专利名称：鬼臼毒素醇质体及其制备方法
技术领域：
本发明属制药领域，涉及一种鬼白毒素醇质体；本发明还涉及该醇质体的制备方 法。
背景技术：
鬼臼毒素(Podophyllotoxin，PPT)是从小檗科植物桃耳七、八角莲或六角莲的根 及根茎中提取分离得到的木脂素类化合物，它是世界卫生组织(WHO)推荐使用治疗尖锐湿 疣(CA)的一线药物，它的主要作用机理是通过其细胞毒作用使受人类乳头瘤(HPV)感染的 细胞死亡，常用的是0.5%的鬼臼毒素酊剂。CA占我国性传播疾病的第二位，其病因是HPV感染人体后寄居于基底细胞等角质 层形成细胞的细胞核内，其DNA可整合到宿主细胞的DNA中并进行表达，因而出现表皮的过 度增生甚至癌变。目前CA的治疗主要由冷冻、激光、微波、免疫疗法及外用药物等，临床主 要使用的就是鬼臼毒素酊剂。鬼臼毒素酊剂虽然能去除肉眼可见的病变，但过量大面积的 使用会产生严重的毒副作用，而脂质体虽然能够减少不良反应，但是其作用也仅限于皮肤 表层，所以难以消除皮肤深部的HPV潜伏感染而导致其复发。2000年，以色列Touitou等的研究小组对另一种新型脂质体——醇质体 (Ethosomes)进行了报道，其是在常规脂质体中添加高浓度的醇制备的含醇脂质体。醇质体 不仅能够渗入皮肤深部，还能够与细胞膜脂质融合，渗入细胞内部，因此将鬼白毒素制成醇 质体可以达到减少用药量，增加疗效减少复发及毒副作用的目的，具有一定的临床意义。
发明内容
针对现有临床常用的鬼白毒素酊剂在治疗尖锐湿疣(CA)存在的、会产生严重毒 副作用的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种鬼白毒素醇质体，以提高鬼白毒素 在皮肤内的滞留量，减少全身毒副作用及局部刺激性；本发明所要解决的技术问题还包括 提出鬼白毒素醇质体的制备方法。为了解决上述技术问题，本发明提供的载药醇质体的活性组分为鬼白毒素，鬼臼 毒素包封于醇质体中，所用载药脂质材料为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或者二棕榈酰磷脂 酰胆碱，鬼臼毒素醇质体粒径范围为50 300nm。优选地，本发明上述鬼臼毒素醇质体的含醇量为20 50%，脂质含量为2 5%， 载药量为0. 1 1.0%，包封率为30 90%。本发明上述鬼白毒素醇质体可通过下述两种方法制备一、注入法将鬼白毒素与载药脂质材料置于密闭容器中，在磁力搅拌状态下加入 乙醇使其溶解，恒速缓慢滴入2 5倍量的水继续恒速搅拌0. 5 lh，于冰水浴中探头超声 后过孔径为0. 22 0. 5 μ m的微孔滤膜，即得鬼臼毒素醇质体。二、薄膜超声法将鬼臼毒素与磷脂类溶于甲醇与氯仿的体积比为(3-5) 1的混 合溶液中，溶解后加入茄型瓶中，在25 50°C下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂，
3使脂质在器壁上形成均勻薄膜，加入一定体积的乙醇水溶液，旋转水合，与冰水浴中探头超 声0. 5 Ih后过孔径为0. 22 0. 5 μ m的微孔滤膜，即得鬼臼毒素醇质体。本发明鬼白毒素醇质体性质稳定，可以按照常规方法将其制成贴剂、凝胶剂等多 种外用剂型。目前临床常用的0. 5%鬼臼毒素酊剂含有60 80%的乙醇，高浓度的乙醇对皮肤 有强烈的刺激作用，且用药面积过大会带来全身毒性，且临床实验证明该制剂由于不能作 用到皮肤深部而极其容易复发。随后的实施例将证明，本发明含鬼白毒素醇质体的局部刺激性较小，与酊剂及脂 质体相比增加了皮肤内的滞留量而减少了透过量，且醇质体与细胞膜具有良好的生物相容 性，可以渗入细胞内部，这对降低疾病的复发具有重要的意义。
图1是鬼臼毒素醇质体的脂质囊泡的电镜扫描图。图2是鬼臼毒素醇质体的粒径分布图。图3是鬼白毒素醇质体与其他给药系统24h大鼠皮肤体外累积渗透量。
具体实施例方式下面结合附图和具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说 明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术 人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限 定的范围。本发明以下实施例对制备得到的鬼白毒素醇质体的粒径、包封率和载药量等指标 采用以下措施进行如下评价和表征1、鬼臼毒素醇质体的透射电镜(TEM)照片样品加适量乙醇水溶液稀释，滴加在覆盖碳膜的铜网上，用2.0%磷钨酸负染，于 透射电镜下观察，放大10万倍拍摄透射电镜照片，如图1所示。2、测定鬼臼毒素醇质体的粒径将鬼白毒素醇质体用激光粒度分析仪(Mcomp 380/ZLS)测定鬼白毒素醇质体的 粒径，如图2所示。3、测定鬼白毒素醇质体的包封率采用微柱离心法分离鬼白毒素醇质体和游离药物，HPLC法测定游离药物浓度，根 据公式计算其包封率。4、鬼白毒素醇质体体外经皮渗透特性考察采用Tp-5智能透皮扩散仪，离体SD大鼠腹部皮肤为渗透屏障，以累计渗透量为指 标，用HPLC测定鬼白毒素Mh的累积渗透速率及皮肤滞留量，研究鬼白毒素醇质体的体外 渗透特性。实施例1称取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量> 95% )置于密闭容器 中，加入3mL无水乙醇置于磁力搅拌器上，在37°C，700rpm密闭条件下边变搅拌边缓慢注入
42倍量的水，注完后继续搅拌5min，然后在冰水浴条件下探头超声0. 5h,最后过0. 45 μ m微 孔滤膜，即得。经检测，本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为83nm，包封率为51 %。实施例2称取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量> 95% )溶解于5mL甲 醇氯仿(体积比为3 1)混合溶剂中，将该溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂，并真空保持30min，使脂质在器壁上形成均勻薄 膜，加入IOmL的30%乙醇水溶液，旋转水合30min，室温放置，于冰水浴中探头超声5min，过 0. 22 μ m微孔滤膜，即得。经检测，本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为80nm，包封率为49. 5%。实施例3称取30mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量> 95% )溶解于3mL甲 醇氯仿(体积比为4 1)混合溶剂中，将该溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂，并真空保持30min，使脂质在器壁上形成均勻薄 膜，加入SmL的35%乙醇水溶液，旋转水合30min，室温放置，于冰水浴中探头超声2min，过 0. 50 μ m微孔滤膜，即得。经检测，本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为157nm，包封率为80. 3%。实施例4称取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量> 95% )溶解于IOmL甲 醇氯仿(体积比为5 1)混合溶剂中，将该溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂，并真空保持30min，使脂质在器壁上形成均勻薄 膜，加入15mL的25%乙醇水溶液，旋转水合30min，室温放置，于冰水浴中探头超声lOmin， 过0. 30 μ m微孔滤膜，即得。经检测，本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为497nm，包封率为30. 0%。实施例5称取30mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量> 95% )溶解于5mL甲 醇氯仿(体积比为3.5 1)混合溶剂中，将该溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水 浴温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂，并真空保持30min，使脂质在器壁上形成均勻 薄膜，加入IOmL的30%乙醇水溶液，旋转水合30min，室温放置，于冰水浴中探头超声5min， 过0. 40 μ m微孔滤膜，即得。经检测，本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为lMnm，包封率为42. 3%。实施例5称取25mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱含量> 95% )溶解于3mL甲 醇氯仿(体积比为4. 5 1)混合溶剂中，将该溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水 浴温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂，并真空保持30min，使脂质在器壁上形成均勻 薄膜，加入8mL的30%乙醇水溶液，旋转水合30min，室温放置，于冰水浴中探头超声2min， 过0. 35 μ m微孔滤膜，即得。经检测，本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为57nm，包封率为89. 5%。实施例6
以SD大鼠腹部皮肤为媒介，Franza单室扩散池为体外模型，用HPLC法测定透过 皮肤及皮肤内的鬼白毒素含量，求算稳态透皮速率，皮肤滞留量，考察不同给药形式(鬼臼 毒素酊剂、不同剂量的鬼白毒素脂质体、鬼白毒素游离药物与空白醇质体的物理混合物及 鬼臼毒素乙醇水混悬液)对鬼白毒素经皮渗透的影响。研究结果如表1和图3显示，相较 于其它给药系统鬼白毒素醇质体具有较大的皮肤滞留量及较小的透皮速率。表1.鬼白毒素醇质体与其他给药系统24h大鼠皮肤皮肤滞留量
权利要求
1.一种鬼白毒素醇质体，其特征在于，鬼白毒素包封于醇质体中，载药脂质材料为磷脂 酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或者二棕榈酰磷脂酰胆碱，粒径为50 300nm。
2.按权利要求1所述的鬼白毒素醇质体，其特征在于，含醇量为20 50%，脂质含量 为2 5%，载药量为0. 1 1. 0%，包封率为30 90%。
3.权利要求1或2所述的鬼白毒素醇质体的制备方法，其特征是，将鬼白毒素与载药脂 质材料置于密闭容器中，在磁力搅拌状态下加入乙醇使其溶解，恒速缓慢滴入2 5倍量的 水继续恒速搅拌0. 5 lh，于冰水浴中探头超声后过孔径为0. 22 0. 5 μ m的微孔滤膜，即 得鬼白毒素醇质体。
4.权利要求1或2所述的鬼白毒素醇质体的制备方法，其特征是，将鬼白毒素与载药脂 质材料溶于甲醇与氯仿体积比为(3-5) 1的混合溶液中，溶解后加入茄型瓶中，在25 50°C下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂，使脂质在器壁上形成均勻薄膜，加入处方 量的乙醇水溶液，旋转水合，于冰水浴中探头超声0. 5 Ih后过孔径为0. 22 0. 5 μ m的 微孔滤膜，即得鬼白毒素醇质体。
全文摘要
本发明公开了一种鬼臼毒素醇质体，鬼臼毒素包封于醇质体中，载药脂质材料为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或者二棕榈酰磷脂酰胆碱，粒径为50～300nm。本发明鬼臼毒素醇质体可制成贴片、凝胶等外用剂型，能减少用药量，达到增加疗效减少复发及毒副作用的目的。本发明还公开了上述鬼臼毒素醇质体的两种制备方法。
文档编号A61P31/20GK102144972SQ20101010801
公开日2011年8月10日 申请日期2010年2月9日 优先权日2010年2月9日
发明者于燕燕, 冯年平, 施晓琴, 翁海挺, 赵继会 申请人:上海中医药大学