一种抗肿瘤的增效药物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及抗肿瘤药物，具体涉及一种抗肿瘤的增效药物，该增效药物由一种或多种细胞自噬抑制剂和重组人精氨酸酶组成药物复合物；该增效药物的一种或者几种自噬抑制剂与重组人精氨酸酶，通过使用联合给药或是序贯给药的方式，通过抑制精氨酸酶诱导的肿瘤细胞的细胞自噬而抵消肿瘤由于细胞自噬而引起的对精氨酸酶治疗的拮抗作用，从而增强重组人精氨酸酶对肿瘤的杀伤作用，显著增强精氨酸酶对肿瘤的治疗效果。该增效药物可用于治疗淋巴瘤、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、乳腺癌和骨髓瘤。
【专利说明】一种抗肿瘤的增效药物
【技术领域】
[0001]本发明涉及抗肿瘤药物，具体涉及一种抗肿瘤的增效药物，尤其涉及一种由自噬抑制剂和重组人精氨酸酶组成的药物复合物。
【背景技术】
[0002]现有技术公开了目前用于肿瘤治疗的化疗药物大多会产生耐药性及对患者有较强的副作用。研究报道，近几十年发展起来的生物大分子药物具有高靶向性、高效、低毒副作用等优点，其中的重组人精氨酸酶的抗肿瘤作用得到了广泛的论证，但其体内亲和力较低，起效剂量较大，尚存在一些潜在的毒副作用。
[0003]精氨酸酶是哺乳动物肝脏中参与尿素循环的一种关键酶，在尿素循环中将精氨酸转化为鸟氨酸和尿素，研究显示，精氨酸是维持部分肿瘤细胞生长的必需氨基酸，肿瘤细胞内精氨酸水平低于一定值后，会导致细胞死亡。有研究在体外试验中显示，精氨酸酶能显著杀伤肝癌细胞、黑色素瘤细胞、胰腺癌细胞以及白血病细胞等[①Lam TL，Wong GK, ChongHC, Cheng PN, Choi SC, Chow TL, et al.Recombinant human arginase inhibitsproliferation of human hepatocellular carcinoma by inducing cell cycle arrest.Cancer letters.2009;277:91-100.② Hernandez CP, Morrow K, Lopez-Barcons LA,Zabaleta J, Sierra R, Velasco C, et al.Pegylated arginase 1: a potentialtherapeutic approach in T-ALL.Blood.2010; 115:5214-21.?Hsueh EC, Knebel SM,Lo WH, Leung YC, Cheng PN, Hsueh CT.Deprivation of arginine by recombinanthuman arginase in prostate cancer cells.Journal of hematology & oncology.2012:5:17.]精氨酸酶治疗肝癌的一期临床结果显示了其良好的 成药性能[Yau T, ChengPN, Chan P, Chan ff, Chen L, Yuen J, et al.A phase I dose-escalating study ofpegylated recombinant human arginase I (Peg-rhArgl) in patients with advancedhepatocellular carcinoma.1nvestigational new drugs.2012.]尽管在体外显不出良好的效果，精氨酸酶在体内低亲和力和较短的半衰期等因素影响了药物的抗肿瘤疗效。因此，进一步提高精氨酸酶的抗肿瘤活性将有助于其抗肿瘤应用。
[0004]恶性淋巴瘤主要可以分为何杰金淋巴瘤(HL)和非何杰金淋巴瘤(NHL)，其中非何杰金淋巴瘤占绝大多数。据世界卫生组织国际癌症研究组织(International Agency forResearch on Cancer)的数据显示，全世界NHL的发病率均有所上升，而且发达国家的发病率明显高于非洲和亚洲地区。恶性淋巴瘤的病因复杂，目前尚未完全研究清楚，远期存活率较低。目前最常用的治疗方法是R-CHOP方案联合美罗华单克隆抗体，然而化疗药物会给病人带来诸多严重的毒副作用以及后遗症，且大量临床研究表明病人产生美罗华耐药性严重以及较高的疾病复发率。因此，开发新型高效低毒的治疗策略十分紧迫。精氨酸在人体的正常生理功能中具有重要作用，是一种半必须氨基酸，正常体细胞能够通过尿素循环将其他氨基酸转化为精氨酸，从而抵消外源性精氨酸缺乏；然而，对于部分精氨酸依赖的肿瘤细胞，由于缺乏尿素循环过程中的关键酶，在外源性精氨酸剥夺时，无法自身合成精氨酸，最终导致细胞死亡。精氨酸酶能够在体内外降解精氨酸，导致精氨酸依赖的肿瘤细胞死亡，而对正常细胞无影响。因此，精氨酸酶的应用前景引起有关研究者的关注。
[0005]细胞自卩遼(autophagy)又称II 型程序性死亡(type II programmed celldeath),是真核生物体内常见的“自我消化”(cellular degradation)的现象，通常根据细胞内底物运送到溶酶体腔内方式的不同，哺乳动物细胞自噬可分为三种方式:大自卩遼(macroautophagy)、小自卩遼(microautophagy)和分子伴侣介导的自曬(chaperone-mediated autophagy, CMA)。近年来随着分子生物学及基因技术的发展和对细胞自噬的深入认识，发现其与多种疾病，尤其是肿瘤的发展关系密切。
[0006]通常，由于细胞自噬有利于细胞的存活，无论在正常细胞或是肿瘤细胞中，自噬普遍被保留下来，并且在一般情况下都维持着基础自噬。研究显示，自噬初期可以作为肿瘤发生的一种抑制因素，一些已知的肿瘤抑制因子，例如PTEN、TSCl和TSC2能激活自噬，并且对自噬的抑制可使蛋白降解减少，合成代谢增加，最终导致原癌细胞持续增殖。大多数肿瘤细胞(如肝、胰腺、乳腺癌等)尽管癌变前自噬能力各有不同，但是在癌变之后其自噬能力均减弱。由于自噬在肿瘤发生及发展中所起的作用尚不明确，故其在抗肿瘤药物杀伤肿瘤细胞过程中所起的作用也不尽相同，大致可以概括为两种:一种是对肿瘤细胞的保护，另一种则是对肿瘤细胞的杀伤。研究表明化疗药物5-FU能显著地诱导细胞自噬，且抑制由这3种药物产生的细胞自噬能显著增加肿瘤细胞对治疗的敏感性[Li J，Hou N, FariedA, Tsutsumi S， et al.1nhibition of Autophagy by 3-MA Enhances the Effect of5-FU-1nduced Apoptosis in Colon Cancer Cells.Ann Surg Oncol.2009; 16(3):761 - 771.]。目前细胞自噬的调节类药物按其对自噬的作用可以分为两类，一类是自噬诱导剂如；雷帕霉素(Rapamycin),锂盐(lithium)和海藻糖(trehalose)等,还有一类则是自曬抑制剂如:3_MA (3-Methyladenine),渥曼青霉素(wortmannin)、LY294002 等，和 NH4C1、氯喹(Chloroquine) 和羟基氯喹(hydroxychloroquine)等。
[0007]迄今为止，尚未见有关重组人精氨酸酶诱导肿瘤细胞自噬以及细胞自噬抑制剂与重组人精氨酸酶制成抗肿瘤的增效药物的报道。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种抗肿瘤的增效药物，尤其涉及一种由细胞自噬抑制剂和重组人精氨酸酶组成的药物复合物。该药物复合物，其中的一种或多种细胞自噬抑制剂，其自身无明显细胞毒性但能通过抑制细胞自噬增强重组人精氨酸酶的疗效，从而降低重组人精氨酸酶在治疗肿瘤时的用量，减少其潜在的副作用和降低治疗成本。
[0009]具体的，本发明提供了一种抗肿瘤的增效药物，其特征在于，该增效药物由一种或多种细胞自噬抑制剂和重组人精氨酸酶组成药物复合物；该增效药物的一种或者几种自噬抑制剂与重组人精氨酸酶，通过使用联合给药或是序贯给药的方式，可以通过抑制精氨酸酶诱导的肿瘤细胞的细胞自噬而抵消肿瘤由于细胞自噬而引起的对精氨酸酶治疗的拮抗作用，从而增强重组人精氨酸酶对肿瘤的杀伤作用，显著增强精氨酸酶对肿瘤的治疗效果。
[0010]本发明的实施例中，使用细胞自噬抑制剂能加强重组人精氨酸酶对肺癌、脑瘤、乳腺癌、淋巴瘤、白血病、和骨髓瘤，尤其是淋巴瘤和白血病的疗效。
[0011]本发明中，所述的精氨酸酶选自鼠源精氨酸酶、重组人精氨酸酶以及各种长效化修饰的精氨酸酶，包括求不限于聚乙二醇修饰的重组人精氨酸酶、唾液酸修饰的重组人精
氨酸酶。
[0012]本发明中，所述的细胞自卩遼抑制剂选自3-MA (3-Methyladenine)、渥曼青霉素(Wortmannin)、LY294002、放线菌酮、巴法洛霉素 Al (Bafilomycin A1)、NH4C1、氯喹(Chloroquine)或羟基氯喹(hydroxychloroquine),优选 3-MA (3-Methyladenine)> 氯喹(Chloroquine)和羟基氯喹(hydroxychloroquine)。
[0013]本发明中，所述的细胞自噬抑制剂中的一种或几种与重组人精氨酸酶组成药物复合物，通过序贯使用方式治疗肿瘤。本发明的实施例中，精氨酸酶通过诱导淋巴瘤和白血病细胞凋亡和细胞周期阻滞杀伤肿瘤细胞，所述的一种或者几种自噬抑制剂与重组人精氨酸酶，通过使用联合给药或是序贯给药的方式，能增强重组人精氨酸酶对肿瘤的杀伤作用，增强重组人精氨酸酶的疗效。
[0014]本发明所述的肿瘤包括肝癌、肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、淋巴瘤、白血病、和骨髓瘤。尤其是淋巴瘤、白血病和肝癌。
[0015]所述的淋巴瘤包括何杰金淋巴瘤(HL)和非何杰金淋巴瘤(NHL)。
[0016]本发明的增效药物进一步选自以下一组中的形式进行配方:固体、溶液、分散剂、胶束、乳剂、脂质体、纳米微球等。
[0017]本发明进行了体外细胞试验，结果表明:在精氨酸脱亚胺酶杀伤肿瘤细胞时，细胞自噬能保护肿瘤细胞免于细胞死亡，从而降低了药物的疗效；重组人精氨酸酶能显著诱导淋巴瘤和白血病细胞发生细胞自噬，而细胞自噬则会部分抵消精氨酸酶的抗肿瘤效果，当使用细胞自噬抑制剂抑制细胞自噬则能增加淋巴瘤和白血病细胞对重组人精氨酸酶的敏感性，从而增强重组人精氨酸酶的疗效。
[0018]【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1显示:重组人精氨酸酶能抑制Raj1、Daudi淋巴瘤细胞的增殖。
[0020]图2显示:重组人精氨酸酶能诱导Raj1、Daudi淋巴瘤细胞发生细胞自噬，其中A显示，给药组细胞内有大量的典型的双层膜结构自噬体，而对照组则未发现显示，给药组细胞内有大量的荧光斑点，而对照组较少。
[0021]图3显示，重组人精氨酸酶能显著降低Raji和Daudi细胞的细胞活力。
[0022]图4是抑制细胞自曬后细胞内相关蛋白的表达水平检测结果。
[0023]图5显示抑制自噬能增强重组人精氨酸酶诱导的Raji和Daudi细胞凋亡。
[0024]图6显示重组人精氨酸酶能诱导Jurkat、HL-60白血病细胞发生细胞自噬，
其中，A:给药组细胞内有大量的典型的双层膜结构自噬体，而对照组则未发现；B、C:
与对照组相比，给予重组人精氨酸酶组的Jurkat和HL-60细胞的LC3 II的表达水平增强。
[0025]图7显示，重组人精氨酸酶能显著降低Jurkat和HL-60细胞的细胞活力。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1:制备重组人精氨酸酶
采用PCR的方法获得编码人精氨酸酶的编码序列，该基因编码序列全长969bp，带有酶切位点XhoI和EcoRI。用XhoI和EcoRI内切酶分别双酶切PCR产物和空质粒载体，将目的基因与载体连接后转化氨苄抗性平板，挑取若干个阳性转化子，取其中一个扩增并提取质粒，进行XhoI和EcoRI内切酶双酶切鉴定，提取重组质粒，将重组载体用Bgl II酶切使线性化，电击转化毕赤酵母，挑取阳性转化子，通过RDB、丽和MD平板筛选，得到表型为his+muts的克隆子，进一步在摇床水平上进行诱导表达，通过SDS-PAGE蛋白电泳检测摇床水平上精氨酸酶的
表达情况，从而筛选分泌表达精氨酸酶的重组子，从若干株带有精氨酸酶基因的重组酵母中筛选到分泌表达精氨酸酶的重组子，样品纯化中，将酵母离心后取上清，样品经过超滤浓缩，采用凝胶排阻层析进行精制，选用Sephacryl S-200作为样品的精制层析柱；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度检测，结果显示，制得的重组精氨酸酶纯度约为95%。获得的重组人精氨酸酶保存于4摄氏度冰箱；试验临用前用细胞培养基稀释至使用浓度。
[0027]实施例2配制自噬抑制剂药物
(1)氯喹的配制:取适量氯喹溶于纯水配成lOmmol/L的储存液，用0.1 μ m的滤器过滤除菌后保存于4°C， 体外实验用PRM1-1640培养基稀释500-1000倍用于抑制细胞自噬；
(2)氯化铵的配制:取适量氯化铵溶于水配成0.4mol/L的储存液，用0.1 μ m的滤器过滤除菌后保存于4°C。体外实验时稀释50-80倍用于抑制细胞自噬；
(3)羟基氯喹的配制:取适量羟基氯喹溶于纯水配成lOmmol/L的储存液，用0.1 μ m的滤器过滤除菌后保存于4°C，体外实验室稀释500-1000倍用于抑制细胞自噬；
(4)3-MA的配制:取适量3-MA干粉配制成0.2mol/L的储存液，用0.1 μ m的滤器过滤除菌后保存于_20°C。体外实验时稀释50-200倍用于抑制细胞自噬；
(5)LY294002的配制:取适量LY294002干粉配制成0.2mol/L的储存液，用0.1 μ m的滤器过滤除菌后保存于-20°C。体外实验时稀释50-100倍用于抑制细胞自噬；
(6)巴伐洛霉素Al的配制:取适量巴伐洛霉素Al干粉配制成0.5 μ g/ml的储存液，用
0.1um的滤器过滤除菌后保存于_20°C，体外实验时稀释1000倍用于抑制细胞自噬；
(7)自噬抑制剂与精氨酸酶联合应用于体内或体外抗肿瘤时，自噬抑制剂3-MA的使用浓度范围为0-1 mol/L,自噬抑制剂CQ的使用浓度范围为0-50 mol/L，羟基氯喹的使用浓度范围为0-50 mol/L, LY294002的使用浓度范围为Ο-lmol/L，巴伐洛霉素Al的使用浓度范围为O-lOmol/L，精氨酸酶的使用浓度范围为0-100IU/ml。
[0028]实施例3:细胞培养
Raji和Daudi淋巴瘤细胞使用含有10% FBS和1%青霉素-链霉素的PRM1-1640培养基培养，细胞生长至对数生长期时，将细胞1000转每分钟离心，弃上清，用新鲜培养基将细胞轻轻吹匀，以2*105cellS/ml的浓度转入细胞培养板内培养，各组细胞分别给予相应浓度的重组人精氨酸酶处理；使用时，给药前Ih加入2mmol/L的3-MA和5mmol/L的CQ抑制Raji和Daudi细胞的细胞自噬，连续培养24h、48h或72h后进行下一步处理。
[0029]实施例4:重组人精氨酸酶能抑制Raj1、Daudi淋巴瘤细胞的增殖
将适当浓度的Raji和Daudi细胞种在96孔培养板内，加入精氨酸酶使体系终体积为100 μ L，精氨酸酶的终浓度为0.016-4IU/ml的精氨酸酶，培养24h、48h或72h，向每孔加入
10μ MTT液，在培养箱内放置4h，之后用含20% SDS的DMF水溶液溶解，570nm下测量光密度值(0.D.)，结果显示，0.032-4IU/ml的精氨酸酶处理24h、48h或72h显著地抑制了细胞的增殖(如图1A、1B所示)。
[0030]实施例5:重组人精氨酸酶能诱导Raj1、Daudi淋巴瘤细胞发生细胞自噬
Raji和Daudi细胞用lIU/ml的精氨酸酶处理24h后，进行石蜡包埋、切片、染色，在透射电子显微镜下观察细胞亚显微结构，结果显示，给药组细胞内有大量的典型的双层膜结构自噬体，而对照组则未发现(如图2A所示)；
Raji和Daudi细胞用lIU/ml的精氨酸酶处理24h后，用Cyto-1D? AutophagyDetection Kit自噬体染色试剂盒按说明书处理，在激光共聚焦显微镜下观绿色荧光斑点，结果显示，给药组细胞内有大量的突光斑点，而对照组较少(如图2B所示)；
将收集到的Raj1、Daudi淋巴瘤细胞用PBS洗I次，用RIPA试剂盒裂解细胞，并定量后按照每个泳道20yg进行蛋白电泳后转膜至PVDF膜上，用5%脱脂牛奶封闭lh，分别加入LC3b和β -actin抗体，于4°C孵育12h。TBST洗膜后加入二抗室温孵育1.5h，用ECL显色液显色，Raji和Daudi细胞经过重组人精氨酸酶处理不同时间或不同浓度处理后，通过Western Blot的检测，结果显示,与对照组相比，给予重组人精氨酸酶组的Raji和Daudi细胞的LC3 II的表达水平增强(如图2C所示)。
[0031]实施例6:抑制自噬能增强重组人精氨酸酶诱导的Raji和Daudi细胞死亡
Raji和Daudi细胞分别给予lIU/ml的重组人精氨酸酶，并在给药前Ih加入2mmol/L的3-MA和5 μ mol/L的CQ抑制细胞自噬，连续培养48h后经过MTT法测定各组的细胞活力，结果显示，重组人 精氨酸酶能显著降低Raji和Daudi细胞的细胞活力(如图3所示)，与重组人精氨酸酶单独使用组相比，重组人精氨酸酶与自噬抑制剂3-MA或CQ联合应用组的Raji和Daudi细胞的细胞活力有显著性下降，证明自噬抑制剂和重组人精氨酸酶的联合给药能更有效地抑制Raji和Daudi细胞的生长，并且只加抑制剂3-MA和CQ组的细胞活力与对照组相比，无显著差异，说明抑制剂本身对细胞无明显细胞毒性，表明自噬抑制剂和重组人精氨酸酶的联合给药所降低的Raji和Daudi细胞的细胞活性并非是抑制剂和药物的协同作用所致，而是因为抑制自噬后增加了 Raji和Daudi细胞对重组人精氨酸酶的药物敏感性；结果证实，抑制自噬能增加重组人精氨酸酶对Raji和Daudi细胞的杀伤作用。
[0032]实施例7:抑制细胞自噬后细胞内相关蛋白的表达水平检测
用RIPA裂解液裂解抽取细胞总蛋白，定量后按每孔50 μ g蛋白量上样进行蛋白电泳并转膜进行Western blot，用ECL化学发光试剂盒进行化学发光，结果显示:经过lIU/ml重组人精氨酸酶处理的Raji和Daudi细胞的LC3 II的表达量高于对照组，经过2mmol/L 3-MA和lIU/ml重组人精氨酸酶处理后的Raji和Daudi细胞的LC3 II的表达量低于lIU/ml重组人精氨酸酶处理后的Raji和Daudi细胞，而经过lIU/ml重组人精氨酸酶和5 μ mol/L的CQ处理后的Raji和Daudi细胞的LC3 II的表达量高于lIU/ml重组人精氨酸酶处理后的Raji和Daudi细胞；经过lIU/ml重组人精氨酸酶处理的Raji和Daudi细胞的Cleaved-PARP的表达量高于对照组，经过2mmol/L 3-MA或5 μ mol/L的CQ与lIU/ml重组人精氨酸酶联合处理后的Raji和Daudi细胞的Cleaved-PARP的表达量高于lIU/ml重组人精氨酸酶单独处理后的Raji和Daudi细胞(如图4所示);基于3-MA是一种PI3K III抑制剂，PI3K III在细胞自噬的调控中起重要的作用，其能与Beciln I等分子结合，参与调控自噬体膜的运输，因此抑制PI3K III将阻遏自噬体的形成，从而起到抑制细胞自噬的作用；Western Blot的结果证明2mmol/L的3-MA能抑制由lIU/ml重组人精氨酸酶所诱导的Raji和Daudi细胞的细胞自噬；而CQ是自噬溶酶体的抑制剂，CQ能造成溶酶体的碱化，使溶酶体酶失去活性，从而造成自噬体的堆积，这造成了自噬体无法在溶酶体内进行降解，导致了处于自噬体膜表面的LC3 II分子的量增加，所以Western Blot的结果能证明5 μ mol/L的CQ能抑制由lIU/ml重组人精氨酸酶诱导的Raji和Daudi细胞的细胞自噬。PARP是caspase家族蛋白的剪切底物，经剪切后变为其剪切形式Cleaved-PARP，Cleaved-PARP的量的多少能直接地反应细胞凋亡的程度，Cleaved-PARP表达量越多则细胞凋亡越显著；本实验结果进一步支持“抑制细胞自噬能增强人重组人精氨酸酶诱导的淋巴瘤细胞凋亡”的结论。
[0033]实施例8:抑制自噬能增强重组人精氨酸酶诱导的Raji和Daudi细胞凋亡 收集的Raji和Daudi细胞用PBS洗I次，之后加入500 μ I结合液和
5 μ IAnexin V -FITC，避光室温孵育15min，随即进行流式细胞检测，结果使用SPSSstatistics 19进行统计学分析,Raji和Daudi细胞经过重组人精氨酸酶和抑制剂处理48小时经过流式细胞检测，结果显示，经过lIU/ml重组人精氨酸酶处理的Raji和Daudi细胞的细胞凋亡率高于对照组，而lIU/ml重组人精氨酸酶与2mmol/L 3-MA或5 μ mol/L的CQ联合干预的Raji和Daudi细胞的细胞凋亡率显著高于lIU/ml重组人精氨酸酶单独处理的Raji 和 Daudi 细胞 ρ〈0.05，ρ〈0.01，(如图 5 所示)。
[0034]实施例9:重组人精氨酸酶能诱导Jurkat、HL-60白血病细胞发生细胞自噬 Jurkat和HL-60细胞用lIU/ml的精氨酸酶处理24h后，进行石蜡包埋、切片、染色，在
透射电子显微镜下观察细胞亚显微结构，结果显示，给药组细胞内有大量的典型的双层膜结构自噬体，而对照组则未发现(如图6A所示)；
Jurkat和HL-60细胞用lIU/ml的精氨酸酶处理不同时间后，将离心收集到的Jurkat和HL-60淋巴瘤细胞用PBS洗I次，用RIPA试剂盒裂解细胞，并定量后按照每个泳道20 μ g进行蛋白电泳后转膜至PVDF膜上，用5%脱脂牛奶封闭lh，分别加入LC3b和β-actin抗体，于4°C孵育12h。TBST洗膜后加入二抗室温孵育1.5h，用ECL显色液显色。Jurkat和HL-60细胞经过重组人精氨酸酶处理不同时间或不同浓度处理后,通过Western Blot的检测，结果，与对照组相比，给予重组人精氨酸酶组的Jurkat和HL-60细胞的LC3 II的表达水平增强(如图6B、6C所示)。
[0035]实施例10:抑制细胞自噬能增强重组人精氨酸酶诱导的Jurkat和HL-60白血病细胞死亡
Jurkat和HL-60细胞分别给予lIU/m I的重组人精氨酸酶，并在给药前Ih加入2mmol/L的3-MA和10 μ mol/L的CQ抑制细胞自噬，连续培养48h后经过MTT法测定各组的细胞活力(如图7所示)，重组人精氨酸酶能显著降低Jurkat和HL-60细胞的细胞活力，与重组人精氨酸酶单独使用组相比，重组人精氨酸酶与自噬抑制剂3-MA或CQ联合应用组的Jurkat和HL-60细胞的细胞活力有显著性下降，证明自噬抑制剂和重组人精氨酸酶的联合给药能更有效地抑制Jurkat和HL-60细胞的生长，并且只加抑制剂3-MA和CQ组的细胞活力与对照组相比，无显著 差异，说明抑制剂本身对细胞无明显细胞毒性，自噬抑制剂和重组人精氨酸酶的联合给药所降低的Jurkat和HL-60细胞的细胞活性并非是抑制剂和药物的协同作用所致，而是因为抑制自噬后增加了 Jurkat和HL-60细胞对重组人精氨酸酶的药物敏感性，结果证实，抑制自噬能增加重组人精氨酸酶对Jurkat和HL-60细胞的杀伤作用。
【权利要求】
1.一种抗肿瘤的增效药物，其特征在于，该增效药物由一种或多种细胞自噬抑制剂和重组人精氨酸酶组成药物复合物。
2.按权利要求1所述的抗肿瘤的增效药物，其特征在于，所述的细胞自噬抑制剂选自，3-MA (3-Methyladenine)、渥曼青霉素(wortmannin)、LY294002、放线菌酮、巴法洛霉素 Al(Bafilomycin Al )、NH4Cl、氯喹(Chloroquine)或羟基氯喹(hydroxychloroquine)。
3.按权利要求1所述的抗肿瘤的增效药物，其特征在于，所述的细胞自噬抑制剂选自3-MA (3-Methyladenine)、氯喹(Chloroquine)和羟基氯喹(hydroxychloroquine)。
4.按权利要求1所述的抗肿瘤的增效药物，其特征在于，所述的精氨酸酶选自鼠源精氨酸酶、重组人精氨酸酶或长效化修饰的精氨酸酶。
5.按权利要求1所述的抗肿瘤的增效药物，其特征在于，所述的重组人精氨酸酶以及长效化修饰的精氨酸酶选自聚乙二醇修饰的重组人精氨酸酶或唾液酸修饰的重组人精氨酸酶。
6.按权利要求1所述的抗肿瘤的增效药物，其特征在于，所述的药物复合中选自以下一组中的形式进行配方:固体、溶液、分散剂、胶束、乳剂、脂质体、或纳米微球。
7.按权利要求1所述的抗肿瘤的增效药物,其特征在于,所述的肿瘤为淋巴瘤、白血病、肝癌、肺癌、黑色素瘤、乳腺癌或骨髓瘤。
8.按权利要 求7所述的抗肿瘤的增效药物，其特征在于所述的淋巴瘤包括何杰金淋巴瘤(HL)和非何杰金淋巴瘤(NHL)。
【文档编号】A61K45/00GK103990128SQ201310052032
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2013年2月17日 优先权日:2013年2月17日
【发明者】鞠佃文, 曾贤, 李玉彬, 范佳君, 王子玉, 王绍飞 申请人:复旦大学