后，用乙醇重结晶，干燥后得到与实施例一.1相同的目标化合物1。产率与实施例一.1基本相同。
实施例二2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物2)的制备
制备方法同实施例一.1。以对氯苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率72％，mp179-181℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.32(s，6H)；3.23-3.31(dd，J1＝6.78Hz，J2＝17.55Hz，1H)；3.83-3.93(dd，J1＝11.88Hz，J2＝17.37Hz，1H)；5.59-5.65(dd，J1＝6.75Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.81(s，1H)；7.16-7.23(m，2H)；7.29-7.38(m，6H)；7.43-7.47(m，1H)；7.56(s，1H)；7.65-7.67(m，2H).MS(ESI)443.1(C26H22ClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22ClN3SC，70.33；H，4.99；N，9.46％；FoundC，70.52；H，5.02；N，9.53％. 实施例三2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物3)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率74％，mp210-212℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，6H)；3.23-3.31(dd，J1＝6.57Hz，J2＝17.37Hz，1H)；3.83-3.93(dd，J1＝12.06Hz，J2＝17.55Hz，1H)；5.61-5.67(dd，J1＝6.60Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.82(s，1H)；7.16-7.24(m，2H)；7.29-7.35(m，4H)；7.44-7.48(m，3H)；7.55(s，1H)；7.65-7.68(m，2H).MS(ESI)487.1(C26H22BrN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22BrN3SC，63.93；H，4.54；N，8.60％；FoundC，63.81；H，4.50；N，8.63％. 实施例四2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲苯基-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物4)的制备
制备方法同实施例一.1。以对甲基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲苯基-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率76％，mp161-163℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，9H)；3.27-3.35(dd，J1＝6.42Hz，J2＝17.58Hz，1H)；3.81-3.91(dd，J1＝11.91Hz，J2＝17.37Hz，1H)；5.61-5.67(dd，J1＝6.39Hz，J2＝11.88Hz，1H)；6.79(s，1H)；7.12-7.22(m，4H)；7.28-7.33(m，4H)；7.45-7.48(m，1H)；7.57(s，1H)；7.68-7.71(m，2H).MS(ESI)423.2(C27H25N3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H25N3SC，76.56；H，5.95；N，9.92％；FoundC，76.43；H，5.86；N，9.81％. 实施例五2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物5)的制备
制备方法同实施例一.1。以对甲氧基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率73％，mp188-189℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.30(s，6H)；3.24-3.31(dd，J1＝6.54Hz，J2＝17.35Hz，1H)；3.82(s，3H)；3.85-3.94(dd，J1＝12.09Hz，J2＝17.56Hz，1H)；5.63-5.67(dd，J1＝6.68Hz，J2＝11.83Hz，1H)；6.84(m，1H)；7.14-7.22(m，2H)，7.27-7.35(m，4H)；7.45-7.49(m，3H)；7.56(s，1H)；7.67-7.69(m，2H).MS(ESI)439.2(C27H25N3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H25N3OSC，73.77；H，5.73；N，9.56％；FoundC，73.59；H，5.63；N，9.58％. 实施例六2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-羟基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物6)的制备
制备方法同实施例一.1。以对羟基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-羟基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率68％，mp176-177℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，6H)；3.22-3.30(dd，J1＝6.74Hz，J2＝17.56Hz，1H)；3.81-3.92(dd，J1＝11.84Hz，J2＝17.36Hz，1H)；5.57-5.63(dd，J1＝6.76Hz，J2＝11.84Hz，1H)；6.81(s，1H)；7.13-7.21(m，2H)；7.28-7.36(m，6H)；7.42-7.47(m，1H)；7.56(s，1H)；7.64-7.69(m，2H).MS(ESI)425.2(C26H23N3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H23N3OSC，73.38；H，5.45；N，9.87％；FoundC，73.14；H，5.57；N，10.07％. 实施例七2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物7)的制备
制备方法同实施例一.1。以对硝基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率69％，mp171-173℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.30(s，6H)；3.24-3.31(dd，J1＝6.58Hz，J2＝17.36Hz，1H)；3.82-3.93(dd，J1＝12.14Hz，J2＝17.56Hz，1H)；5.63-5.67(dd，J1＝6.64Hz，J2＝11.89Hz，1H)；6.81(s，1H)；7.15-7.24(m，2H)；7.27-7.35(m，4H)；7.46-7.49(m，3H)；7.56(s，1H)；7.63-7.67(m，2H).MS(ESI)454.2(C26H22N4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H22N4O2SC，68.70；H，4.88；N，12.33％；FoundC.68.58；H，4.96；N，12.18％. 实施例八2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物8)的制备
制备方法同实施例一.1。以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率74％，mp165-166℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，6H)；3.34-3.39(dd，J1＝6.47Hz，J2＝17.24Hz，1H)；3.97-4.14(dd，J1＝12.09Hz，J2＝18.14Hz，1H)；5.61-5.68(dd，J1＝6.23Hz，J2＝11.71Hz，1H)；7.24-7.26(m，1H)；7.36-7.42(m，5H)；7.46-7.52(m，1H)；7.53-7.57(m，3H)；7.71-7.73(m，2H).MS(ESI)461.1(C26H21ClFN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H21ClFN3SC，67.60；H，4.58；N，9.10％；FoundC，67.53；H，4.70；N，9.30％. 实施例九2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物9)的制备
制备方法同实施例一.1。以对氯苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-氯苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率70％，mp158-160℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，6H)；3.30-3.36(dd，J1＝6.46Hz，J2＝17.23Hz，1H)；3.96-4.09(dd，J1＝12.07Hz，J2＝18.12Hz，1H)；5.61-5.68(dd，J1＝6.27Hz，J2＝11.71Hz，1H)；7.24-7.29(m，1H)；7.37-7.45(m，5H)；7.49-7.54(m，1H)；7.56-7.59(m，3H)；7.73-7.75(m，2H).MS(ESI)477.1(C26H21Cl2N3S，[M+H]+).Anal.Calcdfor C26H21Cl2N3SC，65.27；H，4.42；N，8.78％；FoundC，65.13；H，4.31；N，8.67％. 实施例十2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物10)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-溴苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率72％，mp161-163℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.28(s，6H)；3.32-3.37(dd，J1＝6.43Hz，J2＝17.21Hz，1H)；3.98-4.08(dd，J1＝12.09Hz，J2＝18.14Hz，1H)；5.63-5.69(dd，J1＝6.21Hz，J2＝11.73Hz，1H)；7.23-7.26(m，1H)；7.34-7.42(m，5H)；7.49-7.52(m，1H)；7.54-7.57(m，3H)；7.70-7.73(m，2H).MS(ESI)521.0(C26H21BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H21BrClN3SC，59.72；H，4.05；N，8.04％；FoundC，59.49；H，4.00；N，7.88％. 实施例十一2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物11)的制备
制备方法同实施例一.1。以对甲基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-甲基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率73％，mp160-161℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，9H)；3.36-3.43(dd，J1＝6.52Hz，J2＝17.36Hz，1H)；3.95-4.08(dd，J1＝12.04Hz，J2＝18.17Hz，1H)；5.61-5.69(dd，J1＝6.27Hz，J2＝11.78Hz，1H)；7.21-7.26(m，1H)；7.33-7.41(m，5H)；7.46-7.52(m，1H)；7.52-7.57(m，3H)；7.71-7.73(m，2H).MS(ESI)457.1(C27H24ClN3S，[M+H]+).Anal.Calcdfor C27H24ClN3SC，70.80；H，5.28；N，9.17％；FoundC，70.68；H，5.11；N，9.02％. 实施例十二2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物12)的制备
制备方法同实施例一.1。以对甲氧基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(3，4-二甲氧基苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率76％，mp174-175℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.28(s，6H)；3.31-3.36(dd，J1＝6.38Hz，J2＝17.16Hz，1H)；3.82(s，3H)；3.95-4.12(dd，J1＝12.16Hz，J2＝18.18Hz，1H)；5.60-5.66(dd，J1＝6.29Hz，J2＝11.76Hz，1H)；7.23-7.26(m，1H)；7.34-7.42(m，5H)；7.48-7.52(m，1H)；7.53-7.59(m，3H)；7.69-7.73(m，2H).MS(ESI)473.1(C27H24ClN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C27H24ClN3OSC，68.41；H，5.10；N，8.86％；FoundC，68.16；H，4.97；N，8.93％. 实施例十三2-[5-(4-羟基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物13)的制备
制备方法同实施例一.1。以对羟基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[5-(4-羟基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率70％，mp156-157℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.28(s，6H)；3.36-3.45(dd，J1＝6.36Hz，J2＝17.24Hz，1H)；3.96-4.07(dd，J1＝12.17Hz，J2＝18.13Hz，1H)；5.61-5.69(dd，J1＝6.19Hz，J2＝11.71Hz，1H)；7.21-7.26(m，1H)；7.35-7.43(m，5H)；7.47-7.52(m，1H)；7.56-7.63(m，3H)；7.74-7.78(m，2H).MS(ESI)459.1(C26H22ClN3OS，[M+H]+).Anal.Calcdfor C26H22ClN3OSC，67.89；H，4.82；N，9.13％；FoundC，67.74；H，4.78；N，8.96％. 实施例十四2-[5-(4-硝基苯基)-3-(3，4-二甲基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物14)的制备
制备方法同实施例一.1。以对硝基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到4-(4-氯苯基)-2-(3-(3，4-二甲基苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-吡唑-1-yl)噻唑。产率67％，mp149-150℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.29(s，6H)；3.37-3.49(dd，J1＝6.45Hz，J2＝17.39Hz，1H)；3.91-4.04(dd，J1＝12.28Hz，J2＝18.09Hz，1H)；5.57-5.64(dd，J1＝6.23Hz，J2＝11.76Hz，1H)；7.26-7.30(m，1H)；7.33-7.41(m，5H)；7.44-7.51(m，1H)；7.55-7.63(m，3H)；7.73-7.78(m，2H).MS(ESI)488.1(C26H21ClN4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd for C26H21ClN4O2SC，63.86；H，4.33；N，11.46％；FoundC，63.99；H，4.23；N，11.31％. 实施例十五2-[5-(4-氟苯基)-3-(4-溴苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物15)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，得到2-[5-(4-氟苯基)-3-(4-溴苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率75％，mp166-167℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.33-3.41(dd，J1＝6.96Hz，J2＝18.12Hz，1H)；3.99-4.09(dd，J1＝12.09Hz，J2＝18.12Hz，1H)；5.67-5.73(dd，J1＝6.96Hz，J2＝11.91Hz，1H)；7.16-7.27(m，1H)；7.32-7.37(m，3H)；7.44-7.49(m，4H)；7.67-7.74(m，6H).MS(ESI)477.0(C24H17BrFN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17BrFN3SC，60.26；H，3.58；N，8.78％；FoundC，60.35；H，3.47；N，8.68％. 实施例十六2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物16)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对氯苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率73％，mp164-165℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.32-3.41(dd，J1＝6.78Hz，J2＝17.67Hz，1H)；4.00-4.10(dd，J1＝11.91Hz，J2＝17.93Hz，1H)；5.68-5.74(dd，J1＝6.84Hz，J2＝11.93Hz，1H)；7.21-7.28(m，1H)；7.32-7.37(m，3H)；7.41-7.47(m，4H)；7.67-7.75(m，6H).MS(ESI)493.0(C24H17BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17BrClN3SC，58.25；H，3.46；N，8.49％；FoundC，58.47；H，3.57；N，8.52％. 实施例十七2-[3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑]-4-苯基噻唑(化合物17)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对溴苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-(3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氢-1H-吡唑-1-yl)-4-苯基噻唑。产率70％，mp176-177℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.34-3.40(dd，J1＝6.78Hz，J2＝17.43Hz，1H)；3.99-4.09(dd，J1＝12.08Hz，J2＝17.91Hz，1H)；5.66-5.72(dd，J1＝5.76Hz，J2＝11.97Hz，1H)；7.22-7.27(m，1H)；7.32-7.39(m，3H)；7.55-7.57(m，4H)；7.66-7.74(m，6H).MS(ESI)537.0(C24H17Br2N3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17Br2N3SC，53.45；H，3.18；N，7.79％；FoundC，53.23；H，3.31；N，7.60％. 实施例十八2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基)-4-苯基噻唑(化合物18)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对甲基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基)-4-苯基噻唑。产率72％，mp154-156℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.31(s，3H)；3.30-3.38(dd，J1＝6.71Hz，J2＝17.63Hz，1H)；4.03-4.11(dd，J1＝11.93Hz，J2＝17.87Hz，1H)；5.65-5.72(dd，J1＝6.82Hz，J2＝11.96Hz，1H)；7.24-7.29(m，1H)；7.31-7.37(m，3H)；7.44-7.49(m，4H)；7.69-7.77(m，6H).MS(ESI)473.1(C25H20BrN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H20BrN3SC，63.29；H，4.25；N，8.86％；FoundC，63.40；H，4.20；N，8.64％. 实施例十九2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物19)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对甲氧基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率71％，mp152-154℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.30-3.41(dd，J1＝6.68Hz，J2＝17.41Hz，1H)；3.82(s，3H)；3.98-4.10(dd，J1＝12.12Hz，J2＝17.97Hz，1H)；5.62-5.71(dd，J1＝5.82Hz，J2＝11.91Hz，1H)；7.20-7.25(m，1H)；7.34-7.41(m，3H)；7.52-7.57(m，4H)；7.64-7.74(m，6H).MS(ESI)489.1(C25H20BrN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H20BrN3OSC，61.23；H，4.11；N，8.57％；FoundC，61.06；H，4.01；N，8.37％. 实施例二十2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羟基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物20)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对羟基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羟基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率67％，mp147-149℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.31-3.41(dd，J1＝6.87Hz，J2＝18.16Hz，1H)；3.98-4.12(dd，J1＝12.14Hz，J2＝18.06Hz，1H)；5.65-5.73(dd，J1＝6.92Hz，J2＝11.94Hz，1H)；7.14-7.27(m，1H)；7.31-7.37(m，3H)；7.43-7.52(m，4H)；7.65-7.73(m，6H).MS(ESI)475.0(C24H18BrN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H18BrN3OSC，60.51；H，3.81；N，8.82％；FoundC，60.34；H，3.83；N，8.67％. 实施例二十一2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑(化合物21)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对硝基苯甲醛代替对氟苯甲醛，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-苯基噻唑。产率65％，mp138-140℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.35-3.43(dd，J1＝6.69Hz，J2＝17.57Hz，1H)；4.03-4.15(dd，J1＝11.93Hz，J2＝17.89Hz，1H)；5.65-5.73(dd，J1＝6.81Hz，J2＝11.97Hz，1H)；7.24-7.28(m，1H)；7.35-7.39(m，3H)；7.45-7.53(m，4H)；7.64-7.73(m，6H).MS(ESI)504.0(C24H17BrN4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H17BrN4O2SC，57.04；H，3.39；N，11.09％；FoundC，56.90；H，3.25；N，10.88％. 实施例二十二2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氟苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物22)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氟苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率70％，mp184-185℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.33-3.42(dd，J1＝18.15Hz，J2＝6.84Hz，1H)；4.02-4.10(dd，J1＝17.96Hz，J2＝11.91Hz，1H)；5.63-5.72(dd，J1＝11.94Hz，J2＝6.61Hz，1H)；7.34(s，1H)；7.36-7.42(m，4H)；7.56-7.62(m，2H)；7.69-7.76(m，6H).MS(ESI)511.0(C24H16BrClFN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H16BrClFN3SC，56.21；H，3.14；N，8.19％；FoundC，56.36；H，3.01；N，8.35％. 实施例二十三2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物23)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对氯苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-氯苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率68％，mp170-173℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.34-3.39(dd，J1＝6.43Hz，J2＝17.04Hz，1H)；4.00-4.10(dd，J1＝12.14Hz，J2＝17.93Hz，1H)；5.67-5.73(dd，J1＝6.24Hz，J2＝11.76Hz，1H)；7.36(s，1H)；7.37-7.41(m，4H)；7.53-7.57(m，2H)；7.65-7.73(m，6H).MS(ESI)527.0(C24H16BrCl2N3S，[M+H]+).Anal.Calcd forC24H16BrCl2N3SC，54.46；H，3.05；N，7.94％；FoundC，54.23；H，3.04；N，7.86％. 实施例二十四2-[3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物24)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对溴苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3，5-二(4-溴苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率64％，mp180-182℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.35-3.41(dd，J1＝18.1Hz，J2＝6.8Hz，1H)；4.00-4.10(dd，J1＝17.9Hz，J2＝11.9Hz，1H)；5.66-5.72(dd，J1＝11.9Hz，J2＝6.6Hz，1H)；7.36(s，1H)；7.39-7.43(m，4H)；7.55-7.58(m，2H)；7.67-7.74(m，6H).MS(ESI)571.0(C24H16Br2ClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C24H16Br2ClN3SC，50.24；H，2.81；N，7.32％；FoundC，50.01；H，2.89；N，11.34％. 实施例二十五2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物25)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对甲基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率67％，mp183-184℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)2.30(s，3H)；3.31-3.39(dd，J1＝6.37Hz，J2＝17.21Hz，1H)；4.02-4.13(dd，J1＝12.08Hz，J2＝17.91Hz，1H)；5.64-5.73(dd，J1＝6.17Hz，J2＝11.73Hz，1H)；7.37(s，1H)；7.39-7.45(m，4H)；7.51-7.57(m，2H)；7.63-7.75(m，6H).MS(ESI)507.0(C25H19BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H19BrClN3SC，59.01；H，3.76；N，8.26％；FoundC，58.87；H，3.85；N，8.07％. 实施例二十六2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物26)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对甲氧基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-甲氧基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率65％，mp191-193℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.31-3.39(dd，J1＝6.37Hz，J2＝17.21Hz，1H)；3.84(s，3H)；4.02-4.11(dd，J1＝12.15Hz，J2＝17.94Hz，1H)；5.68-5.75(dd，J1＝6.26Hz，J2＝11.69Hz，1H)；7.36(s，1H)；7.36-7.45(m，4H)；7.54-7.59(m，2H)；7.61-7.73(m，6H).MS(ESI)523.0(C25H19BrClN3S，[M+H]+).Anal.Calcd for C25H19BrClN3SC，57.21；H，3.65；N，8.01％；FoundC，57.05；H，3.61；N，7.79％. 实施例二十七2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羟基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物27)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对羟基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-羟基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑。产率62％，mp175-176℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.32-3.37(dd，J1＝6.51Hz，J2＝17.23Hz，1H)；4.03-4.14(dd，J1＝12.21Hz，J2＝17.89Hz，1H)；5.65-5.73(dd，J1＝6.31Hz，J2＝11.73Hz，1H)；7.35(s，1H)；7.35-7.40(m，4H)；7.52-7.59(m，2H)；7.64-7.71(m，6H).MS(ESI)509.0(C24H17BrClN3OS，[M+H]+).Anal.Calcd forC24H17BrClN3OSC，56.43；H，3.35；N，8.23％；FoundC，56.29；H，3.24；N，8.14％. 实施例二十八2-[3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-1-吡唑基]-4-(4-氯苯基)噻唑(化合物28)的制备
制备方法同实施例一.1。以对溴苯乙酮代替3，4-二甲基苯乙酮，以对硝基苯甲醛代替对氟苯甲醛，以α-溴代对氯苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到2-(3-(4-溴苯基)-5-(4-硝基苯基)-4，5-二氢-1H-吡唑-1-yl)-4-(4-氯苯基)噻唑。产率63％，mp195-197℃.1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)3.35-3.43(dd，J1＝18.09Hz，J2＝6.78Hz，1H)；4.01-4.13(dd，J1＝17.87Hz，J2＝11.96Hz，1H)；5.61-5.72(dd，J1＝11.91Hz，J2＝6.57Hz，1H)；7.35(s，1H)；7.37-7.42(m，4H)；7.57-7.65(m，2H)；7.67-7.76(m，6H).MS(ESI)538.0(C24H16BrClN4O2S，[M+H]+).Anal.Calcd forC24H16BrClN4O2SC，53.40；H，2.99；N，10.38％；FoundC，53.52；H，3.14；N，10.44％. 实施例二十九新型含有吡唑环的噻唑类衍生物的体外抗肿瘤活性研究 采用MTT[3-(4，5)-双甲基-2-噻唑-(2，5)-苯基溴化四氮唑蓝]法来测定噻唑类衍生物对人体口腔上表皮癌细胞株(KB)和人白血病细胞株(K562)的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)。
(1)培养液(每升)的配制①悬浮细胞RPMI-1640培养粉一袋(10.4g)，新生牛血清100ml，青霉素溶液(20万U/ml)0.5ml，链霉素溶液(20万U/ml)0.5ml，加三蒸水溶解后，用5.6％的NaHCO3溶液调PH值至7.2-7.4，最后定容至1000ml。过滤灭菌。②贴壁细胞同上，再加入NaHCO3 2.00g，HEPES 2.38g。
(2)D-Hanks缓冲液(每升)的配制NaCl 8.00g，KCl 0.40g，Na2HPO4·12H2O 0.06g，KH2PO4 0.06g，NaHCO3 0.35g。高压灭菌。
(3)胰蛋白酶液的配制利用D-Hanks缓冲液配成浓度为0.5％胰蛋白酶液。过滤除菌。
(4)实验药液的配制将测试样品用少量的三蒸水溶解配成储备液，一般按实验最高浓度的10倍配制储备液。根据化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量DMSO助溶，再加三蒸水溶解。DMSO在培养液中的浓度不宜过大，加药后的每孔细胞悬液中DMSO的终浓度一般不超过0.05％-0.1％。储备液保存于-20℃冰箱中备用。
(5)人白血病细胞K562的培养为悬浮生长细胞，常规培养于RPMI-1640培养液内(含10％小牛血清、100U/ml链霉素)，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，每隔3-4天传代一次。传代时将原瓶中培养液转移至离心管中，1000rpm离心5min，弃去原培养液，加入等量新鲜培养液，吹打均匀，移取适量至新鲜培养瓶中，再补充新鲜培养液至原体积(培养液体积约为培养瓶容量的1/10)。
(6)人体口腔上表皮癌细胞KB的培养为贴壁生长细胞，常规培养于RPMI-1640培养液内(含10％小牛血清、100U/ml链霉素)，置37℃、5％O2培养箱中培养，每隔3-4天传代一次。传代时先弃去原培养液，再用D-Hanks缓冲液洗涤；然后用0.5％胰蛋白酶消化30秒左右，加入少量新鲜培养液终止消化；吹打，使贴壁细胞从培养瓶壁上脱落下来；移取适量至新鲜培养瓶中，再补充新鲜培养液至原体积(培养液体积约为培养瓶容量的1/10)。
(7)细胞孵育取对数生长期的2种肿瘤细胞，调细胞悬液浓度为1-1.5×105个ml-1。在96孔培养板中每孔加细胞悬液100μl，置37℃，5％CO2培养箱中培养24h。培养24h后，分别按设计加入药液。
(8)加药将测试药液按照最终浓度的浓度梯度分别加入到各个孔中，每个浓度设6个平行孔。实验分为药物试验组(分别加入不同浓度的测试药)、对照组(只加培养液和细胞，不加测试药)和空白组(只加培养液，不加细胞和测试药)。将加药后的96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中培养48h。阳性对照药物的活性按照测试样品的方法测定。
(9)存活细胞的测定在培养了48h后的96孔板中，每孔加MTT 40μl(用D-Hanks缓冲液配成4mg/ml)。在37℃放置4h后，移去上清液。每孔加150μl DMSO，振荡5min，使formazan结晶溶解。最后，利用自动酶标仪在570nm波长处检测各孔的光密度(OD值)。
抑制率的计算细胞生长的抑制率按照下列公式计算 生长抑制率＝(1-存活率)×100％＝[1-(OD实验-OD空白)/(OD对照-OD空白)]×100％(OD实验表示测试药物组的平均光密度，OD对照表示对照组的平均光密度，OD空白表示对照组的平均光密度)。
半数抑制浓度(IC50)定义为当50％的肿瘤细胞存活时的药物浓度。根据测定的光密度(OD值)，制作细胞生长抑制率的标准曲线，在标准曲线上求得其对应的药物浓度。
测得的IC50见表1所示。
表1本发明所列噻唑类化合物的对肿瘤细胞的抑制IC50值(μM)。
权利要求
1.一类含有吡唑环的噻唑类衍生物，其特征是它有如下通式
式中R3＝F、Cl、Br、CH3、OCH3、OH或NO2；R4＝Cl或H；当R1＝CH3，则R2＝CH3；当R1＝Br，R2＝H。
2.一种制备权利要求1所述的含有吡唑环的噻唑类衍生物的方法，其特征是它由如下步骤组成
步骤1.在无水乙醇中依次加入相应的取代苯乙酮酮和相应的取代苯甲醛，待溶解以后，逐滴加入40％氢氧化钠溶液，室温反应4-8h，取代苯乙酮和取代苯甲醛的物质的量之比为1∶1.1-1.3。待反应完全后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，先用水洗，再用乙醇重结晶，待干燥后得到固体；
步骤2.将步骤1得到的固体与氨基硫脲溶于无水乙醇中，完全溶解后，缓慢加入20％氢氧化钠溶液，加热回流8-12h，步骤1得到的固体与氨基硫脲的物质的量之比为1∶1.1-1.2，待反应物完全后，加入冰水中，不断搅拌，静置4-6h，析出固体，水洗后，用乙醇重结晶，干燥后得到含吡唑环的硫脲衍生物；
步骤3.将步骤2得到的固体与相应的取代-α-溴代苯乙酮溶于无水异丙醇中，室温搅拌4-6h，步骤2得到的固体与取代-α-溴代苯乙酮的物质的量之比为1∶1.05-1.1，待反应物完全反应后，真空抽滤，弃掉滤液，得到固体，水洗后，用乙醇重结晶，干燥后得到含有吡唑环的噻唑类衍生物。
3.根据权利要求2所述的制法，其特征是步骤1中，所述的无水乙醇的用量为每毫摩尔取代苯乙酮用4-5ml无水乙醇。
4.根据权利要求2所述的制法，其特征是步骤1中，所述的氢氧化钠溶液的用量为每毫摩尔取代苯乙酮用0.5-1.5ml 40％氢氧化钠溶液。
5.根据权利要求2所述的制法，其特征是步骤2中，所述的无水乙醇的用量为每毫摩尔氨基硫脲用4-5ml无水乙醇。
6.根据权利要求2所述的制法，其特征是步骤2中，所述的氢氧化钠溶液的用量为每毫摩尔氨基硫脲用1-2ml 20％氢氧化钠溶液。
7.根据权利要求2所述的制法，其特征是步骤3中，所述的无水异丙醇的用量为每毫摩尔取代-α-溴代苯乙酮用4-5ml无水异丙醇。
8.根据权利要求1所述的含有吡唑环的噻唑类衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
一类含有吡唑环的噻唑类衍生物，它有如下通式式中R3＝F、Cl、Br、CH3、OCH3、OH或NO2；R4＝Cl或H；当R1＝CH3，则R2＝CH3；当R1＝Br，R2＝H。本发明的新型含有吡唑环的硫脲类衍生物对人体口腔上表皮癌细胞株(KB)和人白血病细胞株(K562)有明显的抑制作用，因此本发明的硫脲类衍生物可以在制备抗肿瘤药物中应用。本发明公开了其制法。
文档编号A61K31/427GK101759695SQ20091026411
公开日2010年6月30日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者朱海亮, 吕鹏程, 阮班锋, 孙娟, 陈进 申请人:南京大学