一种负载疏水性纳米磁性粒子脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属纳米脂质体及其制备领域，特别涉及一种负载负载疏水性纳米磁性粒子脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]肿瘤是严重威胁人类生命健康的常见病、多发病。肿瘤一旦发展到后期便很难再被治愈，因袭肿瘤的早期诊断对于病变的控制和治疗具有非常重要的意义。其中核磁共振成像技术相比于X射线成像、超声波成像等临床诊断手段具有分辨率高、特异性强、成像参数多、无电离辐射等优点，在医学诊断方面有着巨大的应用潜力，尤其是对于肿瘤的早期发现和诊断有着突出的优势。其中核磁共振成像过程中需要使用造影剂来提高MRI诊断的特异性和灵敏性。目前来说，己经被研究出来或正在研究中的MRI造影剂的种类有很多，除了一些金属元素与配体形成的鳌合物如Gd-DTPA为代表的Tl造影剂，还有以表面包覆有生物相容性聚合物的磁性纳米四氧化三铁为代表的T2类造影剂。然而Gd为重金属元素，小分子Gd试剂在体内停留时间过短，且Gd试剂具有很强的肾毒性，限制了其应用前景，而超顺磁性纳米四氧化三铁穿透力强且弛豫率高，使用剂量低等优势，使其成为核磁共振成像的良好造影剂(参见《中华放射学杂志》，2011年6月第45卷第6期，杨蕊梦等人，新型MR对比剂长循环超顺磁氧化铁脂质体纳米微粒的体内外实验研究)。四氧化三铁作为磁共振造影剂来说，其必须具备好的生物相容性，高的稳定性，和较长的血液循环时间等条件。目前已经许可上市和正在临床实验的超顺磁性造影剂大多都是用壳聚糖、葡聚糖等高分子聚合物作为修饰材料，然而这类造影剂粒径较大，容易被体内的网状内皮细胞所吞噬，纳米颗粒偶尔会引发过敏反应等缺点。
[0003]有研究表明脂质体作为磁性材料的包覆剂可以弥补上述造影剂的不足和缺点，而目前大多数的研究都是倾向于脂质体作为亲水性纳米磁性粒子的修饰剂，对于包载疏水性纳米磁性粒子鲜少涉及。对于包载亲水性磁性纳米粒子的脂质体而言，存在一些缺点和不足。例如磁含量不高，磁响应性低。由于脂质体，尤其是小单室脂质体的内部空间有限，导致仅有少量的磁性粒子可以被包入脂质体的内部，饱和磁化强度小、MRI成像效果差；磁性粒子的密度较大、易沉降、易引发一些对生物体的毒性效应，并且在脂质体通过自组装形成囊泡的结构时，难以均匀包覆。另外由于脂质体的内部空间有限，当磁性粒子占据其中时，导致药物的包封率下降。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种负载疏水性纳米磁性粒子脂质体及其制备方法，该发明的磁性脂质体可以避免磁性粒子直接接触人体组织而产生一些毒副作用，同时也可以提高磁性粒子在脂质体中的负载量，增加磁饱和度从而达到增强肿瘤的MRI图像对比度的目的。该制备方法简单，成本低。
[0005]本发明的一种负载疏水性纳米磁性粒子脂质体，所述脂质体的双分子层中含有疏水性磁性粒子。
[0006]所述疏水性纳米磁性粒子为油水界面法制备；所述疏水性纳米磁性粒子为Fe304。
[0007]所述脂质体的水相负载水溶性药物。
[0008]所述水溶性药物为硫酸奎宁。
[0009]本发明的一种负载疏水性纳米磁性粒子脂质体的制备方法，包括:
[0010](I)将卵磷脂和稳定剂按质量比为2?6:1溶解于氯仿-甲醇溶液中，超声，得到卵磷脂-胆固醇溶液；
[0011](2)将磁性粒子溶解到氯仿中，得到磁流体溶液，然后与步骤⑴中卵磷脂-胆固醇溶液以摩尔比为1:100-1:25混合，30?50°C旋转蒸发，得到透明薄膜；
[0012](3)将步骤(2)中的透明薄膜在氮气保护下，旋转蒸发0.5?2.0h，真空中放置12?24h，得到脂质体薄膜；
[0013](4)将磷酸盐缓冲液加入到步骤(3)中的脂质体薄膜中，氮气保护下，搅拌，分散，离心，得到负载疏水性磁性粒子的纳米脂质体；其中，磷酸缓冲液的pH为7.0?7.4。
[0014]所述步骤⑴中所使用的稳定剂为胆固醇。
[0015]所述步骤(I)中氯仿-甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为2:1。
[0016]所述步骤(I)中卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。
[0017]所述步骤(2)中磁性粒子用油酸和油酸钠修饰。
[0018]所述步骤⑵中磁流体的浓度为0.25?1.0mg/mlo
[0019]所述步骤(4)中搅拌的时间为2.0?6.0h ;分散为高速分散均质机分散30?45min ;离心速率 100rpm 离心 1min。
[0020]所述步骤⑷中制备的脂质体用100?220nm的滤膜过滤除菌。
[0021]有益效果
[0022](I)本发明制备的磁性脂质体，磁性粒子由于其疏水性，被包埋在脂质体的磷脂双分子层内，避免了磁性粒子直接接触人体组织所造成的损害；
[0023](2)本发明制备的磁性脂质体粒径分布均匀，重复性好，粒径大小为120?150nm ；
[0024](3)本发明制备的磁性脂质体的磁性粒子包封率高于69%，并且具有好的MRI成像效果；
[0025](4)本发明制备的磁性脂质体的全部水相可以用来包覆其他水溶性药物，为其他生物医学应用提供了可能，同时还提高了磁性粒子的负载量；
[0026](5)本发明的磁性脂质体以有效的降低核磁共振成像时的背景噪声，提高图像的对比度，且具有稳定性好、便于储存、生物相容性好、颗粒分布均匀等优点；
[0027](6)本发明的制备方法简单，成本低。
【附图说明】
[0028]图1是本发明制备的磁性脂质体的结构示意图；
[0029]图2是本发明的工艺流程图；
[0030]图3是实施例1中磁性脂质体的TEM图片；
[0031]图4是实施例2中磁性脂质体的弛豫率测量图(a)和磁性吸引效果图(b)；
[0032]图5是实施例3中磁性脂质体的体外肿瘤MRI成像效果图(a)和信号强度图(b)。
【具体实施方式】
[0033]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0034]实施例1
[0035](I)分别将取10mg蛋黄卵磷脂和25mg胆固醇充分溶解于20ml氯仿与甲醇的体积比为2:1的溶剂中。
[0036](2)取油酸修饰的磁性粒子溶解到20ml的氯仿中，得到浓度为0.25mg/ml的磁流体溶液。接着将磁流体溶液和(I)中的卵磷脂-胆固醇溶液在茄形瓶中以1:50的摩尔比进行混合，在温度为45°C时旋转蒸发