一种三黄片的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种三黄片的制备方法，由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g作为原料药制成，采用超临界萃取萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NCI-H460细胞增殖药物中的应用。
【专利说明】一种三黄片的制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药制剂【技术领域】，具体涉及一种三黄片的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]三黄片记载于药典,处方为大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄岑浸膏21g(相当于黄岑苷15g)，以上三味，黄芩浸膏系取黄芩，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二次I小时，第三次40分钟，合并煎液，滤过，滤液加盐酸调节PH值至I~2，静置I小时，取沉淀，用水洗涤使PH值至5~7，烘干，粉碎成细粉，测定含量，备用。取大黄150g，粉碎成细粉，过筛；剩余大黄粉碎成粗粉，加30 %乙醇回流提取三次，滤过，合并滤液，回收乙醇并减压浓缩至稠膏状，加入大黄细粉、盐酸小檗碱细粉、黄芩浸膏细粉及辅料适量，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。能清热解毒，泻火通便。用于三焦热盛，目赤肿痛，口鼻生疮，咽喉肿痛，牙龈出血,心烦口渴,尿黄便秘；急性胃肠炎,痢疾。
[0003]现有技术中，尚未有三黄片在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用打粉和水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004]发明目的:为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种三黄片的制备方法。
[0005]本发明的另一个目的在于提供一种三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用。
[0006]技术方案:本发明的目的是通过如下的方案实现的:
[0007]—种三黄片的制备方法，由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄岑80g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成:取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l_3ml/g生药.min，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
[0008]上述一种三黄片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0009]上述一种三黄片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.min,萃取时间160min。
[0010]上述一种三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用，三黄片由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l-3ml/g生药.min,萃取时间150_180min,得超临界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片，制成500片，每片重0.5g。[0011]上述三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用，三黄片制备方法中所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0012]上述三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用，三黄片制备方法中所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药.min，萃取时间160min。三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用。
[0013]现有技术中，三黄片每片0.5g，每次4片，一日3次，采用本发明制备成的三黄片每片0.5g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0014]以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0015]实施例1
[0016]取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30°C，C02流量Iml/g生药.min,萃取时间150min,得超临界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片，制成500片，每片重0.5g。
[0017]实施例2
[0018]取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶`剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50°C，CO2流量3ml/g生药.min,萃取时间180min,得超临界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片，制成500片，每片重0.5g。
[0019]实施例3
[0020]取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药.η?η,萃取时间160min,得超临界萃取物,加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片，制成500片，每片重0.5g。
[0021]实施例4:三黄片抑制NC1-H460细胞增殖的实验研究资料
[0022]I实验材料
[0023]1.1实验用细胞株
[0024]人大细胞肺癌NC1-H460细胞，南京正亮医药科技有限公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0025]1.2实验药物
[0026]研究药物:本发明三黄片:按实施例3方法制备。
[0027]药液储液:称取IOOmg三黄片，溶于5ml无水乙醇中，0.2 μ m滤器过滤，500 μ Idoff管分装，-20°C存储，同时0.2 μ m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0028]1.3实验试剂
[0029]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批号:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO 公司批号:2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批号:2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182);MTT(Biosharp批号:0793) ;PBS (实验室自配)；
[0030]1.4实验器材
[0031]莱卡倒置显微镜(德国Leica型号:DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRA MAX190) ；C02培养箱(FORMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号:S/N020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A);冰箱(西门子公司型号:KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号:ΚΑ-1000) ;0.2μπι滤器(MILLIP0RE型号:SLGP033RB) ; IOcm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0032]2实验方法
[0033]I) NC1-H460 细胞用 DMEM+10%FBS 于 37°C、5%C02 进行常规培养(10cm 培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消 化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。
[0034]2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ I,培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。
[0035]3)根据细胞生长情况，一般长至50%_70%，加入三黄片溶液，继续培养24h。
[0036]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，继续培养 4h。
[0037]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0038]6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
[0039]7)结果以药物对细胞的抑制率表示:
[0040]细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
[0041]3统计处理
[0042]采用Microsoft Excel2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean+ S.D.表不。
[0043]4实验结果
[0044]MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对NC1-H460细胞增殖抑制有差异(p〈0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(Ρ〈0.001)。
[0045]表1三黄片对NC1-H460细胞增殖抑制影响研究-(X土 SD)
[0046]
【权利要求】
1.一种三黄片的制备方法，由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄岑浸膏80g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成:取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生药.min，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
2.根据权利要求1所述一种三黄片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求1所述一种三黄片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa,温度40°C, CO2流量2ml/g生药.min,萃取时间160min。
4.根据权利要求1所述一种三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用，其特征在于三黄片由大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取大黄300g、盐酸小檗碱5g、黄芩浸膏80g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，C02流量l_3ml/g生药.min，萃取时间150_180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
5.根据权利要求4所述一种三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用，其特征在于三黄片制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
6.根据权利要求4所述一种三黄片在制备抑制人大细胞肺癌NC1-H460细胞增殖药物中的应用，其特征在于三黄片制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C, CO2 流量 2ml/g 生 药.min,萃取时间 160min。
【文档编号】A61K9/20GK103520294SQ201310471035
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月11日 优先权日:2013年10月11日
【发明者】不公告发明人 申请人:南京正亮医药科技有限公司