益效果为：
[0038] 1、本发明的纳米乳佐剂是呈乳白色、澄清、透明均一，流动性良好，稳定性良好的 新型水包油包水型双相纳米乳佐剂；
[0039] 2、本发明采用的油相为液体石蜡，提高了纳米乳的增溶性，增大了纳米乳形成的 区域；
[0040] 3、本发明的纳米乳佐剂对易水解药物能够起到保护作用，并具有缓释作用；
[0041 ] 4、本发明的纳米乳佐剂粒径小、分散性好、比表面积大，更易于体内吸收；
[0042] 5、由本发明的双相纳米乳佐剂制备而成的疫苗，其稳定性、免疫效力及安全性均 优于传统206佐剂所制备的疫苗。
【附图说明】
[0043] 图1为各种表面活性剂的三元相图；
[0044] 图2为不同因素对纳米乳形成的影响；
[0045]图2a为混合表面活性剂E-聚丙醇-麦芽油-水体系的伪三元相图，Km = 7:1;
[0046]图2b为混合表面活性剂E-PEG400-液体石蜡-水体系的伪三元相图，Km = 7:3;
[0047] 图2c为混合表面活性剂E-混合表面活性剂c-麦芽油-水体系的伪三元相图，Km = 7:4；
[0048] 图2d为混合表面活性剂F-聚丙醇-花生油-水体系的伪三元相图，Km = 7:3;
[0049] 图2e为混合表面活性剂F-PEG400-麦芽油-水体系的伪三元相图，Km = 7:4;
[0050] 图2f为混合表面活性剂F-混合表面活性剂c-液体石蜡-水体系的伪三元相图，Km = 7:1；
[0051] 图2g为混合表面活性剂G-聚丙醇-液体石蜡-水体系的伪三元相图，Km = 7:4;
[0052] 图2h为混合表面活性剂G-PEG400-花生油-水体系的伪三元相图，Km = 7:1;
[0053] 图2i为混合表面活性剂G-混合表面活性剂c-麦芽油-水体系的伪三元相图，Km = 7:3；
[0054] 图3为透射电镜下纳米乳的微观形态图；
[0055] 图4为纳米乳佐剂和206佐剂的粒径分布比较图；
[0056] 图5为纳米乳佐剂和206佐剂疫苗免疫小鼠的抗体效价评价图；
[0057]图6为纳米乳佐剂和206佐剂疫苗小鼠细胞免疫CD3+含量随时间变化结果；
[0058]图7为纳米乳佐剂和206佐剂疫苗小鼠细胞免疫CD4+含量随时间变化结果；
[0059]图8为纳米乳佐剂和206佐剂疫苗小鼠细胞免疫CD8+含量随时间变化结果；
[0060]图9为纳米乳佐剂和206佐剂疫苗免疫猪的抗体效价评价图；
[0061 ]图10为纳米乳佐剂和206佐剂疫苗免疫牛的抗体效价评价图。
【具体实施方式】
[0062]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人 员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进 行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0063]实施例1双相纳米乳佐剂配方的筛选 [0064] 1、试验方法
[0065] 双相纳米乳设计的关键在于选择合适的作为表面活性剂、油相、助表面活性剂的 成份及其组成比例。本发明采用加水滴定法绘制伪三元相图来筛选双相纳米乳配方：
[0066] (1)表面活性剂
[0067] 表面活性剂是纳米乳形成所必需的关键物质，其主要作用在于降低界面张力，形 成界面吸附膜，促使纳米乳的形成。本发明发明人在对药剂学中使用的表面活性剂进行初 步分析的基础上，选择了以下表面活性剂作为候选表面活性剂:Tween80(A)、油酸聚氧乙稀 酯(B)、聚氧乙烯双油酸酯(C)和Span80(D)及其混合物(质量比分别为3:3 :1:1(E)，3:2:1:1 (F)，3:1:1:1 (G))，通过进一步具体实验分别考察上述表面活性剂及其混合物对W/0/W型双 相纳米乳形成的影响。
[0068] (2)油相
[0069] 本发明发明人选用了注射用麦芽油、液体石蜡及花生油作为候选油相，分别命名 为α，β，γ。
[0070] (3)助表面活性剂
[0071] 本发明发明人在对上述复合表面活性剂分析的基础上，为提高双相纳米乳的增溶 性，增大双相纳米乳形成的区域，选择聚丙醇、PEG 400及二者的混合物作为候选助表面活 性剂，共设三个组合，分别为聚丙醇(a)、PEG 400 (b)及二者的混合物c (a: b质量比=1:1)。 [0072] (4)空白纳米乳配方的确定
[0073] 15-25Γ条件下，试验采用L9(34)正交实验设计，将（1)中选择的最优组合表面活 性剂E、F、G，三种助表面活性剂a、b、c，三种油麦芽油（α)、液体石蜡(β)、花生油（γ )，Km值 (表面活性剂与助表面活性剂的质量比，分别为7:10)，7:3(￥)，7:4(2)作为考察因素，以形 成的微乳区的大小为评价指标。分别以表面活性剂和助表面活性剂混合物（S/Cos)、油相 (〇)、水相(W)作为相图的3个顶点绘制伪三元相图，图中每一条边表示相应两组分的比例关 系，任一点表示各组分的质量百分含量，从而确定空白双相纳米乳佐剂配方。水平及正交实 验方案见表1、表2。
[0074] 按每组设计的表面活性剂/助表面活性剂的比例将二者混合，然后与油相分别按 照9·9:0·1、9:1、8 :2、7·5:2·5、7:3、6:4、5:5、4 :6、3:7、2:8、1:9(质量比）比例混合，然后边 搅拌边逐滴加入蒸馏水，直至形成透明、澄清的纳米乳。在滴加过程中，会出现黏度较大的 状态，用偏光显微镜观察有无丁达尔现象，发亮的为液晶，不发亮的为凝胶。但当继续滴加 水到某一点时，体系的黏度突然变小，流动性极好，即形成澄清、透明的纳米乳。记录当体系 由混浊变澄清或由澄清变混浊时的临界点水量，本试验以纳米乳区大小为筛选标准，选择 纳米乳区最大的相图，即每组选择其载水量最大的作为选择标准，从而确定出最佳的纳米 乳配方。
[0075] 2、结果
[0076] 2.1表面活性剂的筛选
[0077] 常温条件下，以液体石蜡为油相，分别考察了表面活性剂对纳米乳形成的影响。图 1表示各种表面活性剂的三元相图。
[0078] 由图1可见，混合型表面活性剂能够增溶更多的水相，其最大增溶水量均大于 20%，所以认为以上三种比例是复合表面活性剂的较优比例，作为其筛选对象。
[0079] 2.2空白纳米乳配方的筛选
[0080] 2.2.1正交试验设计 [0081 ] 表1因子水平表
[0082]
[0083]表2 L9(34)正交试验设计与结果分析
[0084]
[0085] 注:表2中只示出了每组中载水量最大，体系最稳定时的表面活性剂/助表面活性 剂的混合物(简称"混表"）与油相的质量比。
[0086] 2.2.2不同因素对纳米乳形成的影响
[0087] 通过绘制伪三元相图及正交试验设计，实验结果如表2及图2所示，从该结果中可 以看出：第6组试验其微乳区最大，即纳米乳载水量最大，体系也最稳定。因此，空白纳米乳 的最佳配方为FcXMa合(混表：油相= 4:6)，其组成为:表面活性剂为TweenSO、油酸聚氧乙 稀酯、聚氧乙稀双油酸酯以及Span80的混合物(Tween80、油酸聚氧乙稀酯、聚氧