壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物在制备抗肿瘤组合物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药生物技术领域，涉及一种壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物及其在制备 抑制和治疗肿瘤的组合物中的应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤严重危害着人类健康，位于重大疾病的首位，死亡率极高。我国作为一个 发展中国家，随着人口老龄化进程的加快，以及环境污染问题的存在，恶性肿瘤发病率持续 上升，肿瘤的防治形势非常严峻。
[0003] 去甲斑蝥素（norcantharidin，NCTD)为斑蝥活性成分斑蝥素的衍生物，是我国开 发的治疗癌症的药物。与斑蝥素比较，去甲斑蝥素的肾脏毒性和对泌尿系统的刺激作用有 所减小，同时具有升高白细胞作用，并有较强的抗肿瘤作用，临床上用于肝癌、胃癌、结肠癌 等的治疗。尽管去甲斑蝥素的毒性已经有所减小，但仍然存在对泌尿系统的毒性，同时其在 体内的分布广泛、吸收消除时间短，降低了其对肿瘤的治疗效果，也增加了对其它脏器组织 的毒性。因此，研究去甲斑蝥素的新型衍生物，降低用药量，延长其体内存留时间，具有十分 重要的意义。
[0004] 壳聚糖及其衍生物具有多种生物活性，如提高机体免疫力、抗肿瘤、调节血糖、调 节血脂等，同时可生物降解吸收，分子结构中的氨基、羟基等活性基团，易于进行化学修饰。 这些性质使其作为抗肿瘤药物载体具有独特的优势。申请号为200810229077. 0的中国发 明专利公开了一种水溶性斑蝥素和/或去甲斑蝥素壳聚糖衍生物及其制备方法，由壳聚糖 和斑蝥素或者去甲斑蝥素反应得到，该衍生物水溶性好，毒副作用小，并具有抗肿瘤活性。 关于壳聚糖的生物相容性研究的文献报道较多，由于壳聚糖不溶于水，其在体内的生物降 解可产生局部的炎症反应。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物及其在制备抗肿瘤组合物 中的应用，以弥补现有技术的上述不足。
[0006] 羧甲基壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖均为水溶性壳聚糖，与不溶于水的壳 聚糖不同，羧甲基壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖在体内易被人体吸收，经腹腔给药 后，由腹腔吸收，血液运转，经肝脏降解，肾脏代谢，经尿液排出，其吸收降解无毒副作用。羧 甲基壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖在体内可降解生物材料研究中应用已有广泛的 研究报道，在生物体的组织相容性好，而不溶于水的壳聚糖则会在体内引起局部炎症。
[0007] 为实现上述发明目的，本发明采用以下具体的技术方案： 一种壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物在制备抑制和治疗肿瘤的组合物中的应用。
[0008] 上述组合物是药物、医疗器械、保健食品或生物制剂。
[0009] 上述壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物是羧甲基壳聚糖去甲斑蝥素衍生物、羟乙基壳聚 糖去甲斑蝥素衍生物或羟丙基壳聚糖去甲斑蝥素衍生物。
[0010] 上述壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物具体是由羧甲基壳聚糖、羟乙基壳聚糖或羟丙基 壳聚糖与去甲斑蝥素反应生成。
[0011] 所述的壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物，具有以下分子结构特征：
所述的壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物的分子结构中，&为去甲斑蝥素和/或H、C0CH 3、 CH2C00Na、CH2C00K、CH2CH20H、CH 2CH0HCH3,私为 H、CH 2C00Na、CH2C00K、CH2CH20H 或 CH2CH0HCH3， R#H、CH2C00Na、CH 2C00K、CH2CH20H或CH2CH0HCH 3;其中R#去甲斑蝥素的摩尔百分数不 小于10%，即去甲斑蝥素的取代度不小于10%，札为乙酰基（C0CH 3)的摩尔百分数小于50% ; 分子中的羧甲基（CH2C00Na或CH2C00K)、羟乙基（CH2CH 20H)或羟丙基（CH2CH0HCH3)的摩尔 百分数大于50%。本发明的壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物，其特征是：羧甲基（CH 2C00Na或 CH2C00K)、羟乙基（CH2CH20H)或羟丙基（CH 2CH0HCH3)的取代位主要是C6-0位，也可以有少量 的取代位是C3-0位或C2-N位，取代度大于50% (摩尔百分数)，C2-N位的乙酰基（C0CH3)小 于50% (摩尔百分数)，去甲斑蝥素的取代位是在C2-N位，去甲斑蝥素的取代度不小于10% (摩尔百分数)。
[0012] 壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物的制备方法，包括以下步骤： (1) 取壳聚糖衍生物，蒸馏水溶解，搅拌溶解，调pH，得壳聚糖衍生物溶液；所述壳聚糖 衍生物选自羧甲基壳聚糖、羟乙基壳聚糖或羟丙基壳聚糖； (2) 取去甲斑蝥素，溶解，得去甲斑蝥素溶液； (3) 搅拌下将去甲斑蝥素溶液滴加到壳聚糖衍生物溶液中，避光反应； (4) 反应物装入透析袋中，用蒸馏水透析，透析物经冷冻干燥，得壳聚糖基去甲斑蝥素 衍生物。
[0013] 本发明的壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物具有显著的抑制肿瘤组织生长的作用，其效 果优于去甲斑蝥素，在体内的存留时间长，从而降低了去甲斑蝥素的用药量，减少了毒副作 用，具有减毒增效作用，在制备抑制和治疗抗肿瘤的药物、医疗器械、保健食品及生物制剂 中应用，具有广阔前景。
【具体实施方式】
[0014] 下面通过具体实施例来进一步详细说明本发明。
[0015] 实施例1:壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物的制备 以水溶性的羧甲基壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖为底物与去甲斑蝥素反应，制 备了壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物，具体制备过程如下： (1)壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物1的制备：称取1. 〇g羧甲基壳聚糖(羧甲基取代度 95. 5%，脱乙酰度83. 2%，分子量96. 5kD，糖单元摩尔数0. 0033摩尔），置于50ml的三口瓶 中，加入25ml蒸馏水，搅拌溶解，加三乙胺调pH9,得羧甲基壳聚糖溶液。称取2. 2g去甲斑 蝥素（0. 012摩尔)，溶解于10ml丙酮，得去甲斑蝥素丙酮溶液。搅拌下将去甲斑蝥素丙酮溶 液滴加到羧甲基壳聚糖溶液中，室温、避光反应24h，反应物装入透析袋中，用蒸馏水透析， 透析物经冷冻干燥，得1. 15g壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物1 (羧甲基壳聚糖去甲斑蝥素衍生 物A)〇
[0016] (2)羧甲基壳聚糖去甲斑蝥素衍生物B的制备：取l.Og羧甲基壳聚糖(羧甲基取 代度82. 4%，脱乙酰度88. 6%，分子量1. 4kD，糖单元摩尔数0. 0044摩尔），置于50ml的三口 瓶中，加入l〇ml蒸馏水，搅拌溶解，加三乙胺调pH8. 0,得羧甲基壳聚糖溶液。称取0. 75g去 甲斑蝥素（0.0044摩尔)，溶解于5ml丙酮，得去甲斑蝥素丙酮溶液。搅拌下将去甲斑蝥素 丙酮溶液滴加到羧甲基壳聚糖溶液中，45°C、避光反应12h，反应物装入透析袋中，用蒸馏水 透析，透析物经冷冻干燥，得〇. 91g壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物2 (羧甲基壳聚糖去甲斑蝥 素衍生物B)。
[0017] (3)壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物3的制备：称取2. 0g羟乙基壳聚糖(羟乙基取代 度78. 2%，脱乙酰度88. 5%，分子量126. 6kD，糖单元摩尔数0. 01摩尔），置于50ml的三口瓶 中，加入10ml蒸馏水，10ml甘油，搅拌溶解，加三乙胺调pH9. 0,得羟乙基壳聚糖溶液。称取 7g去甲斑蝥素（0. 04摩尔)，溶解于15ml丙酮，得去甲斑蝥素丙酮溶液。搅拌下将去甲斑蝥 素丙酮溶液滴加到羟乙基壳聚糖溶液中，室温、避光反应24h，反应物装入透析袋中，用蒸馏 水透析，透析物经冷冻干燥，得3. 12g壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物3 (羟乙基壳聚糖去甲斑 蝥素衍生物A)。
[0018] (4)壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物4的制备：称取2. 0g羟乙基壳聚糖(轻乙基取代 度78. 2%，脱乙酰度88. 5%，分子量126. 6kD，糖单元摩尔数0. 01摩尔），置于50ml的三口瓶 中，加入10ml蒸馏水，10ml甘油，搅拌溶解，加三乙胺调pH9. 0,得羟乙基壳聚糖溶液。称取 7g去甲斑蝥素（0.04摩尔)，溶解于10ml丙酮，5ml甘油，5ml聚乙二醇2000,得去甲斑蝥素 丙酮溶液。搅拌下将去甲斑蝥素丙酮溶液滴加到羟乙基壳聚糖溶液中，室温、避光反应12h， 反应物装入透析袋中，用蒸馏水透析，透析物经冷冻干燥，得3. 12g壳聚糖基去甲斑蝥素衍 生物4 (羟乙基壳聚糖去甲斑蝥素衍生物B)。
[0019] (5)壳聚糖基去甲斑蝥素衍生物5的制备：称取2.lg羟丙基壳聚糖(羟