新组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的制作方法

专利名称：新组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗肿瘤化合物的领域。在这里描述了具有肉桂酰胺样(cinnamoylamidic)结构的用于治疗与组蛋白脱乙酰基酶活性失控有关的疾病，如用于抗肿瘤治疗的新组蛋白脱乙酰基酶抑制剂。
现有技术组蛋白N-末端部分中赖氨酸残基的ε-氨基上发生的可逆的组蛋白乙酰化调控着核小体内重要的构象变化。这些变化影响着DNA接近转录因子的能力以及基因表达(Curr.Opin.Genet.Dev.1998，8，173-178)。在组蛋白乙酰化中涉及两类酶通过以转录辅激活因子的形式起作用而催化组蛋白乙酰化的组蛋白乙酰转移酶(HATs)、以及组蛋白脱乙酰基酶(HDACs)；后一种酶通过转录阻抑物和辅抑制物如Sin3、SMRT、和N-CoR而在启动子区域的水平上被补充，从而使得形成了低乙酰化(hypoacetylated)的组蛋白和转录沉默(TrendsBiochem.Sci.2000，25，619-623)。在许多病理学中涉及通过致癌蛋白进行的组蛋白脱乙酰基酶的异常募集，或者正常细胞中组蛋白乙酰基转移酶和组蛋白脱乙酰基酶活性的平衡失调1-首先，在肿瘤学疾病中(Oncogene 2001，20，7204-7215，7186-7203，3116-3127；Nature 1998，391，815-818；Mol.Cell.Biol.1998，18，7176-7184)。
2-在一些非肿瘤疾病中神经系统亨廷顿氏舞蹈病(J Neurosci 23，9418-27(2003)；Proc NatlAcad Sci USA 100，2041-6(2003))、由三联(triplette)扩增造成的疾病(Curr Med Chem 10，2577-87(2003)；Curr Biol 12，R141-3(2002))、对抗变性疾病的神经保护作用(FEBS Lett 542，74-8(2003)；局部缺血(J Neurochem 89，1358-67(2004))、氧化应激(Proc Natl Acad Sci USA 100，4281-6(2003))、神经系统的炎性响应(J Neurochem 87，407-16(2003))、癫痫(Epilepsia 45，737-44(2004)，J Neurosci 22，8422-8(2002))、由蛋白聚集造成的疾病(Curr Biol 14，488-92(2004))。
感染HIV(Mol Cell Biol 23，6200-9(2003)，Embo J 15，1112-20(1996)，Biochem Pharmacol 68，1231-8 2004)，Aids 18，1101-8(2004))、疟疾、利什曼病、由原生动物、真菌、植物毒性剂(phytotoxic agents)、病毒、寄生虫造成的感染。
免疫系统自身免疫性疾病(Blood 101，1430-8(2003))、涉及宿主的慢性免疫反应(Proc Natl Acad Sci USA 101，3921-6(2004))。
心脏肥大和心脏病症(J Clin Invest 112，863-71(2003)，NovartisFound Symp 259，132-41，讨论141-5，163-9(2004)，J Clin Invest112，824-6(2003))。
肌肉器官皮肤纤维化疾病(Exp Cell Res 278，184-97(2002))、纤维变性(Hepatology 29，858-67(1999))、脊柱和延髓肌肉萎缩(Hum MolGenet 13，1183-92(2004))。
精神系统双相型精神障碍(Nature 417，292-5(2002))、精神病学病症(Crit Rev Neurobiol 15，121-42(2003))、X-疲劳综合征(X-fragilesyndrome)(BMC Mol Biol 4，3(2003)，Hum Mol Genet 8，2317-23(1999))。
其它关节炎(Mol Ther 8，707-17(2003))、肾病(J Clin Invest 111，539-52(2003))、牛皮癣(Curr Drug Targets Inflamm Allergy 3，213-9(2004))、肠病、结肠炎(Wien Klin Wochenschr 114，289-300(2002))、β地中海贫血(beta thalassemy)(Expert OpinInvestig Drugs 10，925-34(2001))、呼吸疾病(Am J Respir Crit CareMed 167，813-8(2003))、Rubinstein-Taybi综合征(Neuron 42，947-59(2004))。
组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，如天然产物tricostatin A(TSA)、trapoxin(TPX)、和缩酚酸肽FK-228、短链脂肪酸、丁酸(butyrrate)钠、苯基丁酸钠和丙戊酸钠、异羟肟酸、羟肟酸酯如辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)、pyroxamide、scriptaid、oxamflatin、NVP-LAQ824、包含异羟肟酸的环肽(CHAPs)、和苯甲酰胺MS-275强烈促进了培养物和动物模型中许多变异细胞的生长间断、分化和细胞凋亡(Curr.Opin.Oncol.2001，13，477-483)。其中，苯基丁酸钠(单独或者联用的)、缩酚酸肽、SAHA、pyroxamide、NVP-LAQ824、MS-275正处于进行一些癌症疾病治疗的I期和/或II期临床(Nat.Rev.Drug Discov.2002，1，287-299)。然而，其临床应用受到了毒性问题(TSA，CHAPs，MS-275)、低稳定性(TSA，trapoxin)、低溶解度(TSA)、低效力和缺乏选择性(丁酸盐以及类似物)(Anti-Cancer Drugs 2001，13，1-13)的限制。
WO 04/063169公开了具有下面通式的作为HDAC抑制剂的异羟肟酸衍生物 R1是任选地被一个或多个适宜基团取代的含N-杂环，R2是羟基氨基，R3是氢或适宜的取代基，L1是任选地被一个或多个适宜的取代基取代并且其中一个或多个亚甲基可以被适宜的杂原子代替的-(CH2)n-(n是0至6的整数)；L2是低级亚烷基链。
WO 03/087066描述了具有下式的异羟肟酸衍生物以及其作为组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的应用， 其中A是任选地被取代的苯基或芳族杂环基团；m和n独立地是0至4的整数；和X是具有选自 的结构的部分，其中R2是氢或任选地被取代的C1-C4烷基。
WO 02/22577公开了下面通式的作为脱乙酰基酶抑制剂的下面的异羟肟酸衍生物
其中R1是氢、卤素或C1-C6烷基链，R2选自H、C1-C10烷基、C4-C9环烷基、C4-C9杂环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基等；R3和R4独立地选自氢、C1-C6烷基、酰基或酰基氨基R5选自氢、C1-C6烷基等；n1、n2和n3是0至6的整数，X和Y选自氢、卤素、C1-C4烷基等。
WO 01/38322公开了下面通式的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂Cy-L1-Ar-Y1-C(O)-NH-Z其中Cy是任选地被取代的环烷基、芳基、杂芳基或杂环基环；L1是-(CH2)m-W，m是0至4的整数，其中W选自C(O)NH-、S(O)2-NH-等；Ar是任选地被取代的亚芳基环，其中所说的亚芳基可以任选地与芳基或杂芳基环稠合，Y1是一种键或饱和的亚烷基链；其中Z是O-M，其中M是氢或适宜的药用阳离子。
WO 95/13264公开了下面通式的异羟肟酸衍生物以及其作为具有抑制平滑肌生长并可用作预防血管壁增厚、PTCA后的再狭窄作用的药物的应用，并且还甚至涉及其作为抗动脉粥样硬化剂的应用， 其中R1表示苯基或芳氧基苯基等；L是C1-C8亚烷基、C2-C8亚链烯基、(CH2)m-O-(其中m是0至4的整数)、或-CO-；n是0或1；R2是氢、C1-C4烷基或芳基烷基；M是氢、烷酰基(alkoyl)、烷氧基羰基。
Mai等人在J.Med.Chem.2001，44，2069-2072，J.Med.Chem.2002，45，1778-1784，J.Med.Chem.2003，46，512-524，J.Med.Chem.2003，46，4826-4829，J.Med.Chem.2004，47，1098-1109，J.Med.Chem.2004，47，1351-1359和J.Med.Chem.2005，48，3344-3353中描述了作为选择性HDAC抑制剂的吡咯基羟酰胺(hydroxamide)衍生物。
在Expert Opin.Ther.Patents 2004，14(6)，791-804)中公开了另外一些HDAC抑制剂。还鉴定了对特定组蛋白乙酰基酶亚类(HD2，HD1-A，HD1-B)具有不同亲合力的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂区别其对各种组蛋白脱乙酰基酶亚类的能力产生了重要的后果即可以消除副作用和/或对特定的肿瘤形式有活性。
但是，迄今为止，上述化合物中没有任何一种化合物表现出完全令人满意的性质。因此，仍然希望能找到具有有用的抗肿瘤性质、足够的选择性和作用稳定性的新组蛋白脱乙酰基酶抑制剂；还希望寻找对组蛋白脱乙酰基酶具有高亲合力、可能对其特定的亚类具有更高的活性的新抑制剂。
概述我们现在发现了具有高效和稳定的抗肿瘤活性的新组蛋白脱乙酰基酶抑制剂群。这些抑制剂如下面的通式(I)所述，
其中R1是包含至少两个共轭双键的直链或支链，R3选自氢、烷氧基烷基；Ar是任选地被取代的芳基或杂芳基。
A选自 其中R2选自氢、烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基，杂环基烷基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、(硫代)羰基氨基、(硫代)氨基carbonil、磺酰基氨基、氨基磺酰基、(硫代)酰基、(硫代)酰氧基、(硫代)烷氧基羰基、硝基和硝酰基；式(I)的化合物可以通过将式(II)的化合物(其中A和R2具有上述含义并且R4是一种合适的离去基团，例如卤素如溴或碘) (i)用式Ar-W的化合物(其中Ar具有上述含义，并且W是能通过与(II)的CHO基团反应形成上面所定义的基团R1的基团)或者其合成中间体来进行处理，(ii)并且进一步用式(III)的化合物对其进行处理来进行合成，
其中Z表示上面所定义的基团NHOR3或其前体，并且其中步骤(i)和(ii)可以以任何次序进行。
式(I)的化合物是十分有效的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，其IC50为1μM或更低。经过一定的时间已经证明这些化合物表现出广谱和稳定的活性从治疗应用的观点来看，这两种特征都是十分理想的。此外，式(I)的化合物可充分促进细胞凋亡和抑制肿瘤细胞组的细胞增殖。
本发明包括式(I)的化合物在治疗和/或预防与组蛋白脱乙酰基酶活性失控有关的疾病中的应用以及用于所说化合物的给药的相关药物组合物。


图1用所示化合物对U937细胞处理4小时和24小时的结果(200nM，1μM)。
图2.用本发明的化合物对U937细胞进行的处理对细胞生长和细胞凋亡的影响。
图3用本发明的化合物对K562和HT29细胞进行的处理对细胞周期、细胞生长和细胞凋亡的影响。
图4新HDACi的给药对正常皮肤的影响(用于探测乙酰化组蛋白的免疫组织化学)图5在诱导和发生乳头状瘤后新HDACi的给药对皮肤的影响(用于探测组蛋白的组织化学)图6用新HDACi进行的治疗对乳头状瘤数目的影响本发明的详细描述在上述式(I)中，单独或者被包含在更复杂结构(例如烷氧基、芳基烷基等)中的烷基优选地包含1至8个(更优选地包含1至4个)碳原子并且可以是直链或支链的，并且可被取代。
单独或者被包含在更复杂结构(例如酰氧基)中的酰基优选地包含1至8个，更优选1至4个碳原子并且可以是直链或支链、饱和或不饱和的，并且可被取代。
所说的环烷基优选地包含3至8个，更优选3至6个碳原子并且可以是饱和或不饱和的，并且可被取代。
单独或者被包含在更复杂结构(例如芳基烷基)中的芳基是芳族单环或多环，每个环优选地包含6至10个碳原子，其可被取代；芳基的一个优选实例是苯基。
单独或者被包含在更复杂结构(例如杂环烷基)中的杂环基是单环或多环，每个环优选地包含4至8个成员，其中1至3个成员可以是杂原子如N、O、S，并且其可以是饱和或不饱和的并且可被取代。
在所述的所有可被取代的基团中，可能存在的取代基可选自例如羟基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、氨基羰基、羰基氨基、羰基酰胺、酰胺、羧基、烷氧基羰基、氨基烷基、烷基氨基、二烷基氨基、吡啶基、哌嗪基、吗啉基(morpholyl)、卤素、硝基和硝酰基官能团。
对于属于任何α，β不饱和官能团的上述R1的定义而言，包括其中α，β不饱和情况涉及非碳原子，例如氧、氮、或硫原子的那些官能团。因此，R1可以是碳原子链，或者其中Y表示在α，β不饱和情况中所涉及的非碳原子的＝Y取代的碳原子链。R1优选地包括3至8个碳原子；R1更优选地选自下面的结构 其中Y选自O、S、NH、CH2、NOH或具有1至4个碳原子的R5烷基的NOR5。
Ar基团的优选含义是苯基、萘基、吡啶基、吡喃基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基。
在存在时，Ar的任选取代基优选地选自卤素、羟基、烷基、烷氧基、三氟烷基、三氟烷氧基、二烷基氨基、吗啉基、哌嗪基、甲氧基羰基。
A环与R1和与包含R3的残基的连接优选地位于彼此相对于A环而言的对位关系上。取代基R2可以被连接在A环任何可获得的位置上；R2的优选含义是氢、卤素、烷基、烷氧基。R3的优选含义是氢。
式(I)的优选结构是下面的式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id) 其中Ar和R2具有上述含义，并且X是碳或氮原子。
本发明还包括一种制备式(I)化合物的方法。在其最普通的含义上，该方法包括将式(II)的化合物
其中A和R2具有上述含义并且R4是一种适宜的离去基团，例如卤素如溴和碘(i)用式Ar-W的化合物或其合成中间体进行处理，其中Ar具有上述含义，并且W是一种能通过与式(II)的CHO基团进行反应形成所说的R1基团的基团，(ii)和进一步用式(III)的化合物对其进行处理， 其中Z表示上面所定义的NHOR3或其前体。
化合物Ar-W的加成反应通常是在碱性环境中进行的；化合物Ar-W优选地是在苯环上任选地被取代的苯乙酮。
式(III)的化合物优选地是丙烯酸烷基酯，更优选地是丙烯酸正-丁酯。式(III)化合物的加成通常是在存在磷酸钾和醋酸钯的情况下进行的；在式(III)的烷基丙烯酸酯的情况中，O-烷基以NHOH基团前体的形式起作用；如下所列举的那样，其向NHOH的转化是根据已知的技术来进行的。
式(Ia)的优选化合物特别是可以根据下面的合成途径通过将式(IV)或(IVa)的化合物去保护来获得流程图1 在这里所示的所有结构式中，用“Het”标记的环都表示吡啶环
用标准方法除去根据正常化学操作进行选择的保护基团PG1。当PG1是四氢吡喃基或2-甲氧基-2-丙基残基时，使用酸性条件如位于质子惰性溶剂(例如乙醚、二烷或THF)中的盐酸。
式(IV)的化合物是通过将式(V)的化合物与被保护的羟基胺(NH2OPG1)进行反应来获得的。
可以用有机合成现有技术中已知的偶合剂如EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)、DCC(N，N’-二环己基-碳二亚胺)或者聚合物-支撑的偶合剂例如聚合物-支撑的碳二亚胺(PS-DCC，ex ArgonautTechnologies)在存在适宜的碱如三乙胺、二异丙基乙基胺的情况下在适宜的溶剂(例如四氢呋喃、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺)中来促进所说的偶合反应。在所说的反应混合物中通常还可以存在辅催化剂如HOBT(1-羟基-苯并三唑)、HOAT(1-羟基-7-氮杂苯并三唑)等。该反应通常在室温下进行约2小时至高至12小时。
式(V)的化合物可以通过将式(VI)的化合物与式(VII)的化合物在存在无机碱如KOH或NaOH的情况下在质子溶剂如乙醇、甲醇或水中进行反应来获得。该反应通常在0℃至室温下进行约2小时至高至12小时。

式(VII)的化合物是可以通过商业途径获得的已知化合物，或者其可以用已知的方法或者与制备已知化合物所用的这些方法相似的方法由已知的化合物来进行制备。
式(VI)的化合物可以通过商业途径获得或者可以通过用Larhed，M.；Hallberg，A.in Handbook of Organopalladium Chemistry forOrganic Synthesis；Negishi，E.，Ed.；Wiley-Interscience纽约，2002所述的经典Heck反应条件将式(VIII)的化合物与丙烯酸叔-丁酯进行反应来进行制备， 其中B是卤素，特别是溴或碘。该反应是在存在钯盐如醋酸钯、和有机碱和无机碱(三乙胺、1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷和碳酸氢钠或碳酸氢钾)并且最后在存在膦衍生物如三苯基膦的情况下在DMF中进行的。该反应通常在室温至回流，通常在100℃下进行约2小时至高至12小时。用于将叔丁酯转化成相应羧酸的适宜去保护方法是现有技术中常用的这些方法，可参考标准教科书如Greene，T.W.and Wuts，P.G.M.有机合成中的保护基团(Protective Groups in OrganicSynthesis)，John Wiley & Sons Inc.纽约，1991(Second Edt.)或Kocienski，P.J.Protecting groups.George Thieme Verlag，纽约，1994。
式(VIII)的化合物是可通过商业途径获得的已知化合物或者其可以用已知的方法或者与制备已知化合物所用的这些方法相似的方法由已知化合物来进行制备。
或者，式(V)的化合物可以通过将式(IX)的化合物与式(VII)的化合物在存在无机碱如KOH或NaOH的情况下在质子溶剂如乙醇、甲醇或水的情况下进行反应来获得， 该反应通常在0℃至室温下进行约2小时至高至12小时。用于将叔丁酯转化成相应的羧酸的适宜去保护方法是现有技术中常用的这些方法。
式(IX)的化合物可以通过用与合成式(VI)的化合物时所述这些方法相似的经典Heck条件将式(VIII)的化合物(其中B是卤素，特别是溴或碘)与丙烯酸叔-丁酯进行反应来进行制备。
或者，式(V)的化合物可以通过将式(X)的化合物与膦酰基乙酸叔-丁基二乙基酯在存在氢化钠的情况下在质子惰性溶剂如THF中进行反应来获得。
该反应通常在0℃至室温下进行约1小时至高至12小时。用于将叔丁酯转化成相应羧酸的适宜去保护方法是现有技术中常用的这些方法。
式(X)的化合物可以通过将式(XI)的化合物与式(VII)的化合物在存在无机碱如KOH或NaOH的情况下在质子溶剂如乙醇、甲醇或水中进行反应来获得。
该反应通常在0℃至室温下进行约1小时至高至12小时。用于将二甲基乙缩醛转化成相应醛的适宜去保护方法是现有技术中常用的这些方法，参见标准教科书如Greene，T.W.and Wuts，P.G.M.有机合成中的保护基团，John Wiley&Sons Inc.纽约，1991(Second Edt.)或Kocienski，P.J.Protecting groups.George Thieme Verlag，纽约，1994。
式(XI)的化合物可以通过将式(XII)的化合物与烷基锂如正-丁基锂在质子惰性溶剂如THF中进行反应，然后加入DMF来进行制备， 其中B是卤素，特别是溴或碘。该反应通常在-78℃至室温下进行约1小时至高至3小时。
式(XII)的化合物可以通过用现有技术中常用的这些适宜保护方法对相应二甲基乙缩醛中的醛进行转化而由式(VIII)的化合物获得。
或者，式(V)的化合物可以通过用与合成式(VI)的化合物所述的这些方法相似的经典Heck条件将式(XIII)的化合物与丙烯酸叔丁酯进行反应来获得，
其中B是卤素，特别是溴或碘。该叔-丁酯的去保护是根据已知的标准方法来进行的。
式(XIII)的化合物可以通过将式(VIII)的化合物与式(VII)的化合物在存在有机或无机碱如KOH或NaOH的情况下在质子溶剂，如乙醇、甲醇或水中进行反应来进行制备。该反应通常在0℃至回流下进行约1小时至36小时。
当Ar是杂芳基时，式(IVa)的化合物是通过将式(XIV)的化合物与被保护的羟基胺(NH2OPG1)进行反应来获得的。
可以用有机合成领域中已知的偶合剂如EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)、DCC(N，N’-二环己基-碳二亚胺)或聚合物-支撑的偶合剂如聚合物-支撑的碳二亚胺(PS-DCC，ex ArgonautTechnologies)在存在适宜的碱如三乙胺、二异丙基乙基胺的情况下，在适宜的溶剂(例如四氢呋喃、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺)中来促进所说的偶合反应。在该反应混合物中通常还可以存在辅催化剂如HOBT(1-羟基-苯并三唑)、HOAT(1-羟基-7-氮杂苯并三唑)等。该反应通常在室温下进行约2小时至高至12小时。
式(XIV)的化合物可以通过用与上述条件相同的条件将式(XV)的化合物与式(VII)的化合物进行反应来进行制备。
叔丁酯的去保护可以根据已知的标准方法来进行。
式(XV)的化合物可以通过将式(XVI)的化合物与膦酰基乙酸叔-丁基二乙基酯在存在无机碱如氢化钠的情况下在质子惰性溶剂如THF中进行反应来进行制备。
该反应通常在0℃至室温下进行约1小时至高至12小时。用于将所说的二甲基乙缩醛转化成相应醛的适宜方法是现有技术中常用的这些方法。
式(XVI)的化合物可以用与合成式(XI)的化合物所述方法相同的方法来进行制备。
可以根据下面的合成路线来获得式(Ib)的优选化合物流程图2 步骤a可以在存在磷酸钾和醋酸钯的情况下进行。步骤b可以通过向位于醇性碱性环境中的正-丁基-3-甲酰基肉桂酸酯中加入适宜的苯乙酮来进行。步骤c可以通过在现有技术中已知的标准肽偶合条件下用被保护的羟基胺对流程图2中的羧酸衍生物进行处理来进行。对于式(Ic)的化合物而言，可以使用下面的合成路线流程图3
步骤a和c可以在醇性碱性环境中进行。步骤b可以在存在磷酸钾和醋酸钯的情况下进行。步骤d可以通过将氯甲酸乙酯和三乙胺反应，然后用O-(2-甲氧基-2-丙基)羟基胺进行处理和对离子交换树脂进行洗脱来进行。
可以通过类似的反应获得式(Id)的化合物。
由于R1插入到Ar-和肉桂酰酰胺基团之间，所以式(I)化合物的特征为电子共轭区域延伸一种式(I)中所示的中央芳族或杂芳族基团所起的特殊作用，由于内在的芳族特性，其使得可在该分子沿着从Ar向NHOR3基团伸展的整个纵向轴上产生理想的共振度。
其赋予了所有式(I)化合物令人感兴趣的药理学性质。实际上，其表现出高组蛋白脱乙酰基酶抑制活性，其IC50为1μM或更低。就各种细胞系而言，这种活性是广谱的并且随着时间的流逝一直都是稳定的从治疗应用的角度来看，这两种性质都是理想的。式(I)的化合物在促进细胞凋亡和抑制肿瘤细胞组中的细胞增殖方面也表现出有效的活性，其进一步支持了这些化合物的抗肿瘤功效。
本发明包括用于治疗，特别是用于治疗与组蛋白脱乙酰基酶失调有关的疾病的所述的式(I)的化合物。
本发明的另一个目标是用于治疗和预防与组蛋白脱乙酰基酶活性失控有关的疾病的药物组合物，其特征在于包含一种或多种式(I)的活性成分和可药用的赋形剂和稀释剂。
本发明的化合物与已知的抗肿瘤药具有协同作用因此，上述药物组合物还可包含已知的抗肿瘤剂和/或任何用于与抗肿瘤剂一起给药的其它药物(ad.es.免疫刺激化合物、细胞分化促进剂等)。
本发明的化合物可以用常规方式来进行给药，例如其可以被口服、静脉内、皮下、经粘膜(包括颊、舌下、经尿道、和直肠)、局部、经皮、吸入给药或者可以用任何其它给药途径来进行给药。
可以用已知的方法来对式(I)的化合物进行药物制备。可以根据治疗来对所说的药物组合物进行选择。所说的组合物是通过将其成分进行适宜混合来进行制备的，并且其适于口服或胃肠外给药；其可以被制备为片剂、胶囊、口服制剂、粉末、颗粒、锭剂、可再生的粉末、可注射的液体或可输入的溶液、混悬液或栓剂形式。
用于口服给药的片剂和胶囊通常以单元剂型的形式存在，并且可以包含常规赋形剂如粘合剂、填充剂、稀释剂、制片剂、润滑剂、去污剂、崩解剂、染料、矫味剂和润湿剂。可以用现有技术中众所周知的方法来对片剂进行包衣。适宜的填充剂包括纤维素、甘露醇、乳糖以及其它相似物质。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物如羟乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括例如硬脂酸镁。适宜的润湿剂包括月桂基硫酸钠。
适宜的口服组合物可以通过常规的混合、填充或压制来进行制备。可以重复进行混合操作以将所说的活性物质分散于包含高含量填充剂的组合物中。这些操作都是常规的。
口服液体制剂可以被制备为例如水性或油性混悬液或溶液、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或者可以以冷冻干燥产品的形式存在，可以通过在使用前加入水或适宜的基质来将所说的冷冻干燥产品重组。所说的液体制剂可以包含常规添加剂如混悬剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化可食用脂肪、乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯、或阿拉伯胶；非水性基质(其可包括可食用油类)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯类如甘油酯类、丙二醇、或乙醇；防腐剂，例如对-羟基苯甲酸甲酯或对-羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，和如果需要的话，还可包含常规矫味剂和染料。
口服制剂包括常规缓释形式，如肠衣片或颗粒。
对于胃肠外给药而言，可以制备包含所说化合物和无菌基质的液体剂量单位。根据所选择的基质和浓度，所说的化合物可以被混悬或溶解。胃肠外溶液通常是通过将所说的化合物溶解于基质中、将其过滤灭菌、填充到适宜的小瓶中并对其进行密封来进行制备的。其还可有利地在所说的基质中溶解适宜的助剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂。为了增加其稳定性，在将所说的组合物填充到小瓶中后将其冷冻并在真空下除去水。胃肠外混悬液是基本以相同的方式来进行制备的，不同之处在于所说的化合物被混悬而不是溶解于基质中，并且可以通过在被混悬于无菌基质中之前用氧化乙烯进行处理来对其进行灭菌。还可以有利地在所说的组合物中包含表面活性剂或润湿剂以帮助本发明的化合物进行均匀分布。
本发明的化合物还可以被局部给药。局部制剂例如可以包括软膏、乳霜、凝胶、洗剂、溶液、糊剂等，和/或可以被制备从而包含脂质体、胶束和/或微球。正如在药物制剂领域中众所周知的那样，软膏是通常以矿脂或其它矿脂衍生物为基础的半固体制剂。软膏的实例包括leaginous软膏基质，例如，植物油、由动物获得的脂肪、和得自石油的半固体烃类、可乳化的软膏基质，例如硫酸羟基硬脂精、无水羊毛脂和亲水性矿脂、乳剂软膏基质，例如鲸蜡醇、甘油单硬脂酸酯、羊毛脂和硬脂酸以及由各种分子量的聚乙二醇制得的水溶性软膏基质。(见，例如Remington药学科学和实践(The Science and Practiceof Pharmacy)，第20版，Lippincott Williams & Willcins费城，2000)。也是如本领域技术人员众所周知的那样，乳霜是粘性液体或半固体乳液，并且包含油相、乳化剂和水相。所说的油相通常由矿脂和脂肪醇如鲸蜡醇或鲸蜡醇组成。其水相通常包含保湿剂。乳霜制剂中的乳化剂选自非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。单相凝胶包含被基本均匀分散在载体液体中的有机大分子，其典型地是水性的，但是还优选地包含醇，并且任选地包含油。优选的胶凝剂是交联丙烯酸聚合物(如“卡波姆”聚合物，例如，可以以Carbopol的商标通过商业途径获得的羧基聚亚烷基)。还优选亲水性聚合物如聚氧化乙烯类物质、聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物和聚乙烯醇；纤维素聚合物如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、和甲基纤维素；树胶类物质如黄蓍胶和黄原胶；藻酸钠；和明胶。为了制备均匀的凝胶，可以加入分散剂如醇或甘油，或者可以通过研磨、机械混合、和/或搅拌来对所说的胶凝剂进行分散。
本发明的化合物还可以通过经皮释放来进行给药。典型的经皮制剂包括常规的水性和非水性载体，如乳霜、油类、洗剂或糊剂，或者可以以膜或含药硬膏剂的形式被提供。在一个实施方案中，本发明的化合物被分散于粘附到皮肤上的压敏性硬膏剂中。这种制剂使得所说的化合物可以从该硬膏剂通过皮肤向患者进行扩散。为了获得通过皮肤进行的药物持续释放，可以用天然橡胶和硅作为压敏性胶粘剂。
正如通常所实践的那样，该组合物通常具有书写或印刷的用于相关治疗的说明。
本发明还包括所说的式(I)的化合物在制备预防和/或治疗与组蛋白脱乙酰基酶活性失控有关的疾病的药物中的应用。该类疾病的实例有肿瘤疾病、由三联扩增造成的亨廷顿氏舞蹈病、变性疾病、局部缺血、氧化应激、神经系统的炎性响应、癫痫、由蛋白聚集造成的疾病、HIV感染、疟疾、利什曼病(leishmanioses)、由原生动物、真菌、抑制植物生长的物质、病毒、寄生虫造成的感染、自身免疫性疾病、宿主定向的慢性免疫反应、肥大和心脏病症、纤维变性性皮肤疾病、肌肉性脊髓(muscular spinal)或延髓萎缩、双相型精神障碍、精神病症、X-疲劳综合征、关节炎、肾病、牛皮癣、肠-结肠炎疾病、β地中海贫血、呼吸疾病、Rubinstein-Taybi综合征。
对本发明的治疗敏感的肿瘤的实例有白血病和骨髓以及淋巴组织淋巴瘤、急性和慢性myelodisplastic综合征、多发性骨髓瘤、乳房肿瘤、肺部肿瘤和胸膜间皮瘤(pleuric mesoteliomas)、皮肤肿瘤，包括基底癌(基底细胞癌)、黑素瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤、rabdomyosarcomas、成神经细胞瘤、成胶质细胞瘤、脑肿瘤、睾丸和卵巢肿瘤、子宫内膜和前列腺肿瘤、甲状腺癌、结肠-直肠肿瘤、胃部肿瘤和胃肠腺癌、肝癌、胰腺癌、肾脏肿瘤、畸胎癌和胚胎癌。
本发明的另一个主题是一种预防和/或治疗肿瘤的方法，其特征在于给需要其的患者使用药理学有用数量式(I)的化合物。对于式(I)化合物的给药而言，该类应用和方法可以包括具有已知活性的其它可能物质和用于与所说物质在联合治疗中一起给药的任何其它药物的共同给药、同时给药或延迟给药。
式(I)化合物的剂量将随着患者以及其状态、疾病的进行程度、所选择的给药方式、所选择的日给药数目等来广泛进行变化。作为参考，其可以以0.001至1000mg/Kg/天的剂量区间来进行给药。
在这里，用下面的非限制性实例来对本发明进行描述。
实验部分1.化学方法除非特别说明，否则所有的起始物质都是从商业供应商那里获得的并且可以在不进行进一步纯化的情况下进行应用。
具体而言，在所说的实施例和本说明书中，可以使用下面的缩写。

在涉及盐水时，其都指的是NaCl的饱和水溶液。除非特别说明，否则所有的温度都是以℃(℃)为单位进行表达的。
1H-NMR光谱是在Brucker 300MHz上进行记录的。化学位移是以百万份(ppm，δ单位)为单位进行表达的。偶合常数的单位为赫兹(Hz)。分裂方式描述了表观多重性并且被称为s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)。位于各种符号前面的b表示宽。
熔点是在Büchi 530测量仪上进行测量的。红外光谱(KBr)是在Perkin-Elmer Spectrum One仪上获得的。质谱(MS)是在JEOL JMS-HX100分光计上获得的。
LCMS是在下面的条件下进行记录的
方法A泵1525，2777样品管理器，PDA 996，Micromass ZQSingle quadrupole(Waters)。Column Sunfire C18(50×2.1mm，3.5μm)；流速0.25ml/min 分裂比 MS∶waste/1∶4；流动相A相＝水/CH3CN 95/5+0.1％ TFA；B相＝水/CH3CN 5/95+0.1％TFA。0-1.0min(A98％，B2％)，1.0-5.0min(A0％，B100％)，5.0-9.0min(A0％，B100％)，9.1.0-12min(A98％，B2％)；UV检测波长254nm或BPI；注射体积5μl方法B泵1525，2777样品管理器，PDA 996，Micromass ZQSingle quadrupole(Waters)。Column Luna C18(30×2.1mm，3μm)；流速0.25ml/min 分裂比 MS∶waste/1∶4；流动相A相＝水/CH3CN 95/5+0.1％TFA；B相＝水/CH3CN 5/95+0.1％TFA。0-1.0min(A98％，B2％)，1.0-5.0min(A0％，B100％)，5.0-9.0min(A0％，B100％)，9.1.0-12min(A98％，B2％)；UV检测波长254nm或BPI；注射体积5μl方法C泵1525，2777样品管理器，PDA 996，Micromass ZQSingle quadrupole(Waters)。Column XTerra C18(50×2.1mm，2.5μm)；流速0.25ml/min 分裂比 MS∶waste/1∶4；流动相A相＝水/CH3CN 95/5+0.1％TFA；B相＝水/CH3CN 5/95+0.1％TFA。0-1.0min(A98％，B2％)，1.0-5.0min(A0％，B100％)，5.0-9.0min(A0％，B100％)，9.1.0-12min(A98％，B2％)；UV检测波长254nm或BPI；注射体积5μl方法D泵1525，2777样品管理器，PDA 996，Micromass ZQSingle quadrupole(Waters)。Column Atlantis dC18(100×2.1mm，3μm)；流速0.25ml/min 分裂比 MS∶waste/1∶4；流动相A相＝水/CH3CN 95/5+0.1％TFA；B相＝水/CH3CN 5/95+0.1％TFA。0-1.0min(A98％，B2％)，1.0-5.0min(A0％，B100％)，5.0-9.0min(A0％，B100％)，9.1.0-12min(A98％，B2％)；UV检测波长254nm或BPI；注射体积5μl
方法E泵1525，2777样品管理器，PDA 996，Micromass ZQSingle quadrupole(Waters)。Column Disc.HS F5 C18(50×2.1mm，3μm)；流速0.25ml/min 分裂比 MS∶waste/1∶4；流动相A相＝水/CH3CN 95/5+0.1％TFA；B相＝水/CH3CN 5/95+0.1％TFA。0-1.0min(A98％，B2％)，1.0-5.0min(A0％，B100％)，5.0-9.0min(A0％，B100％)，9.1.0-12min(A98％，B2％)；UV检测波长254nm或BPI；注射体积5μl方法F泵1525，2777样品管理器，PDA 996，Micromass ZQSingle quadrupole(Waters)。SunFire C18(50×2.1mm，3.5μm)；流速0.25ml/min 分裂比 MS∶waste/1∶4；流动相A相＝HCOO-NH4+pH＝8/MeOH/CH3CN 85/10//5；B相＝HCOO-NH4+pH＝8/MeOH/CH3CN 5/10/85。0-1.0min(A98％，B2％)，1.0-5.0min(A0％，B100％)，5.0-9.0min(A0％，B100％)，9.1.0-12min(A98％，B2％)；UV检测波长254nm或BPI；注射体积5μl所有的质谱都是在电喷射离子化(ESI)方法下获得的。
大多数反应都是用薄层色谱进行监测的，所说的薄层色谱是在0.2mm Merck硅胶板(60F-254)上进行的，用UV线进行目测检验。闪柱色谱是在硅胶60(0.04-0.063mm)Merck上进行的。
4-甲酰基肉桂酸乙酯的合成其是根据Saigo等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1995，68，2355-2362来进行合成的。
3-甲酰基肉桂酸正-丁基酯的合成将-根10mL的Schenk试管在烘箱中干燥并在N2下向其中加入K3PO4(2.37g，11.16mmol)和DMA(2.0mL)。然后，用注射器向其中加入3-碘benzaldeide(1.85g，7.97mmol)和丙烯酸正-丁酯(2.28mL，15.94mmol)。再通过注射器向其中加入Pd(OAc)2(0.18g，0.797mmol)在DMA(0.5mL)中的溶液。然后，将该Schlenk试管在氮气下密封并将其放置到在140℃下预热了的油浴中，并将该反应混合物搅拌24h。在将其冷却至室温后，将该反应混合物倾倒到水(50mL)中并用乙酸乙酯(3×50mL)对其进行萃取。将所合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并将其真空浓缩至干燥。将该粗品用硅胶柱色谱进行纯化，用正-己烷/乙酸乙酯/甲醇12/3/1进行洗脱(收率47％)。1HNMR(CDCl3)δ0.91-0.96(t，3H，OCH2CH2CH2CH3)，1.39-1.42(m，2H，OCH2CH2CH2CH3)，1.65-1.68(m，2H，OCH2CH2CH2CH3)，4.17-4.21(m，2H，OCH2CH2CH2CH3)，6.48-6.53(d，1H，ArCH＝CHCO)，7.52-7.54(m，1H，苯H-5)，7.53-7.75(m，2H，ArCH＝CHCO和苯H-6)，7.84-7.86(m，1H，苯H-4)，7.99(m，1H，苯H-2)，10.01(s，1H，CHO)。
流程图3中所示的4-肉桂酰基肉桂酸正-丁基酯是用相似的方法制得的。
用于合成3-和4-取代的肉桂酸的一般方法实施例3-[3-[3-(3-氟苯基)-3-氧代丙-1-基]苯丙烯酸的合成。
将正-丁基-4-甲酰基肉桂酸酯(6.0mmol，1.40g)、3-氟苯乙酮(6.0mmol，0.93g)、和KOH 2N(24.0mmol，12.4mL)在乙醇(15mL)/水(15mL)中的混合物在室温下搅拌24h。其后，将该溶液倾倒到水(100mL)中并用HCl 2N对其进行酸化。将由此获得的沉淀滤出并将其重结晶，得到其纯酸。收率72％；mp157-159℃，重结晶溶剂乙腈。1H NMR(DMSO-d6)δ6.69-6.73(d，1H，CH＝CHCOOH)，7.48-7.54(m，2H，苯H)，7.61-7.65(m，2H，苯H和COCH＝CH)，7.74-7.80(m，2H，苯H和COCH＝CH)，7.88-7.90(m，1H，苯H)，8.02-8.06(m，3H，苯H和CH＝CHCOOH)，8.31(s，1H，苯H)，12.50(bs，1H，OH)。
流程图3中所示的4-溴苯基-2-苯基乙烯基酮是用相似的方法来进行制备的。
用于合成3-和4-取代的N-羟基肉桂酰胺的一般方法实施例N-羟基-3-[3-[3-(3-氟苯基)-3-氧代丙-1-基]苯丙烯酰胺的合成。
将冷却了的(0℃)3-[3-[3-(3-氟苯基)-3-氧代丙-1-基]苯丙烯酸(4.2mmol，1.2g)在无水THF(10mL)中的溶液加入到氯甲酸乙酯(5.0mmol，0.5mL)和三乙胺(5.4mmol，0.8mL)中并将该混合物搅拌10分钟。将该反应混合物过滤并将该滤液加入到O-(2-甲氧基-2-丙基)羟基胺(4.71mmol，0.35mL)中(Tetrahedron 1988，44，6013-20)。将该溶液在0℃下搅拌15分钟，然后将其减压蒸发，将残余物用甲醇(10mL)稀释。将该O-保护的异羟肟酸酯溶液加入到Amberlyst15离子交换树脂(0.3g)中，并将所得的混合物在45℃下搅拌1h。其后，将该反应混合物过滤并将滤液真空浓缩，得到N-羟基酰胺粗品，然后，通过结晶对其进行纯化。收率74％；mp166-168℃，重结晶溶剂乙腈。1H NMR(DMSO-d6)δ6.54-6.58(d，1H，CH＝CHCOOH)，7.48-7.56(m，3H，苯H)，7.62-7.66(m，2H，苯H)，7.76-7.80(m，1H，COCH＝CH)，7.87-7.89(m，1H，苯H)，7.96-8.03(m，3H，苯H，COCH＝CH和CH＝CHCOOH)，8.15(s，1H，苯H)，9.07(s，1H，NH)，10.80(s，1H，OH)。
按照上述一般操作合成了许多化合物，在表1中报告了其结构和合成数据。
表1






实施例13-[3-氟-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺

步骤A将4-溴-2-氟苯甲醛(2g，9.9mmol)在DMF(50ml)和三乙胺(6ml)中的溶液用N2充溢脱气30min。向其中加入PPh3(130mg，0.459mmol)、Pd(OAc)2(44.3mg，0.20mmol)、NaHCO3(1.6g，18.6mmol)和丙烯酸叔-丁酯(1.27g，9.9mmol)并将所得的混合物加热回流4h。再向其中加入一些丙烯酸叔-丁酯(633mg)和Pd(OAc)2(20mg)并将该混合物在100℃下搅拌3h，然后将该溶液用H2O稀释并用Et2O进行萃取。将有机层用Na2SO4干燥并在真空下蒸发掉溶剂，得到粗品，将其用胶柱色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 95∶5)。所收集的级分得到2g 3-(3-氟-4-甲酰基-苯基)-丙烯酸叔-丁酯。
收率80％步骤B将3-(3-氟-4-甲酰基-苯基)-丙烯酸叔-丁酯(2g，8mmol)溶解于DCM(23ml)和三氟醋酸(6ml)中。将该混合物在室温下搅拌6h，然后将其在真空下蒸发掉溶剂，得到1.62g 3-(3-氟-4-甲酰基-苯基)-丙烯酸收率定量步骤C将3-(3-氟-4-甲酰基-苯基)-丙烯酸(500mg，2.57mmol)溶解于乙醇/水(1∶1，10ml)和1.7M KOH(3ml)中。向所得的溶液中加入苯乙酮(0.3ml，2.57mmol)。将该混合物在室温下搅拌一整夜，然后用10％HCl酸化并用EtOAc对其进行萃取。将有机层用Na2SO4干燥，并在真空下蒸发掉溶剂。将该粗品在EtOAc中进行研磨，过滤，得到560mg3-[3-氟-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸。
收率73％步骤D将3-[3-氟-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸(450mg，1.52mmol)溶解于THF(10ml)和DMF(1ml)中。向所得的溶液中加入HOBT(413mg，3.04mmol)、EDC(580mg，3.04mmol)、TEA(0.423ml，3.04mmol)和NH2OTHP(213mg，1.82mmol)。将该混合物在RT下搅拌一整夜，然后在水和EtOAc之间进行分配。将该有机萃取物用水进行洗涤，然后用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。
将该粗品用硅胶色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 1∶1)并将所得的油状物溶解于DCM中和用HCl/Et2O处理1h。将沉淀过滤在Buckner漏斗上并用DCM/MeOH进行洗涤，得到200mg 3-[3-氟-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺。
LC-MS法＝B RT＝6.01；(ES+)给出的MH+312.2
1H-NMR(DMSO-d6，)10.84(s br，1H)；9.07(s br，1H)；8.15(m，3H)；8.00(d，1H)；7.81(d，1H)；7.69(ddd，1H)；7.63-7.52(m，4H)；7.48(d，1H)；6.60(d，1H)。
表2中的化合物是根据上面所述的方法来进行制备的(当其中间体可以通过商业途径获得时，步骤A-D或C-D)。
表2







实施例493-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺

步骤A将4-溴苯甲醛(2g，10.8mmol)在DMF(50ml)和三乙胺(3.4ml，27mmol)中的溶液用N2充溢脱气30min。向其中加入PPh3(141mg，0.54mmol)、Pd(OAc)2(48.4mg，0.21mmol)、NaHCO3(1.84g，21.6mmol)和丙烯酸叔-丁酯(1.58ml，10.8mmol)并将所得的混合物加热回流3h。再向其中加入一些Pd(OAc)2(24mg)并将该混合物加热至100℃加热1h。将该溶液用H2O稀释并用Et2O进行萃取。将有机层用Na2SO4干燥并在真空下蒸发掉溶剂，得到粗品，将其用异丙醚研磨，得到1.6g3-(4-甲酰基-苯基)-丙烯酸叔-丁酯。
收率70％步骤B将3-(4-甲酰基-苯基)-丙烯酸叔-丁酯(150mg，0.64mmol)和KOH(72mg，1.28mmol))溶解于乙醇/水(1∶1，5ml)中并向所得的溶液中加入3，4-二氟苯乙酮(83.2μl，0.64mmol)。将所得的混合物在室温下搅拌一整夜，然后用H2O对其进行稀释。将该沉淀滤出并将其真空干燥，得到210mg 3-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酸叔-丁酯。
收率88％。
步骤C将3-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酸叔-丁酯(210mg，0.56mmol)溶解于DCM(5ml)中并向其中加入三氟醋酸(2ml)。将该反应在室温下搅拌12h。在真空下蒸发掉溶剂，得到200mg 3-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酸。
收率定量的步骤D将3-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酸(100mg，0.32mmol)溶解于DCM(10ml)中。向所得的溶液中加入HOBT(72mg，0.44mmol)、EDC(91mg，0.44mmol)、TEA(129μl，0.96mmol)和NH2OTHP(55mg，0.32mmol)。将该混合物在室温下搅拌一整夜，然后将其在水和EtOAc之间进行分配。将该有机萃取物用水洗涤，然后用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。
将该粗品用硅胶色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 8∶2)并将所得的油状物溶解于DCM中，用HCl/Et2O处理1h。将沉淀过滤到Buckner漏斗上并将其真空干燥，得到40mg 3-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺。
收率40％LC-MS法＝B RT＝6.29；(ES+)给出的MH+330.11H-NMR(DMSO-d6，)δ10.72(s br，1H)；9.16(s br，1H)；8.25(ddd，1H)；8.08(m，1H)；7.98(d，1H)；7.95(d，2H)；7.77(d，1H)；7.70-7.60(m，3H)；7.49(d，1H)；6.57(d，1H)表3中所列的化合物是根据上面所述的方法来进行制备的。
表3


实施例60N-羟基-3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺 步骤A将4-溴-2-甲氧基苯甲醛(1g，4.67mmol)溶解于MeOH(20ml)中并向所得的溶液中加入原甲酸三甲酯(562μl，5.139mmol)和对-甲苯磺酸单水合物(89mg，0.467mmol)。将该混合物在室温下搅拌一整夜，然后在真空下除去溶剂。将残余物用Et2O吸收并用5％Na2CO3和用水进行洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，蒸发，得到1.22g无色油状物形式的4-溴-1-二甲氧基甲基-2-甲氧基-苯。
收率＝99％步骤B将4-溴-1-二甲氧基甲基-2-甲氧基-苯(1.22g，4.67mmol)溶解于无水THF(16ml)中并将所得的溶液在N2气气氛下冷却至-78℃。向其中滴加位于己烷中的正-BuLi(2.24ml 2.5M溶液)并将该混合物在-78℃下搅拌20分钟，然后用DMF(467μl，6.07mmol)处理并将其在室温下搅拌0.5h。
将该溶液在Et2O和水之间进行分配并将该有机萃取物用水和盐水进行洗涤，然后用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。用硅胶闪柱色谱分离出716mg 4-二甲氧基甲基-3-甲氧基-苯甲醛(EtOAc/石油醚1∶6)。
收率＝72％步骤C将4-二甲氧基甲基-3-甲氧基-苯甲醛(716mg，3.41mmol)溶解于EtOH/H2O(1∶1，20ml)中并向所得的溶液中加入苯乙酮(409mg，3.41mmol)和1.7M KOH(3ml)。
将该混合物在室温下搅拌5h，然后用EtOAc稀释和用水洗涤两次。将有机相用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。将所得的油状物溶解于THF(10ml)中并用1N HCl(10ml)进行处理。将该溶液在室温下搅拌0.5h，然后用EtOAc稀释和用水对其进行洗涤。将有机相用Na2SO4干燥并将其真空浓缩。将所得的固体用EtOAc研磨并用Buckner漏斗对其进行过滤，得到550mg黄色粉末形式的2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯甲醛。
收率＝61％步骤D将2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯甲醛(550mg，2.07mmol)溶解于THF(5ml)中并将所得的溶液加入到进行着搅拌的二乙基膦酰基乙酸叔-丁酯(603mg，2.27mmol)和NaH(107mg，2.69mmol，60％油分散体)在THF(5ml)中的混合物中。在15分钟后，通过加入水将该反应淬熄并将其在水和EtOAc之间进行分配。将该有机萃取物用Na2SO4干燥并将其真空蒸发，得到一种粗品，将其用硅胶色谱进行纯化(EtOAc/石油醚1∶6)。所收集的级分得到635mg黄色油状物形式的3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸叔-丁酯。
收率＝84％步骤E将3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸叔-丁酯(635mg，1.74mmol)溶解于DCM(12ml)中并向所得的溶液中加入TFA(3ml)。在将其在室温下搅拌2h后，在真空下除去溶剂，得到541mg黄色粉末形式的3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸。
收率＝99％步骤F将3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸(200mg，0.65mmol)溶解于THF(6ml)中并向所得的溶液中加入HOBT(196mg，1.30mmol)、EDC(248mg，1.30mmol)、TEA(182μl，1.30mmol)和NH2OTHP(91mg，0.78mmol)。将该混合物在室温下搅拌一整夜，然后将其在水和EtOAc之间进行分配。将该有机萃取物用水洗涤3次，用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。将该粗品用硅胶色谱进行纯化(EtOAc/石油醚1∶1)并将所得的固体溶解于DCM中，用HCl/Et2O处理15分钟。将沉淀过滤到Buckner漏斗上，得到118mg N-羟基-3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺。
收率＝56％LC-MS法＝A RT＝7.42；(ES+)给出的MH+324.11H-NMR(DMSO-d6，)δ8.16(d，2H)；7.98(d，1H)；7.74(d，1H)；7.68(m，2H)；7.63-7.54(m，4H)；7.49(d，1H)；7.60(d，1H)；3.97(s，3H)。
表4中所列的化合物是根据上面所述的方法来进行制备的。
表4.
实施例63N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺 步骤A
将4-溴苯甲醛(1g，5.40mmol)溶解于MeOH(26ml)和2MNaOH(5.4ml)中。将所得的溶液冷却至0℃并向其中滴加3-乙酰基-吡啶(592μl，5.40mmol)。将该混合物在0℃下搅拌1h，然后，将所得的固体滤出，用MeOH进行洗涤，得到832mg白色粉末形式的3-(4-溴-苯基)-1-吡啶-3-基-丙烯酮。
收率＝53％步骤B将3-(4-溴-苯基)-1-吡啶-3-基-丙烯酮(823mg，2.87mmol)溶解于DMF(18ml)和TEA(1.9ml)中并将所得的溶液用N2充溢脱气20min。
向该混合物中加入NaHCO3(481mg，5.73mmol)、PPh3(37.5mg，0.14mmol)、Pd(OAc)2(13mg，0.06mmol)、丙烯酸叔-丁酯(420μl，2.87mmol)并将该反应加热至100℃加热5h。将所得的褐色溶液在水和Et2O之间进行分配并将该有机萃取物用水进行洗涤，用Na2SO4干燥并将其真空蒸发，得到粗品，将其用硅胶色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 1∶1)。所收集的级分给出680mg 3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸叔-丁酯。
收率＝70％步骤C将3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸叔-丁酯(680mg，2.03mmol)溶解于DCM(15ml)和TFA(5ml)中。将所得的溶液在室温下搅拌4h，然后在真空下除去溶剂，得到600mg三氟醋酸盐形式的3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸。
收率＝75％步骤D将3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸三氟醋酸盐(550mg，1.4mmol)溶解于THF/DMF(1∶1，20ml)中并向所得的溶液中加入HOBT(536mg，3.94mmol)、EDC(752mg，3.94mmol)、TEA(822μl，3.94mmol)和NH2OTHP(276mg，2.36mmol)。将该混合物在室温下搅拌一整夜。然后将其在水和EtOAc之间进行分配。将该有机萃取物用水和盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。
将该粗品用硅胶色谱进行纯化(EtOAc)并将所得的油状物溶解于DCM中，用HCl/Et2O处理1h。将沉淀过滤到Buckner漏斗上并将其在热EtOH中进行研磨，得到380mg盐酸盐形式的N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺。
收率＝82％LC-MS法＝B RT＝4.99；(ES+)给出的MH+295.11H-NMR(DMSO-d6，)δ9.43(d，1H)；8.93(dd，1H)；8.69(ddd，1H)；8.01(d，1H)；7.96(d，2H)；7.82(d，1H)；7.81(m，1H)；7.67(d，2H)；7.49(d，1H)；6.59(d，1H)表5中所列的化合物是根据上面所述的方法来进行制备的。
表5
实施例683-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-N-羟丙烯酰胺(hydroxacrylamide) 步骤A将4-溴-2-氟代苯甲醛(988mg，4.86mmol)和3-乙酰基-吡啶(533μl，4.86mmol)溶解于EtOH(10ml)和TEA(10.8ml)中。将所得的溶液加热回流16h，然后再向其中加入一些TEA(5ml)。将该混合物加热回流16h，然后在真空下除去溶剂并将残余物吸收于水和EtOAc中。将该有机萃取物用Na2SO4干燥并对其进行蒸发。将所得的固体用异丙醚进行研磨并将且过滤到buckner漏斗上，得到680mg黄色粉末形式的3-(4-溴-2-氟-苯基)-1-吡啶-3-基-丙烯酮。
收率＝45％步骤B将3-(4-溴-苯基)-1-吡啶-3-基-丙烯酮(668mg，2.18mmol)溶解于DMF(11ml)和TEA(1.3ml)中并将所得的溶液用N2充溢脱气20min。
向该混合物中加入NaHCO3(366mg，4.37mmol)、PPh3(28.5mg，0.11mmol)、Pd(OAc)2(10mg，0.044mmol)、丙烯酸叔-丁酯(352μl，2.40mmol)并将该反应加热至100℃加热5h。将所得的褐色溶液在水和Et2O之间进行分配并将该有机萃取物用水进行洗涤，用Na2SO4干燥并将其真空蒸发，得到粗品，将其用硅胶色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 7∶3)。所收集的级分给出550mg 3-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸叔-丁酯。
收率＝71％步骤C将3-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸叔-丁酯(550mg，1.55mmol)溶解于DCM(15ml)和TFA(5ml)中。将所得的溶液在RT下搅拌4h，然后在真空下除去溶剂，得到636mg三氟醋酸盐形式的3-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸。
收率＝定量的步骤D将3-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酸三氟醋酸盐(300mg，0.64mmol)溶解于THF(5ml)和DMF(2ml)中。向所得的溶液中加入HOBT(174mg，1.28mmol)、EDC(245mg，1.28mmol)、TEA(178μl，1.28mmol)和NH2OTHP(90mg，0.77mmol)。将该混合物在室温下搅拌6h，然后将其在水和EtOAc之间进行分配。将该有机萃取物用水、盐水进行洗涤，用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。
将该粗品在EtOAc中进行研磨，将其过滤到Bucker漏斗上并将所得的固体溶解于DCM中，用HCl/Et2O处理3h。将沉淀滤出，得到150mg盐酸盐形式的3-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺。
收率＝67％LC-MS方法＝A RT＝5.23；(ES+)给出的MH+313.11H-NMR(DMSO-d6，)δ9.40(d，1H)；8.92(dd，1H)；8.63(ddd，1H)；8.20(dd，1H)；8.05(d，1H)；7.87(d，1H)；7.77(dd，1H)；7.55(m，2H)；7.48(d，1H)；6.63(d，1H)。
实施例69N-羟基-3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酰胺 步骤A将原甲酸三甲酯(643μl，5.9mmol)和对-甲苯磺酸单水合物(102mg，0.54mmol)加入到溶解于MeOH(40ml)中的6-溴-吡啶-3-甲醛(1g，5.37mmol)。将该混合物在室温下搅拌24h，然后将其在水和Et2O之间进行分配。将该有机萃取物用水、5％Na2CO3洗涤，用Na2SO4干燥并将其真空蒸发，得到1.2g褐色油状物形式的2-溴-5-二甲氧基甲基-吡啶。
收率＝99％步骤B将2-溴-5-二甲氧基甲基-吡啶(503mg，2.13mmol)溶解于无水THF(20ml)中并将所得的溶液在N2气气氛下冷却至-70℃。向其中滴加2.5M正-BuLi在己烷中的溶液(0.94ml)并将该混合物在-70℃下搅拌15分钟，然后用DMF(245μl，3.19mmol)对其进行处理。在30分钟后，使其温度达到RT并将该混合物在水和Et2O之间进行分配。将该有机萃取物用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。将该粗品用色谱柱进行纯化(石油醚/EtOAc 7∶3)，得到206mg 5-二甲氧基甲基-吡啶-2-甲醛。
收率＝44％步骤C将5-二甲氧基甲基-吡啶-2-甲醛(355mg，1.97mmol)溶解于THF(10ml)中并将所得的溶液加入到进行着搅拌的二乙基膦酰基乙酸叔-丁酯(547mg，2.169mmol)和NaH(102mg，2.56mmol，60％油分散体)在THF(5ml)中的混合物中。在15分钟后，通过加入水将该反应淬熄并将所得的结晶浆液用Et2O进行萃取。将有机相用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。将该粗品用硅胶色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 95∶5)，得到491mg 3-(5-二甲氧基甲基-吡啶-2-基)-丙烯酸叔-丁酯。
收率＝89％步骤D将3-(5-二甲氧基甲基-吡啶-2-基)-丙烯酸叔-丁酯(491mg，1.76mmol)溶解于THF(20ml)和1N HCl(7ml)中。
将所得的溶液搅拌4h。向其中加入水(1ml)和10％HCl(1ml)。将该混合物搅拌一整夜，然后用20％NaOH将其碱化至pH＝10并用EtOAc对其进行萃取。将有机相用Na2SO4干燥并将其真空蒸发，得到固体形式的3-(5-甲酰基-吡啶-2-基)-丙烯酸叔-丁酯。
收率＝88％步骤E将3-(5-甲酰基-吡啶-2-基)-丙烯酸叔-丁酯(364mg，1.56mmol)溶解于MeOH(10ml)中并将该溶液冷却至0℃。向其中加入苯乙酮(188mg，1.56mmol)和1.7M KOH(1.8ml)。将该反应在0℃下搅拌3h。将所得的固体过滤到Buckner漏斗上，得到130mg黄色粉末形式的3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酸叔-丁酯。
收率＝25％步骤F将3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酸叔-丁酯(130mg，0.38mmol)溶解于DCM(4ml)和TFA(1ml)中。将所得的溶液在室温下搅拌4h，然后在真空下除去溶剂。将所得的油状物用Et2O结晶，得到165mg三氟醋酸盐形式的3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酸。
收率＝定量的步骤G将HOBT(133mg，0.98mmol)、EDC(187mg，0.98mmol)、TEA(148mg，1.47mmol)和NH2OTHP(68.8mg，0.59mmol)加入到溶解于THF/DMF(1∶1，10ml)中的3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酸三氟醋酸盐(193mg，0.49mmol)中。将该混合物在室温下搅拌6h，然后将其在水和Et2O之间进行分配。将该有机萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并将其真空蒸发。
将该粗品用硅胶色谱进行纯化(石油醚/EtOAc 4∶6)并将所得的油状物溶解于DCM中，用HCl/Et2O处理1.5h。将沉淀过滤到Buckner漏斗上，用DCM和Et2O进行洗涤，得到55mg盐酸盐形式的N-羟基-3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酰胺。
收率＝33％LC-MS法＝B RT＝5.58；(ES+)给出的MH+295.21H-NMR(DMSO-d6，)δ9.06(d，1H)；8.45(dd，1H)；8.18(d，2H)；8.11(d，1H)；7.78(d，1H)；7.76-7.66(m，2H)；7.59(dd，2H)；7.53(d，1H)；7.04(d，1H)表6中所列的化合物是根据上面所述的方法来进行制备的。
表6.
2.生物化学和药理学核体(nucleosomal)组蛋白的乙酰化和脱乙酰化在染色质结构、染色质功能的调节和基因表达的调节中起着重要的作用。许多类结构不同的化合物都已经被鉴定为HDAC抑制剂；这些化合物导致了肿瘤细胞和正常组织中乙酰化组蛋白蛋白质的积聚。HDAC抑制剂能激活分化、抑制G1和/或G2中的细胞周期、和诱导变异细胞或癌细胞中的细胞凋亡。
试验组11.组蛋白乙酰化将U937造血细胞系用一些浓度间隔的化合物进行处理，这些浓度间隔与tricostatin A(一种已知的最有效的组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(微摩尔浓度))的浓度间隔相当。用使用识别H3和H4乙酰化组蛋白的抗体的细胞荧光比色法(cytofluorimetry)来测量组蛋白乙酰化的水平。用不同的技术(蛋白质印迹法)和其它细胞系获得了相似的结果。
如图1所示，所试验的化合物表现出有效的抑制活性，具有一定的效力谱和抑制稳定性(通过与处理4h后获得的数据进行比较)，其与所说化合物的稳定性和/或组蛋白脱乙酰基酶的抑制程度有关。
2.细胞生长/细胞凋亡/细胞周期.
对U937细胞对式(I)化合物的生物学响应进行了研究。作为参考，如之前所述的那样，用tricostatin A处理24hr在U937细胞中诱导了强烈的细胞凋亡(约60％的细胞死亡)，同时在G2/M相中有许多正在进行生长的细胞(Qiu等人，Mol.Biol.Cell.，2000，11(6)，2069-83)。
首先对两种化合物(MC1610和MC1645)进行了研究如图2中所示的那样，两种化合物(浓度为1μM)完全阻断了细胞生长，诱导了细胞凋亡和刺激了G2/M相中的阻滞。
根据上述的方法，对本发明的化合物抑制HD2、HD1-B和HD1-A(其都是具有脱乙酰基酶活性的mais酶)的能力进行分析。特定地，HD1-B和HD1-A分别是I类和II类哺乳动物脱乙酰基酶的同系物。所得的结果如表7所示。
表7






表7中的数据表明所有的试验化合物都具有有效抑制组蛋白脱乙酰基酶的活性。
实验组2方法体外研究2.1组蛋白乙酰化试验用组蛋白乙酰化试验来对细胞培养物中乙酰化组蛋白的相对水平进行常规探测。将混悬细胞(U937或K562，分别得自组织细胞性淋巴瘤和髓细胞性白血病)与剂量渐增的HDAC抑制剂(HDACi)接触以诱导组蛋白乙酰化。在3h后，将这些细胞固定(1％位于PBS中的低聚甲醛)和渗透(permeabilized)(Triton X-100 0.1％位于PBS中，RT)。在洗涤(PBS-1％ BSA)后，将这些细胞在10％山羊血清(Goatserum)PBS(30’，4°)中预培养。然后，将这些细胞用指向于乙酰化组蛋白的单克隆抗体(位于PBS-1％ BSA中；1小时，RT)进行培养，然后用抗-小鼠FITC轭合抗体(位于PBS-1％BSA中；1小时，RT)进行培养。在最后洗涤后，对这些细胞进行FACS分析。
2.2 HDAC抑制试验根据制造商的建议，用HDAC荧光活性试验试剂盒(Biomol Inc.)在核提取物上进行该HDAC活性试验。该试验是分两步进行的首先，将5μg HELA核提取物(HDAC活性)加入到HDAC抑制剂和底物(乙酰化赖氨酸侧链，116μM)的溶液中，然后将该混合物在室温(25°)下培养10分钟。在第二步中，通过加入显色剂(在室温下15分钟)来终止该反应。在这一步中，产生了荧光团。
用Vector 3荧光计(Perkin-Elmer)来对荧光进行分析，使用355nm的激发波长和在460nm的发射光线下进行探测。
2.3 MTT试验
MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物]试验是以得自有活力的细胞的线粒体脱氢酶裂解淡黄色MTT的四唑环和形成深蓝色甲 结晶(其对于细胞膜而言在很大程度上是不可渗透的，因而导致了其在健康细胞内的积聚)的能力为基础的。通过加入去污剂来对细胞进行的增溶导致了该被溶解的催化剂的释放。存活细胞的数目直接与所产生的甲 产物的水平成比例。然后，可以用简单比色试验来对其颜色进行定量。可以在多孔(multiwell)扫描分光光度计(ELISA读数器)上读取结果。
将肿瘤细胞系(HT29，MCF-7，PC3，U937)用不同浓度的试验化合物进行培养(24、48和72小时)。在不同的时间点向其中加入MTT(5mg/ml，位于PBS中)并将其在37℃下培养3-4小时。在培养后，除去包含MTT溶液的培养基并将甲 结晶用有机溶剂(DMSO/无水乙醇1∶1)溶解，然后在多孔扫描分光光度计上对其进行读数(550-570nm)。将存活细胞的百分比表示为(处理孔的吸光度/对照孔的吸光度)×1002.4细胞生长/细胞凋亡/细胞周期将混悬或粘连细胞(HT29或K562)与剂量渐增的HDACi化合物进行接触以对其生物学响应进行评估。对于细胞周期和细胞凋亡分析而言，在收集后，将这些细胞在70％乙醇中固定30min。在洗涤后，将这些细胞重新混悬于Propidium Iodide(PI；50μg/ml附加于RNase(250μg/ml)上)中并将其在室温下培养3h。
对这些样品进行处理，用其来进行流式细胞(FC)分析。FC是用FACScan细胞计数器(Becton Dickinson)进行的。如图3中所示的那样，所试验的化合物能完全抑制细胞生长、诱导细胞凋亡和刺激G0/G1阻滞。
体内研究抗肿瘤活性研究2.5 Carciginogenesis研究和HDACi给药首先，用25μg DMBA(被溶解于200μl丙酮中)对六周大的雌性129小鼠进行处理，将该物质涂在所述小鼠剃了毛的背部皮肤上。在开始2周后，在接下来的13周中，将小鼠用3μg TPA(被溶解于200μl丙酮中)一周处理两次。在应用TPA后6周，明显可以看到皮肤肿瘤(乳头状瘤)。在发生可见的乳头状瘤时，开始进行HDACi给药。将HDAC抑制剂溶解于甘油/H2O/DMSO(7∶2∶1)中。将HDACi给药于正常组或用DMBA-TPA进行处理的动物，一组被看成伪组(仅给予基质)。将HDACi(或基质)涂到动物被剃了毛的背部皮肤(2×3cm)上。在接下来的6-7周，所有组都每周处理两次。每周都对所有可见的肿瘤进行计数并在6周后，在将其处死(CO2吸入)时对其进行解剖。
2.6组织学和免疫组织化学分析将这些肿瘤样品在10％进行了缓冲的福尔马林中进行固定，对其进行用于石蜡包埋的处理并对其进行切片(4μm)。用苏木精和曙红对一个系列进行染色，同时对其余系列进行免疫组织化学处理以探测乙酰化组蛋白的水平。简单地说，在脱蜡后，通过梯度醇系列进行组织水合，并在枸橼酸溶液(pH 6)中进行抗体暴露，将这些切片淬火(3％H2O2的TBS溶液)并将其与抗-乙酰化组蛋白(位于TBS 1X-BSA 2％-NGS2％-吐温0.05％中)一起在室温下培养2小时。然后，将这些切片用易于应用的二抗(DAKO Envision System HRP抗小鼠)在室温下培养1小时，随后将其在过氧化物酶底物溶液(1滴位于1mL DAB DAKO缓冲液中的铬精)中进行培养。最后，将这些切片在H2O中进行洗涤，将其脱水以对其进行封藏和观察。
结果3.1组蛋白乙酰化试验和HDAC抑制试验根据第2.1和2.2段中所述的方法，对本发明化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶的能力进行试验。在表8中对所得的结果进行了概述。
表8.所测量活性的概述(HDAC抑制试验和组蛋白乙酰化试验)


IC50范围(nM)＜100＝+++＞100，＜200＝++＞200，＜600＝+乙酰化增量范围＜4倍＝+＞4倍，＜6倍＝++＞6倍＝+++表8中所示的数据证明所试验的化合物具有有效抑制组蛋白脱乙酰基酶的活性。
3.2MTT试验根据第2.3段中所述的方法，用不同的细胞系对本发明化合物诱导增生阻断和/或细胞死亡的能力进行试验。在表9中对所得的结果进行了概述。
表9.活性MTT试验化合物

IC50(μM)范围＜0.5＝+++＞0.5，＜5＝++＞5＝+表9中所示的结果表明本发明的化合物能诱导各种肿瘤细胞系中的增生阻断和/或细胞死亡。
3.3体内研究根据在第2.5和2.6段中进行了解释的方法，将得自正常小鼠或用DMBA-TPA进行处理的小鼠的皮肤分别用免疫组织化学进行分析或用苏木精和曙红进行染色。在图4和图5中表示了所得结果的实例，其证明所试验的化合物能十分有效地诱导正常动物体内的组蛋白乙酰化，并且能降低治疗动物的肿瘤大小。此外，如图6所示，所试验的化合物还能完全阻断所诱导的乳头状瘤数目的进一步增加。
权利要求
1.式(I)的化合物 其中R1是包含至少两个共轭双键的直链或支链，R3选自氢、烷氧基烷基；Ar是任选地被取代的芳基或杂芳基，A选自 其中R2选自氢、烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、(硫代)羰基氨基、(硫代)氨基carbonil、磺酰基氨基、氨基磺酰基、(硫代)酰基、(硫代)酰氧基、(硫代)烷氧基羰基、硝基和硝酰基；
2.如权利要求1所述的化合物，其中R1选自 其中Y表示O、S、NH、CH2、NOH或NOR5，其中R5是具有1至4个碳原子的烷基。
3.如权利要求1-2所述的化合物，其中Ar选自苯基、萘基、吡啶基、吡喃基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基，其可任选地被取代。
4.如权利要求1-3所述的化合物，其中Ar被一个或多个选自卤素、羟基、烷基、烷氧基、三氟烷基、三氟烷氧基、二烷基氨基、吗啉基、哌嗪基、甲氧基羰基的基团所取代。
5.如权利要求1-4所述的化合物，其中R1和包含R3的基团彼此相对而言以对位关系被连接到A环上。
6.如权利要求1-5所述的化合物，其中R2选自氢、卤素、烷基、烷氧基。
7.如权利要求1-6所述的化合物，其中R3是氢。
8.如权利要求1-7所述的化合物，其具有下述结构中的一种 其中Ar和R2具有上述含义，并且X是碳或氮原子。
9.如权利要求8所述的化合物，其中在式(Ia-d)中，X是碳原子，R2是氢，和Ar选自苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、1-萘基、5-二氢苯并呋喃基。
10.如权利要求1所述的化合物，其选自3-[3-氟-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氯-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氯-4-(3-氧代-3-邻-甲苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(2-氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(2-氯-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氯-4-(3-氧代-3-间-甲苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(3-氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(3-氯-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氯-4-(3-氧代-3-对-甲苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(4-氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氯-4-[3-(4-氯-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氯-4-(3-氧代-3-噻吩-2-基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氟-4-(3-氧代-3-邻-甲苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(2-氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(2-氯-苯基)-3-氧代-丙烯基]-3-氟-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氟-4-(3-氧代-3-间-甲苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(3-氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(3-氯-苯基)-3-氧代-丙烯基]-3-氟-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氟-4-(3-氧代-3-对-甲苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(4-氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(4-氯-苯基)-3-氧代-丙烯基]-3-氟-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-[3-氟-4-(3-氧代-3-噻吩-2-基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-{3-氟-4-[3-(4-吗啉-4-基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-氧代-3-(2-三氟甲基-苯基)-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-氧代-3-(2-三氟甲氧基-苯基)-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；3-{4-[3-(2-溴-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；3-{4-[3-(3-溴-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-氧代-3-(4-三氟甲基-苯基)-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-氧代-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；3-{4-[3-(4-溴-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(4-二乙基氨基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-(4-吗啉-4-基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；3-[4-(3-呋喃-2-基-3-氧代-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-噻吩-2-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-氧代-3-(1H-吡咯-2-基)-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；3-[4-(3-苯并呋喃-2-基-3-氧代-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-[4-(3-苯并[b]噻吩-2-基-3-氧代-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-噻吩-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-(3-甲氧基-4-吗啉-4-基甲基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；3-{4-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(3，5-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(2，5-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；3-{4-[3-(2，6-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-[3-甲氧基-4-(3-氧代-3-噻吩-2-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-[3-甲基-4-(3-氧代-3-噻吩-2-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；4-{3-[4-(2-羟基氨基甲酰基-乙烯基)-苯基]-丙烯酰基}-苯甲酸甲酯；3-{3-[4-(2-羟基氨基甲酰基-乙烯基)-苯基]-丙烯酰基}-苯甲酸甲酯；3-{4-[3-(5-氯-噻吩-2-基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-{4-[3-(3-羟基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-苯基}-丙烯酰胺；N-羟基-3-(4-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙烯基}-苯基)-丙烯酰胺；N-羟基-3-[2-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；3-[2-氟-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；3-[2-氯-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-N-羟基-丙烯酰胺；N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-吡啶-2-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-[4-(3-氧代-3-吡啶-4-基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-[3-甲基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-[3-甲氧基-4-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-苯基]-丙烯酰胺；3-[3-氟-4-(3-氧代-3-吡啶-3-基-丙烯基)-苯基]-N-羟丙烯酰胺；N-羟基-3-[5-(3-氧代-3-苯基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酰胺；N-羟基-3-{5-[3-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙烯基]-吡啶-2-基}-丙烯酰胺；N-羟基-3-[5-(3-氧代-3-噻吩-2-基-丙烯基)-吡啶-2-基]-丙烯酰胺。3-{5-[3-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丙烯基]-吡啶-2-基}-N-羟基-丙烯酰胺
11.制备式(I)化合物的方法，其包括将式(II)的化合物 其中A和R2具有上述含义并且R4是一种适宜的离去基团，(i)用其中Ar具有上述含义和W是能通过与(II)的CHO基团反应而形成上面所定义的基团R1的基团的式Ar-W的化合物、或其合成中间体来进行处理(ii)和进一步用式(III)的化合物进行处理 其中Z表示上面所定义的NHOR3或其前体。
12.如权利要求11所述的方法，其中化合物Ar-W是任选地在苯基环上被取代的苯乙酮。
13.如权利要求11-12所述的方法，其中化合物Ar-W的加成反应是在碱性环境中进行的。
14.如权利要求11-13所述的方法，其中所说的式(III)的化合物是丙烯酸烷基酯。
15.如权利要求11-14所述的方法，其中所说的式(III)的化合物是丙烯酸正-丁酯。
16.如权利要求11-15所述的方法，其中所说的式(III)化合物的加成反应是在存在磷酸钾和醋酸钯的情况下进行的。
17.用于治疗的如权利要求1-9中所定义的式(I)的化合物。
18.药物组合物，特征在于其包含一种或多种如权利要求1-9中所定义的式(I)的活性成分和可药用的赋形剂和稀释剂。
19.片剂、胶囊、口服制剂、粉末、颗粒、锭剂、可再生粉末、可注射或可输入液体溶液或混悬液、栓剂、水性或油性混悬液、溶液、乳液、糖浆、酏剂形式或经皮形式的用于口服或胃肠外给药的如权利要求18所述的组合物。
20.以软膏、乳霜、凝胶、洗剂、溶液、糊剂等形式用于局部应用的如权利要求18所述的组合物，可能包含脂质体、胶束、和/或微球。
21.一种或多种如权利要求1-9所定义的式(I)的化合物在制备预防和/或治疗与组蛋白脱乙酰基酶的活性失控有关的疾病的药物中的用途。
全文摘要
在这里描述了具有抗肿瘤活性的新组蛋白脱乙酰基酶抑制剂以及其制备方法。这些化合物属于结构式(I)，其中R
文档编号C07D409/06GK101039905SQ200580035432
公开日2007年9月19日 申请日期2005年9月30日 优先权日2004年10月1日
发明者S·米努奇, P·G·佩利奇, A·马伊, M·巴拉里尼, G·加尔朱洛, S·马萨 申请人:Dac有限公司