本发明涉及药物领域，具体涉及一种治疗尿路感染的药物组合物及其用途，特别地所述尿路感染是由真菌导致的尿路感染。
背景技术：
：尿路感染(UTI)是指各种病原体侵犯尿路粘膜或组织而引起的尿路炎症，是临床最常见的感染性疾病之一。UTI的病原体以细菌为最常见，包括大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等。由细菌导致的UTI在临床上主要采用对致病菌敏感的抗生素进行治疗。而真菌性UTI多为继发性感染，常因基础疾病或医源性因素导致机体免疫力下降，条件致病菌侵犯宿主所致。广谱抗生素、皮质激素和免疫抑制剂的长期使用，肿瘤患者的化疗和放射治疗，糖尿病患者抗念珠菌的能力降低，艾滋病患者的免疫功能障碍等均可导致真菌在泌尿系统的失调性生长，从而导致真菌性UTI。此外，留置导尿管、各种造瘘、膀胱输尿管返流、尿路畸形等导致尿路局部抵抗力下降，也是导致真菌性UTI的主要因素。常见的导致真菌性UTI的真菌主要是假丝酵母菌属菌种，包括白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、法氏假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和葡萄牙假丝酵母菌等。目前，临床上治疗真菌性UTI主要应用抗真菌药物如氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、5-氟胞嘧啶和卡泊芬净等。而三唑类药物其作用机理是三唑环上的N-4通过与真菌细胞色素P450中铁卟啉中心的铁原子配位，抑制底物脱甲基化反应，致使形成细胞膜的重要物质麦角甾醇缺乏，羊毛甾醇蓄积，导致真菌细胞膜破裂，达到抑菌和杀菌的作用。然而，这些抗真菌药物如伊曲康唑由于本身损伤肝肾的副作用而不宜长期服用，并且反复使用单一抗真菌药物容易导致真菌产生耐药性。不同种类的抗真菌药物有不同的作用机制和作用靶标，联合用药则可能产生协同作用，从而减少单一用药的剂量，缩短疗程，是解决临床真菌耐药性问题的一个可行方案。典型的联用实例如两性霉素B和5-氟胞嘧啶的联合(参见陈宏等，两性霉素B和5-氟胞嘧啶的体外联合药敏试验，第二军医大学学报，2003，24(4)：453-454)，卡泊芬净和伊曲康唑的联合(参见刘雪杰等，伊曲康唑与卡泊芬净治疗小儿真菌性肺炎疗效分析，中外医疗，2010，29(22)：1-2)以及卡泊芬净和两性霉素B的联合等(参见MaurizioS.,etal.,MechanismsofazoleresistanceinclinicalisolatesofCandidaglabratacollectedduringahospitalsurveyofantifungalresistance,AntimicrobialAgentsandChemotherapy,2005,49(2):668-679，以及BryceEM,etal.,AzoledrugsareimportedbyfacilitateddiffusioninCandidaalbicansandotherpathogenicfungi,PLosPathogens,2010,6(9):1-11)。现有抗真菌药物能够产生协同抗耐药真菌的联合有限，研究者们转而从天然产物中寻找具有抗真菌活性的天然化合物或先导化合物，同时还发现了某些天然化合物能够提高唑类抗真菌药物对耐药真菌的敏感性的化合物或先导化合物。例如，已有研究表明和厚朴酚与氟康唑联合可协同对抗耐药假丝酵母菌，生物碱类小檗碱和黄酮类黄芩素与氟康唑联合具有协同对抗耐药假丝酵母菌，大蒜素与两性霉素B、氟康唑、酮康唑等的联合具有协同抗真菌作用等(参见JenielEN,etal.,RoleofFkslpandmatrixglucaninCandidaalbicansbiofilmresistancetoanechinocandin,pyrimidineandpolyene,AntimicrobialAgentsandChemotherapy,2010,54(8):3505-3508；SheenaDS,etal.,Hsp90governsechinocandinresistanceinthepathogenicyeastCandidaalbicansviacalcineurin,PlosPathogens,2009,5(7):1-4；JiaXM,etal.,RTA2isinvolvedincalcineurin-mediatedazoleresistanceandsphingoidlong-chainbasereleaseinCandidaalbicans,Cell.Mol.LifeSci,2009,66:122-134；以及MartelCM,etal.,Identificationandcharacterizationoffourazole-resistanterg3mutantsofCandidaalbicans,AntimicrobialAgentsandChemotherapy,2010,54(1):4527-4533)。还有研究表明从刺蒺藜中分离出的一种皂苷类化合物TTS-12具有很强的抗真菌活性，它能够直接与真菌细胞膜上的麦角甾醇结合，发挥类似两性霉素B的作用，同时还能抑制EGR基因的表达，阻断真菌的甾醇合成通路(参见张军东等，天然产物T-12抗真菌作用及其机制研究，中国新药杂志，2004，13(12):1110-1114；以及张军东等，新型抗真菌剂TTS-12对白念珠菌麦角甾醇生物合成相关ERG基因表达的作用研究，中国药学杂志，2011，46(16):1229-1234)。技术实现要素：本发明一方面提供一种治疗尿路感染的药物组合物，其包含三氮唑类化合物和川芎嗪。在一个实施方案中，所述三氮唑类化合物和川芎嗪的重量配比为1:1-256，优选为1:2-16，例如1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15和1:16。在另一个实施方案中，所述药物组合物由三氮唑类化合物、川芎嗪和羌活醇组成。在进一步地实施方案中，所述药物组合物中，三氮唑类化合物、川芎嗪和羌活醇的重量配比为1:2-16：2-16，优选为1：4-8：4-8。在又一个实施方案中，所述三氮唑类化合物包括氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑和/或泊沙康唑。本发明的另一方面提供所述药物组合物用于制备治疗尿路感染的药物中的用途，所述尿路感染优选是由真菌导致的尿路感染。在一个实施方案中，所述导致尿路感染的真菌为假丝酵母菌属菌种，优选选自白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、法氏假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和葡萄牙假丝酵母菌中的一种或多种。上述所述的医药用途中，对于本发明药物组合物的给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠或大鼠的治疗方案应用于人身上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是容易实现的。本发明的另一方面是提供包含所述药物组合物的药物制剂，其包括片剂、胶囊、缓释片剂、丸剂、颗粒剂、分散片或散剂。在一个实施方案中，所述药物制剂是由药物组合物和辅料组成，所述辅料选自淀粉、预胶化淀粉、淀粉浆、β-环糊精、卡波姆、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙二醇(PEG)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、甘露醇、十二烷基硫酸钠、交联羧甲基纤维素钠、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、阿斯巴甜、甜橙香精、碳酸氢钠、碳酸钠、肠溶包衣粉中的一种或多种。本发明的药物组合物中，药物组合物的活性成分之间对假丝酵母菌属菌种具有协同的抗菌作用，可大大降低三氮唑类化合物的用量，特别是对三氮唑类化合物非敏感菌而言，有助于减轻其对肝肾的毒副作用。所述药物组合物可用于治疗由所述假丝酵母菌属菌种引起的感染，如尿路感染。具体实施方式在下文中更详细地描述了本发明的药物组合物的生物学实施例，以有助于对本发明的理解。实施例1：微量稀释法测定各单药最低抑菌浓度(MIC)1、菌株质控菌采用NCCLS推荐的ATCC标准菌株：近平滑假丝酵母菌(Candidaparapsilosis)ATCC22019临床标准菌株：白假丝酵母菌(Candidaalbicans)Y0109(标记为Y0109)，经形态学和生化学鉴定。临床分离菌株：白假丝酵母菌(Candidaalbicans)4株(分别标记为Ca-1#，Ca-2#，Ca-3#和Ca-4#)，光滑假丝酵母菌(Candidaglabratas)2株(分别标记为Cg-1#和Cg-2#)，近平滑假丝酵母菌(Candidaparapsilosis)2株(分别标记为Cp-1#和Cp-2#)，热带假丝酵母菌(Candidatropicalis)2株(分别标记为Ct-1#和Ct-2#)和克柔假丝酵母菌(Candidakrusei)3株(分别标记为Ck-1#，Ck-2#和Ck-3#)，上述菌株均经形态学和生化学鉴定。菌株培养条件：所有实验用菌株分别于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)中划板活化，各菌株于37℃培养2天后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置于SDA斜面，用上述方法培养后于4℃保存备用。2、药物与试剂伊曲康唑(Itraconazole，ITCZ)原料药、川芎嗪和羌活醇通过商购获得(上海伊奥生物科技有限公司)，HPLC纯度大于99％。药物贮备液的配制：伊曲康唑以DMSO溶解为2560μg/ml的贮备液，川芎嗪以DMSO溶解为2560μg/ml的贮备液，羌活醇以DMSO溶解为2560μg/ml的贮备液，所有贮备液置于-20℃冰箱中贮存备用。3、实验方法真菌悬液的配制实验前，从4℃保存的SDA培养基上挑取少量白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌，接种至1mlYEPD培养基，于37℃、200rpm振荡培养，活化两次后，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至YEPD培养基中，用上述方法再次活化，16小时后，用血细胞计数板计数，以RPMI1640培养基调整菌液浓度至1×103-5×103个/ml。药敏反应板的制备取无菌96孔板，于每排1号孔加入RPMI1640液体培养基100μl作空白对照；3-12号孔各入加新鲜配制的菌液100μl；2号孔分别加入菌液198μl和受试化合物溶液2μl；12号孔不加入药物，只加入菌液100μl作阳性生长对照。2-11号孔进行倍比稀释。使伊曲康唑的浓度在64-0.125μg/ml之间，川芎嗪或羌活醇的浓度在1024-2μg/ml之间。各孔中DMSO含量均低于1％。每次配制药敏板的同时均制备一质控菌药敏板，各药敏板于37℃恒温箱中培养。最低抑菌浓度(MIC值)的判定在37℃恒温箱中，各株假丝酵母菌培养48小时后，用酶标仪于630nm下测定各孔OD值。阳性对照孔的OD值控制在0.2左右，与阳性对照孔比，以OD值下降80％以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC80(真菌生长80％被抑制时的药物浓度)。上述实验均平行操作2至3次，当MIC80值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC80值；当MIC80值相差两个浓度以上时，则重新进行实验，直到符合要求为止。根据2002年NCCLS提出的标准M27-A2方案，与生长对照孔比较≥80％生长抑制所对应的最低药物浓度为MIC80值。质控菌根据NCCLSM27-A2方案的建议，采用近平滑假丝酵母菌ATCC22019为质控菌，其MIC参考值如下：伊曲康唑的MIC80值0.125-0.5μg/ml。每次试验以此菌株为参照菌株，在每次配制药敏板的同时制备一质控菌药敏板，只有当该质控菌的MIC值位于上述范围内时，才认为试验操作准确可靠。如同时试验菌株生长良好，则可认为试验成功，结果可接受。4、实验结果通过上述微量稀释法测定了伊曲康唑、川芎嗪和羌活醇对抗不同菌株的假丝酵母菌的作用。结果如下面的表1所示。表1：各化合物单用对抗假丝酵母菌属菌株的MIC80值(μg/ml)菌株ITCZ川芎嗪羌活醇质控菌220190.2525664标准菌Y01090.5128128Ca-1#1128256Ca-2#32512512Ca-3#16128128Ca-4#32256256Cg-1#4512128Cg-2#16128512Cp-1#16512128Cp-2#32512512Ct-1#8128128Ct-2#16256512Ck-1#32256256Ck-2#4128128Ck-3#8512256注：ITCZ即伊曲康唑。下同。由表1中的实验结果可以看出，伊曲康唑单用对白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的各临床分离菌株的MIC80值均大于或等于16μg/ml，表明各临床分离菌株对伊曲康唑不敏感，产生了耐药性，单用伊曲康唑的抑菌效果不理想。而川芎嗪和羌活醇对质控菌近平滑假丝酵母菌ATCC22019、标准菌白假丝酵母菌Y0109以及白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的各临床分离菌株的MIC80值均大于或等于64μg/ml，且绝大部分大于或等于128μg/ml，表明单用抑菌作用较微弱。实施例2：棋盘式微量稀释法测定ITCZ和川芎嗪联用的抗真菌效果1、实验方法棋盘式微量稀释法是体外真菌药敏实验的延伸，根据实施例1的单体药物的抗真菌效果，挑选ITCZ抗真菌效果较差的菌株进行联合用药测试，分别配置不同浓度比例的药物组合物溶液，并测试各不同浓度比例药物的最低MIC，以便考察联合给药是否产生了协同效果。实验所用药物和试剂以及实验操作步骤同上述生物学实施例1，具体各组药物组合物的配比如下：ITCZ川芎嗪组132μg/ml16μg/ml组232μg/ml32μg/ml组332μg/ml64μg/ml组432μg/ml128μg/ml组532μg/ml256μg/ml组632μg/ml512μg/ml2、联合用药的效果评价部分抑菌浓度指数(fractionalinhibitoryconcentrationindex，FICI)是评价联合用药的两药相互作用方式的主要参数。抑菌浓度分数(FIC)分别为每一种药物联合抑菌时所需的最低抑菌浓度(MIC)与单用时MIC的比值，而FIC指数(FICI)则等于两种药物FIC之和。FICI的计算公式如下：FICI＝FICA+FICB＝(MICAB/MICA)+(MICBA/MICB)MICAB和MICBA分别为两药合用时药物A和药物B的最低抑菌浓度浓度，MICA和MICB分别为药物A和药物B单独使用时的最低抑菌浓度。一般认为当FICI≤0.5时，两药的相互作用为协同作用，且FICI值越小，协同作用越强；当0.5＜FICI≤1时，两药的相互作用为相加作用；当1＜FICI≤4时，两药的相互作用为无关作用；当FICI＞4时，两药的相互作用为拮抗作用。3、实验结果通过上述棋盘式微量稀释法测定了川芎嗪与伊曲康唑联用的体外抗真菌效果，实验结果如下：伊曲康唑与川芎嗪联用的体外抗真菌活性评价上述实验结果表明，白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的各临床分离菌株对单独的伊曲康唑的敏感性较差，提示所分离的各临床菌株对伊曲康唑产生了耐药性。而当伊曲康唑与川芎嗪连用后可以大幅降低MIC值，提示伊曲康唑和川芎嗪在抗真菌方面产生了明显的协同作用，另外，通过FIC指数判断，两者之间配比在1:4-8之间效果最佳。实施例3：棋盘式微量稀释法测定ITCZ、川芎嗪和羌活醇联用的抗真菌效果在实施例2的试验结果基础上，我们以ITCZ和川芎嗪之间重量比1:8为最佳配伍比例，结合本领域川芎与羌活配伍的中医遣方用药经验，进一步地研究了羌活中代表活性成分羌活醇与ITCZ和川芎嗪之间的配伍协同作用，以期获得协同作用最佳的药物组合物，按照川芎和羌活配伍1:1的中医经验，我们将ITCZ、川芎嗪和羌活醇之间的重量配比设定为1:8:8试验方法同实施例2，具体结果如下：实施例4药物组合物对尿路感染大鼠模型的疗效评价造模方法：取SD大鼠，雌雄各半，体重200g左右，试验前大鼠禁水18小时，5％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。腹部皮肤去毛后消毒，下腹正中切口2cm，露出左侧后腹壁，认清左侧输尿管后暴露膀胱，除正常对照组外，其他各组分别向大鼠膀胱注射标准菌Y0109菌液0.5ml，正常对照组注射等量生理盐水，然后清理腹腔，逐层缝合切口。给药方案：术后24小时后开始给药，各给药组按照17mg/kg灌胃给予不同组成的药物组合物，模型组和正常对照组给予等量生理盐水，连续给药7天，各给药组给药剂量如下：ITCZ川芎嗪羌活醇组117mg/kg--组2-17mg/kg-组3--17mg/kg组41.9mg/kg15.1mg/kg-组51mg/kg8mg/kg8mg/kg检测指标：末次给药24小时后，将大鼠麻醉，腹主动脉取血5ml用于血常规检测，然后处死大鼠，在无菌条件下直接抽取膀胱尿液0.5ml，接种于平板培养基上，与孵箱中培养24小时，观察细菌生长情况，将左右肾脏去除，去除多余组织，称取左右肾脏重量，计算左右肾重量比。具体结果如下：1、各组大鼠左右肾脏重量及重量比左肾(g)右肾(g)左/右肾重比正常对照组0.91±0.130.93±0.120.98模型组1.51±0.21##0.98±0.141.54组11.34±0.08*1.04±0.131.29组21.54±0.191.01±0.131.52组31.41±0.150.99±0.131.42组41.27±0.07**1.02±0.131.24组51.12±0.09**1.03±0.131.082、尿细菌培养结果尿细菌数正常对照组0模型组69.7±9.2##组150.2±7.4*组264.3±7.9组358.4±8.1*组436.9±5.2**组524.3±5.6**3、血常规检测结果WBC(109/L)NEU(％)正常对照组10.4±1.720.3±3.6模型组29.8±2.4##49.6±2.8组124.3±1.8*40.3±2.4**组230.2±1.149.8±1.9组327.9±2.245.7±2.1组419.5±1.3**34.1±1.8**组514.9±1.2**28.6±1.6**从上述结果可以看出，在口服给予不同药物后，伊曲康唑组对大鼠尿路感染有明显的改善效果，而川芎嗪几乎无效，羌活醇有微弱的该改善效果，但与模型组相比，不存在显著性差异，伊曲康唑与川芎嗪联用与伊曲康唑组相比可明显提高治疗效果，而伊曲康唑、川芎嗪和羌活醇组合物改善效果最佳。以上描述了本发明的优选实施方式，然而这并不构成对本发明的限制。本领域技术人员在不偏离本发明的范畴和精神的情况下对本文公开的实施方案所进行的修改和变化落入本发明的范围。当前第1页1 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