专利名称：一株草除灵降解菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株草除灵降解菌，属于废水治理技术领域。是利用微生物的方法降 解化学农药，解决农药生产过程中的废水治理问题。
背景技术：
草除灵(benazolin-ethyl)，化学名称4_氯-2-氧代苯并噻唑-3-基乙酸乙 酯，属有机杂环类除草剂。15%的草除灵乳油是一种防除油菜田阔叶杂草及其它旱田作物 阔叶杂草的芽后除草剂。纯品为浅黄色结晶粉，带有典型的硫磺味，溶点77.4°C，密度约 1. 45g · mL—1。在酸性介质中极稳定，不易水解。微溶于水，20°C时的溶解度为47mg · Γ1,易 溶于大多数有机溶剂。法国万安特作物科学公司于1990年在我国登记商品草除灵10%乳 油、50%悬浮剂，主要防治繁缕、牛繁缕、猪殃殃、雀舌草等杂草，对于未出苗的杂草无效。施 药后植物通过叶片吸收，输导到整个植物体，敏感植物受药后生长停滞，叶片僵绿、增厚反 卷，新生叶扭曲，节间缩短，最后死亡。气温高作用快，气温低作用慢。草除灵在耐药作物内 能降解为无活性物质，对油菜等作物比较安全，芥菜型油菜对草除灵高度敏感，白菜型油菜 施用草除灵后有轻度药害。目前，有机杂环类除草剂草除灵生产废水生物降解实验及工程 治理的文献国内鲜有报道。因此，从环境中分离筛选高效降解草除灵的菌株，通过研究其生 物学特性、降解特性，能够为农药生产过程中的废水治理提供依据，可以满足农药废水排放 指标以及总量控制的要求。
发明内容
技术问题本发明的目的在于从环境中筛选出一株高效草除灵降解菌，为农药生产 过程中的废水治理问题提供依据。技术方案下面为本发明的主要内容本发明提供一株草除灵降解菌，2009年12月17日寄存于中国微生物菌种保存管 理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No. 3517。菌株为革兰氏染色反应阴性菌 cd_l，经鉴定为 Methyloversatilis universalis (关于 Methyloversatilisuniversalis 国内至今尚未有权威机构对其属名进行中文命名，故本专利中涉及的降解菌只提供其拉丁 名属名和种名的名称，没有中文命名)。主要生物学特性为G_，菌体为不规则短杆状，大小约 0. 5X0. 6 μ m，无鞭毛；氧化酶和接触酶试验阳性；硝酸盐还原、糖发酵及吲哚反应阴性。按 5%接种量将菌株cd-Ι接种于100mg/L草除灵的基础盐培养基中48h后，草除灵完全降解。有益效果该发明的草除灵降解菌在48h内能够完全降解100mg/L的草除灵。可将其制成农 药降解菌剂，解决农药生产过程中的废水治理问题。
四
图1 菌株cd-Ι对IOOmg · L—1草除灵的降解效率五具体实施例方式以下叙述本发明的实施例。1.菌株的富集样品的采集采自扬州某草除灵生产工厂废水处理池的污泥；取活性污泥5. 00g，置于IOOmL草除灵浓度为20mg · Γ1的基础盐培养基中，30°C、 150r .min-1摇床培养5d，以5%的接种量接入新鲜的基础盐培养基中，转接3次，经测定连 续3代能降解草除灵达90%以上的富集液，即为有活性的富集液。所述基础盐培养基的配方为(g· Γ1) :NaCl 1.0, (MM)2SO4 1. 0，K2HPO4 1.5， KH2PO4O. 5，MgSO4 ·7Η20 0. 2，去离子水 IOOOmL, ρΗ7. 0，固体培养基中加入 1. 5% -1. 8% 的琼脂。2.菌株的分离纯化取0. 5mL有活性的富集液作梯度稀释，取10_2_10_8稀释度的液体各0. ImL涂布于 含IOOmg · Γ1草除灵的基础盐固体培养基平板上，30°C培养，挑取单菌落划线分离纯化，得 到一株能以草除灵为唯一碳源生长的草除灵降解菌cd-1。3.对菌株cd-1的16S rRNA基因序列进行分析，结果表明，cd-Ι的16S rRNA基因 序列与Methyloversatilis universalis 16S rRNA基因序列同源性达99%。并结合生理 生化特性试验结果，将cd-Ι鉴定为Methyloversatilis universalis。菌株cd_l的主要生 物学特性为G—，菌体为不规则短杆状，大小约0. 5 X 0. 6 μ m，无鞭毛；氧化酶和接触酶试验阳 性；硝酸盐还原、糖发酵及吲哚反应阴性。草除灵的降解试验4.菌株对草除灵的降解效率研究将菌株cd-Ι接种至3mL无机盐试管中30°C、 150r · mirT1摇床培养至对数生长期，即成种子液；将种子液按5 %接种量转接至含有 IOOmg · Γ1草除灵的基础盐培养基中，30°C、150r · mirT1摇床培养4d，每隔6小时通过紫外 扫描检测其降解效果，如图1所示，在培养48h后，草除灵已完全降解。用此方法，可将菌株 用于解决农药生产过程中废水治理方面。
权利要求
一株草除灵降解菌，菌株为革兰氏染色反应阴性菌cd 1，经鉴定为Methyloversatilis universalis，2009年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.3517，主要生物学特性为G ，菌体为不规则短杆状，大小约0.5×0.6μm，无鞭毛；氧化酶和接触酶试验阳性；硝酸盐还原、糖发酵及吲哚反应阴性。
2.权利要求1所述的草除灵降解菌cd-Ι在农药生产废水治理方面的应用。
3.权利要求1所述的草除灵降解菌cd-Ι降解草除灵农药的应用。
全文摘要
本发明提供一株草除灵降解菌，属于废水治理技术领域。菌株为革兰氏染色反应阴性菌cd-1，经鉴定为Methyloversatilis universalis。该菌株16S rRNA基因序列的Genbank登录号为GU350457。主要生物学特性为G-，菌体为不规则短杆状，大小约0.5×0.6μm，无鞭毛；氧化酶和接触酶试验阳性；硝酸盐还原、糖发酵及吲哚反应阴性。按5％接种量将菌株cd-1接种于100mg/L草除灵的基础盐培养基中48h后，草除灵完全降解。可将其制成农药降解菌剂，解决农药生产过程中的废水治理问题，具有广阔的应用前景。
文档编号A62D101/28GK101928684SQ20101010055
公开日2010年12月29日 申请日期2010年1月25日 优先权日2010年1月25日
发明者蔡天明, 钱丽花, 陈立伟 申请人:南京农业大学