脂质结合核酸的制作方法

专利名称：脂质结合核酸的制作方法
脂质结合核酸本发明涉及一种能够结合脂质,优选磷脂、更优选I-磷酸鞘氨醇(sphingosine)的核酸分子；其用于分别制造药剂、诊断剂和检测剂的用途；一种包含所述核酸分子的组合物；一种包含所述核酸分子的复合物；一种用于使用所述核酸分子来筛选活性由脂质或脂质的类似物介导的拮抗剂的方法；以及一种用于检测所述核酸分子的方法。脂质和脂质衍生物因其作为细胞膜中的结构组分或作为β氧化作用或糖酵解的底物的功能而最为知名。近年来，脂质和脂质衍生物已被认定为一种在疾病中起重要作用的信号传导分子。存在生物活性脂质信号传导分子的许多实例，包括磷脂，诸如磷脂酸肌醇(phosphatidyl inositol)(缩写为 PI)、憐脂酸丝氨酸(phosphatidyl serine)
(缩写为PS)、二脂酰甘油(diacylglyceride)(缩写为DAG)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol)(缩写为PG)和磷脂酸(phosphatidic acid)(缩写为PA);溶血磷脂酰胆碱 (lysophosphatidyl choline)、血小板活化因子和心磷脂(cardiolipin)。脂质信号传导分子的其它实例包括类二十烧酸(eicosanoid),其涵盖大麻素(cannabinoid)、前列腺素(prostaglandin)、异类二十烧酸(isoeicosanoid)和白三烯(Ieukotriene)。脂质可充当第二信使或通过直接与其自身特定受体相互作用来起作用。脂质信号传导路径是通过各种不同刺激物活化的且涉及于一系列不同细胞过程(包括粘着、运动性、增殖、细胞凋亡和分化)的调控中。鞘脂及其衍生物具有细胞外和细胞内信号传导功能且在人疾病中起重要作用。另一且重要类别的脂质信号传导分子为鞘脂；其包括神经酰胺(ceramide)、神经酰胺-I-磷酸酯、鞘磷脂、鞘氨醇、鞘氨醇-I-磷酸酯、二氢鞘氨醇(sphinganine)和二氢鞘氨醇-I-磷酸酯。I-磷酸鞘氨醇(缩写为SlP)为一种380道尔顿(Dalton)的磷脂，分子式为C18H38NO5P0 SlP曾经被认为仅是神经酰胺的一种分解产物，目前已知其在不同生物过程，诸如细胞生长、细胞增殖、血管生成和淋巴细胞迁移中具有重要功能(关于综述，参见Kim等，Biochim Biophys Acta. 20091791:692-6 ;Maceyka等，J Lipid Res. 2009 50增刊:S272_6 ；Takabe 等，Pharmacol Rev. 200860 (2) : 181-95)。在SlP的其它功能之中，SlP具有抗细胞凋亡作用且促进细胞生长和增殖。其前体鞘氨醇和神经酰胺具有相反功能，从而诱导细胞周期阻滞和细胞死亡。因为SlP及其前体展现所述相反作用，所以认为主要由鞘氨醇磷酸酶和鞘氨醇激酶的相互影响控制的不同鞘氨醇代谢物的相对平衡而非其绝对量决定细胞命运。这个复杂调控系统称为“鞘脂变阻器(sphingolipid rheostat)”。新近研究已暗示SlP及其代谢物以及其前体神经酰胺为TNF- a、ILl β和其它细胞因子的第二信使。各种证据支持SlP作为负责细胞增殖和存活的第二信使的作用。然而，同时，许多SlP的生物作用为充当细胞表面上S IP的五个G蛋白偶联受体(缩写为S1PR)的配体的结果。最初鉴定为孤儿受体且命名为内皮分化基因(缩写为EDG)，其目前已重命名为 EDG1/S1P” EDG5/S1P2、EDG3/S1P3、EDG6/S1P4、EDG8/S1P5,且加以表征。各受体偶联于杂二聚G蛋白(Gq、GU G12-13)，从而活化下游信号传导分子，诸如Rho家族的小 GTP 酶(Zhou 和 Murthy, Am J Physiol Cell Physiol. 2004，286:C1130_C1138 ；Kume等，J Pharmacol Exp The r. 2007320:766-773)、有丝分裂原(mitogen)活化的蛋白质激酶(Guo 等，Eur J Biochem. 1998257:403-408 ;Sato 等，Mol Pharmacol. 199955:126-133 ；Dikic 等，Nature. 1996383:547-550.)、憐脂酶 C/D (Okamoto 等，J BiolChem. 1998273:27104-27110 ；Gonda 等，Biochem J. 1999337:67-75 ;Banno 等，JBiolChem. 1999274:27385-27391)等。SlPR的表达为广布的且SlP影响巨大范围的细胞反应，包括粘着、收缩、运动性、形态发生、增殖和分化，从而暗示SlP牵涉于血管张力的调控、伤口愈合、免疫细胞的迁移、神经元信号传导、血管生成、繁殖和心血管功能中。反应的范围取决于受体在细胞和组织中的表达样式和相应效应物。因此，在例如内皮细胞中，活化特定 SlPR 可具有与活化另一 SlPR 相反的作用(Lee 等，Mol Cell. 2001 8:693-704. ；Kimura等，Biochem J. 2000348:71-76. ;Ryu 等，Circ Res. 2002 90:325-332.)。活化一种 SlPR 可差异性调控 Rho 家族的 GTP 酶(Garcia 等，J Clin Invest. 2001108:689-701 ;Gon 等，ProcNatl Acad Sci USA. 2005102:9270-9275 ;Liu 等，J Clin Invest. 2000 106:951-961)。此夕卜，存在与其它生长因子信号传导路径的相互影响。存在于循环血液和淋巴中的SlP主要由血小板、活化肥大细胞和单核吞噬细胞制备且分泌。发现SlP的浓度介于O. ImM至ImM之间，有时可达5mM，但仅一部分可用于活化S1PR，因为大多数SlP结合于白蛋白(albumin)或其它血浆蛋白。内源性SlP水平的改变可导致病理生理学病状，包括炎症和自体免疫性疾病、哮喘、血管生成、心脏病、癌症、眼病和脑血管疾病。因为SlP的许多作用被认为由SlP与一种或若干种SlPR的相互作用或结合介导，所以治疗方法已集中于靶向受体。已鉴定并描述众多不同SlP受体拮抗剂和激动剂。其对各种SlPR的特异性和亲和力不同且因此显示各种功能概况。最先进的化合物芬戈莫德(Fingolimod)，也称为FTY720，为一种前药且在体内被磷酸化。磷酸化形式为SlPR SlP1,S1P3、SlP4和SlP5的激动剂且被证明在移植和自体免疫性疾病的模型中高度有效。其当前处于治疗多发性硬化症的3期临床试验中。由于不同SlPR具有相反作用，所以有兴趣鉴定对各种受体具有特定选择性的分子。干扰SlP依赖性病理生理学的另一方法在于影响内源性SlP水平。这个可通过靶向SlP激酶以改变通过使鞘氨醇磷酸化制备的SlP的量或通过靶向SlP磷酸酶以影响脱磷酸SlP的量来实现。影响内源性生物活性SlP水平的另一方法是通过由与中和剂的分子相互作用直接抑制SlP作用来实现。本发明描述一种中和SlP的方法。构成本发明的基础的问题在于提供一种工具，其特异性与脂质，优选磷脂、更优选SlP相互作用。更具体地，构成本发明的基础的问题在于提供一种基于核酸的工具，其特异性与脂质，优选磷脂、更优选SlP相互作用。构成本发明的基础的另一问题在于提供一种制造用于治疗人或非人疾病的药剂的工具，其中所述疾病的特征为脂质，优选磷脂、更优选S1P，直接或间接涉及于所述疾病的 致病机制中。构成本发明的基础的另一问题在于提供一种制造用于诊断疾病的诊断剂的工具，其中所述疾病的特征为脂质，优选磷脂、更优选S1P，直接或间接涉及于所述疾病的致病机制中。构成本发明的基础的这些和其它问题由所附独立权利要求的主题解决。优选实施方案可取自附属权利要求。更具体地，在也为第一方面的第一实施方案的第一方面，构成本发明的基础的问题由能够结合脂质的核酸分子解决。在第一方面的也为第一方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，核酸为活性由脂质介导的拮抗剂。在第一方面的也为第一方面的第一和第二实施方案的一实施方案的第三实施方案中，脂质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。在第一方面的也为第一方面的第一、第二和第三实施方案的一实施方案的第四实施方案中，核酸分子包含中心核苷酸链段，其中所述中心核苷酸链段包含核苷酸序列5， WAUUGCCGAWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，或·
5，WAUUGCCGWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，且其中脂质优选为I-磷酸鞘氨醇。在第一方面的也为第一方面的第四实施方案的一实施方案的第五实施方案中，中心核苷酸链段包含选自 5’AAUAGCCGUUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3 ’、5 ’ AAUAGCCGAUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3’ 和 5’ AAUAGCCGAAUGAAACGCCUUAAGAGAAGCACUAG 3’ 的组的核苷酸序列。在第一方面的也为第一方面的第四和第五实施方案的一实施方案的第六实施方案中，核酸分子在5’ _>3’方向上包含第一末端核苷酸链段、中心核苷酸链段和第二末端核苷酸链段，其中第一末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸，且第二末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸。在第一方面的也为第一方面的第四和第五实施方案的一实施方案的第七实施方案中，核酸分子在5’ _>3’方向上包含第二末端核苷酸链段、中心核苷酸链段和第一末端核苷酸链段，其中第一末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸，且第二末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸。在第一方面的也为第一方面的第六和第七实施方案的一实施方案的第八实施方案中，第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列 5’ CASX4X5X63’，其中X1为A或不存在，X2为G或不存在，X3为S或不存在，X4为S或不存在，X5为C或不存在，且X6 Su或不存在。在第一方面的也为第一方面的第六、第七和第八实施方案的一实施方案的第九实施方案中，第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’，其中a) X1 为 A, X2 为 G, X3 为 S, X4 为 S, X5 为 C,且 X6 为 U 或WX1 不存在，\为6，X3 为 S，X4 为 S，X5SC,且 X6 SU 或c) X1为A, X2为G, X3为S, X4为S, X5为C,且X6不存在或
(I)X1不存在，\为6，X3为S，X4为S，X5为C，且X6不存在。在第一方面的也为第一方面的第六、第七、第八和第九实施方案的一实施方案的第十实施方案中，a)第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’AGCGUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACG⑶3’或b)第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’GCGUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACGC 3’。在第一方面的也为第一方面的第六、第七和第八实施方案的一实施方案的第十一实施方案中，第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’，其中 a) X1不存在，X2不存在，X3为S，X4为S，X5为C，且X6不存在或WX1不存在，X2为G，X3为S，X4S S，X5不存在，且乂6不存在或CU1不存在，X2不存在，X3为S，X4为S，X5不存在，且X6不存在。在第一方面的也为第一方面的第六、第七、第八和第十一实施方案的一实施方案的第十二实施方案中，a)第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACG 3’或b)第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ GCUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CAGC 3’或c)第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ GGUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACC 3’，优选地第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACG 3’。在第一方面的也为第一方面的第六、第七和第八实施方案的一实施方案的第十三实施方案中，第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’，其中X1不存在，X2不存在，X3为S或不存在，X4为S或不存在，X5不存在，且X6不存在。在第一方面的也为第一方面的第六、第七、第八和第十三实施方案的一实施方案的第十四实施方案中，第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’GUG 3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CAC 3’。在第一方面的也为第一方面的第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和第十四实施方案的一实施方案的第十五实施方案中，中心核苷酸链段为结合I-磷酸鞘氨醇所必需。在第一方面的也为第一方面的第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四和第十五实施方案的一实施方案的第十六实施方案中，第一末端核苷酸链段和第二末端核苷酸链段任选彼此杂交,其中在杂交后,形成双链结构。在第一方面的也为第一方面的第十六实施方案的一实施方案的第十七实施方案中，双链结构由三至六个碱基对组成。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六和第十七实施方案的一实施方案的第十八实施方案中，核酸分子包含根据SEQ. ID. No 12至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，优选根据SEQ. ID. No 12、13、15、18、19、23至26,41和42中的任一者的核苷酸序列，更优选根据SEQ ID No 12、18、23、24、41和42中的任一者的核苷酸序列。在第一方面的也为第一方面的第一、第二和第三实施方案的一实施方案的第十九实施方案中，核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列或与其同源的核酸分子,其中同源性为至少85%。在第一方面的也为第一方面的第一、第二和第三实施方案的一实施方案的第二十实施方案中，核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 41的核苷酸序列或与其同源的核酸分子,其中同源性为至少85%。在第一方面的也为第一方面的第一、第二和第三实施方案的一实施方案的第二i 实施方案中，核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 42的核苷酸序列或与其同源的核酸分子，其中同源性为至少85%。在第一方面的也为第一方面的第一、第二和第三实施方案的一实施方案的第二十二实施方案中，相较于参照核酸分子，核酸分子的亲和力增加，其中所述参照核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中所述参照核酸分子由核糖核苷酸组成，其中所述核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中根据SEQ. ID. No. 18的核苷酸序 列的一或多个核苷酸为脱氧核糖核苷酸而非核糖核苷酸。在第一方面的也为第一方面的第二十二实施方案的一实施方案的第二十三实施方案中，核酸分子包含根据SEQ. ID. No 27至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，优选根据SEQ. ID. No 30、34至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，更优选根据SEQ. ID. No. 36、
37、39和40中的任一者的核苷酸序列。在第一方面的也为第一方面的第二十三实施方案的一实施方案的第二十四实施方案中，核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 36的核苷酸序列或与其同源的核酸分子,其中同源性为至少85%，其中所述同源核酸包含核糖核苷酸和至少一个脱氧核糖核苷酸。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三和第二十四实施方案的一实施方案的第二十五实施方案中，核酸分子包含修饰基团，其中相较于不包含所述修饰基团的核酸，包含所述修饰基团的所述核酸分子自生物体的排泄率降低。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三和第二十四实施方案的一实施方案的第二十六实施方案中，核酸分子包含修饰基团，其中相较于不包含所述修饰基团的核酸分子，包含所述修饰基团的所述核酸分子在生物体中的保留时间增加。在第一方面的也为第一方面的第二十五和第二十六实施方案的一实施方案的第二十七实施方案中，修饰基团选自包含生物可降解和非生物可降解修饰的组，所述修饰基团优选选自包含聚乙二醇、直链聚乙二醇、支链聚乙二醇、羟乙基淀粉、肽、蛋白质、多糖、固醇、聚氧化丙烯、聚氧基酰胺化物和聚(2-羟乙基)-L-谷氨酰胺的组。
在第一方面的也为第一方面的第二十七实施方案的一实施方案的第二十八实施方案中，修饰基团为聚乙二醇，优选由直链聚乙二醇或支链聚乙二醇组成，其中所述聚乙二醇的分子量优选为约20，OOODa至约120，OOODa、更优选约30，OOODa至约80，OOODa且最优选约 40，OOODa0在第一方面的也为第一方面的第二十七和第二十八实施方案的一实施方案的第二十九实施方案中，其中修饰基团为羟乙基淀粉，其中优选地，羟乙基淀粉的分子量为约50kDa至约lOOOkDa、更优选约IOOkDa至约700kDa且最优选200kDa至500kDa。在第一方面的也为第一方面的第二十五、第二十六、第二十七、第二十八和第二十九实施方案的一实施方案的第三十实施方案中，修饰基团经由连接子偶合于核酸分子，其中所述连接子为生物可降解连接子。在第一方面的也为第一方面的第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九和第三十实施方案的一实施方案的第三十一实施方案中，修饰基团偶合于核酸分子 的5’末端核苷酸和/或3’末端核苷酸和/或偶合于核酸分子的介于核酸分子的5’末端核苷酸与核酸分子的3’末端核苷酸之间的核苷酸。在第一方面的也为第一方面的第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十和第三十一实施方案的一实施方案的第三十二实施方案中，生物体为动物或人体，优选人体。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一和第三十二实施方案的一实施方案的第三十三实施方案中，核苷酸或形成核酸分子的核苷酸为L-核苷酸。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二和第三十三实施方案的一实施方案的第三十四实施方案中，核酸分子为L-核酸。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三和第三十四实施方案的一实施方案的第三十五实施方案中，核酸分子包含至少一个能够结合I-磷酸鞘氨醇的结合部分，其中所述结合部分由L-核苷酸组成。在第一方面的也为第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四和第三十五实施方案的一实施方案的第三十六实施方案中，核酸分子用于治疗和/或预防疾病的方法中。在第一方面的也为第一方面的第三十六实施方案的一实施方案的第三十七实施方案中，通过抑制血管生成和/或纤维化来治疗或改善疾病。在第一方面的也为第一方面的第三十六和第三十七实施方案的一实施方案的第三十八实施方案中，疾病为眼病，优选地，所述眼病选自包含以下的组年龄相关的黄斑变性(age-related macular degeneration)、伴有糖尿病性黃斑水肿的糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy with diabetic macular edema)、年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜色素上皮脱离(retinal pigmented epithelium detachment)、增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy)和年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜纤维化。在第一方面的也为第一方面的第三十六实施方案的一实施方案的第三十九实施方案中，通过抑制血管生成和/或增殖来治疗或改善疾病。在第一方面的也为第一方面的第三十六、第三十七、第三十八和第三十九实施方案的一实施方案的第四十实施方案中，疾病为癌症，优选地，所述癌症选自包含乳癌、卵巢 癌、黑素瘤(melanoma)、肺癌、增生(诸如前列腺增生)的组。在第一方面的也为第一方面的第三十六实施方案的一实施方案的第四十一实施方案中，疾病为炎性疾病，其中所述炎性疾病选自包含自体免疫性疾病、肺炎、败血症和创伤(诸如呼吸器诱发的肺损伤)的组。在第一方面的也为第一方面的第四i^一实施方案的一实施方案的第四十二实施方案中，自体免疫性疾病选自包含多发性硬化症(multiple sclerosis)、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘和炎性肠病的组。在也为第二方面的第一实施方案的第二方面，构成本发明的基础的问题由包含如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子和任选另一组分的药物组合物解决，其中所述另一组分选自包含药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的载体和药学活性剂的组。在第二方面的也为第二方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，药物组合物包含如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子和药学上可接受的载体。在也为第三方面的第一实施方案的第三方面，构成本发明的基础的问题通过使用根据第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第二十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第三十九、第四十、第四i 和第四十二实施方案中的任一者的用于制造药剂的核酸分子来解决。在第三方面的也为第三方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，药剂用于人医学中或用于兽医学中。在也为第四方面的第一实施方案的第四方面，构成本发明的基础的问题通过使用根据第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第二十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第三十九、第四十、第四十一和第四十二实施方案中的任一者的用于制造诊断工具的核酸分子来解决。在第三方面的也为第三方面的第一实施方案的一实施方案的第三实施方案中，药剂用于治疗和/或预防眼病、癌症或炎性疾病。在第三方面的也为第三方面的第三实施方案的一实施方案的第四实施方案中，眼病选自包含以下的组年龄相关的黄斑变性、伴有糖尿病性黃斑水肿的糖尿病性视网膜病变、年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜色素上皮脱离、增殖性玻璃体视网膜病变和年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜纤维化。在第三方面的也为第三方面的第三实施方案的一实施方案的第五实施方案中，癌症选自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、增生(诸如前列腺增生)的组。在第三方面的也为第三方面的第三实施方案的一实施方案的第六实施方案中，炎性疾病选自包含自体免疫性疾病、肺炎、败血症和创伤(诸如呼吸器诱发的肺损伤)的组。 在第三方面的也为第三方面的第六实施方案的一实施方案的第七实施方案中，自体免疫性疾病选自包含多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘和炎性肠病的组。在也为第五方面的第一实施方案的第五方面,构成本发明的基础的问题由包含根据第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第四十、第四十一和第四十二实施方案中的任一者的核酸分子和脂质的复合物解决，其中所述复合物优选为结晶复合物。在第五方面的也为第五方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，月旨质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。在也为第六方面的第一实施方案的第六方面，构成本发明的基础的问题通过使用根据第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第二十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第三十九、第四十、第四十一和第四十二实施方案中的任一者的用于检测脂质的核酸分子来解决。在第六方面的也为第六方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，月旨质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。在也为第七方面的第一实施方案的第七方面，构成本发明的基础的问题由一种筛选活性由脂质或所述脂质的类似物介导的拮抗剂的方法解决，所述方法包含下列步骤-提供活性由所述脂质和/或所述脂质的类似物介导的候选拮抗剂，-提供如第一方面的任一实施方案中定义的核酸，-提供在活性由所述脂质和/或所述脂质的类似物介导的拮抗剂存在下提供信号的测试系统，以及I.-确定活性由所述脂质介导的所述候选拮抗剂是否为所述脂质和/或所述脂质的类似物的拮抗剂。
在第七方面的也为第七方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，月旨质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。在也为第八方面的第一实施方案的第八方面，构成本发明的基础的问题由用于检测脂质的试剂盒解决，所述试剂盒包含根据第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一和第四十二实施方案中的任一者的核酸分子，其中所述脂质优选为磷脂，其中所述磷脂更优选为I-磷酸鞘氨醇。在也为第九方面的第一实施方案的第九方面，构成本发明的基础的问题由一种检测样品中的如第一方面的任一实施方案中定义的核酸的方法，其中所述方法包含以下步骤 a)提供捕获探针，其中所述捕获探针至少部分互补于如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子的第一部分；和检测探针，其中所述检测探针至少部分互补于如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子的第二部分，或替代地，所述捕获探针至少部分互补于如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子的第二部分且所述检测探针至少部分互补于如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子的第一部分；b)单独或组合添加所述捕获探针和所述检测探针至含有如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子或假定含有如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子的样品中；c)使所述捕获探针和所述检测探针同时或以任何顺序依序与如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子或其一部分反应；d)任选检测所述捕获探针是否与步骤a)中提供的如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子杂交；以及e)检测步骤c)中形成的由如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子和所述捕获探针及所述检测探针组成的复合物。在第九方面的也为第九方面的第一实施方案的一实施方案的第二实施方案中，检测探针包含检测工具，和/或其中捕获探针固定于载体，优选固体载体。在第九方面的也为第九方面的第一和第二实施方案的一实施方案的第三实施方案中，自反应移除不为复合物的一部分的任何检测探针以使在步骤e)中仅检测为复合物的一部分的检测探针。在第九方面的也为第九方面的第一、第二和第三实施方案的一实施方案的第四实施方案中，步骤e)包含以下步骤比较当捕获探针和检测探针在如第一方面的任一实施方案中定义的核酸分子或其一部分存在下杂交时由检测工具产生的信号与在不存在所述核酸或其一部分下由检测工具产生的信号。本发明是基于以下惊人发现a)有可能产生特异性结合脂质且对脂质具有高亲和力的核酸分子，所述脂质优选为磷脂、更优选为SlP;b)为根据本发明的核酸分子的所述核酸分子共有共同核苷酸序列，其中根据本发明的核酸分子的所述共同序列优选为根据本发明的核酸分子的结合特征所必需，更优选为结合SlP所必需；c)根据本发明的核酸分子对脂质，优选对磷脂、更优选对SlP的结合亲和力将通过用2’ -脱氧核糖核苷酸置换有限数目的核糖核苷酸来提高。所述核酸优选在本文中也称为根据本发明的核酸分子、根据本发明的核酸、本发明核酸或本发明核酸分子。就此而言，如果不相反指示，那么术语核酸及核酸分子以同义方式在本文中使用。可在单独或以任何组合使用核酸的本发明的任何方面实现如本文所述的根据本发明的核酸的特征。短核酸分子对脂质、磷脂且特别是SlP具有高结合亲和力的研究结果可被鉴定，
就此而言为惊人的，因为尽管如 ‘The aptamer handbook’ (Klussmann, Klussmann, S.(编著)；The Aptamer Handbook,第 I 版-2006 年 2 月，ffiley-VCH, Weinheim)中所述鉴定了针对几乎所有靶标类别(诸如肽、蛋白质、核酸、小分子、抗生素、氨基酸、核苷酸)的核酸分子，但迄今为止无核酸分子可被鉴定结合脂质、磷脂且特别是S1P。脂质，特别是磷脂的结构和电荷说明为何鉴定脂质结合核酸分子迄今为止尚未成功和/或从未加以考虑。诸如SlP的磷脂的主要特征为其具有不带电荷的脂族部分和一个带负电荷的磷酸基团。在考虑电荷和所述脂质的磷酸基团的负电荷下，惊人的是发明者可鉴定结合脂质、且更具体地结合磷脂的核酸分子。归因于核酸分子的糖骨架中的磷酸，核酸分子本身带负电荷。因此，核酸分子结合另一带负电荷的分子或部分不大可能。除电荷排斥之外，粘附也影响具有三维结构的核酸分子到达靶分子。尽管已公布结合小分子的若干核酸分子，但通常，针对小分子的核酸分子的亲和力在微摩尔范围内(James, 2000 Encyclopedia of Analytical Chemistry,第4848-4871页)，此致使其不适合供治疗使用。然而，根据本发明的最佳SlP结合核酸分子显示由Kd值表示的高结合亲和力，此允许在体内使用所述核酸分子，更具体地在治疗或诊断哺乳动物，优选人的方法中使用所述核酸分子。优选地，根据本发明的核酸分子的Kd值小于100nM、更优选小于50nM。在一实施方案中，根据本发明的核酸分子的Kd值等于或小于由5nM至53nM的范围限定的任何值。在另一实施方案中，根据本发明的核酸分子的IC5tl值等于或小于由5nM至31nM的范围限定的任何值。根据本发明的核酸分子特异性结合SlP (也称为D-赤-鞘氨醇-I-磷酸酯)，而非缺乏磷酸基团的D-赤-鞘氨醇。因为认为诸如SlP的脂质的许多作用由脂质与一种或若干种脂质受体(优选SlP受体)的相互作用且更具体地脂质与一种或若干种脂质受体的结合介导，所以治疗方法已集中在靶向脂质受体，特别是SlP受体。因此，本领域技术人员应了解根据本发明的核酸分子优选为活性由脂质，优选由磷脂、更优选由SlP介导的拮抗剂。已鉴定并描述众多不同SlP受体拮抗剂和激动剂，其由于其结合所述脂质而对这些脂质介导的活性具有影响。其对各种S1PR(诸如SlPi、SlP3、SlP4和SlP5)的特异性和亲和力不同且因此显示各种功能概况。根据本发明的核酸分子的一个优势在于根据本发明的核酸分子为SlP的拮抗剂且由此介导所有SlP受体的功能而非处理且更具体地结合单一 SlP受体。根据本发明的脂质优选选自包含蜡、固醇、脂溶性维生素(诸如维生素A、D、E和K)、单酸甘油酯、二酸甘油酯、磷脂等但不限于其的组。
脂质可广泛定义为疏水性或两亲性小分子；一些脂质的两亲性性质允许其在水性环境中形成诸如囊泡、脂质体或膜的结构。生物脂质完全或部分自两种不同类型的生物化学亚单位或“构筑嵌段”:酮酰基和异戊二烯基团产生。使用此方法，脂质可分成八个种类脂肪酰基、甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、糖脂、聚酮(由酮酰基亚单位缩合产生)、固醇脂质和异戊烯醇脂质(由异戊二烯亚单位缩合产生)。尽管术语脂质有时用作脂肪的同义词，但脂肪为称为甘油三酯的脂质亚组。脂质也涵盖诸如脂肪酸及其衍生物(包括甘油三酯、甘油二酯和甘油单酯及磷脂)、以及其它含固醇代谢物(诸如胆固醇)的分子。磷脂为一类脂质且为所有细胞膜的主要组分，因为其可形成脂质双层。大多数磷脂含有甘油二酯、磷酸基团和简单有机分子(诸如胆碱)；这个规则的一个例外为鞘磷脂，其由鞘氨醇而非甘油产生。鞘脂为一类由脂族氨基醇鞘氨醇产生的脂质。长链碱(有时简称为类鞘氨醇碱)为酵母与哺乳动物两者中重新鞘脂合成的第一非短暂产物。这些化合物，具体地称为植物 鞘氨醇和二氢鞘氨醇(dihydrosphingosine)(也称为二氢鞘氨醇(sphinganine),但此术语较不常见)，主要为C18化合物，同时有些较低水平的C20碱。神经酰胺和糖鞘脂为这些化合物的N-酰基衍生物。鞘氨醇骨架为O-连接于(通常)带电荷的头基(head group),诸如乙醇胺、丝氨酸或胆碱。骨架也为酰胺-连接于酰基，诸如脂肪酸。I-磷酸鞘氨醇(缩写为SlP)为一种380道尔顿的磷脂，分子式为C18H38N05P。SlP的同义词为D-赤-鞘氨醇-I-磷酸酯，4-十八烯-1，3- 二醇，2-氨基 _，1_(磷酸二 氢酯)，(2S, 3R, 4E)-，(2S, 3R, 4E) -2-氨基-3-轻基十八-4-烯-I-基憐酸二氢酯，4-十八烯-I, 3- 二醇，2-氨基 _，I-(磷酸二氢酯)，(R- (R*，S*_ (E)))-，4-十八烯-I, 3- 二醇，2-氨基 _，I-(磷酸二氢酯)，[R- [R*，S*_ (E)]]-，I-磷酸鞘-4-氨醇，I-磷酸C18-鞘氨醇，鞘氨醇，D-赤-I-磷酸酯，I-磷酸D-赤-二氢鞘氨醇，(2S, 3R, E) _2_氨基_3_羟基十八_4_烯基磷酸二氢酯，(2S, 3R, 4E) _2_ 氨基 _4_ 十八烯-I, 3_ 二醇 I-(磷酸二氢酯)，(2S, 3R, 4E) ~2~按基-3-轻基十八-4-稀_1_基憐酸氧酷，(E) - (IS, 2R) ~2~轻基_1-勝酸氧基甲基_十七_3_稀基_按。本发明的SlP结合核酸分子可用在本文中也称为盒(Box)的核苷酸链段来表征。不同类型的SlP结合核酸包含不同核苷酸链段。一般而言，本发明的SlP结合核酸分子在其5’末端和3’末端包含末端核苷酸链段第一末端核苷酸链段和第二末端核苷酸链段。第一末端核苷酸链段和第二末端核苷酸链段可彼此杂交，借此在杂交后形成双链结构。然而，在生理和/或非生理条件下，所述杂交并非必定在分子中实现。SlP结合核酸的三个核苷酸链段-第一末端核苷酸链段、中心核苷酸链段和第二末端核苷酸链段-在5’ 一 3’方向上彼此按以下进行排列第一末端核苷酸链段-中心核苷酸链段-第二末端核苷酸链段。然而，或者，在5’ 一3’方向上彼此排列第二末端核苷酸链段、中心核苷酸链段和末端第一核苷酸链段。不同SlP结合核酸分子之间的确定盒或链段的序列差异影响对SlP的结合亲和力。基于对本发明的不同SlP结合核酸分子的结合分析，中心链段及其核苷酸序列个别地且更优选地以其整体方式为结合人SlP所必需。在本发明内的是根据本发明的核酸分子或其链段或其任何部分原则上可彼此杂交。在所述杂交后，形成双链结构。本领域技术人员应了解所述杂交可能或可能不发生，特别在体外和/或体内条件下。此外，在所述杂交的情况下，情况并不必定是杂交历经两个链段的至少基于碱基配对的规则，原则上可发生所述杂交及因此双链结构的形成所处的整个长度而发生。如本文中优选所用，双链结构为由两个或更多个单独链或单一链的两个在空间上分开的链段形成的分子或结构的一部分，其中存在至少一个、优选两个或更多个优选根据沃森-克里克(Watson-Crick)碱基配对规则进行碱基配对的碱基对。本领域技术人·员也应了解诸如Hoogsten碱基配对的其它碱基配对可存在于所述双链结构中或形成所述双链结构。在一优选实施方案中，如本文所用的术语排列意谓本文关于本文公开的核酸分子所述的结构或功能特征或组分的次序或顺序。本领域技术人员应了解根据本发明的核酸分子能够使本发明的分子结合S1P。在不希望受任何理论束缚下，本发明者假定SlP结合由个别核酸分子的三维结构特性或组分的组合所致，所述特性或组分由形成所述特性或组分的核苷酸序列的定向和折叠样式所产生，其中优选地，所述特性或组分为SlP结合核酸分子的第一末端核苷酸链段、中心核苷酸链段和第二末端核苷酸链段。明显的是个别特性或组分可因此由各种不同个别序列形成，所述序列的变化程度可视所述组分或特性必须形成的三维结构而变化。核酸分子的总体结合特征分别由各种组分和特性的相互影响所致，所述相互影响最终导致核酸分子与其靶标(即SlP)的相互作用且更具体地核酸分子与其靶标的结合。此外，在不希望受任何理论束缚下，为本发明的SlP结合核酸分子所特有的中心链段似乎对于介导和/或建立所要求的核酸与SlP的结合而言为重要的。实质上，根据本发明的核酸分子适于检测S1P。此外，本领域技术人员应了解根据本发明的核酸分子为活性由SlP介导的拮抗剂。由于这个原因，所以根据本发明的核酸分子适于分别治疗和预防与任一 SlP相关或由任一 SlP引起的任何疾病。科学推理可取自确定SlP分别涉及多种疾病和病状或与多种疾病和病状相关，且以引用的方式并入本文的先前技术。根据本发明的核酸分子也应包含实质上与特定序列，且优选本文公开的根据本发明的核酸分子的特定序列同源的核酸分子。术语实质上同源应理解成同源性为至少75%、优选85%、更优选90%且最优选超过95%、96%、97%、98%或99%。相对于根据本发明的参照核苷酸序列或参照核酸分子，根据本发明的核酸分子中存在的同源核苷酸的实际百分比将取决于核酸分子中存在的核苷酸总数。修饰百分比可基于核酸分子中存在的核苷酸总数。优选地，本发明的核酸分子的同源核苷酸选自包含核糖核苷酸和2’ -脱氧核糖核苷酸的组。同源性可如本领域技术人员所知加以确定。更具体地，序列比较算法接着基于指定程序参数计算测试序列相对于参照序列的序列一致性百分比。测试序列优选为据称其与另一核酸分子同源或将被测试其是否与另一核酸分子同源，且如果同源的话，同源程度有多少的序列或核酸分子，其中所述另一核酸分子也称为参照序列。在一实施方案中，参照序列为如本文所述的核酸分子、更优选具有根据任何SEQ. ID. No 12、18、36、41和42的序列的核酸分子。可例如通过Smith和Waterman的局部同源性算法(Smith和Waterman, 1981)、通过Needleman和Wunsch的同源性比对算法(Needleman和Wunsch, 1970)、通过Pearson和Lipman的搜寻类似性方法(Pearson和Lipman, 1988)、通过这些算法的电脑化执行(Wisconsin Genetics 软件包(Genetics Computer Group, 575ScienceDr. ,Madison, Wi s.)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或通过目视检查进行序列的最佳对准以实现比较。适于确定序列一致性百分比的算法的一个实例为用于基本局部比对搜寻工具(下文称为“BLAST”)中的算法，参见例如Altschul等(Altschul等1990和Altschul等，1997)。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(下文称为“NCBI”) 公开获得。用于使用可自NCBI获得的软件(例如BLASTN(用于核苷酸序列)和BLASTP (用于氨基酸序列))确定序列一致性的缺省参数描述于McGinnis等(McGinnis等，2004)中。根据本发明的核酸分子也应包含含有一个或若干个本文公开的核酸序列或其一部分的那些核酸分子，优选就核酸分子或所述部分涉及于结合人SlP中而言。在一实施方案中，所述核酸分子为本文所述的核酸分子之一或其衍生物和/或代谢物，其中相较于本文所述的核酸分子，所述衍生物和/或代谢物优选为截短核酸分子。截短可涉及如本文公开的核酸分子的任一末端或两个末端。此外，截短可涉及核酸分子的内部核苷酸序列，即其可涉及分别5’末端核苷酸与3’末端核苷酸之间的核苷酸。此外,截短应包含自本文公开的核酸分子的序列缺失少至单一核苷酸。截短也可涉及一个或一个以上本发明的核酸分子的链段，其中所述链段的长度可少至一个核苷酸。根据本发明的核酸分子的结合可由本领域技术人员使用常规实验或通过使用或采用如本文所述，优选如本文在实施例部分中所述的方法加以测定。根据本发明的核酸分子可为D-核酸分子(D-核酸分子)或L-核酸(L-核酸分子)。优选地，核酸为L-核酸分子。此外,有可能的是核酸分子的一部分或若干部分以D-核酸形式存在或核酸的至少一部分或若干部分为L-核酸。术语核酸分子的“部分”应意谓少至一个核苷酸。所述核酸分子在本文中通常分别称为D-核酸和L-核酸。因此，在一特别优选实施方案中，根据本发明的核酸分子由L-核苷酸组成且包含至少一个D-核苷酸。所述D-核苷酸优选连接于不同于界定根据本发明的核酸的链段的部分，优选为其涉及与核酸分子的其它部分相互作用的那些部分。优选地，所述D-核苷酸分别在任何链段的末端和根据本发明的任何核酸分子的末端连接。在另一优选实施方案中，所述D-核苷酸可充当优选使修饰或修饰基团(诸如PEG和HES)连接于根据本发明的核酸的间隔子或连接子。本发明的一实施方案也为本文所述的各个及任何核酸分子就其核酸序列而言以其整体方式限于特定核苷酸序列。换句话说，在所述实施方案中，术语“包含”应以含有或由…组成的含义解释。在本发明内的还有根据本发明的核酸分子为较长核酸分子的一部分，其中这个较长核酸包含若干部分，其中至少一个所述部分为根据本发明的核酸分子或其一部分。这些较长核酸分子的其它部分可为一个或若干个D-核酸或一个或若干个L-核酸。任何组合可与本发明关联使用。较长核酸的这些其它部分单独或集合、以其整体形式或以特定组合形式可展现不同于结合，优选不同于结合SlP的功能。一个可能的功能在于允许与一个或其它分子相互作用(其中所述一个或其它分子优选不同于SlP)诸如以实现固定、交联、检测或扩增。在本发明的另一实施方案中，根据本发明的核酸分子包含呈个别或组合部分形式的本发明的若干核酸分子。包含本发明的若干核酸分子的所述核酸分子也由术语较长核酸分子涵盖。如本文所用的L-核酸或L-核酸分子为由L-核苷酸组成，优选完全由L-核苷酸组成的核酸。如本文所用的D-核酸或D-核酸分子为由D-核苷酸组成，优选完全由D-核苷酸组成的核酸。此外，如果不相反指示，那么任何核苷酸序列在本文中都以5’ 一 3’方向阐述。如本文优选所用，核苷酸的任何位置都是相对于序列、链段或亚链段的5’末端确定或提及。因此，第二核苷酸为分别自序列、链段和亚链段的5’末端计数的第二核苷酸。此外，根据此规则，倒数第二核苷酸为分别自序列、链段和亚链段的3’末端计数的第二核苷酸。不管本发明的核酸分子是否由D-核苷酸、L-核苷酸或两者的组合(其中所述组合为例如随机组合或由至少一个L-核苷酸和至少一个D-核酸组成的确定链段序列)组成，核酸可由脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或其组合组成。将根据本发明的核酸分子设计成有利于若干原因的L-核酸分子。L-核酸分子为天然存在的核酸分子的对映异构体。然而，归因于普遍存在核酸酶，D-核酸分子在水溶液中且特别在生物系统或生物样品中不是很稳定。天然存在的核酸酶，特别是来自动物细胞的核酸酶不能降解L-核酸分子。由于这个原因，L-核酸分子在所述系统(包括动物体和人体)中的生物半衰期显著增加。归因于对L-核酸缺乏可降解性，无核酸酶降解产物自所述L-核酸分子产生且因此未观察到由此产生的副作用。这个方面限定事实上所有其它用于治疗涉及SlP或由SlP介导的疾病和/或病症的化合物的L-核酸分子。通过不同于沃森克里克碱基配对的机制特异性结合靶分子的L-核酸分子、或部分或完全由L-核苷酸组成的适体(特别是其中涉及于使适体结合于靶分子的那些适体部分)也称为镜像异构体(Spiegelmer)。在本发明内的还有不管本发明的本发明核酸分子是否以D-核酸、L-核酸或D, L-核酸形式存在或其是否为DNA或RNA，其可以单链或双链核酸形式存在。通常，根据本发明的核酸分子为单链核酸，其归因于一级序列而展现确定二级结构且因此也可形成三级结构。然而，在彼此互补或部分互补的两个链彼此杂交的意义上，根据本发明的核酸分子也可为双链。这个会赋予核酸分子稳定性，如果核酸分子以天然存在的D型而非L型存在，那么此特别将为有利的。本发明的核酸分子可经修饰。所述修饰可涉及核酸分子的单一核苷酸且在本领域中为熟知的。所述修饰的实例尤其描述于Venkatesan(2003) ；Kusser (2000)；Aurup(1994) ；Cummins (1995) ；Eaton(1995) ；Green(1995) ；Kawasaki(1993)；Lesnik(1993);和Miller (1993)中。所述修饰可为在组成核酸分子的个别核苷酸的2’位置处的H原子、F原子或0-CH3基团或NH2-基团。此外，根据本发明的核酸分子可包含至少一个LNA核苷酸。在一实施方案中,根据本发明的核酸分子由LNA核苷酸组成。本发明者惊人地发现相较于根据本发明的母SlP结合RNA核酸分子，即由不具有非化学修饰或取代的核糖核苷酸组成的本发明的核酸分子，在本发明的SlP结合RNA分子，即由L-核糖核苷酸组成的本发明的L-核酸分子中进行所述非化学修饰或取代会导致本发明的SlP结合RNA分子的结合亲和力提高。非化学修饰或取代优选选自由一个或多个L-脱氧核糖核苷酸置换根据本发明的RNA核酸分子(即由核糖核苷酸组成的本发明的核酸分子)中的一个或多个L-核糖核苷酸的组。在一优选实施方案中，SlP结合核酸一仅由核糖核苷酸组成的RNA镜像异构体L-S1P-215-F9-002—的结合亲和力通过由至多五个脱氧核糖核苷酸置换至多五个核糖核苷酸，优选通过由四个脱氧核糖核苷酸置换四个核糖核苷酸得以提高。在一实施方案中，根据本发明的核酸分子可为多分体核酸。如本文所用的多分 体核酸分子为由至少两个核酸链组成的核酸。这至少两个核酸链形成功能单元，其中所述功能单元为靶分子的配体。至少两个核酸链可通过裂解核酸以产生两个链或通过合成对应于本发明(即)总体核酸分子的第一部分的一个核酸和对应于总体核酸分子的第二部分的另一核酸而由任何本发明核酸分子产生。应了解裂解与合成两者均可应用于产生存在如上所示例的两个以上链的多分体核酸。换句话说，至少两个核酸链通常不同于彼此互补和杂交的两个链，但在各种核酸部分之间可存在某一程度的互补性。最后，在本发明内的还有根据本发明的核酸的完全闭合(即环状)结构被实现，即根据本发明的核酸优选通过共价键联而闭合，其中更优选地，所述共价键联在如本文公开的核酸序列的5’末端与3’末端之间进行。本发明者已发现根据本发明的核酸展现极有利的Kd值范围。一种测定根据本发明的核酸分子的结合常数的可能性为使用如实施例4和6中所述的表面等离子体共振，其确认根据本发明的核酸展现有利Kd值范围的以上研究结果。用以表示个别核酸分子与靶标(在本情况下为SlP)之间的结合强度的一个适当量度为所谓Kd值，其本身以及其测定方法为本领域技术人员所知。根据本发明的核酸的特征为具有某一 Kd值。优选地，由根据本发明的核酸所示的Kd值小于I μ M。约I μΜ的Kd值据称为核酸非特异性结合靶标所特有。如本领域人员所应了解，一组化合物(诸如根据本发明的核酸)的Kd值在某一范围内。以上提及的约ΙμΜ的Kd为Kd值的一优选上限。靶结合核酸的Kd的优选下限可为约10皮摩尔或10皮摩尔以上。在本发明内的是结合SlP的个别核酸的Kd值优选在这个范围内。优选范围可通过选择这个范围内的任何第一数值和这个范围内的任何第二数值来确定。优选上限值为250ηΜ和 ΙΟΟηΜ，优选下限值为 50nM、10nM、lnM、IOOpM 和 ΙΟρΜ。根据本发明的核酸分子可具有任何长度，条件是其仍然能够结合靶分子。本领域中应了解根据本发明的核酸存在优选长度。通常，长度介于15个核苷酸与120个核苷酸之间。本领域技术人员应了解介于15与120之间的任何整数都为根据本发明的核酸的可能长度。根据本发明的核酸的更优选长度范围为具有约20至100个核苷酸、约20至80个核苷酸、约20至60个核苷酸、约20至50个核苷酸和约30至50个核苷酸的长度。在本发明内的是本文公开的核酸包含优选为高分子量部分和/或优选允许改进核酸的就尤其在动物体，优选人体中的保留时间而言的特征的部分。所述修饰的特别优选实施方案为根据本发明的核酸的PEG化和HES化。如本文所用，PEG代表聚(乙二醇)且HES代表羟乙基淀粉。如本文优选所用的PEG化为修饰根据本发明的核酸，其中所述修饰由连接于根据本发明的核酸的PEG部分组成。如本文优选所用的HES化为修饰根据本发明的核酸，其中所述修饰由连接于根据本发明的核酸的HES部分组成。诸如直链聚(乙二醇)、支链聚(乙二醇)、羟乙基淀粉、肽、蛋白质、多糖、固醇、聚氧化丙烯、聚氧基酰胺化物、聚(2-羟乙基)-L-谷氨酰胺和聚乙二醇的修饰以及使用所述修饰来修饰核酸的方法描述于欧洲专利申请EP I 306 382中，其公开内容由此以引用的方式整体并入本文。在PEG为所述高分子量部分的情况下，分子量优选为约20，OOODa至约120，OOODa,更优选约30，OOODa至约80，OOODa且最优选约40，OOODa0在HES为所述高分子量部分的情况下，分子量优选为约50kDa至约lOOOkDa、更优选约IOOkDa至约700kDa且最优选200kDa至500kDa。HES展现O. I至I. 5、更优选I至I. 5的摩尔取代度且展现表示为C2/C6比率约O. I至15、优选约3至10的取代样品。HES修饰的方法例如描述于德国专利申请DE I2004 006 249. 8中，其公开内容由此以引用的方式整体并入本文。 修饰在原则上可在本发明的核酸分子的任何位置处对其进行。优选地，对核酸分子的5’末端核苷酸、3’末端核苷酸和/或介于5’核苷酸与3’核苷酸之间的任何核苷酸进行所述修饰。修饰且优选PEG和/或HES部分可直接或通过连接子连接于本发明的核酸分子。在本发明内的还有根据本发明的核酸分子包含一个或多个修饰，优选一个或多个PEG和/或HES部分。在一实施方案中，个别连接子分子使一个以上PEG部分或HES部分连接于根据本发明的核酸分子。与本发明关联使用的连接子本身可为直链或支链。这种连接子为本领域技术人员所知且进一步描述于专利申请W02005074993和W02003035665中。在一优选实施方案中，连接子为生物可降解连接子。归因于修饰自根据本发明的核酸释放，生物可降解连接子允许改进根据本发明的核酸的就尤其在动物体中，优选在人体中的保留时间而言的特征。生物可降解连接子的使用可允许对根据本发明的核酸的保留时间进行较好控制。所述生物可降解连接子的一优选实施方案为如但不限于以下中所述的生物可降解连接子国际专利申请W02006/052790、W02008/034122、W02004/092191和W02005/099768，其中在国际专利申请W02004/092191和W02005/099768中，连接子为由一或两个如本文所述的修饰、核酸分子和两者之间的生物可降解连接子组成的聚合寡核苷酸前药的一部分。在本发明内的是修饰或修饰基团为生物可降解修饰，其中所述生物可降解修饰可直接或通过连接子连接于本发明的核酸分子。归因于修饰自根据本发明的核酸释放，生物可降解修饰允许改进根据本发明的核酸的就尤其在动物体中，优选在人体中的保留时间而言的特征。生物可降解修饰的使用可允许对根据本发明的核酸的保留时间进行较好控制。如但不限于国际专利申请W02002/065963、W02003/070823、W02004/113394和W02000/41647 (在W02000/41647中优选第18页第4至24行)中所述，所述生物可降解修饰的一优选实施方案为生物可降解的。除如上文所述的修饰之外，其它修饰可用于改进根据本发明的核酸的特征，其中所述修饰选自蛋白质、脂质(诸如胆固醇)和糖链(诸如淀粉酶、葡聚糖等)的组。
在不希望受任何理论束缚下，似乎通过用高分子量部分，诸如聚合物且更特别本文公开的优选生理学上可接受的聚合物修饰根据本发明的核酸，排泄动力学得以改变。更特别地，似乎归因于所述经修饰本发明核酸的分子量增加及归因于核酸特别在呈L型时不经受代谢，自动物体，优选自哺乳动物体且更优选自人体的排泄降低。因为排泄通常通过肾进行，所以本发明者假定相较于不具有这种导致在体内的保留时间增加的高分子量修饰的核酸，如此修饰的核酸的肾小球滤过率显著降低。与此关联，特别值得注意的是不管所述高分子量修饰如何，根据本发明的核酸的特异性不以不利方式受到影响。就此而言，根据本发明的核酸具有惊人的特征-其通常不能自药学活性的化合物预期-以致提供持续释放的医药制剂并不必定为提供持续释放所需。更确切而言，呈其经修饰形式的包含高分子量部分的根据本发明的核酸可本身已用作持续释放制剂。就此而言，如本文公开的核酸分子的修饰和如此修饰的核酸分子及包含所述核酸分子的任何组合物可提供不同，优选受控制的药物动力学及其生物分布。这个也包括在循环中的保留时间和向组织的分布。所述修饰进一步描述于专利申请W02003035665中。然而，在本发明内的还有本文公开的核酸不包含任何修饰且特别是无高分子量修饰，诸如PEG化或HES化。当核酸显示向体内任何靶器官或组织的优先分布时或当需要核酸在施用之后自身体快速清除时，所述实施方案是特别优选的。如本文公开的具有向体内任何靶器官或组织的优先分布概况的核酸将允许在靶组织中建立有效局部浓度同时保持 核酸的全身浓度较低。这个将允许使用不仅就经济观点来看有益，而且使其它组织向核酸剂的不必要暴露降低，由此降低潜在副作用风险的低剂量。在使用各自根据本发明的核酸或包含所述核酸的药剂的体内成像或特定治疗给药要求的情况下，可能需要如本文公开的核酸在施用之后自身体快速清除。在本文中也称为根据本发明的核酸和/或根据本发明的拮抗剂的本发明核酸可用于产生或制造药剂。所述根据本发明的药剂或药物组合物含有至少一种本发明核酸、任选以及其它药学活性的化合物，其中本发明核酸优选本身充当药学活性的化合物。在优选实施方案中，所述药剂包含至少药学上可接受的载体。所述载体可为例如水、缓冲剂、PBS、葡萄糖溶液(优选5%葡萄糖盐平衡溶液)、淀粉、糖、明胶或任何其它可接受的载体物质。所述载体通常为本领域技术人员所知。本领域技术人员应了解本发明的药剂的或与之相关的任何实施方案、用途和方面也可适用于本发明的药物组合物且反之亦然。根据本发明或根据本发明制备的核酸、药物组合物和药剂所治疗和/或预防的适应症、疾病和病症由以相应致病机制直接或间接涉及SlP所致。本发明提供一种通过鉴定和使用SlP结合核酸来中和SlP的。因为根据本发明的核酸与人和动物SlP相互作用，所以预期熟练技术人员了解本发明的SlP结合核酸可用于治疗、预防和/或诊断本文所述的任何人和动物疾病。与此关联，应了解本发明的核酸可用于治疗和预防本文所述的疾病、病症或病状，不管构成所述疾病、病症或病状的基础的作用模式如何。在下文中且在不希望受任何理论束缚下，提供结合各种疾病、病症和病状使用根据本发明的核酸分子的推理，由此致使对根据本发明的核酸分子所要求的治疗、预防和诊断适用性似乎有理。为避免任何不必要的重述，应了解由于涉及如与此关联所概述的SlP及其受体SlPi、SlP2、SlP3、SlP4和SlP5，所述相互作用可由根据本发明的核酸分子阐明以便实现所要求的治疗、预防和诊断作用。此外，应了解患者的疾病、病症和病状的特性及与此关联所述的治疗方案的任何详情可服从本申请的优选实施方案。根据本发明或根据本发明制备的核酸分子、药物组合物和药剂所治疗和/或预防的适应症、疾病和病症由以相应致病机制直接或间接涉及SlP所致。在特征至少部分为一个或多个病理学过程受SlP调控的疾病和病状(诸如过度增殖、异常新血管化、血管生成、纤维发生、纤维化、结疤、异常细胞迁移、异常血管完整性、炎症和自体免疫性反应)中，中和SlP可能有益。本文提供的分类是为了描述方便且不限制本发明。SlP通过刺激细胞增殖和存活来促进细胞生长。因此，预期降低SlP的有效体内浓度会有益于治疗或预防过度增殖病症。过度增殖病症定义为与不受控制的细胞增殖相关的疾病和/或病症和/或患病状况。SlP相关的过度增殖病症包括增生、瘤形成、与内皮细胞增殖相关的病症和与成纤维细胞增殖相关的病症。在大多数情况下，瘤形成将为癌症。与内皮细胞相关的过度增殖病症可导致血管生成疾病。所述疾病和病状的实例为由实体肿瘤或血液肿瘤引起的癌症、血管瘤、子宫内膜异位症、肥胖症、年龄相关的黄斑变 性和各种视网膜病变、以及由于动脉粥样硬化的治疗中的支架术(stenting)导致再狭窄的内皮细胞和平滑肌细胞增殖。大量日益增长的证据暗示SlP为一种高度强力促血管生成剂。SlP刺激人静脉内皮细胞(HUVEC)的趋化运动性且诱导多细胞结构的分化[Liu等，J Clin Invest. 2000106:951-961]并促进EC前体迁移至新血管化部位[Annabi, Exp Hematol. 2003年7月；31 (7):640-9]。在一项用鼠类抗SlP抗体进行的新近研究中，显示在不同体外测定中，用抗体中和SlP会抑制细胞保护作用和血管内皮细胞的迁移。在体内研究中，相同抗体在基膜胶塞测定中抑制小鼠中VEGF诱导的血管生成以及促血管生成细胞因子(诸如VEGF、bFGF、IL-6和IL-8)自肿瘤细胞释放。在携带人癌细胞的异种移植小鼠中，用鼠类抗SlP抗体的治疗显著减缓肿瘤进展[Visentin，Cancer Cell. 2006年3月；9 (3) : 225-38]。因此，在病理病状，包括但不限于癌症和与视网膜和脉络膜新血管化相关的眼病(Caballero，ExpEye Res 2009, 88:367-377 ；Skoura, J Clin Invest 2007,117:2506-2516 ；Xie, J CellPhysiol 2009, 218:192-198)(诸如年龄相关的黄斑变性)中的促血管生成活性的治疗中，直接结合且中和SlP的药剂适用于对抗SlP介导的效应。涉及成纤维细胞的过度增殖病症包括但不限于结疤过度(例如纤维化)的病症，诸如年龄相关的黄斑变性[Caballero, Exp Eye Res. 2009年3月;88 (3) : 367-77]、与心肌梗塞相关的心脏重塑和衰竭[Takuwa Cardiovasc Res. 2010年2月I日；85 (3) : 484-93]、硬皮病(scleroderma) [Bu, Arthritis Rheum. 2010 年 7 月;62 (7) : 2117-26]、囊性纤维化[Uhlig1Am J Respir Crit Care Med. 2008 年 12 月 I 日；178 (11) : 1100-14]、和过度伤口愈合，诸如通常由于手术或损伤、癜痕瘤和类纤维肿瘤及支架术而发生。SlP活化成纤维细胞迁移、增殖且刺激其产生胶原蛋白(collagen)。因此，在细胞损伤和/或炎症后，由受损细胞局部产生的SlP可导致异常伤口愈合、纤维发生和纤维化。因此，在与成纤维细胞的过度活性或数目相关的疾病和病状，包括但不限于眼病(诸如年龄相关的黄斑变性)、心血管疾病和硬皮病的治疗中，直接结合且中和SlP的药剂适用于对抗SlP介导的效应。SlP调控淋巴细胞的运动性、粘着和迁移。认为淋巴细胞自淋巴组织的溢出遵循SlPn梯度，其中组织中的SlP浓度较低且循环中的SlP浓度较高。这个理解由显示抑制SlP降解酶SlP裂解酶会导致淋巴细胞减少的研究支持[Schwab, Science2005，309 (5741) : 1735-9]。药物FTY720 (芬戈莫德)通过作用于SlP受体而导致淋巴细胞减少且已成功用于移植和自体免疫性疾病中(Japtok和Kleuser, Curr OpinInvestig Drugs. 2009年11月；10 (11) : 1183-94)。除淋巴细胞之外，SlP也通过这些调控新血管化和血管渗透性的手段来刺激其它免疫细胞(诸如嗜中性白细胞、肥大细胞和树突细胞)以及成纤维细胞、上皮细胞、周细胞和其它细胞类型的迁移、增殖和存活[Annabi，Exp Hematol. 2003 年 7 月；31(7):640-9 ；Paik,Genes Dev.2004 年 10 月 IH ; 18(19) :2392-403 ；Chae, J Clin Invest 2004，114，1082-9]。因此，由诸如 SlP 结合核酸分子的中和剂降低特定靶脂质(例如SlP)体内有效血浆浓度可用于引导效应T淋巴细胞离开炎症部位，由此适用于治疗疾病，包括但不限于自体免疫性疾病和具有炎性组分的眼病，诸如见于年龄相关的黄斑变性中的脉络膜新血管化。SlP在内皮和上皮屏障的调控中起重要作用[Marsolais和Rosen, Nat Rev Drug Discov, 2009年4月；8 (4) : 297-307]。血管内皮细胞屏障使血管组分与小间隙分开。破环这些屏障会导致血管渗透性变高，从而导致炎症及影响器官功能。SlP维持屏障的完整性。认为这个主要由其与SlPl的相互作用介导[Singleton，FASEBJ.2005 年 10 月；19(12):1646-56 ;Freistritzer 和 Riewald, Blood. 2005 年 4 月 15H ; 105 (8) :3178-84]，但也可能涉及其它S1PR。显示拮抗SlPl会诱导血管泄漏[Sanna等，Nat Chem Biol. 2006年8月；2 (8) :434-41]且有证据表明SlPl与S1P2之间的平衡在SlP介导的血管渗透性调控中是重要的。在正常情况下，可能重要的是维持内皮和上皮屏障的完整性且血管渗透性增加会造成急性肺损伤和败血症[Wang，MiCr0VasCRes.，2009年I月；77 (I) : 39-45.]。另一方面，可存在所述屏障的暂时破环为合乎需要或有益的疾病或病理学情形。在赘生疾病中，血管稳定化对于新血管生成和肿瘤转移为重要的[Paik, Genes Dev. 2004 年 10 月 I 日;18 (19) : 2392-403]。用 siRNA 降低 SlPl 的表达会抑制肿瘤异种移植模型中的血管稳定化，从而导致显著抑制肿瘤生长[Chae，J ClinInvest 2004，114，1082-9]。功能性SlP受体拮抗剂FTY720已显示会抑制鼠类黑素瘤模型中VEGF诱导的血管渗透性、肿瘤血管化和生长[LaMontagne, Cancer Res. 2006年I月I日；66 (I) :221-31]。此外，短暂直接中和SlP在以下情况下可能有益其中单独或与一种或多种其它治疗药物联合破环内皮或上皮屏障适用于治疗病理学状态，所述药物的作用或对病理学状态的治疗可由对屏障的所述破环增强。尚未显示直接干扰SlP本身且因此阻断所有细胞外SlP受体活化的药剂对血管渗透性的影响。增加或降低血管渗透性仍为思考对象。两者均可能适用于治疗如上所示的疾病。归因于生物活性脂质涉及于各种病理学过程(包括过度增殖、新血管化、血管生成、异常纤维发生、炎症和血管稳定性)中，因此通过直接与中和剂(诸如SlP结合核酸分子)相互作用降低SlP的有效体内浓度可适于治疗其中SlP可导致或造成病状的病理学病状。所述疾病和病状可为全身性的或定位于一个或多个特定身体系统、部分或器官。可用所述方法治疗的疾病或病症的类别包括但不限于癌症、感染和炎症、自体免疫性病症、脑血管疾病、心血管疾病、眼病、结疤、通气诱发的肺损伤、皮肤病、与过度纤维发生和纤维化相关的疾病或病症、与病理性血管生成相关的疾病或病症、与异常新血管化相关的疾病或病症、与异常血管稳定性相关的疾病或病症、和与如下文中更详细所述的移植相关的疾病或病症。癌细胞常通过不断突变和进化，由此变得对细胞毒素或抗血管生成剂具有抗性而逃脱治疗方案。癌细胞如何变得对治疗具有抗性的一个重要机制为鞘氨醇激酶I (SphK I)的上调和反过来使SlP释放入肿瘤微环境中[RaguzJr J Cancer 2008,99:387-3912008 ；Cuvillier, Curr Mol Pharmacol 2010,3:53-65]。SlP 介导的化学抗性的一个可能机制涉及SlP与低氧可诱导转录因子(HIF)之间的相互影响，其中癌细胞对低氧的反应涉及SlP/SphK系统的上调[Ader, Cancer Res 2009，68:8635-8642]。总之，用诸如SlP结合核酸分子的SlP中和剂克服与SlP过度产生相关联的药物抗性可能为一种有希望的方法。受SlP调控的各种过程(诸如异常血管生成/新血管化、异常重塑、纤维化、结疤和炎症)与眼病关联发生[Eichler 等(2006), Curr Pharm Des,第 12 卷2645-60]。年龄相关的黄斑变性(AMD)为西方世界超过60岁患者的主要失明病因[Bylsma和 Guymer(2005)，Clin Exp Optom,第 88卷:322-34 ；Gryziewicz (2005), Adv Drug Deliv·Rev,第 57卷2092-8 JLiu和 Regillo (2004), Curr Opin Ophthalmol,第 15 卷221-6.]。尽管未完全了解AMD的确切病因，但各种SlP调控的过程(诸如脉络膜新血管化(CNV)、视网膜下纤维化、水肿和炎症)会有助于AMD的发病机制和AMD相关的视力损失[Tezel和Kaplan (2004), Trends MoI Med,第 10 卷417-20 ;及 Ambati 等(2003)，Surv Ophthalmol,第48卷257-93]，VEGF通过增加CNV和血管渗透性(此举会导致出现视网膜内和视网膜下水肿)而有助于AMD的发病机制。因此，当前疗法集中在通过玻璃体内注射抗VEGF单克隆抗体来抑制VEGF。日益增长的证据表明SlP在渗出性(即湿性)AMD相关的CNV、纤维化和炎症中具有作用。SlP诱导上皮细胞募集至血管化部位并刺激早期血管结构的产生[Lee, Biochem Biophys Res Commun 1999，264:743-750]且其以 VEGF 非依赖性方式促进在上皮细胞与壁细胞之间形成N-I丐粘着蛋白(cadherin)介导的接合[Paik, Genes Dev. 2004年10月I日;18(19) :2392-403]。此外，SlP通过交叉活化其它促血管生成因子(诸如bFGF和 VEGF)来支持新血管化[Igarashi, Proc Natl Acad Sci USA2003，100:10664-9]。SlP与促纤维化因子(诸如TGFbJDGF和结缔组织生长因子)的相互影响和视网膜色素上皮细胞通过SlP诱导胶原蛋白表达强烈表明SlP在AMD相关的纤维发生中具有作用[Xin，JBiolChem 2004, 279:35255-35262 ；Hobson,Science 2001,291:1800-1803 ；Katsuma, FEBS Lett2005,579:2576-2582 ；Swaney, Exp Eye Res 2008,87:367-375]。此外，有累积的证据表明SlP介导的炎症事件有助于AMD的发病机制。全身性消除巨噬细胞会减弱激光诱导的CNV[Sakurai, Invest Ophthalmol Vis Sci 2003，44:3578-3585]且中和抗 SlP 抗体会降低巨噬细胞浸润[Xie, J Cell Physiol 2009, 218:192-198] 此外，已暗示SlP为C5a作用的一种主要下游介体[Vlasenko, J Tmmunol 2005,174:6456-6461],表明 C5a_SlP 轴可决定性地涉及于眼炎症过程中，因为所述过程例如在AMD期间发生。与这些数据一致，玻璃体内注射中和性抗SlP抗体会阻断在激光诱导的布鲁赫氏膜(Bruch’s membrane)( 一种渗出性AMD模型)破环之后的CNV形成和视网膜下纤维化[Caballero, Exp Eye Res2009，88:367-377 ;0’Brien, J Lipid Res 2009，50:2245-2257]。此外，在单剂量 Ia 期临床试验中，SlP中和抗体在一些患者中导致新血管系统退化，此为一种用抗VEGF疗法在单剂量之后尚未观察到的效应[Sabbadini，Br J Pharmacol. 2011 年 3 月;162 (6) : 1225-38]。总之，有强力证据表明降低玻璃体内SlP浓度的中和剂(诸如SlP结合核酸分子)将为一种治疗渗出性AMD和与新血管化、纤维化和炎症相关的其它眼病的有希望的方法。糖尿病性视网膜病变(DR)为糖尿病患者的一种常见并发症。DR为一种缺血性视网膜病变，因此特征为视网膜血流受损害。DR的病理学涉及VEGF驱动的视网膜新血管化，其可最终导致眼内出血、牵拉性视网膜脱离和血管渗透性增加。SlP在新血管化、血管渗透性和纤维化中的作用已表明拮抗SlP可有益于治疗DR。实际上，用SPHK的小分子拮抗剂抑制SlP形成会减弱大鼠链脲佐菌素(Streptozotocin)诱发的糖尿病性视网膜病变中的VEGF诱导的血管化和视网膜血管泄漏的早期事件[Maines, Invest Ophthalmol VisSci 2006,47:5022-5031]。糖尿病性视网膜病变患者视力损坏的一个主要病因为糖尿病性黃斑水肿(DME)的显现。VEGF诱导的新血管化和血管泄漏广泛涉及于DME显现和进展中[Aiello, Diabetes 1997, 46:1473-1480]。因此，抗VEGF抗体(雷珠单抗(ranibizumab)，诺适得(Lucentis))治疗已在 DME 中成功[Massin1Diabetes Care. 2010，33 (11) : 2399-405]且新近已收到批准。鉴于中和性抗SlP抗体对VEGF介导的新血管化和血管泄漏的抑制作用[LaMontagne, Cancer Res. 2006 年 I 月 I 日；66 (I) : 221-31 ;Visentin, Cancer Cell. 2006年3月；9(3) :225-38]，预期降低玻璃体内和视网膜SlP浓度的中和剂(诸如SlP结合核酸分子)将为一种治疗DME的有希望的方法。视网膜色素上皮(RPE)脱离继发于与新血管化、血管渗透性增加和纤维发生的刺激相关的眼病，诸如AMD和DR。在激光诱导的损伤后，SlP受RPE强烈上调[Caballero，ExpEye Res 2009,88:367-377]。证明拮抗SlP在RPE脱离中的有益作用的证据由单克隆抗S IP抗体松匹珠单抗(sonepcizumab)的I期临床试验提供。患有隐性疾病的患者经历RPE脱离的消散，此为一种尚未对抗VEGF治疗剂加以研究的效应[Sabbadini，Br JPharmacol. 2011年 3 月;162(6):1225-38]。增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)为视网膜脱离的最常见并发症。PVR病理生理学最终导致视网膜结疤过度。鉴于SlP与生长因子(诸如VEGF、bFGF、IL-6和IL-8)之间的所述相互影响和中和性抗SlP抗体对这些因子的抑制作用[Visentin, Cancer Cell2006,第 9 卷1-14 ;Milstien 和 Spiegel, Cancer Cell 2006,第 9 卷148-150]。鉴于最终导致PVR中所见的过度结疤的病理生理学和功能性SlP受体拮抗剂FTY720对这些相同关键介体的已知作用以及松匹珠单抗在视网膜脱离患者中的治愈作用[Sabbadini，Br JPharmacol. 2011年3月；162 (6) : 1225-38]，预期降低玻璃体内SlP浓度的中和剂(诸如SlP结合核酸分子)将为一种治疗PVR的有希望的方法。在AMD和DR中，视网膜纤维化导致不可逆的光受体破坏和视力损失。这个过程不由当前可用的治疗剂处理。中和性抗SlP抗体会阻断激光诱导的布鲁赫氏膜(一种渗出性AMD模型)破环中的CNV形成和视网膜下纤维化[Caballero, Exp Eye Res2009，88:367-377]。在一个早产儿视网膜病变(ROP)模型中，缺乏S1P2的小鼠显示玻璃体腔中的病理性新血管化降低[Skoura, J Clin Invest 2007,117:2506-2516]。在缺血诱导的血管生成的ROP模型中，中和性抗SlP抗体有效阻断视网膜新血管化和血管泄漏[Xie，J CellPhysiol 2009218:192-198]。此外，中和性抗SlP抗体可限制在ROP期间巨噬细胞的浸润[Xie, J Cell Physiol 2009,218:192-198]。
眼内压升高为青光眼中的主要风险因素。显示SlP会降低猪和人眼中的流出流畅性(outflow facility),由此增加流出阻力和眼内压[Mettu, Invest Ophthalmol VisSci.2004年 7 月;45(7) :2263-71 ；Stamer, Exp Eye Res. 2009年 12 月;89 (6):980-8]。S1P2受体活化会增加常规流出阻力[Sumida, Am J Physiol Cell Physiol. 2011年2月2日]。因此，用诸如SlP结合核酸分子的中和剂降低玻璃体内SlP浓度将为一种治疗青光眼的有希望的方法。鉴于SlP的已知多效性作用及其与VEGF和相关生长因子及细胞因子的相互作用，预期降低SlP的有效眼浓度将有效抑制与VEGF驱动的病理视网膜新血管化增殖相关的缺血性视网膜病变。这些包括但不限于镰状细胞视网膜病变、视网膜静脉闭塞性疾病、黃斑皱褶(玻璃纸样视网膜病变)、增殖性糖尿病性视网膜病变O3DR)和视网膜新血管疾病。特征至少部分为新血管化或血管生成异常的其它眼病状包括隐形眼镜佩戴过度、角膜感染(包括单纯性疱疹、带状疱疹和原虫感染)、翼状胬肉(pterygium)、感染性葡萄膜炎、在角膜移植和移植排斥之后的淋巴管生成、慢性视网膜脱离、屈光手术的并发症(诸如 朦胧、基质结疤和退化)、镰状细胞视网膜病变、静脉闭塞性疾病、视网膜血管瘤增殖和特发性息肉样脉络膜血管病变。具有炎性或免疫组分的其它眼病包括慢性玻璃体炎、自体免疫性葡萄膜视网膜炎、过敏性结膜炎、春季结膜炎、单纯性疱疹、带状疱疹和原虫感染[Ciulla等(2001)，CurrOpin Ophthalmol,第 12 卷:442-9]及眼组织胞衆菌病(histoplasmosis)。SlP涉及于结疤的调控中。眼睛前端部分的结疤涉及于创伤(由在气载碎片至可例如由手术和化学品所致的钝创伤的范围内的各种危险所致KDart等(2003)，Eye，第17卷886-92]、眼瘢痕类天疱疮(OCP)(—种主要影响结膜的慢性结疤性(疤形成)自体免疫性疾病)、史蒂文斯约翰逊综合症(Stevens Johnson Syndrome, SJS)和中毒性上皮坏死溶解(TEN)(对药物的危急生命的不良反应)、翼状胬肉(一种出现在睑间裂缝中的可导致视力损失的翼状三角形膜；VEGF可能在翼状胬肉的显现中起重要作用[Dougherty等(1996)，Cornea,第 15 卷537-540 ;及 Lee 等(2001)，Cornea,第 20 卷238-42])中。SlP通过刺激细胞增殖和防止细胞凋亡来促进在增生和瘤形成期间的过度增殖。瘤形成是指异常、不受控制且混乱的细胞生长。在大多数情况下，瘤形成将为癌症。若干证据表明SlP相对于鞘氨醇和神经酰胺的平衡决定细胞命运[Morita等，2000 ；Melendez 和 Khaw, 2002 ； Baumruker 和 Prieschl, 2000]。已显不癌细胞会上调 SPHKl,由此增加肿瘤微环境中的S IP浓度[Pyne, Nat Rev Cancer 2010, 10:489-503] 降低SPHKl表达会诱导乳癌细胞中的细胞周期阻滞和细胞凋亡且SPHK的小分子抑制剂降低乳腺腺癌、组织细胞白血病、成胶质细胞瘤异种移植和AML异种移植模型中的肿瘤生长[Sabbadini, Br J Pharmacol. 2011 年 3 月；162 (6):1225-38]。与这些来自动物模型的结果一致，SPHK在实体肿瘤患者，尤其患有乳房肿瘤、结肠肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、胃肿瘤、子宫肿瘤、肾肿瘤、前列腺肿瘤和直肠肿瘤的那些患者中过度表达[French 等，Cancer Res 63:5962-5969,2003 ；Fyrst, Nat Chemical Biology2010,489-497]。SPHK的表达增加与患有若干形式的癌症的患者的存活率显著降低相关联[Sabbadini, Br J Pharmacol. 2011 年 3 月;162 (6) : 1225-38]。显示 SlP 中和抗体会抑制癌细胞系的增殖、其侵袭及其对阿霉素(doxOTobucin)诱导的体外细胞凋亡的抗性，即A549、HT-29、MCF-7 细胞[Visentin, Cancer Cell. 2006 年 3 月;9(3) :225-38]。除S IP的过度增殖作用之外，其也促进作为癌症病理学中的关键过程的新血管化、血管生成和转移。暗示SlP为最强力促血管生成剂之一的大量日益增长的新近证据来自直接比较SlP与诸如VEGF和bFGF的药剂的研究。SlP刺激DNA合成和人静脉内皮细胞(HUVEC)的趋化性运动性，同时诱导多细胞结构分化，所有这些都表明SlP在早期血管形成中具有作用(Argraves 等，2004 ;Lee 等，1999 ;Liu 等，JClin Invest. 2000106:951-961)。此外，SlP促进骨髓源性EC前体迁移至新血管化部位(Annabi，Exp Hematol. 2003年7月；31 (7) :640-9.)。过度表达SlP1的细胞对抗血管生成剂沙利度胺(thalidomide)和新伐司他(Neovastat)具有抗性(Annabi, Exp Hematol. 2003 年 7 月;31 (7) : 640-9.)。此夕卜，已证明在SlP与其它促血管生成生长因子(诸如VEGF、EGF、PDGF, bFGF和IL-8)之间存在实质性相互影响。例如，S IP会转活化EGF(Shida等，2004)和VEGF2受体(Spiegel和 Milstien, 2003)，且 VEGF 会上调 SlP1 受体表达(Igarashi 等，2003)。此外，通过 SlP1和“VEGF轴”起作用的SlP为下肢血管生成和新血管化所需(Chae等，2004)。抗血管生成药物单克隆抗VEGF抗体贝伐单抗(bevacizumab) (Avastin, Genentech)已批准用 于与化学疗法联合治疗结肠癌。也已显示SlP涉及于转移中[Takuwa, Biochim BiophysActa2002, 1582:112-120]。在肝细胞癌、胚细胞危象慢性骨髓性白血病、费城染色体(Philadelphiachromosome)阳性急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、成淋巴细胞白血病/淋巴瘤和肺肿瘤模型中，功能性SlP受体拮抗剂FTY720抑制肿瘤生长和肿瘤相关的血管生成[Ho, MolCancer Ther 2005，4:1430-1438 ;Neviani, J Clin Invest 2007，117:2408-2421 ；Liu,Blood 2008,111:275-284 ；Lucas da Silva, J Exp TherOncol2008,7:9-15]。尽管这些研究强烈表明SlP的大多数促肿瘤功能由其细胞表面受体介导，但应认为SlP也可充当细胞内第二信使[Hait，Science 2009，325:1254-1257 ;Alvarez, Nature 2010，465:1084-1088]。例如，已鉴定 SlP 为组蛋白(histone)脱乙酰酶的一种直接细胞内配体，所述组蛋白脱乙酰酶也牵涉于癌症的显现和进展中[Hait, Science2009，325:1254-1257]。中和性抗SlP抗体显著阻断肿瘤生长和肿瘤相关的血管生成。在鼠类基膜胶塞测定中，抗体抑制bFGF和VEGF诱导的血管生成，且抗体在体外和在体内抑制促血管生成生长因子(VEGF、IL-8、IL-6)自肿瘤细胞释放。在小鼠乳癌、卵巢癌模型中，在肺腺癌异种移植模型中及在鼠类黑素瘤同种移植模型中，其抑制肿瘤进展[Visentin, Cancer Cell. 2006年3月；9 (3) :225-38]。增生称为正常组织或器官中的细胞的过度增殖。一临床相关实例为良性前列腺增生。SlP的过度增殖作用已与增生相关联。已在不同类型的癌症和前列腺癌中测试导致S IP含量降低的苯妥帝尔(Phenoxodiol) [Marshall Edwards新闻稿,2010年6月I曰]。总之，存在强力证据证明SlP促进过度增殖、血管生成和转移。不管个别过程对发病机制所起的作用如何，预期用诸如SlP结合核酸分子的中和剂直接靶向SlP会提供对特征为过度增殖、血管生成、转移和对细胞凋亡具有抗性的疾病(诸如大多数类型的肿瘤和癌症)的有效治疗。SlP调控淋巴细胞的运动性、粘着和迁移。SlP调控淋巴细胞自淋巴器官的退出及其在炎症部位的停留[Matloubian, Nature 2004,427, 355-360 ；Ledgerwood, Nat.Immunol. 2008，9，42-53]。血浆SlP水平的降低会导致淋巴细胞减少，因此引导病原性T淋巴细胞离开炎症部位，由此适用于治疗炎性疾病[Schwab，Science2005，309(5741):1735-9 ;Japtok 和 Kleuser, Curr Opin Investig Drugs. 2009 年 11月;10(11) : 1183-94]。此外，已显示SlP会诱导诸如前列腺素、TNF-α和IL-6的促炎性因子的产生[Lai, J Immunol 2008, 181:8010-17 ；Lai, J Immunol 2009,183:2097-2103]。FTY720在体内被磷酸化且充当所有SlP受体1、3、4和5的激动剂。FTY720对SlP受体的活化反过来导致在细胞表面处的受体可用性的下调。这致使细胞对SlP不反应且阻断淋巴细胞自淋巴组织溢出，从而产生FTY720的免疫抑制作用[Mandala，Science 2002，296:346-349 ；Graler, Faseb J 2004,18:551—553]。FTY720 在各种自体免疫性模型中显示功效且被批准用于治疗多发性硬化症。据报导相较于骨关节炎患者，在滑膜类风湿性关节炎中，SlP和SlPl受体表达在滑液衬细胞(synovial lining cell)、血管内皮细胞和炎性单核细胞中被上调 [Kitano, Arthritis Rheum. 2006 年 3 月;54 (3):742-53 ;Lai, J Immunol. 2008 年 12 月 I日；181 (11) :8010-7]。在胶原蛋白诱发的关节炎模型中，鞘氨醇激酶抑制剂显著抑制疾病严重性且减轻关节炎症和关节破坏[Lai, J Immunol. 2008年12月I日；181 (11) :8010-7]。与此一致，在SKG小鼠类风湿性关节炎模型中，功能性SlP受体拮抗剂FTY720抑制骨破坏[Tsunemi, Clin Immunol. 2010 年 8 月；136 (2):197-204]。归因于SlP受体功能性拮抗剂FTY720的免疫抑制作用，建议用诸如SlP结合核酸分子的中和剂降低SlP的有效体内浓度将有益于治疗炎性皮肤病，诸如红斑狼疮、银屑病和异位性皮炎[Herzinger, AmJ Clin Dermatol. 2007; 8 (6) : 329-36]。已显示全身性施用SlP会增加小鼠的支气管高反应性[Roviezzo, Am JRespir Cell Mol Biol. 2010年5月；42 (5) :572-7]。在鼠类哮喘模型中，通过吸入局部应用功能性SlP受体拮抗剂FTY720会抑制过敏性气道炎症[Idzko，J Clin Invest2006,116:2935-2944 ；Nishiuma, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.2008 年 6月;294(6):L1085-93]。在炎性肠病(IBD)模型中，缺乏SPH激酶的小鼠显现疾病显著改善[Snider，FASEBJ. 2009年I月；23 (I) :143-52]。与此一致，在小鼠IBD模型中，功能性SlP受体拮抗剂FTY720 高效抑制疾病显现[Deguchi, Oncol Rep. 2006 年 10 月；16(4) :699-703]。在低剂量下，已显示在小鼠呼吸器诱发的肺损伤(VILI)模型中，功能性SlP受体拮抗剂FTY720会增强内皮屏障功能且降低肺渗透性(Miiller，Pulm Pharmacol Ther. 2011年3月23日，电子版先于印刷版)。因此，降低有效肺SlP浓度可抑制炎症且增强不同临床相关情形(诸如肺炎、慢性阻塞性肺病(COPD)或肺动脉高血压(PAH))下的肺内皮屏障功能。存在其它证据表明抑制鞘氨醇激酶且由此降低有效SlP水平可能改善在创伤和出血性休克之后的肺损伤[Lee, J Trauma. 2004,57(5) :955-60]。在体外在人吞噬细胞中以及在败血症患者中，细菌产物增加SphKl表达和功能。SphKl的阻断抑制人吞噬细胞中LPS诱导的细胞因子产生且增加腐败性小鼠的存活率。重要的是在败血症中，抗生素治疗剂对存活的治疗作用由SphKl阻断剂增强[Puneet, Science, 2010 年 6 月 4 日;328 (5983):1290-4]。
在动物器官移植模型中，SlPl拮抗剂延长皮肤和心脏同种移植物存活且减弱慢性排斥[Shimizu, Circulation 2005，111，222-229]。类似地，在原位小鼠角膜移植模型中及在大鼠至小鼠角膜异种移植模型中，功能性SlP受体拮抗剂FTY720显著延长移植物存活率[Zhang 等(2003), Transplantation,第 76 卷:1511-3 ；Sedlakova 等(2005),Transplantation,第 79 卷，297-303]。在继承性转移小鼠I型糖尿病模型中，功能性SlP拮抗剂芬戈莫德减缓疾病进展[Morris, Autoimmunity. 2011 年 3 月;44 ⑵:115-28]。在炎性前列腺炎模型中，用芬戈莫德治疗显著降低炎性浸润和组织破环[Zhang, ScandJ Immunol. 2011年 2 月 15 日]。用功能性SlP受体拮抗剂FTY720治疗显著降低链脲佐菌素处理的大鼠的蛋白尿 和小管损伤。这个指示在糖尿病性肾病变中，用诸如SlP结合核酸分子的中和剂抑制SlP可为有益的。已报导抑制鞘氨醇激酶-2会减弱大鼠中与碘乙酸单钠诱发的骨关节炎相关的膝关节组织学破坏和疼痛[Fitzpatrick, Pharmacology. 2011; 87 (3-4) : 135-43]。S 1P2受体信号传导已牵涉于动脉粥样硬化的发病机制中[Skoura, ArteriosclerThromb Vase Biol. 2011年 I 月；31 (I):81-5]。过度表达SPHKl的小鼠显示与心肌纤维化相关的深度心脏重塑[Takuwa, Cardiovasc Res 2009,85:484-493]。中和性抗SlP抗体抑制初级心脏成纤维细胞产生胶原蛋白[Gellings Lowe, Cardiovasc Res 2009,82:303-312]。因此，根据本发明的药剂可用于治疗和/或预防的疾病和/或病症和/或患病状况包括但不限于a)眼病，所述眼病优选选自包含以下的组年龄相关的黄斑变性、伴有糖尿病性黃斑水肿的糖尿病性视网膜病变、年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜色素上皮脱离、增殖性玻璃体视网膜病变和年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜纤维化，b)癌症，所述癌症优选选自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、增生(诸如前列腺增生)的组，c)炎性疾病，其中所述炎性疾病优选选自包含自体免疫性疾病、多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘、炎性肠病、肺炎、败血症和创伤(诸如呼吸器诱发的肺损伤)和败血症的组，其中所述自体免疫性疾病优选选自包含多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘和炎性肠病的组。在另一实施方案中，药剂包含另一药学活性的化合物。或者或另外，所述另一药学活性的化合物为另一根据本发明的核酸。或者，药剂包含至少另一种核酸，其结合不同于SlP的靶分子或展现不同于根据本发明的核酸的功能的功能。所述至少另一种核酸优选展现与本文公开的其它药学活性的化合物的一种或若干种功能之一类似或一致的功能。在本发明内的是药剂在原则上可选或另外用于预防与使用药剂治疗所述疾病关联公开的任何疾病。因此，即相应疾病的相应标记物为本领域技术人员所知。相应标记物优选为S1P。
在本发明的药剂的一个实施方案中，所述药剂与用于本文公开的任何疾病，特别是本发明的药剂将用于的那些疾病的其它治疗剂联合使用。根据本发明的组合物也可与另一治疗剂或治疗方案联合施用。此外，通过中和剂调节SlP可适用于诱导对血管渗透性的暂时调节以允许或增强用作用可通过所述联合治疗得以增加或提1 的第一治疗试剂的治疗。根据本发明的药剂可与第二药剂或第二药学活性剂联合用于治疗和/或预防癌症，其中所述第二药剂或第二药学活性剂会破坏、毁坏和/或标记癌细胞。所述第二药剂或第二药学活性剂优选选自但不限于包含以下的组a)抗体，诸如利妥昔单抗(Rituximab)(革巴向CD20)、西妥昔单抗(Cetuximab)(革巴向上皮生长因子受体)、替伊莫单抗(Ibritumomab-Tiuxetan)(革巴向⑶20)、托西莫单抗(Tositumomab)(革巴向CD20)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)(革巴向HER2/neu)、贝伐单抗(革巴向VEGF)；·b)焼化剂，诸如顺钼(cisplatin)、卡钼(carboplatin)、奥沙利钼(oxaliplatin)、氮芥(mechlorethamine)、环憐酸胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、阿霉素(Doxorubicin)、美法仑(Melphalan)；c)抗代谢物，诸如_呤硫唑_呤、巯基票呤(mercaptopurine)、氟达拉滨(Fludarabine)；d)植物生物碱(诸如长春花生物碱)、植物类萜(诸如紫杉烷(taxane)，优选多西他赛(Docetaxel)、紫杉醇(Paclitaxel)、鬼曰毒素(podophyllotoxin)、埃博霉素(epothilone))；e)拓扑异构酶抑制剂，诸如喜树碱(camptothecins)、伊立替康(Irinitecan)；f)和其它药剂或活性剂，诸如亚叶酸(Leucovorin)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、他莫昔芬(Tamoxifen)、索拉非尼(Sorafenib)、来那度胺(Lenalidomide)、硼替佐米(Bortezomib)、地塞米松(Dexamethasone)、氟尿啼卩定(Flurouracil) 0根据本发明的药剂可与第二药剂或第二药学活性剂联合用于治疗和/或预防眼病，其中所述第二药剂或第二药学活性剂优选选自但不限于包含以下的组a)已知会抑制免疫系统的那些药剂或活性剂，诸如钙调神经磷酸酶(calcineurin)抑制剂、环孢霉素(cyclosporin)、甲氨蝶呤、硫唑_呤(azathioprin)、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、苯丁酸氮芥、来氟米特(Ieflunomide)、霉酌■酸吗乙酯(mycophenolate mofetil)、布喹那(brequinar)、咪唑立宾(mizoribin)、沙利度胺或脱氧精胍菌素(deoxyspergualin);皮质类固醇(corticosteroid)，如泼尼松(prednisone)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、地塞米松、曲安奈德(triamcinolone)、倍他米松(betamethasone)(泡腾)或布地缩松(budesonide)。b)消炎或抗血管生成生物品可联合使用，诸如IL-10、厄利珠单抗(erlizumab)、托勒单抗(tolermab)、利妥昔单抗、鲁昔单抗(gomiliximab)、巴利昔单抗(basiliximab)、达利珠单抗(daclizumab)、HuMax-TAC、维利珠单抗(visilizumab)、HuMaxCD4、克立昔单抗(clenoliximab)、MAX 16H5、TNX 100、托利珠单抗(toralizumab)、阿仑珠单抗(alemtuzumab)、CY 1788、加利昔单抗(galiximab)、培克珠单抗(pexelizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、PMX-53、ETI 104、FG3019、柏替木单抗(bertiIimumab)、249417 (抗因子IX)阿昔单抗(abciximab)、YM 337、奥马珠单抗(omalizumab)、他利珠单抗(talizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、J695 (抗 IL12)、HuMaxIL-15、美泊利单抗(mepolizumab)、伊斯利莫单抗(elsilimomab)、HuDREG、阿那白滞素(anakinra)、Xoma-052、阿达木单抗(adalimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、赛妥珠单抗(certolizumab)、阿非莫单抗(afelimomab) > CytoFab> AME 527、伐利昔单抗(Vapaliximab)、贝伐单抗、雷珠单抗、维塔辛(vitaxin)、贝利木单抗(be I imumab) > MLN 1202、伏洛昔单抗(volociximab)、F200 (抗α 5 β I)、依法珠单抗(efalizumab)、m60. 11 (抗 CD lib)、依那西普(etanercept)、奥那西普(onercept)、那他珠单抗(natalizumab)或希普利珠单抗(siplizumab)、托珠单抗(tocilizumab)、优特克单抗(ustekinumab)、ABT-874.、眼用 VEGF 捕集剂(VEGF-trapeye)。“联合疗法”(或“共疗法”)包括施用本发明的药剂和作为特定治疗方案的一部分的至少一种第二药剂，所述治疗方案欲提供由这些治疗剂(即本发明的药剂和所述第二药齐IJ)的共同作用产生的有益作用。联合的有益作用包括但不限于由治疗剂的联合所产生的 药物动力学或药动学共同作用。这些治疗剂的联合施用通常历经确定时期(视所选联合而定通常数分钟、数小时、数天或数周)进行。“联合疗法”可但通常不欲涵盖施用这些治疗剂中的两者或更多者作为附带且任意产生本发明的联合的单独单药疗法方案的一部分。“联合疗法”欲包括以依序方式施用这些治疗剂，即其中各治疗剂在不同时间施用，且以实质上同时的方式施用这些治疗剂或治疗剂中的至少两者。实质上同时施用可例如通过向受试者施用各治疗剂的比率固定的单一胶囊或各治疗剂的多个单一胶囊来实现。依序或实质上同时施用各治疗剂可通过包括但不限于表面途径、经口途径、静脉内途径、肌肉内途径和直接通过粘膜组织吸收的任何适当途径来实现。治疗剂可通过相同途径或通过不同途径施用。例如，所选联合的第一治疗剂可通过注射来施用而联合的其它治疗剂可以表面方式施用。或者，例如，所有治疗剂都可以表面方式施用或所有治疗剂都可通过注射来施用。除非另外指示，否则施用治疗剂所依的顺序并不为严格关键的。“联合疗法”也可包括进一步与其它生物活性成分联合施用如上所述的治疗剂。当联合疗法进一步包含非药物治疗时，所述非药物治疗可在任何适合时间进行，只要实现由治疗剂与非药物治疗的联合的共同作用产生的有益作用即可。例如，在适当情况下，当非药物治疗暂时自治疗剂的施用移除优选数天或甚至数周时，有益作用仍然会实现。如以上概括所述，根据本发明的药剂在原则上可以本领域技术人员已知的任何形式施用。一优选施用途径为全身性施用，更优选通过胃肠外施用，优选通过注射进行。或者，药剂可局部施用。其它施用途径包含肌肉内、腹膜内和皮下、口服、鼻内、气管内或经肺，优选给予侵袭性最小，同时确保功效的施用途径。胃肠外施用通常用于皮下、肌肉内或静脉内注射和输注。另外，一种用于胃肠外施用的方法采用植入本领域普通技术人员熟知的缓释或持续释放系统，其保证恒定剂量水平得以维持。此外，本发明的优选药剂可通过表面使用适合鼻内媒介物、吸入剂以鼻内形式施用，或使用本领域普通技术人员熟知的那些经皮皮肤贴片形式通过经皮途径施用。为以经皮传递系统形式施用，在整个剂量方案期间，剂量施用将当然为连续的而非间歇的。其它优选表面制剂包括乳膏剂、软膏剂、洗剂、气雾剂喷雾剂和凝胶剂。本发明的药剂将通常包含疗法的有效量的活性组分，包括但不限于溶解或分散于药学上可接受的介质中的本发明的核酸分子。药学上可接受的介质或载体包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。所述介质和试剂针对医药活性物质的使用在本领域中为熟知的。补充性活性成分也可并入本发明的药剂中。在另一方面，本发明涉及一种药物组合物。所述药物组合物包含至少一种根据本发明的核酸和优选药学上可接受的媒介物。所述媒介物可为本领域中使用和/或已知的任何媒介物或任何粘合剂。更特别地，所述粘合剂或媒介物为如与本文公开的药剂的制造关联论述的任何粘合剂或媒介物。在另一实施方案中，药物组合物包含另一药学活性剂。药剂和药物组合物的制备将为本领域技术人员根据本公开内容所知。通常，所述组合物可制备成呈液体溶液或悬浮液形式的可注射物；适于在注射之前溶解或悬浮于液体 中的固体形式；用于经口施用的片剂或其它固体；定时释放胶囊；当前使用的任何其它形式，包括滴眼剂、乳膏剂、洗剂、油膏剂、吸入剂等。也可特别适用的是由外科医生、医师或卫生保健工作者使用用以处理手术区域中的特定区域的无菌制剂，诸如基于生理盐水的洗涤齐 。组合物也可通过微装置、微粒或海绵传递。在配制后，药剂将以与剂量配制相容的方式且以诸如药理学上有效的量施用。制剂易于以多种剂型，诸如上述可注射溶液类型施用，但也可采用药物释放胶囊等。本发明的药剂也可以诸如定时释放和持续释放片剂或胶囊、丸剂、粉末、颗粒剂、酏剂、酊剂、悬浮液、糖浆和乳液的经口剂型施用。栓剂方便地由脂肪乳液或悬浮液制备。药物组合物或药剂可经灭菌和/或含有佐剂，诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化齐U、溶液促进剂、用于调控渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，其也可含有其它有治疗价值的物质。组合物是根据常规混合、粒化或包覆方法来制备的，且通常含有约O. 1%至75%，优选约1%至50%的活性成分。液体，特别是可注射组合物可例如通过溶解、分散等制备。将活性化合物溶解于药学纯溶剂中或与其混合以由此形成可注射溶液或悬浮液，所述溶剂诸如水、生理盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等。另外，可配制适于在注射之前溶解于液体中的固体形式。本发明的分别药剂和核酸分子也可以脂质体传递系统(诸如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡)形式施用。脂质体可由多种含有胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱的磷脂形成。在一些实施方案中，脂质组分的薄膜用药物水溶液水合以形成本领域普通技术人员熟知的囊封药物的脂质层。例如，本文所述的核酸分子可以使用本领域已知方法构建的与亲脂性化合物或非免疫原性高分子量化合物的复合物形式提供。另外，脂质体可在其表面上携带所述核酸分子以内部靶向和运载细胞毒性剂来介导细胞杀伤。核酸缔合的复合物的一实例提供于美国专利No. 6，011，020中。本发明的分别药剂和核酸分子也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶合。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或经十六酰基残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，本发明的分别药剂和核酸分子可偶合于一类适用于实现药物的控制释放的生物可降解聚合物，例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。在治疗本文公开的任何疾病时，根据本发明的核酸的有效血浆水平优选在500fM至200 μ Μ、优选InM至20 μ Μ、更优选5ηΜ至20 μ Μ、最优选50ηΜ至20 μ M的范围内。本发明的分别核酸分子和药剂可优选以单一每日剂量、每两天或每三天、每周、每两周、以单一每月剂量或每三个月施用。在本发明内的是如本文所述的药剂构成本文公开的药物组合物。在另一方面，本发明涉及一种用于治疗需要所述治疗的受试者的方法，其中所述方法包含施用医药有效量的至少一种根据本发明的核酸。在一实施方案中，受试者罹患疾病或处于显现所述疾病的风险中，其中所述疾病为本文公开的疾病的任一者，特别是与使 用根据本发明的任何核酸制造药剂关联公开的那些疾病的任一者。应了解根据本发明的核酸以及拮抗剂可不仅用作药剂或用于制造药剂，而且也用于美容目的，特别是关于发炎区域性皮肤病变中涉及S1P。因此，根据本发明的核酸、药剂和/或药物组合物可用于治疗或预防的另一病状或疾病为发炎区域性皮肤病变。如本文优选所用，诊断法或诊断剂或诊断手段适于直接或间接检测S1P，优选如本文所述的SlP且更优选如本文与本文所述的各种病症和疾病关联所述的S1P。诊断剂适于检测和/或追踪本文所述的分别病症和疾病的任一者。通过根据本发明的核酸结合S1P，所述检测为可能的。所述结合可直接或间接被检测。相应方法和手段为本领域技术人员所知。其中，根据本发明的核酸可包含允许检测根据本发明的核酸，优选与SlP结合的核酸的标记。所述标记优选选自包含放射性标记、酶标记和突光标记的组。在原则上，针对抗体开发的所有已知测定都可用于根据本发明的核酸，而靶结合抗体替换成靶结合核酸。在使用未标记靶结合抗体的抗体测定中，检测优选通过用放射性标记、酶标记和荧光标记修饰且在其Fe片段处结合靶结合抗体的二抗来进行。在核酸，优选根据本发明的核酸的情况下，用所述标记修饰核酸，其中所述标记优选选自包含生物素(biotin)、Cy-3和Cy_5的组，且所述标记由针对所述标记的抗体，例如抗生物素抗体、抗Cy3抗体或抗Cy5抗体检测,或-在标记为生物素的情况下-标记由天然结合生物素的抗生蛋白链菌素(streptavidin)或抗生蛋白(avidin)检测。所述抗体、抗生蛋白链菌素或抗生蛋白反过来优选用相应标记，例如放射性标记、酶标记或突光标记修饰(如同二抗)。在另一实施方案中，根据本发明的核酸分子由第二检测工具检测或分析，其中所述检测工具为分子信标。分子信标的方法学为本领域技术人员所知且由Mairal等综述(Mairal 等，2008，Anal Bioanl Chem390(4)，989-1007)。应了解使用根据本发明的核酸检测SlP将特别允许检测如本文定义的S1P。与SlP的检测相关联，一优选方法包含下列步骤(a)提供将被测试SlP的存在性的样品，(b)提供根据本发明的核酸，(C)使所述样品与所述核酸，优选在反应容器中反应其中步骤(a)可在步骤(b)之前进行，或步骤(b)可在步骤(a)之前进行。在一优选实施方案中，提供另一步骤d)，其包括检测样品与核酸的反应。优选地，使步骤b)的核酸固定于表面。表面可为反应容器(诸如反应管、板的孔)的表面、或所述反应容器中含有的装置(诸如微珠)的表面。可通过本领域技术人员已知的任何手段，包括但不限于非共价或共价键联使核酸固定于表面。优选地，通过表面与核酸之间的共价化学键来建立键联。然而，在本发明内的还有核酸间接固定于表面，其中所述间接固定涉及使用另一组分或一对相互作用伴侣。所述另一组分优选为与欲经固定的核酸特异性相互作用的也称为相互作用伴侣，且因此介导核酸连接于表面的化合物。相互作用伴侣优选选自包含核酸、多肽、蛋白质和抗体的组。优选地，相互作用伴侣为抗体，更优选为单克隆抗体。或者，相互作用伴侣为核酸，优选为功能性核酸。更优选地，所述功能性核酸选自包含至少部分互补于核酸的适体、镜像异构体和核酸的组。在另一替代性实施方案中，核酸与表面的结合由多分体相互作用伴侣介导。所述多分体相互作用伴侣优选为由第一成员和第二成员组成的一对相互作用伴侣或一相互作用伴侣，其中所述第一成员由核酸组成或连接于核酸且所述第二成员连接于表面或由表面组成。多分体相互作用伴侣优选选自包含生物素和抗生蛋白、生物素和抗生蛋白链菌素、及生物素和中和亲和素(neutravidin)的数对相互作用伴侣的组。优选地，相互作用伴侣对的第一成员为生物素。所述方法的一优选结果为形成SlP与核酸的经固定复合物，其中更优选地，检测所述复合物。在一实施方案内的是自复合物检测S1P。 依照这个要求的一相应检测工具为例如对SlP的那个/那些部分具有特异性的任何检测工具。一特别优选检测工具为选自包含核酸、多肽、蛋白质和抗体的组的检测工具，所述检测工具的产生为本领域技术人员所知。用于检测SlP的方法也包含自优选已用于进行步骤c)的反应容器移除样品。在另一实施方案中，方法也包含使SlP的相互作用伴侣固定在表面，优选如上定义的表面上的步骤，其中所述相互作用伴侣如本文所定义且优选如上与相应方法关联所定义且更优选在其各种实施方案中包含核酸、多肽、蛋白质和抗体。在这个实施方案中，一特别优选检测工具为根据本发明的核酸，其中所述核酸可优选经标记或未经标记。在所述核酸经标记的情况下，其可直接或间接被检测。在本文所述的各种实施方案中，所述检测也可涉及使用第二检测工具，其优选也选自包含核酸、多肽、蛋白质和实施方案的组。所述检测工具优选对根据本发明的核酸具有特异性。在一更优选实施方案中，第二检测工具为分子信标。在一优选实施方案中，核酸或第二检测工具或两者可包含检测标记。检测标记优选选自包含生物素、溴脱氧尿苷标记、地高辛(digoxigenin)标记、荧光标记、UV标记、放射标记和螯合剂分子的组。或者，第二检测工具与优选由核酸含有、包含或连接的检测标记相互作用。特别优选的组合如下检测标记为生物素且第二检测工具为针对生物素的抗体，或其中检测标记为生物素且第二检测工具为抗生蛋白或携带抗生蛋白的分子，或其中检测标记为生物素且第二检测工具为抗生蛋白链菌素或携带抗生蛋白链菌素的分子，或其中检测标记为生物素且第二检测工具为中和亲和素或携带中和亲和素的分子，或其中检测标记为溴脱氧尿苷且第二检测工具为针对溴脱氧尿苷的抗体，或其中检测标记为地高辛且第二检测工具为针对地高辛的抗体，或其中检测标记为螯合剂且第二检测工具为放射核素，其中优选的是所述检测标记连接于核酸。应了解这种组合也可适用于核酸连接于表面的实施方案。在所述实施方案中，优选的是检测标记连接于相互作用伴侣。最后，在本发明内的还有使用第三检测工具检测第二检测工具，优选地，所述第三检测工具为酶，更优选在检测第二检测工具后显示酶促反应，或所述第三检测工具为用于检测放射，更优选由放射核素发出的放射的工具。优选地，第三检测工具特异性检测第二检测工具和/或与第二检测工具相互作用。此外，在SlP的相互作用伴侣固定在表面上且优选添加根据本发明的核酸至在相互作用伴侣与SlP之间形成的复合物中的实施方案中，样品可自反应，更优选自进行步骤c)和/或d)所处的反应容器移除。在一实施方案中，根据本发明的核酸包含突光部分且其中所述突光部分的突光在核酸与SlP和游离SlP之间形成复合物后为不同的。在另一实施方案中，核酸为根据本发明的核酸的衍生物，其中核酸的所述衍生物包含至少一种置换腺苷的腺苷荧光衍生物。在一优选实施方案中，腺苷荧光衍生物为亚乙 烯基腺苷。在另一实施方案中，使用荧光检测由根据本发明的核酸的衍生物和SlP组成的复合物。在方法的一实施方案中，在步骤(C)或步骤(d)中产生信号且所述信号优选与样品中的SlP的浓度相关。在一优选方面，可在96孔板中进行测定，其中组分固定在如上所述的反应容器中且孔充当反应容器。本发明核酸可进一步用作药物发现的起始物质。基本上，存在两种可能的方法。一种方法为筛选化合物库，而所述化合物库优选为低分子量化合物库。在一实施方案中，筛选为高通量筛选。优选地，高通量筛选为在基于靶标的测定中对化合物进行快速高效试验与误差(trial-and-error)评估。在最佳情况下，分析通过比色测量来进行。如与此关联使用的库为本领域技术人员所知。在筛选化合物库的情况下，诸如通过使用本领域技术人员已知的竞争性测定，可发现适当SlP类似物、SlP激动剂或SlP拮抗剂。所述竞争性测定可如下建立。使本发明核酸，优选作为靶结合L-核酸的镜像异构体偶合于固相。为鉴定SlP类似物，可添加经标记SlP至测定中。潜在类似物将与结合镜像异构体的SlP分子竞争，所述镜像异构体将连同由相应标记获得的信号一起降低。筛选激动剂或拮抗剂可涉及使用如本领域技术人员已知的细胞培养测定。根据本发明的试剂盒可包含至少一种或若干种优选用于检测脂质，更优选用于检测SlP的本发明核酸。另外，试剂盒可包含至少一种或若干种阳性或阴性对照。阳性对照可例如为S1P，特别是选择本发明核酸所针对或本发明核酸所结合的优选呈液体形式的S1P。阴性对照可例如为依据生物物理性质类似于SlP加以定义，但不由本发明核酸识别的肽。此外，所述试剂盒可包含一种或若干种缓冲剂。各种成分可以干燥或冻干形式或溶解于液体中含于试剂盒中。试剂盒可包含一个或若干个容器，其反过来可含有试剂盒的一种或若干种成分。在另一实施方案中，试剂盒包含向使用者提供关于如何使用试剂盒及其各种成分的信息的说明书或说明书活页。药学性和生物分析性测定根据本发明的核酸基本上是用于评估其在人体和非人体的若干体液、组织和器官中的药物动力学和生物动力学概况。出于所述目的，本文公开或本领域技术人员已知的任何检测方法都可加以使用。在本发明的另一方面，提供用于检测根据本发明的核酸的夹心式杂交测定。在检测测定内使用捕获探针和检测探针。捕获探针互补于根据本发明的核酸的第一部分且检测探针互补于第二部分。使捕获探针固定于表面或基质。检测探针优选携带可如本文先前所述加以检测的标记分子或标记。对根据本发明的核酸的检测可如下进行根据本发明的核酸以其一个末端与捕获探针杂交且以另一末端与检测探针杂交。之后，通过例如一个或若干个洗涤步骤移除未结合检测探针。优选携带标记或标记分子的结合检测探针的量可随后如例如W0/2008/052774中更详细概述加以测量，所述专利以引用的方式并入本文。如本文优选所用，在一优选实施方案中，术语治疗另外或替代地包含预防和/或追踪。 如本文优选所用，如果不相反指示，那么术语疾病和病症应以可互换方式使用。如本文所用，术语包含优选不欲限制随后主题或由所述术语描述的主题。然而，在一替代性实施方案中，术语包含应以含有的含义加以理解且因此应理解为限制随后主题或由所述术语描述的主题。根据本发明的核酸分子的各种SEQ. ID.No.、化学性质和如本文所用的靶分子S1P、其实际序列和内部参考编号概述于下表中。
权利要求
1.一种核酸分子，所述核酸分子能够结合脂质。
2.根据权利要求I所述的核酸分子，其中所述核酸为活性由所述脂质介导的拮抗剂。
3.根据权利要求I或2所述的核酸分子，其中所述脂质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。
4.根据权利要求I至3中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含中心核苷酸链段，其中所述中心核苷酸链段包含核苷酸序列 5，WAUUGCCGAWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，或 5，WAUUGCCGWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG 3， 且其中所述脂质优选为I-磷酸鞘氨醇。
5.根据权利要求4所述的核酸分子，其中所述中心核苷酸链段包含选自以下的组的核苷酸序列 5， AAUAGCC⑶UGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3'5， AAUAGCCGAUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3，和5， AAUAGCCGAAUGAAACGCCUUAAGAGAAGCACUAG 3'
6.根据权利要求4至5中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子在5’->3’方向上包含第一末端核苷酸链段，所述中心核苷酸链段和第二末端核苷酸链段，其中 所述第一末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸，且 所述第二末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸。
7.根据权利要求4至5中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子在5’->3’方向上包含第二末端核苷酸链段、所述中心核苷酸链段和第一末端核苷酸链段，其中 所述第一末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸，且 所述第二末端核苷酸链段包含三至六个核苷酸。
8.根据权利要求6至7中任一项所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X6 3’， 其中 X1为A或不存在，X2为G或不存在，X3为S或不存在，X4为S或不存在，X5为C或不存在，且X6 SU或不存在。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X6 3’， 其中a)X1 为 A，X2 为 G，X3 为 S，X4 为 S，X5 为 C，且 X6 为 U 或 b)X1不存在，X2为G，X3为S，X4为S，X5为C，且X6为U或 CU1为A，X2为G，X3为S，X4为S，X5为C，且X6不存在或 (I)X1不存在，X2为G，X3为S，X4为S，X5为C，且X6不存在。
10.根据权利要求6至9中任一项所述的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’AGCGUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACG⑶3’或 b)所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’GCGUG3’且第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACGC 3’。
11.根据权利要求6至8中任一项所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’， 其中 a) X1不存在，X2不存在，X3为S，X4为S，X5为C，且X6不存在或 b)X1不存在，X2为G，X3为S，X4为S，X5不存在，且X6不存在或 c)X1不存在，X2不存在，X3为S，X4为S，X5不存在，且X6不存在。
12.根据权利要求6至8和11中任一项所述的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACG 3’或 b)所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’GCUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CAGC 3’或 c)所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’GGUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACC 3’，优选地 所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CACG 3’。
13.根据权利要求6至8中任一项所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’， 其中 X1不存在，X2不存在，X3为S或不存在，X4为S或不存在，X5不存在，且X6不存在。
14.根据权利要求6至8和13中任一项所述的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ GUG 3’且所述第二末端核苷酸链段包含核苷酸序列5’ CAC 3’。
15.根据权利要求4至14中任一项所述的核酸分子，其中所述中心核苷酸链段为结合.1-磷酸鞘氨醇所必需。
16.根据权利要求6至15中任一项所述的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸链段和所述第二末端核苷酸链段任选彼此杂交，其中在杂交后形成双链结构。
17.根据权利要求16所述的核酸分子，其中所述双链结构由三至六个碱基对组成。
18.根据权利要求I至17中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根据SEQ.ID. No 12至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，优选根据SEQ. ID. No 12、13、15、18、19、.23至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，更优选根据SEQ ID No 12、18、23、24、41和42中的任一者的核苷酸序列。
19.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根据SEQ.ID. NO. 18的核苷酸序列或与其同源的核酸分子，其中同源性为至少85%。
20.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根据SEQ.ID. NO. 41的核苷酸序列或与其同源的核酸分子，其中同源性为至少85%。
21.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根据SEQ.ID. NO. 42的核苷酸序列或与其同源的核酸分子，其中同源性为至少85%。
22.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其中相较于参照核酸分子，所述核酸分子的亲和力增加，其中所述参照核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中所述参照核酸分子由核糖核苷酸组成，其中所述核酸分子包含根据SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中根据SEQ. ID. No. 18的所述核苷酸序列的一个或多个核苷酸为脱氧核糖核苷酸而非核糖核苷酸。
23.根据权利要求22所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根据SEQ.ID. No 27至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，优选根据SEQ. ID. No 30、34至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，更优选根据SEQ. ID. No. 36、37、39和40中的任一者的核苷酸序列。
24.根据权利要求23所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根据SEQ.ID. NO. 36的核苷酸序列或与其同源的核酸分子，其中同源性为至少85%，其中所述同源核酸包含核糖核苷酸和至少一个脱氧核糖核苷酸。
25.根据权利要求I至24中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含修饰基团，其中相较于不包含所述修饰基团的核酸，包含所述修饰基团的所述核酸分子自生物体的排泄率降低。
26.根据权利要求I至24中任一项所述的核酸分子分子，其中所述核酸分子包含修饰基团，其中相较于不包含所述修饰基团的核酸分子，包含所述修饰基团的所述核酸分子在生物体中的保留时间增加。
27.根据权利要求25和26中任一项所述的核酸分子，其中所述修饰基团选自包含生物可降解和非生物可降解修饰的组，所述修饰基团优选选自包含聚乙二醇、直链聚乙二醇、支链聚乙二醇、羟乙基淀粉、肽、蛋白质、多糖、固醇、聚氧化丙烯、聚氧基酰胺化物和聚(2-羟乙基)-L-谷氨酰胺的组。
28.根据权利要求27所述的核酸分子，其中所述修饰基团为聚乙二醇，优选由直链聚乙二醇或支链聚乙二醇组成，其中所述聚乙二醇的分子量优选为约20,OOODa至约120，OOODa、更优选约 30，OOODa 至约 80，OOODa 且最优选约 40，OOODa0
29.根据权利要求27所述的核酸分子，其中所述修饰基团为羟乙基淀粉，其中优选地，所述羟乙基淀粉的分子量为约50kDa至约lOOOkDa、更优选约IOOkDa至约700kDa且最优选200kDa 至 500kDa。
30.根据权利要求25至29中任一项所述的核酸分子，其中所述修饰基团通过连接子偶合于所述核酸分子，其中所述连接子优选为生物可降解连接子。
31.根据权利要求25至30中任一项所述的核酸分子，其中所述修饰基团偶合于所述核酸分子的5’末端核苷酸和/或3’末端核苷酸和/或偶合于所述核酸分子的介于所述核酸分子的5’末端核苷酸与所述核酸分子的3’末端核苷酸之间的核苷酸。
32.根据权利要求25至31中任一项所述的核酸分子，其中所述生物体为动物或人体，优选人体。
33.根据权利要求I至32中任一项所述的核酸分子，其中所述核苷酸或形成所述核酸分子的所述核苷酸为L-核苷酸。
34.根据权利要求I至33中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为L-核酸。
35.根据权利要求I至34中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含至少一个能够结合I-磷酸鞘氨醇的结合部分，其中所述结合部分由L-核苷酸组成。
36.根据权利要求I至35中任一项所述的核酸分子，所述核酸分子用于治疗和/或预防疾病的方法中。
37.根据权利要求36所述的核酸分子，其中通过抑制血管生成和/或纤维化来治疗或改善所述疾病。
38.根据权利要求36和37中一项所述的核酸分子，其中所述疾病为眼病，所述眼病优选选自包含以下的组年龄相关的黄斑变性、伴有糖尿病性黃斑水肿的糖尿病性视网膜病变、年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜色素上皮脱离、增殖性玻璃体视网膜病变和年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜纤维化。
39.根据权利要求36所述的核酸分子，其中通过抑制血管生成和/或增殖来治疗或改善所述疾病。
40.根据权利要求36和39中一项所述的核酸分子，其中所述疾病为癌症，所述癌症优选选自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、诸如前列腺增生的增生的组。
41.根据权利要求36所述的核酸分子，其中所述疾病为炎性疾病，其中所述炎性疾病选自包含自体免疫性疾病、肺炎、败血症和诸如呼吸器诱发的肺损伤的创伤的组。
42.根据权利要求41所述的核酸分子，其中所述自体免疫性疾病选自包含多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘和炎性肠病的组。
43.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求I至36中的任一项所定义的核酸分子和任选另一组分，其中所述另一组分选自包含药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的载体和药学活性剂的组。
44.根据权利要求43所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求I至36中的任一项所定义的核酸分子和药学上可接受的载体。
45.一种根据权利要求I至36中任一项所述的核酸分子的用途，所述核酸分子用于制造药剂。
46.根据权利要求45所述的用途，其中所述药剂用于人医学中或用于兽医学中。
47.一种根据权利要求I至36中任一项所述的核酸分子的用途，所述核酸分子用于制造诊断工具。
48.根据权利要求45所述的用途，其中所述药剂用于治疗和/或预防眼病、癌症或炎性疾病。
49.根据权利要求48所述的用途，其中所述眼病选自包含以下的组年龄相关的黄斑变性、伴有糖尿病性黃斑水肿的糖尿病性视网膜病变、年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜色素上皮脱离、增殖性玻璃体视网膜病变和年龄相关的黄斑变性或糖尿病性视网膜病变中的视网膜纤维化。
50.根据权利要求48所述的用途，其中所述癌症选自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、诸如前列腺增生的增生的组。
51.根据权利要求48所述的用途，其中所述炎性疾病选自包含自体免疫性疾病、肺炎、败血症和诸如呼吸器诱发的肺损伤的创伤的组。
52.根据权利要求51所述的核酸分子，其中所述自体免疫性疾病选自包含多发性硬化症、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘和炎性肠病的组。
53.一种包含根据权利要求I至36中任一项所述的核酸分子和脂质的复合物，其中所述复合物优选为结晶复合物。
54.根据权利要求53所述的复合物，其中脂质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。
55.一种根据权利要求I至36中任一项所述的核酸分子的用途，所述核酸分子用于检测脂质。
56.根据权利要求55所述的用途，其中所述脂质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。
57.一种用于筛选活性由脂质或所述脂质的类似物介导的拮抗剂的方法，所述方法包含下列步骤 -提供活性由所述脂质和/或所述脂质的类似物介导的候选拮抗剂， -提供如权利要求I至36中的任一项所定义的核酸， -提供在活性由所述脂质和/或所述脂质的类似物介导的拮抗剂存在下提供信号的测试系统，以及 -确定活性由所述脂质介导的所述候选拮抗剂是否为活性由所述脂质和/或所述脂质的类似物介导的拮抗剂。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述脂质为磷脂，所述磷脂优选为I-磷酸鞘氨醇。
59.一种用于检测脂质的试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求I至36中任一项所述的核酸分子，其中所述脂质优选为磷脂，其中所述磷脂更优选为I-磷酸鞘氨醇。
60.一种用于检测样品中的如权利要求I至36中的任一项所定义的核酸的方法，其中所述方法包含以下步骤 a)提供捕获探针，其中所述捕获探针至少部分互补于如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子的第一部分；和检测探针，其中所述检测探针至少部分互补于如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子的第二部分，或替代地，所述捕获探针至少部分互补于如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子的第二部分且所述检测探针至少部分互补于如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子的第一部分； b)单独或组合添加所述捕获探针和所述检测探针至含有如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子或假定含有如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子的样品中； c)使所述捕获探针和所述检测探针同时或以任何顺序依序与如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子或其一部分反应； d)任选检测所述捕获探针是否与步骤a)中提供的如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子杂交；以及 e)检测步骤c)中形成的由如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子和所述捕获探针及所述检测探针组成的复合物。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述检测探针包含检测工具，和/或其中所述捕获探针固定于载体，优选固体载体。
62.根据权利要求60或61所述的方法，其中自反应移除不为所述复合物的一部分的任何检测探针以使在步骤e)中仅检测为所述复合物的一部分的检测探针。
63.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中步骤e)包含以下步骤比较当所述捕获探针和所述检测探针在如权利要求I至36中的任一项所定义的所述核酸分子或其一部分存在下杂交时由所述检测工具产生的信号与在不存在所述核酸或其一部分下由所述检测工具产生的信 号。
全文摘要
本发明涉及一种能够结合脂质的核酸分子。
文档编号A61K31/7088GK102906265SQ201180024560
公开日2013年1月30日 申请日期2011年4月21日 优先权日2010年4月21日
发明者W·普尔施克, S·克鲁斯曼, K·布驰尼尔, F·施沃布尔, K·赫利格 申请人:诺松制药股份公司