薯莨在制备预防或治疗糖尿病及其并发症的药物中的应用_2

文档序号:9254338阅读:来源:国知局
,称取1000 Og炮制成1.0 cm段的薯莨,提取2次,第一次加 8倍量水浸泡30分钟,煎煮2小时,第二次加8倍量水煎煮2小时,提取后,提取液滤过,滤液 浓缩,进行出膏率测定,余下的浓缩物进行减压干燥(温度为65~75°C,真空度为0. 08~ 0.1 Mpa),结果如表8所示:
[0052] 表8提取方案验证
[0053]
[0054] 由上表8可见,优选出的试验条件用来提取薯莨是合理、可行的。
[0055] 上述实验例中所述出膏率测定的具体方法为:取浓缩至相对密度1. 20~1. 30 (测 定温度60°C )的清膏,转移至1000 ml的容量瓶中并定容,摇匀,精密量取20ml分别置于已 恒重的蒸发皿中,水浴挥干,残渣于l〇5°C干燥3小时,取出,置干燥器中放置30分钟,称重, 计算;超临界二氧化碳萃取的提取物水浴挥干,置于l〇5°C下干燥至恒重,称重,计算。
[0056] 实验例4本发明的薯莨提取物对2型糖尿病大鼠的影响
[0057] 1?材料与方法
[0058] I. 1材料
[0059] I. I. 1动物清洁级雄性SD大鼠,体重150~180g,购于重庆腾鑫比尔实验动物销 售有限公司,动物许可证号SCXK (渝),2012-0006。
[0060] I. 1. 2提取物及试剂
[0061] 1. 1.2. 1薯莨提取物:由自备(以下简称TQW),成人临床剂量为0.045g / kg,大 鼠等效剂量与人换算为7倍人用临床剂量。临用时将胶囊内容物(褐色粉末)取出用纯水 配制。试验时大鼠TQW低剂量组为0. 63g/kg(二倍临床剂量),高剂量组为I. 26g/kg (四倍 临床剂量)。
[0062]I. 1. 2. 2链脲佐菌素(Str印tozotocin STZ),北京博奥拓达科技有限公司,批号: 040M1367。
[0063] I. 1. 2. 3 大鼠膜岛素试剂盒:Manufactured by Mercodia AB,Sylveniusgatan8A, SE-75450Uppsala,Sweden。批号:20518,用时按说明书操作。
[0064] 1. 1.2. 4大鼠C肽试剂盒:上海蓝基科技有限公司,批号:20130617,用时按说明书 操作。
[0065] 1.1. 2. 5二甲双胍:为天安牌盐酸二甲双胍肠溶片(批号20121144),成人临床剂 量为每日0.03g / kg,换算为大鼠等效量0.21g / kg。
[0066] I. I. 2. 6普通饲料购于重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司。
[0067] I. 1. 2. 71?脂1?糖词料制作:白砂糖、猪油、鸡蛋均购于超市,鸡蛋煮熟只用蛋黄, 普通饲料打碎成粉。饲料配方:每100g高脂饲料中含普通饲料35g(重庆滕鑫比尔实验动 物销售有限公司),猪油15g、白砂糖25g、鸡蛋黄25g、饲喂动物20天。
[0068] 1. 2动物分组及给药方法
[0069] 1.2. 1预先给予TQW对2型糖尿病大鼠的影响试验:大鼠分为3组,分别为正常组、 模型组、TQW组。正常组给予普通饲料,模型组和TQW组高脂高糖饲料喂养,同时TQW组每 天灌胃给予TQW(0. 63g / kg,l次/天),20天后,模型组和TQW组腹腔注射STZ (临用时以 朽1檬酸盐缓冲液配制,pH值4. 2,30mg/kg,在30分钟内完成注射),制造糖尿病模型,筛选 出造模成功的大鼠用普通饲料喂养12天(TQW组全程给药32天)。
[0070]I. 2. 2TQW对2型糖尿病大鼠的影响试验:大鼠分成5组,正常组、模型组、二甲双 胍组、TQW低剂量组、TQW高剂量组。正常组给予普通饲料,其他4组高脂高糖饲料喂养20 天后造模(同上),造模成功的大鼠改用普通饲料喂养,同时各组开始给药,2次/ d,上、下 午各1次。二甲双胍组ig〇.21g/kg,TQW低剂量ig0.63g/kg,(二倍临床剂量),TQW高 剂量igl. 26g/kg(四倍临床剂量)。全程给药27天。
[0071] I. 2. 3TQW与西药联合使用对2型糖尿病大鼠和正常大鼠的影响试验:大鼠分成4 组,正常组、模型组、二甲双胍+TQW低剂量组、正常+TQW高剂量组。正常组和正常+TQW高剂 量组给予普通饲料,模型组、二甲双胍+TQW低剂量组高脂饲料喂养20天后造模(同上),筛 选造模成功的大鼠改用普通饲料喂养,同时各组开始给药,2次/ d,上、下午各1次。二甲 双胍+TQW低剂量组先给二甲双胍27天(ig,0. 21g/kg),然后换成TQW低剂量(ig,0.63g / kg,二倍临床剂量)21天。正常+TQW高剂量组给TQW高剂量(ig,I. 26g / kg,四倍临床剂 量)21天。
[0072] 1. 3检测方法及仪器
[0073] L3. 1胰岛素、C肽均用ELISA法检测,检测仪器BiotekSynergy2荧光酶标仪,美 国Biotek公司产品。
[0074] 1. 3. 2血糖检测仪及试纸:美国罗氏产品,ACXU-CHEK Pertorma。
[0075] 1.4病理切片检查大鼠空腹16小时后,断头处死,取胰腺置于中性甲醛液中固定 保存,做病理检测。该项检测在贵阳中医学院第二附属医院病理科完成。根据胰腺被损伤 后的萎缩程度将其分成正常和萎缩,按每组萎缩和正常的只数进行统计学(卡方)检验处 理。
[0076] 1. 5统计方法:使用SPSS17. 0统计软件,计量资料以^±s表达,计数资料以百分比 表达,组后计量资料以T检验比较,计数资料以卡方检验比较。
[0077] 2?结果
[0078] 2. 1预先给予TQW对2型糖尿病大鼠的影响
[0079] 2. L 1糖耐量:大鼠空腹16小时后,给予葡萄糖溶液(灌胃,20g / 100mL,3mL / 只),测定大鼠的空腹、lh、2h、3h血糖值,结果见表9、图I :
[0080] 表9预先给TQW对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响(^±5)
[0081]
[0082] 注:与正常组比较,*p < 0.05, **p < 0.01 ;与模型组比较,#p < 0.05, ##p < 0? 01。
[0083] 由表9、图1可知:TQW组3h的血糖值明显低于模型组(P< 0.05),其他两个时间 点亦有降低;说明薯莨提取物对2型糖尿病具有预防作用。
[0084] 2.L2胰腺组织病理切片检查
[0085] 病理检测结果提示,预先给TQW组较模型组胰腺病理损伤明显减轻。见表10、图 2-图4(HE染色 X400):
[0086] 表10预先给TQW对2型糖尿病大鼠胰腺的影响(单位:只)
[0087]
[0088] 注:与正常组比较,*p < 0. 05;与模型组比较,#p < 0. 05。
[0089] 2. 2TQW对2型糖尿病大鼠的影响
[0090] 2. 2. 1 体重
[0091] TQW可显著改善糖尿病大鼠降低的体重,结果见表11、图5 :
[0092] 表1lTQW对2型糖尿病大鼠体重的影响< 赵)
[0093]
[0094]
[0095]注:与正常组比较,*p<0.05,#p<0.01 ;与模型组比较,#p<0.05,##p<0.01
[0096] 2. 2. 2 糖耐量
[0097]大鼠空腹16小时后,给予葡萄糖溶液(灌胃,20g/100mL,3mL/只),使用罗氏血 糖仪测定空腹、lh、2h、3h血糖值。结果见表12、图6 :
[0098] 表12TQW对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响(^±s)
[0099]
[0100] 注:与正常组比较,*p <
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