专利名称：一种中药提取的g6凝集素及其在排毒稳压、软化血管、防并发中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，特别涉及一种中药提取的G6凝集素及其在排毒稳压、软化血管、防并发中的用途。
背景技术：
凝集素(lectin)是动物细胞和植物细胞都能够合成和分泌的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA),通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina, ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等,凝集素是它们的总称。凝集素在细胞识别和粘着反应中起重要作用，主要是促进细胞间的粘着。凝集素最大的特点在于它们能识别糖蛋白和糖肽中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞膜表面的碳脂化合物决定簇。一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合的能力，因此，凝集素可以作为一种探针来研究细胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多价结合能力，能与荧光素、生物素、酶、胶体金和铁蛋白等示踪物结合，从而在光镜与/或电镜水平显示其结合部位。凝集素不仅具有凝集诸如血细胞、淋巴细胞、精子细胞等作用，而且参与了生物体内一些重要的生理和药理过程，因此是研究生物体内细胞癌变、受精、分化及分子识别等生命过程极其有用的工具，同时在临床医学检验上有着重要地位，而且是抗肿瘤药物生产所需的促有丝分裂原。近年来还报道某些凝集素对艾滋病毒等也有抑制作用，并应用于实验性治疗。但是到目前为止，还未见凝集素在高血压以及其他心脑血管疾病治疗中作用的研究报道。尽管国内现有的 高血压治疗方式多种多样包括中药，西药，理疗仪器，但令人遗憾的是每种方式都有其弊端，西药降压快速但稳压效果不好，毒副作用巨大，不能阻止高血压并发症的发生，我国目前有接近2亿高血压人群，而服用西药的人群占所有高血压人群的四分之三，大多数患者知道西药的副作用及弊端，可在无药可选的情况下，只有选择西药；而中药服用不便，药效流失严重；理疗仪只能缓解一时的症状。因此，找到一种既能够平稳降压，又能够降低降压西药带来的毒副作用的生物分子已成当务之急。
发明内容
本发明要解决的技术问题为针对现有技术中高血压患者服用降压西药毒副作用无法排除，且易有并发症发生的问题，提供一种具有排毒稳压、通血管、防止并发症作用的中药提取G6凝集素。为解决上述技术问题，本发明提供的G6凝集素为从中药三七、杜仲、葛根、地黄、
丹参、昆布中通过提取得到，且含有丹参酸、丹参黄酮、三七皂苷、地黄皂苷、地黄素、昆布素、葛根黄酮、杜仲萜烯成分。
该凝集素的制备方案为步骤I)按相同质量称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药，研成50 100目药物混合粉末；步骤2)将上述得到的药物混合粉末加入5倍体积的Tris缓冲液，匀浆，4°C下浸泡12小时，离心，取上清；步骤3)将上述得到的上清利用高渗凝集的方法过滤，去除杂质，得到含有植物凝集素的滤液；步骤4)将上述滤液透析、浓缩、干燥，得到G6凝集素。本发明提供的G6凝集素是以祖 国中医传统组方为基础，选用对高血压，心脑血管有很好治疗作用的三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布六种中药原料提取独有的G6凝集素，不但具有植物凝集素的特性，同时具有恢复人体交感神经系统的调节功能，在稳定高血压及其并发症的改善上有着全新的突破。其中三七又名田七，是我国特有的名贵中药材。清朝药学著作《本草纲目拾遗》中记载“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药中之最珍贵者。”三七具有扩张血管、降低血压，改善微循环，增加血流量，预防和治疗心脑组织缺血、缺氧症的功能与作用。杜仲为杜仲科植物杜仲的干燥树皮，是中国名贵滋补药材。具补肝肾、强筋骨、降血压、安胎等诸多功效。《神农本草经》列为上品。谓其“主治腰膝痛，补中，益精气，坚筋骨，除阴下痒湿，小便余浙。久服，轻身耐老。”杜仲是中国特有药材，其药用历史悠久，在临床有着广泛的应用。葛根，为豆科植物野葛，含多种黄酮成分如异黄酮成分葛根素、葛根素木糖甙、大豆黄酮、大豆黄酮甙及谷留醇、花生酸，又含多量淀粉。明朝著名的医学家李时珍对葛根进行了系统的研究，认为葛根的茎、叶、花、果、根均可入药。《本草纲目》载葛根，性凉、气平、味甘，具清热、降火、排毒诸功效。现代医学研究表明葛根中的异黄酮类化合物葛根素对闻血压、闻血脂、闻血糖和心脑血管疾病有一定疗效。地黄为玄参科多年生草本植物,味甘、苦,性寒。化学成分以式类为主，其中又以环烯醚萜甙类为主。现代医学实验证明，地黄70%甲醇提取物抑制ADP引起的大鼠血小板聚集，并有抗凝血酶作用，对内毒素引起的大鼠弥漫性血管内凝血有对抗作用，因此对各类心脑血管疾病有辅助治疗作用。丹参又名赤参，紫丹参，红根等。其主要含有脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸成分，还含黄酮类，三萜类，留醇等其他成分。现代药理学实验表明，丹参具有加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量，扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，使血流增加的功效，并且，丹参能够改善微循环，提高纤溶酶活性；延长出、凝血时间；抑制血小板聚集。丹参能使主动脉粥样斑块形成面积明显减少，血清总胆固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低。丹参可抑制高脂膳食家兔的血脂上升。通过研究发现丹参素还能抑制细胞内源性胆固醇的合成，降低血脂。昆布为海带科植物海带的叶状体或者翅藻科植物，其化学成分含有藻胶素、甘露醇、半乳聚糖、海带氨酸、海带聚糖、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、维生素B1、C、P和磺、钾等。昆布具有降血脂和抗凝作用，昆布中的海带多糖经多次灌胃，能明显地抑制高血脂鸡血清总胆固醇、甘油三酯的含量上升，并能减少鸡主动脉内膜粥样斑块的形成及发展。本发明提供的G6凝集素是从上述六味中药中，利用现代高渗凝集技术提取出来的生物活性物分子。目前国内现有的中药提纯技术不外乎水煎醇沉、过滤、浓缩，酶解等几种方式，这些传统提纯工艺已经越来越多的暴露出问题，如耗费原料巨大，药效流失，纯度不能保证等
坐寸ο而G6凝集素的提纯工艺采用的是国际上先进的高渗凝集技术，彻底避免了这些问题的出现，高渗凝集技术能够准确的选择出中药中对疾病有益的成分，将其准确识别，提纯，凝集出来，且采用该技术提取的G6凝集素，具有极高的渗透性，便于人体吸收，利用，能大大提高其对疾病的辅助治疗效果。高渗凝集技术以其高效、节能、环保和分子级分离等特性，已广泛地应用于医药、食品加工等领域，成为现代提纯技术领域最先进的技术之一。被公认为21世纪最重大产业技术之一的高渗凝集技术，是一种新兴的绿色工业科技。与常规的离心分离、沉降、过滤、萃取等方法相比，高渗凝集技术具有的明显潜在优势。随着近几年来人们对高渗凝集技术的大力开发以来，已开发出适合高血压，心脑血管，肿瘤等各种疾病的治疗产品。尤其是针对高血压开发出了极具代表性的G6凝集素，克服了传统中药，西药作用不全面，药效单一等弊端。中药所含化学成分很复杂，通常有糖类、氨基酸、蛋白质、油脂、蜡、酶、色素、维生素、有机酸、鞣质、无机盐、挥发油、生物碱、甙类等。这些成分中即有有效成分，又有无效杂质，如不尽量去除杂质，会影响制剂的质量和稳定性，而高渗凝集技术则具有极高的识别性和选择性可以将其中对疾病有益的成分完整的分离出来。高渗凝集技术采 用阶梯式过滤分离药液，合理地运用多次分离方法去除药液中的非药用等杂质。并对分离出的药液进行有效的纯化，滤除蛋白质、淀粉、果胶、鞣质等大分子物质以及微生物，减少水溶性有效成分的损失，使中药有效成分基本无截留。采用高渗凝集技术对药液进行精密过滤以去除鞣质、淀粉等杂质，取代一次醇沉，减少醇沉次数，直至无醇化生产。从而替代了传统的水提醇沉法工艺，缩短生产周期，达到药液澄明及无醇化，纯度高，利于人体吸收的目的。本发明提供的G6凝集素包含有多种有效成分，其中包括丹参酸、丹参黄酮、三七皂苷、地黄皂苷、地黄素、昆布素、葛根黄酮和杜仲萜烯。本发明实施例中，发明人对制备的G6凝集素进行了活性测定，结果表明，用本发明方法制备的G6凝集素具有使红细胞凝集的活力，并且在效果上要优于大豆凝集素标准品O在本发明的实施例中，发明人还对G6凝集素的降压作用和对降压药所带来毒副作用的抑制效果进行了研究。结果表明，本发明制备的G6凝集素单独使用具有很好的降压作用；当与降压药联合使用时，其降压效果更好，并与空白对照组有显著差异，且优于单独使用降压药的情况；当与降压药联合使用时，能够消除降压药所带来的毒副作用。本发明的主要优点如下I)本发明从六味具有降压排毒、通血管、防治高血压并发症的中药中提取了 G6凝集素，其不但有植物凝集素的特性，与西药一起服用还能解除西药给人体带来的肝肾损伤，同时具有恢复人体交感神经系统的调节功能，在稳定血压、控制并发症上有良好的功效；2)本发明所采用的高渗凝集技术能够准确的选择出中药中对疾病有益的成分，将其准确识别，提纯，凝集出来，且采用该技术提取的G6凝集素，具有极高的渗透性，便于人体吸收，利用，能大大提高其对疾病的辅助治疗效果；3)本发明提供的G6凝集素因其是纯天然的植物制剂，是通过对患者身体状况的整体调理来达到最终稳定血压，防止心脑血管疾病发生的目的，因此对高血压及心脑血管并发症的改善效果平稳、循序渐进。
具体实施例方式本发明公开了一种中药提取的G6凝集素，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供的技术方案为步骤I)按相同质量称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药，研成50 100目药物混合粉末； 步骤2)将上述得到的药物混合粉末加入5倍体积的Tris缓冲液，匀浆，4°C下浸泡12小时，离心，取上清；步骤3)将上述得到的上清利用高渗凝集的方法过滤，去除杂质，得到含有植物凝集素的滤液；
步骤4)将上述滤液透析、浓缩、干燥，得到G6凝集素。为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例1 :G6凝集素的制备称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药各50克，研成50目细粉，加入5倍体积的 Tris 缓冲液(50mmoI /T, Tris-HCl, Immol /T, MgCl2, Immol /T, CaCl2, ρΗ8· O),勻衆,4°C下浸泡12小时。4°C, 3000rpm离心15min,取上清。用高渗凝集的方法将所得上清进行过滤，滤除蛋白质、淀粉、果胶、鞣质等大分子物质以及微生物，取滤液，用50倍体积的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小时，浓缩，干燥，得到G6凝集素。对所得蛋白质进行定量分析，结果为300g中成药粉末得到G6凝集素蛋白250mg。实施例2 G6凝集素的制备称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药各100克,研成100目细粉,加入5倍体积的 Tris 缓冲液(50mmoI /T, Tris-HCl, Immol/!,MgCI2,1 mmol /T, CaCl2,ρΗ8· O),勻衆,4°C下浸泡12小时。4°C, 3000rpm离心15min,取上清。用高渗凝集的方法将所得上清进行过滤，滤除蛋白质、淀粉、果胶、鞣质等大分子物质以及微生物，取滤液，用50倍体积的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小时，浓缩，干燥，得到G6凝集素。对所得蛋白质进行定量分析，结果为600g中成药粉末得到G6凝集素蛋白550mg。实施例3 G6凝集素的制备称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药各70克，研成80目细粉，加入5倍体积的 Tris 缓冲液(50mmoI /T, Tris-HCl, lmmol/LMgCl2, lmmol/L CaCl2,ρΗ8· O),勻衆,4°C下浸泡12小时。4°C, 3000rpm离心15min,取上清。用高渗凝集的方法将所得上清进行过滤，滤除蛋白质、淀粉、果胶、鞣质等大分子物质以及微生物，取滤液，用50倍体积的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小时，浓缩，干燥，得到G6凝集素。对所得蛋白质进行定量分析，结果为420g中成药粉末得到G6凝集素蛋白370mg。实施例4 G6凝集素活力测定本发明采用兔红细胞凝集实验检测凝集素的凝集活力。 阳性对照Sigma大豆凝集素标准品(溶液A)样品实施例1制备的G6凝集素(溶液B)，实施例2制备的G6凝集素(溶液C)，实施例3制备的G6凝集素(溶液D)阴性对照0·5mol/L PBS (溶液 E)抽取家兔耳源静脉血，采集红细胞，用生理盐水配成2%的红细胞悬液。在V型凝血板上，将阳性对照和样品分别按不同比例稀释，每孔加25ul，在加入2%新鲜红细胞悬液25ul，震荡摇匀后，25°C放置2小时，肉眼观察，无凝集现象时红细胞沉积在V型孔底部呈大红点状，有凝集现象时呈网 状不下沉。收集不同稀释倍数时凝集情况，结果见表I所示。结果表明，实施例1-3所制备的G6凝集素活力与阳性对照无显著差异(P > O. 05)，说明利用本发明所述方法得到的G6凝集素具有使红细胞凝集的活力，而阴性对照组无凝集。特别值得注意的是，本发明实施例中制备的G6凝集素在稀释倍数较低的情况下仍具有很好的凝集活力，说明本发明所得G6凝集素在效果上要优于大豆凝集素标准品。表I不同样品兔红细胞凝集效价比较
权利要求
1.一种G6凝集素，其特征在于，从中药三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布中通过提取得到，且含有丹参酸、丹参黄酮、三七皂苷、地黄皂苷、地黄素、昆布素、葛根黄酮、杜仲萜烯成分。
2.一种制备如权利要求1所述G6凝集素的方法，其特征在于，包括以下步骤 步骤I)按相同质量称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药，研成50 100目药物混合粉末； 步骤2)将上述得到的药物混合粉末加入5倍体积的Tris缓冲液，匀浆，4°C下浸泡12小时，离心，取上清； 步骤3)将所得上清利用高渗凝集的方法过滤，去除杂质，得到含有植物凝集素的滤液； 步骤4)将上述滤液透析、浓缩、干燥，得到G6凝集素。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述离心的转速为3000rpm，时间为15min，温度为40C ο
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4)所述透析使用的透析液为磷酸盐缓冲液。
5.如权利要求1所述G6凝集素在制备防治心脑血管疾病药物中的用途。
6.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述心脑血管疾病为高血压。
全文摘要
本发明公开了一种从中药三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布中提取的G6凝集素，该凝集素的制备方法为1)按相同质量称取三七、杜仲、葛根、地黄、丹参、昆布干药，研成50～100目药物混合粉末；2)将上述得到的药物混合粉末加入5倍体积的Tris缓冲液，匀浆，4℃下浸泡12小时，离心，取上清；3)将所得上清利用高渗凝集的方法过滤，去除杂质，得到含有植物凝集素的滤液；4)将上述滤液透析、浓缩、干燥，得到G6凝集素。本发明提供的G6凝集素不但具有植物凝集素的特性，同时具有恢复人体交感神经系统的调节功能，在稳定高血压及其并发症的改善上有着全新的突破。
文档编号A61K36/804GK103055011SQ201110321989
公开日2013年4月24日 申请日期2011年10月20日 优先权日2011年10月20日
发明者王学英 申请人:王学英