专利名称：抗light的人源化抗体及其使用的制作方法
抗LIGHT的人源化抗体及其使用
背景技术：
本申请要求2009年3月M日提交的美国临时申请第61/202，661号的权益。美国临时申请第61/202，661号的全部内容通过引用并入本文。本发明涉及特异性结合LIGHT多肽的抗原结合多肽和制备及使用该类抗体的方法。具体地，本发明涉及特异性结合LIGHT多肽的人源化抗原结合多肽。所述抗原结合多肽用于治疗和诊断免疫性疾病和病症、炎症性疾病和病症和恶性疾病和病症，例如，炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、类风湿关节炎和移植。与肿瘤坏死因子(TNF)在结构上有关的蛋白质统称为TNF超家族。LIGHT是 TNF超家族的一个成员，其在被激活的T细胞和未成熟的树突状细胞中表达(Tamada等， J. Immunology. 2000)。LIGHT是II型跨膜蛋白，被称为TNF超家族成员14 (TNFSF14)，也被称为TL5、LTg、⑶258和HVEML。LIGHT是T协同刺激分子，LIGHT诱导T细胞增殖和细胞因子的产生(Tamada K.等，Nat. Med. 2000)。LIGHT也诱导单核细胞和内皮细胞中的炎症反应(Otterdal 等，Blood 2006 ；Chang 等，J. Biomed. Sci. 2005)。LIGHT结合于在不同细胞类型上表达的3个不同受体在T-细胞和B细胞上表达的疱疹病毒进入介质(HVEM) (Kwon等，J. Biol. Chem 1997)、在基质细胞和非造血细胞上表达的淋巴毒素 β 受体(LT β R) (Ettinger 等，Curr TopMicrobiol Immunol. 2000)和诱骗受体3/TR6。树突状细胞和T细胞中的LIGHT增强了 T细胞增殖和细胞因子的产生。rLIGHT 可直接协同刺激T细胞反应(Tamada K.等，Nat. Med. 2000)。LIGHT在各种炎症性疾病和病症中的作用已通过使用LIGHT缺陷模型和LIGHT过表达转基因动物的各种模型所证明。LIGHT在小鼠中的过表达导致活化的外周T细胞群过度产生和严重的自身免疫性疾病的自发产生(Wang等，J. Clin. Invest. 2001) 0 LIHGT 的靶向破坏导致T细胞的协同刺激活化和Thl型免疫反应方面的缺陷(Scheu等，J. Exp. Med. 2002 ；Xu 等 J. Immunol. 2007)。由于LIGHT对T细胞的有效刺激活性，LIGHT是慢性炎症的重要组成部分。因此， LIGHT的抗体，尤其是LIGHT拮抗剂抗体，会在治疗与慢性炎症有关的疾病中有用。这种疾病包括，但不仅限于下列讨论的疾病。肠道菌群失调的免疫反应是炎症性肠病(IBD)的主要病因。T辅助细胞在IBD的异常免疫反应中有重要作用。具体而言，已经将Thl细胞与克罗恩病联系起来。一些研究已经验证了 LIGHT在肠道炎症中的关键作用。LIGHT过表达的转基因小鼠易患T细胞介导的自身免疫疾病，且LIGHT转基因小鼠表现出严重的T细胞介导的肠道炎症并患上结肠炎(Wang J.等，J. Clin. Invest. 2004 ；Wang J.等，J. Immunol2005 ；Wang 等，J. Clin. Invest 2001 ； Shaikh等，J. Immunol. 2001)。此外，用可溶性LT β R-Fc阻断LIGHT和其受体的相互作用改善了 TNBS 诱导的结肠炎(An，MM 等，Pharmacol. Res. 2005)。在人体染色体 19pl3. 312-14 上，LIGHT位于与IBD感受性基因座位重叠的位置(Rioux等，Am. J. Hum. Genet. (2000)； Bonen 等，Gastroenterology (2003))。在类风湿关节炎(RA)患者的关节滑液中已检测出高水平的LIGHT蛋白。例子可参见，RA患者滑膜成纤维细胞中重组LIGHT诱导的炎症介质(Recombinant LIGHT-induced inflammatory mediators in synovial fibroblastsfrom RA patients, Pierer 等， Rheumatology (2007) ；Kang 等，Arthritis &Rheumatism(2007))禾Π 阻断 LIGHT-受体相互作用防止胶原诱导性关节炎的进展(Blocking LIGHT-receptor interaction prevents development ofCoIlagen-Induced Arthritis, Fava 等，J. Immunol. (2003))。 最后，在2007年11月，Biogen IDEC公司宣布了在IIa期临床试验中对RA患者使用 baminercept (LT β R-Fc ffi^SS ) (Biogen IDEC Press Release, 2007 ^Ξ 11 月 9 日)。在肝炎的实验模型中LIHGT被上调。通过利用抗体或者可溶性LT β R处理阻断了 LIGHT和LIGHT受体的相互作用，显著地减弱了肝脏炎症，减少了炎症细胞因子的产生并防止小鼠患上致命的肝炎(Anand 等，J.Clin. Invest. (2006) ；An 等 Biol. Pharm. Bull.
(2006))ο几份研究表明，在动物模型中阻断LIGHT-受体相互作用防止移植物抗宿主病 (GVHD)并且延长同种异体移植物的存活(Xu等，Blood(2007) Je等，J. Exp. Med. (2002)； Fan 等，Transplantation (2007))。除了上面提到的研究之外，阻断LIGHT受体(LTi3R*HVEM)还显著地减少不同动物模型中的疾病迹象，所述疾病例如，胶原诱导性关节炎(CIA)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)，实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型是多发性硬化症(MQ的动物模型 (Fava 等，J Immunol. (2003)和 Suen 等，J. Exp. Med. (1997))。LIGHT 敲除的小鼠也在 IL-12 的产生方面有缺陷，因此缺乏对炎症刺激产生IFNy介导的、抗原特异性Thl反应的能力。因此，本领域有必要创造特异性结合于LIGHT的抗原结合多肽和拮抗剂抗原结合多肽以治疗炎症性、恶性、自身免疫性疾病和病症，例如多发性硬化症、IBD和RA以及上文描述的或本领域已知的其他疾病。与可溶性受体的使用相比，特异性结合LIGHT的抗原结合多肽和拮抗剂抗原结合多肽有一些优势，例如1)与Fc-融合蛋白相比，抗体在血流中具有更长的半衰期；2)与可溶性受体相比，抗体具有更高的疗效，因为抗体可被设计成对 LIGHT具有更高的亲和力；以及3)由于对LIGHT的特异性，抗体是比可溶性受体更为安全的选择。LIGHT拮抗剂抗体只会阻断LIGHT介导的信号转导从而改善局部炎症过程，而没有由可溶性受体引起的可最终导致免疫抑制的次级淋巴组织结构的全身性衰竭。
发明内容
本发明基于LIGHT多肽在炎症疾病中的作用。具体地，本发明基于LIGHT刺激诸如IFN- γ和IL-8之类的致炎性细胞因子的能力并且基于LIGHT是⑶3协同刺激的Thl7 细胞产生的IL-17的强效刺激剂。由于最近发现Thl7细胞是所有主要的自身免疫病症中引起持续发炎和组织损伤的炎症过程的重要驱动因素，因此LIGHT和IL-17的产生之间的联系尤其重要，所述主要的自身免疫性疾病如多发性硬化症(MS)、炎症性肠病(IBD)和类风湿关节炎(RA)。总体上，本发明涉及特异性结合于TNF样细胞因子TL5的抗原结合多肽，所述TNF 样细胞因子TL5又称LIGHT (参见GenBank登录号AF036581，通过引用全部并入本文)。在一些实施方式中，本发明的抗原结合多肽包括人源化重链可变区(VH)和人源化轻链可变区(VK)。例如，在一些实施方式中，本发明的抗原结合多肽包括人类抗体的轻链和重链可变区的骨架区(FR)，同时基本上保留亲本单克隆抗体的抗原结合特异性(即互补决定区 (OTR))。除⑶R外，人源化重链可变区和/或人源化轻链可变区至少约87%人源化、至少约 90%人源化、至少约95%人源化、至少约98%人源化或至少约100%人源化。抗原结合多肽分子来自单克隆抗体供体(例如，小鼠单克隆抗体供体)并包括来自单克隆抗体的CDR(例如，小鼠单克隆CDR)。在一些实施方式中，本发明的抗原结合多肽是LIGHT活性的拮抗剂和 /或LIGHT与LIGHT受体相互作用的拮抗剂。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(l)CDR-Hl，所述 CDR-Hl包含氨基酸序列X1Y X2X3X4 (SEQ IDNO 1 ，其中X1是氨基酸D、S、T或N, X2是氨基酸Y、L或W，&是氨基酸I或M，且&是氨基酸Y、H、E或N ； (2)⑶R-H2，所述⑶R-H2包含氨基酸序列 XJAPXJiPgCKAAAJXMi^FXMXySEQ ID NO :19)，其中)(5 是氨基酸 Y、M、V 或 W，X6是氨基酸D、N、H或F，X7是氨基酸Y、G或S，X8是氨基酸N、S、T或D，X9是氨基酸G、 S或D，X10是氨基酸G、D、E或I，X11是氨基酸T或S，X12是氨基酸K或R，且X13是氨基酸Y 或L，X14是氨基酸Q或E，X15是氨基酸K或N，X16是氨基酸K、I或R，且X17是氨基酸G、A 或 D ； (3)CDR-H3，所述 CDR-H3 包含选自以下的氨基酸序列(i) WX18X19 (SEQ IDNO 20) ； (ii) X20X21X22X23X24X25X26X27X28 (SEQ ID NO 21)；和(i i i) X20X21X22X23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO 22)，其中X18是氨基酸D或N，X19是氨基酸R或Y，X20是氨基酸Ε、T或G，X21是氨基酸D、S 或N，X22是氨基酸Y或G，X23是氨基酸G、S或V，X24是氨基酸I、S或W，)(25是氨基酸S、W或 A，X26是氨基酸T、F或M，X27是氨基酸Y、P或D，且\2%是氨基酸S或Y。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含(l)CDR-Ll，所述 CDR-Ll 包含选自以下的氨基酸序列(iU29)(3(1SX31X32X33X34X35X36X37X38 (SEQ ID NO :38) ； (ii)X
(SEQ ID NO 39)；和 QiiU29X3tlSX31X32X33X34X35X36X37X38X3 A0X41X42H(SEQ ID NO :40)，其中X29是氨基酸K或R，X30是氨基酸A或S，)(31是氨基酸Q或 K，X32是氨基酸D、S或N，X33是氨基酸V、I或L，X34是氨基酸G、S、V或L，X35是氨基酸T、 N或H，X36是氨基酸A、N或S，X37是氨基酸V、L、N或G，X38是氨基酸A、H、G或Y，X39是氨基酸N或T，X40是氨基酸T或Y，X41是氨基酸Y或M，X42是氨基酸F或H ； ( ⑶R-L2，所述 CDR-L2 包含氨基酸序列 X43X44X45X46X47X48X49 (SEQID NO 41)，其中 X43 是氨基酸 W、Y、K 或 I， X44是氨基酸A、T或V，X45是氨基酸S或Y，X46是氨基酸T、Q或N，X47是氨基酸R、S或L，X48 是氨基酸H、I、F或E，且X49是氨基酸T或S ；和( ⑶R-L3，所述⑶R-L3包含氨基酸序列 X50X51X52X53X54X55PX56T (SEQ ID NO :4 ，其中 X50 是氨基酸 Q 或 S，)(51 是氨基酸 Q 或 H，X52 是氨基酸S或Y，X53是氨基酸S、N、T或R，X54是氨基酸S、R、H或E，)(55是氨基酸Y、W、V或L，且 X56是氨基酸L或Y。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区和人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(1)⑶R-Hl，所述CDR-Hl包含氨基酸序列X1YX2X3X4(SEQ ID NO 18)，其中X1是氨基酸D、S、T或N，X2是氨基酸Y、L或W，X3是氨基酸I或M，且&是氨基酸Y、H、E或N ；⑵ CDR-H2，所述 CDR-H2 包含氨基酸序列 X5M6PX7X8X9XltlX11X12X13NX14X15FX16X17 (SEQ ID NO 19)， 其中&是氨基酸Y、Μ、V或W，X6是氨基酸D、N、H或F，X7是氨基酸Y、G或S，X8是氨基酸N、S、T或D，X9是氨基酸G、S或D，Xltl是氨基酸G、D、E或I，X11是氨基酸T或S，X12是氨基酸K或R，且X13是氨基酸Y或L，X14是氨基酸Q或E，X15是氨基酸K或N，X16是氨基酸K、 I或R，且是氨基酸G、A或D ；和(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含选自以下的氨基酸序列
(i)WX18X19(SEQ ID NO 20) ； (ii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28 (SEQID NO 21)；和(iii)X20X21X22X 23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO :2 ，其中 X18 是氨基酸 D 或 N，X19 是氨基酸 R 或 Y，X20 是氨基酸Ε、T或G，X21是氨基酸D、S或N，X22是氨基酸Y或G，X23是氨基酸G、S或V，X24是氨基酸I、S或W，)(25是氨基酸S、W或A，X26是氨基酸T、F或M，X27是氨基酸Y、P或D，且\2%是氨基酸S或Y。所述人源化抗体轻链可变区包含(1)⑶R-Ll，所述⑶R-Ll包含选自以下的氨基酸序列Gn29X30SX31X32X33X34X35X36X37Xs^SEQ ID NO 38) Jiin29X30SX31X32X33X34X35X36X37 ^38^39^40^41^42 (SEQ ID NO 39)；禾口 (^:1))^9)(30^)(3^32)(33)(34)^5)^6)(37)^8)(39)(40)(4^4211(^ ID NO 40)，其中)(29是氨基酸K或R，X30是氨基酸A或S，X31是氨基酸Q或K，X32是氨基酸D、S或 N，X33是氨基酸V、I或L，X34是氨基酸G、S、V或L，X35是氨基酸T、N或H，X36是氨基酸A、N 或S，X37是氨基酸V、L、N或G，X38是氨基酸A、H、G或Y，X39是氨基酸N或T，X40是氨基酸 T或Y，X41是氨基酸Y或M，X42是氨基酸F或H ； ( ⑶R-L2，所述⑶R-L2包含氨基酸序列 X43X44X45X46X47X48X49 (SEQ ID NO :41)，其中 X43 是氨基酸 W、Y、K 或 IJ44 是氨基酸 A、T 或 V, X45 是氨基酸S或Y，X46是氨基酸T、Q或N，X47是氨基酸R、S或L，X48是氨基酸H、I、F或E，且 X49 是氨基酸 τ 或 S ；和(3) CDR-L3，所述 CDR-L3 包含氨基酸序列)(5(1X51X52X53X54)(55PX56T (SEQID NO 42)，其中)(5。是氨基酸Q或S，X51是氨基酸Q或H，X52是氨基酸S或Y，X53是氨基酸S、 N、T或R，X54是氨基酸S、R、H或E，X55是氨基酸Y、W、V或L，且是氨基酸L或Y。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(1) CDR-H1，所述 CDR-Hl 包含选自以下的氨基酸序列(i) SSYIH (SEQ ID NO :23)，(ii) DYYIY (SEQ ID NO: 26)，(iii)TYLIE(SEQ IDNO 29), (iv)TYWMN(SEQ ID NO :32)，和(v)NYLIE(SEQ ID NO :35)； 0)CDR-H2，所述 CDR-H2 包含选自以下的氨基酸序列(i)WIFPGSDITKYNEKFKG(SEQ ID NO: 24)，(ii)YIDPYNGGTKYNQKFKD(SEQ ID NO 27), (iii)VINPGTGETKYNENFRA(SEQ ID NO :30)， (iv)MIHPSDSESRLNQKFID(SEQ ID NO :33)，和(ν)VINPGSGDTKYNENFKG(SEQ ID NO :36)；禾口 (3)CDR-H3，所述 CDR-H3 包含选自以下的氨基酸序列(i) EDYGISTYSAMDF (SEQ ID NO 25)，
(ii)TSGSSffFPY (SEQ IDNO 28)，(iii) WDR (SEQ ID NO 31), (iv) GNYVffAMDY (SEQ ID NO: ；34)，和(ν) WNY (SEQ ID NO :37)。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含(1) CDR-Ll，所述CDR-Ll包含选自以下的氨基酸序列(i) KASQDVGTAVA (SEQ ID NO 43)， (ii)RASQSISNNLH(SEQ ID NO :46)，(iii)RSSQNLVHSNGNTYFH(SEQ ID NO 49), (iv) RASKSVSTSGYTYMH(SEQ ID NO: 52)，和(ν)RSSQSLLHSNGNTYFH(SEQ ID NO :55) ； (2)CDR_L2， 所述CDR-L2包含选自以下的氨基酸序列(i) WASTRHT (SEQID NO :44)，(ii) YTYQSIS (SEQ ID NO 47), (iii)KVSNRFS(SEQ IDNO :50)，和(iv)ITSNLES(SEQ ID NO :53)；禾口 (3)CDR_L3，所述CDR-L3 包含选自以下的氨基酸序列(i)QQYSSYPLT(SEQ ID NO 45), (ii) QQSNRWPLT (SEQ ID NO 48), (iii)SQSTHVPYT(SEQ ID NO :51)，和(iv)QHSRELPYT(SEQ ID NO :54)。本发明的另一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区和/或人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(1)⑶r-hl，所述cdr-hl包含氨基酸序列syyih(seq id no 23)，(2) cdr-h2，所述 cdr-h2 包含氨基酸序列 wifpgsditkynekfkg(seq id no :24)，和(3)cdr_h3， 所述⑶r-h3包含氨基酸序列edygistysamdf(seq id no 25)；所述人源化抗体轻链可变区包含(1) cdr-ll，所述 cdr-ll 包含氨基酸序列 kasqdvgtava (seq id no 43)，⑵ cdr-l2， 所述cdr-l2包含氨基酸序列wastrht (seq id no 44)，和cdr-l3，所述cdr-l3 (3)包含氨基酸序列 qqyssyplt (seq id no :45)。本发明的实施方式还包括特异性结合于light多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含选自以下的氨基酸序列(1)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX ‘ ^ewx ‘ 2gx5ix6px7x8x
s3x10x11x12x13nxwx15fx16x17x' 3x' 4tx ‘ 5tx' 6dx' 7sx' 8stx' 9ymelsx' 10lrsx' ndtavyyc-ARffX18X19WGQGTLVTVSS (SEQ IDNO :1)；(2)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX' ^ewx' 2gx5ix6px7x8x9x10
x11x12x13nx14x15fx16x17x' 3x' 4tx' 5tx' 6dx' 7sx' 8stx' 9ymelsx'10lrsx'ndtavyycarx20)(2 !X22X23X24X25X26X27X28Wgqgtlvtvss (seq id no a)；禾口(3)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX'^ewx'2gx5ix6px7x8x9x10
x11x12x13nx14x15fx16x17x' 3x' 4tx' 5tx' 6dx' 7sx' 8stx' 9ymelsx' 10lrsx' ndtavyycarx20)(2 !X22X23X24X25X26X27X28AMDFffGQGTLVTVSS (SEQ ID NO :3)，其中 X1 是氨基酸 D、S、T 或 N，X2 是氨基酸y、l或w，x3是氨基酸i或m，&是氨基酸y、h、e或n，x5是氨基酸y、μ、v或w，x6是氨基酸d、n、h或f，x7是氨基酸y、g或s，x8是氨基酸n、s、t或d，x9是氨基酸g、s或d， X10是氨基酸G、D、E或I，X11是氨基酸T或S，X12是氨基酸K或R，且)(13是氨基酸Y或L，X14 是氨基酸q或e，x15是氨基酸k或n，x16是氨基酸k、i或r，且x17是氨基酸g、a或d，其中 x18是氨基酸d或n，x19是氨基酸r或y，x20是氨基酸ε、t或g，x21是氨基酸d、s或n，x22 是氨基酸y或g，x23是氨基酸g、s或v，x24是氨基酸i、s或w，)(25是氨基酸s、w或a，x26是氨基酸t、f或m，x27是氨基酸y、p或d，x28是氨基酸s或y，且其中x'工是氨基酸r或g， x' 2是氨基酸m或i，x' 3是氨基酸k或r，x' 4是氨基酸v或a，x' 5是氨基酸m、l或 i, x' 6是氨基酸v或r，x' 7是氨基酸t或k，x' 8是氨基酸a、i或t，x' 9是氨基酸v 或a，x' 1(1是氨基酸r或s，且x'工工是氨基酸d或ε。本发明的一些实施方式包括特异性结合于light多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含选自以下的氨基酸序列qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyyihwvrqapgqrlewmgwifpgsditkynekfkgrvt itrdtsastaymelsslrsedtavyycaredygistysamdfwgqgtlvtvss(seq id no 4),qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftdyyiywvrqapgqglewigyidpynggtkynqkfkdrvt mtrdtsistaymelsrlrsddtavyycartsgsswfpywgqgtlvtvss(seq id no 5),
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIYWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNGGTKYNQKFKDKAT LTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTSGSSWFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 6),QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYLIEWVRQAPGQGLEWMGVINPGTGETKYNENFRARVT MTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWDRWGQGTLVTVSS(SEQ ID N0:7)，和QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPSDSESRLNQKFIDRVT MTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYVWAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :8)。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列(1)X' 12X' 13X' I4X' I5TQX ‘ I6PX' 17^' 18^' 19^' 2(|X, 2lX, 22^' 23^' 24^' 25^' 26^' 2
7父 28-^ 29-^ 30^29-^305^31-^32-^33-^34-^35-^36-^37-^38^ 31-^ 3234-^ 35-^37-^ 38^ IX
'I39X43X44X45X46X47X48X49GX' 40PX' 41RFSGSGSGTX' 42FTLX' 43IX' 44X' 45X' 46X' 47X' 48EDX' 49X' ggX' S1YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTXr 52VEIKR (SEQ ID NO :9)；(2)V 12X, I3X1 14X1 15TQX1 I6PX1 I7X1 18^1 I9X1 20X1 21X1 22X1 23^1 24X1 25X1 26^1 2 7乂 28-^- 29乂 3〇G 乂 29乂30§乂31乂32 乂 33^^4X35 乂 36乂37乂38 乂 39 乂40 乂 41 乂 42监 31^ 3234^ 35^ 36^ 37^
1 3gLIX ‘39^43^44^45^46^47^48^49^ ‘ 4〇PX ‘ 41 RFSGSGSGTX ‘ ^FTLX ‘ 43工乂 ‘ 44^ ‘ 45乂 ‘ 46^ ‘ 47^ ‘ 48^0
V 49X'5。X' S1YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTXr &VEIKR(SEQ IDNO :10)；禾口(3)V 12X, 13X1 14X1 I5TQX1 I6PX1 I7X1 18^1 I9X1 20X1 21X1 22X1 23^1 24X1 25X1 26乂, 2
7乂 28-^- 29乂 30^29^305^31 ^32^33^34^35^36^37^38^39^40 31^- 3234^- 35^- 36^- 3
7X ‘ ‘ 39^3^44^5 ^- ‘ ‘ 41 RFSGSGSGTX ‘ ‘ 43 ^, 44^ ‘ 45^ ‘ 46^ ‘ 47^ ‘ 4δΕ Χ ‘ 49^ ‘50x' 51YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQ IDNO :11)，其中 &9是氨基酸K 或R， X30是氨基酸A或S，X31是氨基酸Q或K，X32是氨基酸D、S或N，X33是氨基酸V、I或L，X34 是氨基酸G、S、V或L，X35是氨基酸T、N或H，X36是氨基酸A、N或S，X37是氨基酸V、L、N或 G，X38是氨基酸A、H、G或Y，X39是氨基酸N或T，X40是氨基酸T或Y，X41是氨基酸Y或M， X42是氨基酸F或H，X43是氨基酸W、Y、K或I，X44是氨基酸A、T或V，)(45是氨基酸S或Y，)(46 是氨基酸T、Q或N，X47是氨基酸R、S或L，X48是氨基酸H、I、F或E，)(49是氨基酸T或S，)(5(1 是氨基酸Q或S，X51是氨基酸Q或H，X52是氨基酸S或Y，X53是氨基酸S、N、T或R，X54是氨基酸S、R、H或E，X55是氨基酸Y、W、V或L，X56是氨基酸L或Y，且其中X' 12是氨基酸D或 E, X' 13是氨基酸I或V，X' 14是氨基酸V或Q，X' 15是氨基酸M或L，X' ^5是氨基酸S 或T，X' 17是氨基酸3、0^或1^3' ^是氨基酸3、11或？3' 19是氨基酸L或Q，X'加是氨基酸A、S或P，X' 21是氨基酸V或Α，Χ' μ是氨基酸S或T，X' ^是氨基酸？、1^或乂， X' ^是氨基酸G或K，X' 是氨基酸E、Q或D，X' ^5是氨基酸R、K或P，X' 27是氨基酸 A或V，X' w是氨基酸T或S，X'㈨是氨基酸I或L，X' 3(1是氨基酸S、T或N，X' ^是氨基酸F或Y，X' %是氨基酸Q或L，X' ^是氨基酸K或R，X' 34是氨基酸G或D，X' 35是氨基酸Q或K，X' %是氨基酸A、S或P，X' 37是氨基酸K、R或Q，X' 38是氨基酸L或R， X' 39是氨基酸￥或1(，1' 4(1是氨基酸V或I，X' 41是氨基酸S、A或D，X' 42是氨基酸D或E，X' 43是氨基酸K或T，X' 44是氨基酸3或队乂' 45是氨基酸S或R，X' 46是氨基酸 V或L，X' 47是氨基酸Q或E，X' 48是氨基酸？、々或33' 49是氨基酸？、々或￥3' 5Q是氨基酸A或G，X' 51是氨基酸T或V，且X' ^是氨基酸R或K。本发明的一些实施方式也包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGT EFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :12)，EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISNNLHWYQQKPDQSPKLLIKYTYQSISGVPSRFSGSGSGT DFTLTlNSLEAEDAATYYCQQSNRffPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 13)，EIVMTQSPATLSVSPGEKATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLIYYTYQSISGIPARFSGSGSGT EFTLTISSLQSEDFAVYYCQQSNRWPLTFGQGTRVEIKR(SEQ ID NO :14)，DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO 15),DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 16)，禾口DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYTYMHWYQQKPGQPPKLLIYITSNLESGVPDRFSGS GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :17)。本发明的一些实施方式包括特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含(a)重链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQRLEWMGWIFPGSDITKYNEKFKGRVT ITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYGISTYSAMDFWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 4)和(b)轻链
可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGT EFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :12)。在本发明的一些实施方式中，特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽包含上述人源化重链或人源化轻链中的任一个或其组合。另外，在一些实施方式中，本发明的抗原结合多肽包含来自重链的上述⑶R区(即⑶R-H1、⑶R-H2或⑶R-H3)中的一个或一个以上， 或来自轻链的上述⑶R区(即⑶R-L1、⑶R-L2或⑶R-L3)中的一个或一个以上或其组合。在本发明的其他实施方式中，特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽是抗体分子或其片段，所述片段例如Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段或scFv分子。在一些实施方式中，所述抗原结合多肽是抗体分子。抗体分子可包含嵌合抗体，包括例如，融合于鼠重链可变区和鼠轻链可变区的人重链恒定区和人轻链恒定区。在其他实施方式中，所述抗原结合多肽是scFv分子，所述scFv分子包含具有选自 NH2-L-VH-X-VK-C00H和NH2-L-VK-X-VH-C00H的化学式的多肽，其中L·是前导序列，VH是人源化抗体重链可变区，X是连接多肽，VK是人源化抗体轻链可变区。在另外的实施方式中， 将scFv分子融合或连接于人类血清白蛋白多肽(HSA)以产生scFv HSA融合分子。可将 scFv分子融合或连接于HSA的N-末端或C-末端。在其他的实施方式中，所述抗原结合多肽是Fab片段。可将本发明的Fab片段融合或连接于HSA上。可将Fab片段的重链或轻链融合或连接于HSA的N-末端或C-末端。本发明的一些实施方式包括结合或融合于治疗剂或诊断剂的抗原结合多肽。例如，治疗剂可选自细胞毒性剂、放射性标记物、免疫调节剂、激素、酶、寡核苷酸、光敏治疗剂及其组合。诊断剂的例子可包括放射性标记物、光敏诊断剂、超声增强剂或非放射性标记物。本发明的一些实施方式还包括含有本发明抗原结合多肽的组合物和制备这种多肽的方法。此外，本发明的实施方式包括治疗或诊断炎症性、免疫性或恶性疾病或病症的方法，所述方法包括将本发明的抗原结合多肽和组合物给药于有此需要的患者。在其他实施方式中，本发明包括使用本发明的组合物治疗疾病的方法，所述疾病包括但不限于自身免疫性疾病(例如，狼疮)、炎症性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎(例如，类风湿关节炎)、多发性硬化症、移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、中枢神经系统损伤、诸如克罗恩病、银屑病、白血病或淋巴瘤(例，慢性淋巴细胞白血病(CLL))之类的Thl介导的肠道疾病、动脉粥样硬化、肺癌与结肠癌以及诸如肝炎之类的病毒感染。在一些实施方式中，本发明包括分离的编码前述抗原结合多肽的多核苷酸。可将多核苷酸可操作地连接至启动子以在合适的宿主细胞中表达所编码的多肽。另外，本发明的实施方式包括生产本发明的抗原结合多肽的方法，所述方法包括a)培养用多核苷酸转化的细胞以表达所编码的多肽，所述多核苷酸编码本发明的抗原结合多肽；b)回收由此表达的多肽。
图1表示从外周血淋巴细胞(PBL)中分离Thl和Thl7细胞，所述外周血淋巴细胞 (PBL)由聚蔗糖密度梯度离心法从血液分离。去除单核细胞后，用2yg/mL PHA加IL-12和抗-IL-4抗体对Thl细胞进行培养。Thl7细胞在37°C下被结合于板的抗-⑶3抗体加可溶性抗-⑶观抗体或IL-12加IL-18刺激2天。收集细胞培养的上清液，并由ELISA检测上清液中IFN-Y和IL-17的产生。图2表示LIGHT如何诱导Thl7细胞产生IL-17。37°C下，在不存在LIGHT或存在各种浓度的LIGHT的情况下，用结合于板的抗-CD3抗体刺激Thl7细胞2天。收集细胞培养上清液，并用ELISA检测上清液中IL-17的产生。图3说明鼠抗-LIGHT单克隆抗体(10D11)如何抑制LIGHT与其受体结合。用蛋白 A捕获法将LIGHT受体HVEM (TR2)、诱骗受体3 (TR6)和LT β R的Fc融合蛋白包被在96孔板上。在不存在LIGHT抗体或存在各种浓度的LIGHT抗体的情况下，使用链霉亲和素-HRP 测定LIGHT-生物素与受体的结合。图4说明鼠抗-LIGHT单克隆抗体(10D11)如何抑制LIGHT诱导内皮细胞产生 IL-8。将HUVEC细胞接种于96孔板中。在不存在LIGHT抗体或存在LIGHT抗体(10D11) 和非中和对照(19H9)的情况下，用LIGHT处理汇合的HUVEC细胞5小时。用ELISA测定来自HUVEC的IL-8分泌。图5A至5C说明各种抗-LIGHT鼠单克隆抗体如何抑制LIGHT诱导的HT-四细胞凋亡。LIGHT/TL5诱导结肠癌细胞系HT-29的细胞死亡。用HT-四细胞活性检测(如实施例2所述)测定LIGHT抗体的中和活性。37°C下用IFN- γ预处理HT-四细胞6小时。然后在不存在抗-LIGHT或存在各种浓度的抗-LIGHT和对照抗体或LT β R-Fc的情况下用LIGHT 培养细胞3天。细胞活性用细胞滴度Glo试剂(!Iomega)测定。图5A显示鼠抗-LIGHT单克隆抗体(IODll)抑制LIGHT诱导的HT-四细胞凋亡的能力。图5B和图5C显示鼠源抗体 5E10、13C7、14A10、14G8、15G4、7G5、18F1、2B12、16F12、18B1 和 10D11AB 抑制人(B)和猕猴 (C) LIGHT诱导的HT-四细胞凋亡的能力。图6A表示小鼠抗-LIGHT IODll的VH结构域与最接近的人胚系VH1-02的比对。该比对用作制备人源化IODl IVH的模板，所述人源化IODl IVH在图6A确定为Hum 10D11VH#1。图6B表示小鼠抗-LIGHT 10D11的VH结构域与确定为CAI54212的表达抗体VH结构域的比对，CAI54212部分来自图6A的VH1-02胚系。该序列比对用作制备人源化IODl IVH 的模板，所述人源化IODl IVH在图6B确定为HumlODl 1VH#2。图6C表示小鼠抗-LIGHT 10D11的VK结构域与最接近的人类胚系基因似6的比对。该序列比对用作制备人源化10D11VK的模板，所述人源化10D11VK在图6C确定为 10D11VK#1。图7表示2种不同的人源化LIGHT抗体抑制LIGHT诱导的HT-四细胞凋亡。37°C 下用IFN- γ预处理HT-四细胞6小时。然后在不存在小鼠和人源化LIGHT抗体或存在各种浓度的小鼠和人源化LIGHT抗体或对照抗体的情况下，用LIGHT培养细胞3天。用细胞滴度Glo试剂(ftOmega)测定细胞活性。图8表示完全人源化LIGHT抗体抑制LIGHT诱导的HT-四细胞凋亡。37°C下用 IFN- γ预处理HT-四细胞6小时。然后在不存在小鼠和人源化LIGHT抗体或存在各种浓度的小鼠和人源化LIGHT抗体或对照抗体的情况下，用LIGHT培养细胞3天。用细胞滴度 Glo试剂(ftOmega)测定细胞活性。图9A和图9B表示，与对照抗体16H02相比，人源化抗体抑制人LIGHT (A)和猕猴 LIGHT(B)诱导的Η ^9细胞凋亡。37°C下用IFN-γ预处理HT-四细胞6小时。然后在不存在小鼠和人源化LIGHT抗体或存在各种浓度的小鼠和人源化LIGHT抗体或对照抗体的情况下，用LIGHT培养细胞3天。用细胞滴度Glo试剂(!Iomega)测定细胞活性。图IOA和图IOB表示LIGHT抗体和活化的T细胞的结合。Thl、Th2和Thl7细胞由外周血淋巴细胞(PBL)产生，所述PBL通过聚蔗糖密度梯度离心法从血液中分离。Thl 和Thl7细胞如前述(图1)产生。通过2 μ g/mL PHA加IL-4和抗-IFN- α抗体培养PBL 3 天产生Th2细胞。3天后，细胞用5ng/mL IL-12维持。用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯 (PMA)和离子霉素激活细胞持续M小时以诱导LIGHT表达。通过流式细胞仪使用与PE结合的山羊抗-小鼠耦合抗体测定LIGHT抗体与活化T细胞的结合。图IOA表示小鼠LIGHT抗体结合于活化的 1ι17细胞。常温下将LIGHT抗体与 1ι17 细胞一起孵育40分钟。小鼠IgGl用作阴性对照。图IOB表示，与对照组相比，人源化5Ε10抗体与 ι 、Thl7和Th2活化的T细胞的结合。用PMA/离子霉素活化极化的T细胞持续M小时。常温下将细胞与生物素标记的 LIGHT抗体或对照抗体一起孵育40分钟。用PBS洗2次后，通过流式细胞仪用结合于PE的链霉亲和素确定抗体与表达在活化T细胞上的LIGHT的结合。图中虚线表示人源化LIGHT 抗体的结合。实体填充表示对照抗体的结合。图IlA和图IlB显示候选的鼠抗-LIGHT抗体中的重链可变结构域㈧和轻链可变结构域(B) (5E10、13C7、14G8和18B1)的序列比对。图中的方框表示每个序列的CDR结构域。图IlC和图IlD表示鼠5E10重链可变VH(C)和轻链可变VK (D)与三个最匹配的人胚系重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VK)序列的序列比对。
具体实施例方式术语的定义注意，单数形式(“a”或“an”)是指一个(一种)或一个以上(一种以上)；例如， “单数形式(“an”)抗原结合多肽”理解为代表一种或一种以上抗原结合多肽。因此，单数形式(“a”或“an”)、“一个(一种)或一个以上(一种以上)”和“至少一个(一种)，，在本发明中可互相交换使用。如本发明所使用的术语“多肽”意为包含单个“多肽”和多个“多肽”，并指由酰胺键 (也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”指两个或两个以上氨基酸的任何单链或多链，且不指明产物的具体长度。因此，用于指两个或两个以上氨基酸的单链或多链的肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或任何其他术语都包含在“多肽” 的定义内，且可用术语“多肽”替代任何上述肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或任何其他术语或与任何上述肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或任何其他术语互换使用。术语“多肽”还意指多肽表达后修饰的产物，包括而不限于被已知的保护基团糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、衍生化，以及蛋白水解切割或被非天然生成的氨基酸修饰。多肽可来自天然的生物来源或由重组技术产生，但未必由特定的核酸序列翻译而来。它可以任何方式生成，包括通过化学合成而生成。“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物指不在其自然环境中的多肽。不需要特殊水平的纯化。例如，分离的多肽可从天然或自然的环境中分离出去。就本发明的目的而言， 认为宿主细胞中表达的重组产生的多肽和蛋白是分离的，正如已用任何适当的技术分离、 分馏、部分纯化或完全纯化的天然多肽或重组多肽。术语“多核苷酸”意为包括单个核苷酸和多个核苷酸，并指分离的核苷酸分子或结构，例如，信使RNA(mRNA)或质粒DNA (pDNA)。多核苷酸可含有常规的磷酸二酯键或非常规键(例如，诸如在肽核酸(PNA)中发现的酰胺键之类的酰胺键)。术语“核酸”指出现在多核苷酸中的任何一个或一个以上的核酸片段，例如，DNA或RNA片段。“分离的”核酸或多核苷酸意为从自然环境中分离的核酸分子(DNA或RNA)。例如，就本发明的目的而言，认为包含在载体内的编码本发明抗体的重组多核苷酸是分离的。分离的多核苷酸的另外例子包括， 保持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或溶液中的(部分或完全)纯化的多核苷酸。分离的RNA分子包括本发明多核苷酸的体内或体外RNA转录体。根据本发明的分离的多核苷酸或核酸进一步包括合成产生的这种分子。另外，多核苷酸或核酸可为诸如启动子、核糖体结合位点或转录终止子之类的调控元件，或可包括诸如启动子、核糖体结合位点或转录终止子之类的调控元件。如本发明所使用的“编码区”是由翻译成氨基酸的密码子构成的核酸的一部分。虽然“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)不翻译成氨基酸，但也可认为“终止密码子”是部分编码区，而任何侧翼序列(例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等等)不是部分编码区。本发明的两个或两个以上编码区可出现在单个多核苷酸结构中，例如，在单个载体上，或在分离的多核苷酸结构中(例如，在独立的(不同的)载体上)。此外，任何载体可包含单个编码区或包含两个或两个以上的编码区，例如，单个载体可分别编码免疫球蛋白重链可变区和免疫球蛋白轻链可变区。另外，本发明的载体、多核苷酸或核酸可编码异源编码区，所述异源编码区融合或不融合于编码本发明的抗原结合多肽或其变体或衍生物的核酸。异源编码区包括但不限于特定元件或模体，例如分泌信号肽或异源功能结构域。在一些实施方式中，所述多核苷酸或核酸是DNA。就DNA而言，包含编码多肽的核酸的多核苷酸通常可包含启动子和/或其他转录或翻译控制元件，所述控制元件可操作地与一个或一个以上的编码区结合。可操作地结合使基因产物(如多肽)的编码区与一个或一个以上的调控序列以该方式结合，以使基因产物的表达在调控序列的影响或控制之下。 如果启动子功能的诱导导致编码预期基因产物的mRNA转录，并且两个DNA片段之间的连接性质没有干扰指导基因产物表达的表达调控序列的能力或者没有干扰待转录的DNA模板的能力，那么两个DNA片段(例如多肽编码区和与之相关的启动子)是“可操作地结合” 的。因此，如果启动子能够使所述核酸转录，那么启动子区将与编码多肽的核酸可操作地结合。启动子可为仅在特定细胞中指导基本的DNA转录的细胞特异启动子。除启动子外，其他转录控制元件(例如增强子、操纵基因、阻遏子和转录终止信号)可与多核苷酸可操作地结合，从而指导细胞特异性转录。本发明公开了合适的启动子和其他转录控制区。本领域技术人员已知许多转录控制区。这些转录控制区包括但不限于在脊椎动物细胞中起作用的转录控制区，例如但不限于，来自巨细胞病毒(与内含子-A结合的立即早期启动子)、猿猴病毒40 (早期启动子)和逆转录病毒(如劳斯肉瘤病毒)的启动子和增强子片段。其他转录控制区包括来自脊椎动物基因(例如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素和兔球蛋白)的转录控制区，以及能够控制真核细胞中基因表达的其他序列。另外的合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子可诱导的启动子(例如， 可由干扰素或白介素诱导的启动子)。相似地，本领域普通技术人员已知许多翻译控制元件。这些翻译控制元件包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始密码子和终止密码子以及来自小核糖核酸病毒的元件 (尤其是内部核糖体进入位点，或IRES，也称作CITE序列)。在其他实施方式中，本发明的多核苷酸是RNA，例如，信使RNA(mRNA)的形式。本发明的多核苷酸和核酸编码区可与编码分泌多肽或信号多肽的其他编码区结合，所述分泌多肽或信号多肽指导本发明的多核苷酸编码的多肽分泌。根据信号假说，哺乳细胞分泌的蛋白质具有信号肽或分泌前导序列，一旦已经开始使生长的蛋白链输出穿过粗面内质网，就从成熟蛋白中切除所述信号肽或分泌前导序列。本领域普通技术人员意识到， 脊椎动物细胞分泌的多肽一般具有融合于该多肽N-末端的信号肽，从完整的或“全长”的多肽中切除所述信号肽从而产生该多肽分泌的或“成熟的”形式。在一些实施方式中，使用天然的信号肽(例如，免疫球蛋白重链或轻链信号肽)，或所述天然的信号肽序列的功能性衍生物，所述功能性衍生物保留了指导与其可操作地结合的多肽分泌的能力。可选地，可使用异源哺乳动物信号肽或其功能性衍生物。例如，野生型前导序列可由人类组织型纤溶酶原激活物(TPA)或小鼠葡萄糖苷酸酶的前导序列代替。如本发明所描述的“抗体”或“抗体分子”，指全长的(即，自然生成或由正常免疫
20球蛋白基因片段重组过程形成)免疫球蛋白分子(例如，IgG抗体)。本发明包括结合LIGHT的一些抗原结合多肽，所述多肽包括抗体、抗体或抗原结合片段、其变体或衍生物。如上所述，除非特指全尺寸的抗体，术语“抗原结合多肽”包括全尺寸的抗体以及“抗原结合片段”或这些抗体的变体、类似物或衍生物，例如，天然产生的抗体或免疫球蛋白分子或工程抗体分子或以类似的方式将抗原结合于抗体分子的片段-Fab 片段、scFv分子等。抗体片段(包括单链抗体)可只包含可变区或包含与下列全部或部分结合的可变区铰链区、CHU CH2和CH3结构域。本发明还包括抗原结合片段，所述抗原结合片段也包含可变区与铰链区、CHI、CH2和CH3结构域的任意组合。如本发明所使用的术语“抗体片段”或“抗原结合片段”是抗体的一部分，例如 F(ab' )2、F(ab)2、Fab'、Fab、Fv、scFv等等。不考虑结构，抗体片段与完整抗体所识别的同种抗原结合。术语“抗体片段”包括适体、镜像适体(spiegelmer)和双价抗体。术语“抗体片段”还包括通过结合于特定抗原以形成复合物的像抗体一样作用的任何合成蛋白或基因工程改造蛋白。例如，抗体片段包括由可变区构成的分离的片段，例如由重链和轻链的可变区构成的“Fv”片段、轻链和重链可变区由肽连接物连接的重组单链多肽分子(“scFv 蛋白”)、scFv融合于HSA的N末端或C末端进行表达的scFv HSA融合多肽、Fab’ HSA融合多肽和由模拟高变区的氨基酸残基构成的最小识别单元，在所述Fab’ HSA融合多肽中， VH-CHl或VK-CK通过融合于HSA来产生，然后分别和与其同源的VK-CK轻链或VH-CHl重链一起折叠以形成Fab’。术语“抗原结合多肽”和“免疫球蛋白，，在本发明中可互换使用。抗原结合多肽或免疫球蛋白包含重链的至少可变结构域，并通常包含重链和轻链的至少可变结构域。已相对熟知脊椎动物系统中基本的免疫球蛋白结构。参见，例如，Harlow等，Antibodies =A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 2nd ed. 1988)。如以下将详细讨论的，术语“抗原结合多肽”包含各种类型的可从生物化学上区别的多肽。本领域技术人员将认为，重链分类为Y、μ、α、δ或ε，它们之中包含一些亚类 (例如YlM Y 4)。所述重链的性质决定抗体的“类别”，所述类别分别是IgG、IgM、IgA、 IgG或IgE0免疫球蛋白亚类(同种型)(例如，IgG1, IgG2, IgG3、IgG4, IgG5等)已被表征并已知其赋予功能性特化作用。根据本发明，本领域技术人员可容易地辨别这些类别中的每一种的修饰类型和同种型的修饰类型，因此所述修饰类型在本发明的范围内。所有免疫球蛋白类别都明显在本发明范围之内，以下讨论主要涉及免疫球蛋白分子的IgG类。关于 IgG，标准的免疫球蛋白分子包含两个相同的分子量约23，000道尔顿的轻链多肽和两个相同的分子量约53，000至70，000道尔顿的重链多肽。典型地，所述四条链由二硫键以“Y” 结构连接，其中轻链从“Y”的开口处开始将重链括在一起并穿过可变区延伸。轻链分为κ或λ类。每类重链均可与κ或λ轻链结合。一般而言，轻链和重链互相共价结合，两条重链的“尾”部以共价二硫键互相结合；或者当免疫球蛋白由杂交瘤、 B细胞或基因改造宿主细胞生成时，所述两条重链的“尾”部以非共价键互相结合。重链中氨基酸序列从在Y结构的叉末端的N-末端开始，至每条链底部的C-末端结束。轻链和重链均分为结构同源的区域和功能同源的区域。术语“恒定”和“可变”是功能上使用的。就这点而言，认识到轻链(VK)和重链(VH)部分的可变结构域决定抗原的识别和特异性。相反，轻链(CK)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域提供重要的生物特性，例如分泌、经胎盘的移动、Fc受体结合、补体结合等等。按照惯例，恒定区结构域离抗体的抗原结合位点或氨基末端越远，恒定区结构域的编号越大。N-末端部分是可变区而C-末端部分是恒定区；CH3和CK结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。如上文所指出的，可变区使抗体选择性识别并特异性结合抗原上的表位。也就是说，抗体的VK结构域和VH结构域，或互补决定区(CDR)的子集组合以形成可变区，所述可变区以三维抗原结合位点为特征。这个四级抗体结构形成抗原结合位点，所述位点位于Y每条臂的末端。更具体地，抗原结合位点以每个VH和VK链上的三个⑶R(即⑶R-H1、 ⑶R-H2、⑶R-H3、⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3)为特征。在一些例子中(例如，来自骆驼的一些免疫球蛋白分子或基于骆驼免疫球蛋白设计的一些免疫球蛋白分子)，完整的免疫球蛋白分子可只包含重链，没有轻链。参见，例如，Hamers-Casterman等，Nature 363 446-448(1993)。在天然产生的抗体中，出现在每个抗原结合结构域中的六个“互补决定区”或 “CDR”是短的、非连续的氨基酸序列，所述氨基酸序列被特异性定位以使抗体在水性环境中呈现三维结构时形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中氨基酸的剩余部分(也称 “骨架”区)显示出较少的分子间可变性。骨架区主要采用折叠结构，而⑶R形成连结折叠结构的环，并在某些情况下形成部分折叠结构。因此，骨架区起形成支架的作用，所述支架用于通过链间、非共价相互作用以正确的方向定位CDR。定位的CDR形成的抗原结合结构域界定了互补于免疫反应抗原上的表位的表面。所述互补的表面提高了抗体与其关联表位的非共价结合。对于任何给定的重链或轻链可变区，本领域的普通技术人员可容易地辨别分别包含CDR和骨架区的氨基酸，因为它们已被精确定义(参见 "Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat, E.等，美国健康与人类月艮务部(U. S. Dept. of Health and Human Services)，1983 ；和 Chothia与 Lesk，J. MoI. Biol.， 196 :901-917 (1987)，上述文献通过引用全部并入本文)。如果本领域使用和/或接受的术语有两个或两个以上的定义，本发明使用的定义意在包含所有这些定义，除非明确指出相反意义。一个具体的例子是使用术语“互补决定区”(“CDR”)描述在重链和轻链多肽可变区内发现的非连续抗原结合位点。这个特殊的区域已在Kabat等在美国健康与人类服务部发表的文章“Sequences of Proteins of Immunological Interest” (1983)和 Chothia 等在 J. MoI. Biol. 196 :901-917 (1987)中发表的文章中描述，上述文献通过引用全部并入本文。当将Kabat和Chothia的⑶R定义相互比较时，根据Kabat和Chothia的⑶R定义包括氨基酸残基的重叠或氨基酸残基的子集。 然而，适用于抗体或其变体CDR的任一定义的应用意在本发明定义及使用的术语的范围之内。包括由以上引用的每一参考文献所定义的CDR的适当的氨基酸残基在下表I中列出以作比较。包含特定CDR的确切的残基数目随CDR的序列和大小而不同。已知抗体的可变区氨基酸序列，本领域的技术人员通常可确定哪些残基包含特定的⑶R。表 权利要求
1.一种特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽含有人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(1)⑶R-Hl，所述⑶R-Hl包含氨基酸序列X2X3X4(SEQIDNO :18)，其中，X1为氨基酸 D、S、T或N ；X2为氨基酸Y、L或W ；X3为氨基酸I或M ；且&为氨基酸Y、H、E或N ；(2)CDR-H2，所述 CDR-H2 包含氨基酸序列 XJAPXA^g^XnXuXJXMXuFXwXu (SEQ ID NO 19)，其中，X5为氨基酸Y、M、V或W ；X6为氨基酸D、N、H或F ；X7为氨基酸Y、G或S成为氨基酸N、S、T或D ；X9为氨基酸G、S或D ；X10为氨基酸G、D、E或I ；X11为氨基酸T或S ；X12 为氨基酸K或R ；且X13为氨基酸Y或L ；X14为氨基酸Q或E ；X15为氨基酸K或N ；X16为氨基酸K、I或R ；且X17为氨基酸G、A或D ；以及(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含选自以下的氨基酸序列 ⑴WX18X19(SEQ ID NO 20)；(ii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28(SEQ ID NO 21)；和(iii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO 22)；其中，X18为氨基酸D或N ；X19为氨基酸R或Y ；X20为氨基酸Ε、T或G ；X21为氨基酸D、 S或N ；X22为氨基酸Y或G ；X23为氨基酸G、S或V ；X24为氨基酸I、S或W ；X25为氨基酸S、W 或A ；X26为氨基酸T、F或M ；X27为氨基酸Y、P或D ；且)(28为氨基酸S或Y。
2.一种特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含(1)⑶R-L1，所述⑶R-Ll包含选自以下的氨基酸序列 (土)父29父305父31父32父33父34父35父36父37父38(3已0 ID NO 38)； (iDXMXsoSXMX^XmXMX^X^XwX^X^X^XMX^CSEQ ID NO :39)；禾口 (iii) X29X30SX31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42H (SEQ IDNO 40)；其中，)(29为氨基酸K或R ；X30为氨基酸A或S ；X31为氨基酸Q或K ；X32为氨基酸D、S或 N ；X33为氨基酸V、I或L ；X34为氨基酸G、S、V或L ；X35为氨基酸T、N或H ；X36为氨基酸A、N 或S ；X37为氨基酸V、L、N或G ；X38为氨基酸A、H、G或Y ；X39为氨基酸N或T ；X40为氨基酸T 或Y ；X41为氨基酸Y或M ；X42为氨基酸F或H ；(2)CDR-L2，所述 CDR-L2 包含氨基酸序列 A3X44X45X46X47X48X49 (SEQ ID NO 41)；其中，)(43为氨基酸W、Y、K或I ；X44为氨基酸A、T或V ；X45为氨基酸S或Y ；X46为氨基酸T、Q或N ；X47为氨基酸R、S或L ；X48为氨基酸H、I、F或E ；且)(49为氨基酸T或S ；以及(3)CDR-L3，所述CDR-L3 包含氨基酸序列)(5。X51X52X53X54X55P)(56T(SEQ ID NO :42)； 其中，I为氨基酸Q或S ；X51为氨基酸Q或H ；X52为氨基酸S或Y ；X53为氨基酸S、N、T或R ；X54为氨基酸S、R、H或E ；X55为氨基酸Y、W、V或L ；且)(56为氨基酸L或Y。
3.一种特异性结合于LIGHT多肽的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含 (a)人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(1)⑶R-Hl，所述⑶R-Hl包含氨基酸序列X2X3X4(SEQIDNO :18)，其中，X1为氨基酸 D、S、T或N ；X2为氨基酸Y、L或W ；X3为氨基酸I或M ；且&为氨基酸Y、H、E或N ；(2)CDR-H2，所述 CDR-H2 包含氨基酸序列 XJAPXA^g^XnXuXJXMXuFXwXu (SEQ ID NO 19)，其中，X5为氨基酸Y、M、V或W ；X6为氨基酸D、N、H或F ；X7为氨基酸Y、G或S成为氨基酸N、S、T或D ；X9为氨基酸G、S或D ；X10为氨基酸G、D、E或I ；X11为氨基酸T或S ；X12为氨基酸K或R ；且X13为氨基酸Y或L ；X14为氨基酸Q或E ；X15为氨基酸K或N ；X16为氨基酸K、I或R ；且X17为氨基酸G、A或D ；以及(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含选自以下的氨基酸序列 ⑴WX18X19(SEQ ID NO 20)；(ii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28(SEQ ID NO 21)；和(iii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO 22)；其中，X18为氨基酸D或N ；X19为氨基酸R或Y ；X20为氨基酸Ε、T或G ；X21为氨基酸D、 S或N ；X22为氨基酸Y或G ；X23为氨基酸G、S或V ；X24为氨基酸I、S或W ；X25为氨基酸S、W 或A ；X26为氨基酸T、F或M ；X27为氨基酸Y、P或D ；且)(28为氨基酸S或Y ；以及 (b)人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含(1)⑶R-L1，所述⑶R-Ll包含选自以下的氨基酸序列 (土)父29父305父31父32父33父34父35父36父37父38(3已0 ID NO 38)； (iDXMXsoSXMX^XmXMX^X^XwX^X^X^XMX^CSEQ IDNO :39)；禾口 (iii) X29X30SX31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42H (SEQ IDNO 40)；其中，)(29为氨基酸K或R ；X30为氨基酸A或S ；X31为氨基酸Q或K ；X32为氨基酸D、S或 N ；X33为氨基酸V、I或L ；X34为氨基酸G、S、V或L ；X35为氨基酸T、N或H ；X36为氨基酸A、N 或S ；X37为氨基酸V、L、N或G ；X38为氨基酸A、H、G或Y ；X39为氨基酸N或T ；X40为氨基酸T 或Y ；X41为氨基酸Y或M ；X42为氨基酸F或H ；(2)CDR-L2，所述CDR-L2 包含氨基酸序列)(43)(44X45X46)(47X48X49 (SEQ ID NO :41)，其中，X43 为氨基酸W、Y、K或I ；X44为氨基酸A、T或V ；X45为氨基酸S或Y ；X46为氨基酸T、Q或N ；X47 为氨基酸R、S或L ；X48为氨基酸H、I、F或E ；且)(49为氨基酸T或S ；以及(3)CDR-L3，所述 CDR-L3 包含氨基酸序列 X5。)(51X52)(53X54)(55PX56T (SEQ ID NO :4 ，其中， X50为氨基酸Q或S ；X51为氨基酸Q或H ；X52为氨基酸S或Y ；X53为氨基酸S、N、T或R ；X54为氨基酸S、R、H或E ；X55为氨基酸Y、W、V或L ；且)(56为氨基酸L或Y。
4.如权利要求1所述的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体重链可变区，所述人源化抗体重链可变区包含(1)⑶R-H1，所述⑶R-Hl包含选自以下的氨基酸序列(1)SSYIH(SEQID NO 23)；(ii)DYYIY(SEQID NO 26)；(iii)TYLIE(SEQID NO 29)；(iv)TYWMN(SEQID NO :32)；禾口 (ν)NYLIE(SEQ ID NO :35)；(2)⑶R-H2，所述⑶R-H2包含选自以下的氨基酸序列(i)WIFPGSDITKYNEKFKG(SEQID NO 24)；(ii)YIDPYNGGTKYNQKFKD(SEQID NO :27)；(iii)VINPGTGETKYNENFRA(SEQID NO 30)；(iv)M1HPSDSESRLNQKFID(SEQID NO :33)；禾口 (ν) VINPGSGDTKYNENFKG (SEQ ID NO :36)；以及(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含选自以下的氨基酸序列(i)EDYGISTYSAMDF(SEQID NO :25)；(ii)TSGSSffFPY(SEQID NO 28)；(iii)WDR(SEQID NO :31)；(iv)GNYVffAMDY(SEQID NO :34)；禾口 (ν)WNY(SEQ ID NO :37)。
5.如权利要求2所述的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含(1)⑶R-L1，所述⑶R-Ll包含选自以下的氨基酸序列(1)KASQDVGTAVA(SEQID NO :43)；(ii)RASQSISNNLH(SEQID NO 46)；(iii)RSSQNLVHSNGNTYFH(SEQID NO 49)；(iv)RASKSVSTSGYTYMH(SEQID NO :52)；禾口 (ν)RSSQSLLHSNGNTYFH(SEQ ID NO :55)；(2)⑶R-L2，所述⑶R-L2包含选自以下的氨基酸序列(i)WASTRHT(SEQID NO 44)；(ii)YTYQSIS(SEQID NO 47)；(iii)KVSNRFS(SEQID NO 50)；禾口(iv)ITSNLES (SEQ ID NO :53)；以及(3)⑶R-L3，所述⑶R-L3包含选自以下的氨基酸序列(i)QQYSSYPLT(SEQID NO :45)；(ii)QQSNRffPLT(SEQID NO 48)；(iii)SQSTHVPYT(SEQID NO :51)；禾口(iv)QHSRELPYT(SEQID NO :54)。
6.如权利要求4所述的抗原结合多肽，其中(1)所述CDR-Hl包含氨基酸序列SYYIH(SEQID NO 23)；(2)所述CDR-H2 包含氨基酸序列 WIFPGSDITKYNEKFKG(SEQ IDNO :24)；且(3)所述CDR-H3 包含氨基酸序列 EDYGISTYSAMDF (SEQ ID NO 25)。
7.如权利要求5所述的抗原结合多肽，其中(1)所述CDR-Ll 包含氨基酸序列 KASQDVGTAVA(SEQ ID NO :43)；(2)所述CDR-L2包含氨基酸序列WASTRHT(SEQ ID NO :44)；且(3)所述CDR-L3 包含氨基酸序列 QQYSSYPLT (SEQ ID NO 45)。
8.如权利要求6所述的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽进一步包含人源化抗体轻链可变区，所述人源化抗体轻链可变区包含(1)CDR-Ll，所述 CDR-Ll 包含氨基酸序列 KASQDVGTAVA (SEQ IDNO 43)；(2)CDR-L2，所述CDR-L2 包含氨基酸序列 WASTRHT(SEQ ID NO :44)；以及(3)CDR-L3，所述CDR-L3 包含氨基酸序列 QQYSSYPLT (SEQ ID NO :45)。
9.如权利要求1所述的抗原结合多肽，其中，所述人源化抗体重链可变区包含选自以下的氨基酸序列(ι) Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX ‘ ^ewx ‘ 2gx5ix6px7x8x9x!OX11X12X13NX14X15FX16X17X' 3X' 4TX ‘ 5TX' 6DX' 7SX' 8STX' 9YMELSX' 10LRSX' nDTAVYYCAR-wx18x19wgqgtlvtvss (seq ID NO :1)；(2)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX' ^ewx' ^x5ix6px7x8x9x10x1 !X12X13NX14X15FX16X17X' 3X' 4TX' 5TX' 6DX' 7SX' 8STX' 9YMELSX' 10LRSX' nDTAVYYCARX20X21X 22X23X24X25X26X27X28WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :2)；以及(3)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX' ^ewx' ^x5ix6px7x8x9x10x1 !X12X13NX14X15FX16X17X' 3X' 4TX' 5TX' 6DX' 7SX' 8STX' 9YMEL SX' 10LRSX' nDTAVYYCARX20X21 X22X23X24X25X26X27X28AMDFffGQGTLVTVS S (SEQ ID NO :3)，其中，X1为氨基酸D、S、T或N ；X2为氨基酸Y、L或W ；X3为氨基酸I或M式为氨基酸 Y、H、E或N ；X5为氨基酸Y、Μ、V或W ；X6为氨基酸D、N、H或F ；X7为氨基酸Y、G或S 为氨基酸N、S、T或D ；X9为氨基酸G、S或D ；X10为氨基酸G、D、E或I J1I为氨基酸T或S ；X12 为氨基酸K或R ；且X13为氨基酸Y或L ；X14为氨基酸Q或E ；X15为氨基酸K或N ；X16为氨基酸K、I或R ；且X17为氨基酸G、A或D ；其中X18为氨基酸D或N ；X19为氨基酸R或Y ；X20为氨基酸E、T或G ；X21为氨基酸D、S或N ；X22为氨基酸Y或G ；X23为氨基酸G、S或V ；X24为氨基酸I、S或W ；X25为氨基酸S、W或A ；X26为氨基酸T、F或M ；X27为氨基酸Y、P或D ；X28为氨基酸S或Y ；并且其中，X'工为氨基酸R或G;X' 2为氨基酸M或I;X' 3为氨基酸K或R;X' 4为氨基酸V或A;X' 5为氨基酸M、L或I ;X' 6为氨基酸V或R;X' 7为氨基酸T或K;X' 8为氨基酸Α、Ι或Τ;Χ' 9为氨基酸V或Α;Χ' 1(1为氨基酸R或S;且X' 氨基酸D或Ε。
10.如权利要求9所述的抗原结合多肽，其中，所述人源化抗体重链可变区包含选自以下的氨基酸序列(a)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQRLEWMGWIFPGSDITKYNEKFKGRVTITRD TSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYGISTYSAMDFffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :4)；(b)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIYWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNGGTKYNQKFKDRVTMTRD TSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARTSGSSWFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :5)；(c)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIYWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNGGTKYNQKFKDKATLTVD KSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTSGSSWFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :6)；(d)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYLIEWVRQAPGQGLEWMGVINPGTGETKYNENFRARVTMTRD TSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWDRWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :7)；禾口(e)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPSDSESRLNQKFIDRVTMTRD TSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYVffAMDYffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :8)。
11.如权利要求2所述的抗原结合多肽，其中，所述人源化抗体轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列(1) )(, 12Xf 13X, I4X ‘ 15TQX ‘ I6PX ‘ 17乂 ‘ 18乂 ‘ 19乂 ‘ 2〇X ‘ 21^ ‘ 22^ ‘ 23^ ‘ 24^ ‘ 25^ ‘ 26^ ‘ 27S9X43X44X45X46X47X48X49GX' 4ciPX' 41RFSGSGSGTX' 42FTLX' 43IX' 44X' 45X' 46X' 47X' 4δΕ0Χ' 49X' 5oX' 51Y YCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQID NO :9)，(2) X , I2X , I3X ‘ 14X ‘ I5TQX ‘ I6P乂 ‘ 17乂 ‘ 18乂 ‘ 19乂 ‘ 20^ ‘ 21^ ‘' γ' 22入‘ V' 23入‘ ψ 24入26乂'27V28-^- 29-^- 30^29^305^31^32^33^34^35^36^37^38^39^40 ! ^ 31^ 3234^ ‘37VggLIX1 39^3^4^5^46^- ‘ ‘ 41RFSGSGSGTX1 1 43IX144x,45^ ‘V' V' 46λ 47λ 驳^EDXr49^I5oX' 51YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQ ID NO:10)；和(3) X , I2X , I3X ' 14X ' I5TQX ' I6P乂 ' 17^ ' 18^ ' I9X ' 2〇X ' 2lX 1' Y' 22入‘ V' 23入' γ/ 24入27V28^ 29^ 30^29^305^31^32^33^34^35^36^37^38^39^40 ! ^^- 31^-32QX,‘ γ' 34入‘35乂‘ V' 36入37X'3gLIX1 39&3乂44&5^46^7^48^49 ' 4QPX ' 41 RFSGSGSGTX' ^FTLX1 43 IXr44x,45^ ‘47乂，4SEDX/49^'5oX' 51YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQ ID NO :11),其中，)(29为氨基酸κ或R ；X30为氨基酸A或S ；X31为氨基酸Q或K ；X32为氨基酸D、S或 N ；X33为氨基酸V、I或L ；X34为氨基酸G、S、V或L ；X35为氨基酸T、N或H ；X36为氨基酸A、N 或S ；X37为氨基酸V、L、N或G ；X38为氨基酸A、H、G或Y ；X39为氨基酸N或T ；X40为氨基酸 T或Y ；X41为氨基酸Y或M ；X42为氨基酸F或H ；X43为氨基酸W、Y、K或I A44为氨基酸A、T 或V ；X45为氨基酸S或Y ；X46为氨基酸T、Q或N ；X47为氨基酸R、S或L ；X48为氨基酸H、I、 F或E ；X49为氨基酸T或S ；X50为氨基酸Q或S ；X51为氨基酸Q或H ；X52为氨基酸S或Y ；X53 为氨基酸S、N、T或R ；X54为氨基酸S、R、H或E ；X55为氨基酸Y、W、V或L ；X56为氨基酸L或 Y;并且其中，X' 12为氨基酸D或E;X' 13为氨基酸I或V;X' 14为氨基酸V或Q;X' 15为氨基酸M或L;X' ^；为氨基酸S或T;X' 17为氨基酸3、0、六或1^3' 18为氨基酸3、1~或？; X'⑴为氨基酸L或Q;X'㈤为氨基酸A、S或P;X' 21为氨基酸V或A;X' ^为氨基酸S 或T;X' ^为氨基酸P、L或V;X'对为氨基酸G或K;X'邪为氨基酸E、Q或D ^5为氨基酸R、K或Ρ;Χ' 27为氨基酸A或V;X'此为氨基酸T或S;X'四为氨基酸I或L;X' 3o 为氨基酸S、T或N;X' 31为氨基酸F或Y;X' %为氨基酸Q或L;X' 33为氨基酸K或R ； X' 34为氨基酸G或D;X' %为氨基酸Q或K;X' %为氨基酸A、S或P 37为氨基酸K、R 或Q;X' %为氨基酸L或R;X' 39为氨基酸Y或K;X' 4(1为氨基酸V或I ;Χ' 41为氨基酸 3、八或0 3' 42为氨基酸D或Ε;Χ' 43为氨基酸K或Τ;Χ' 44为氨基酸S或Ν;Χ' 45为氨基酸S或R;X' 46为氨基酸V或L;X' 47为氨基酸Q或E;X' 48为氨基酸P、A或S 49 为氨基酸F、A或V;X' 5(1为氨基酸A或G;X' 51为氨基酸T或V;且X' ^为氨基酸R或 K0
12.如权利要求11所述的抗原结合多肽，其中，所述人源化抗体轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列(a)DIQLTQSPSFLSASV⑶RVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTL TISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 12)；(b)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISNNLHWYQQKPDQSPKLLIKYTYQSISGVPSRFSGSGSGTDFTL TlNSLEAEDAATYYCQQSNRffPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO 13)；(C)EIVMTQSPATLSVSPGEKATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLIYYTYQSISGIPARFSGSGSGTEFTL TISSLQSEDFAVYYCQQSNRWPLTFGQGTRVEIKR(SEQ ID NO 14)；(d)DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSG TDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO 15)；(e)DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSG TDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :16)；禾口(f)DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYTYMHWYQQKPGQPPKLLIYITSNLESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :17).
13.一种特异性结合于LIGHT的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含权利要求9至 10中任一项所述的人源化重链和权利要求11至12中任一项所述的人源化轻链。
14.如权利要求1至13任一项所述的抗原结合多肽，其中，所述抗原结合多肽选自抗体分子、Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段和scFv分子。
15.如权利要求14所述的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽包含(a)含有以下氨基酸序列的重链可变区QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQRLEWMGWIFPGSDITKYNEKFKGRVTITRD TSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYGISTYSAMDFffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 4)；禾口(b)含有以下氨基酸序列的轻链可变区DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTL TISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 12)。
16.如权利要求15所述的抗原结合多肽，其中，所述抗体分子包含人重链恒定区和人轻链恒定区。
17.如权利要求15至16任一项所述的抗原结合多肽，其中，所述抗体分子为IgG分子。
18.如权利要求14所述的抗原结合多肽，其中(a)所述抗原结合多肽为scFv分子；或(b)所述抗原结合多肽为scFvHSA融合分子；或(c)所述抗原结合多肽为FabHSA融合分子。
19.如权利要求18所述的抗原结合多肽，其中(a)权利要求18(a)所述的scFv分子包含具有选自以下的化学式的多肽(i) nh2-l-vh-x-vk-cooh 和(ii)nh2-l-vk-x-vh-cooh ；其中，L 为前导序列；VH 为所述人源化抗体重链可变区；X为连接多肽；VK为人源化抗体轻链可变区；(b)权利要求18(b)所述的scFv HSA融合分子的scFv部分在HSA的N-末端表达，并且所述scFv HSA融合分子多肽具有选自以下的化学式(i) NH2-L-VH-X-VK-HSA-C00H和(ii) NH2-L-VK-X-VH-HSA-C00H，其中，L 为前导序列；VH 为所述人源化抗体重链可变区；X为连接多肽；HSA为人血清白蛋白；VK为所述人源化抗体轻链可变区；(c)权利要求18(b)所述的scFv HSA融合分子的scFv部分在HSA的C-末端表达，并且所述scFv HSA融合分子多肽具有选自以下的化学式(i)NH2-HSA-VH-X-VK-C00H 和(ii)NH2-HSA-VK-X-VH-C00H，其中，L 为前导序列；VH 为所述人源化抗体重链可变区；X为连接多肽；HSA为人血清白蛋白；VK为所述人源化抗体轻链可变区；(d)权利要求18(c)所述的抗原结合多肽，其中，所述FabHSA融合分子的重链部分在 HSA的N末端或C末端表达，并且所述Fab HSA融合分子多肽具有选自以下的化学式(i) NH2-VH-CH1-HSA-C00H 和(ii)NH2-HSA-VH-CHl-C00H，其中，VH 为所述人源化抗体重链可变区；CHl为所述恒定的重链结构域1 ；HSA为人血清白蛋白；或(e)权利要求18(c)所述的抗原结合多肽，其中，所述FabHSA融合分子的轻链部分在 HSA的N末端或C末端表达，并且所述Fab HSA融合分子多肽具有选自以下的化学式(i) NH2-VK-CK-HSA-C00H和(ii)NH2-HSA-VK-CK-C00H，其中，VK为所述人源化抗体轻链可变区； CK为所述轻链恒定结构域；HSA为人血清白蛋白。
20.如权利要求1至19任一项所述的抗原结合多肽，所述抗原结合多肽与治疗剂或诊断剂联合。
21.如权利要求20所述的抗原结合多肽，其中(a)所述治疗剂选自细胞毒性剂、放射性标记物、免疫调节剂、激素、酶、寡核苷酸、光敏治疗剂及其组合；或(b)所述诊断剂选自放射性标记物、光敏诊断剂、超声增强剂和非放射性标记物。
22.如权利要求1至21任一项所述的抗原结合多肽，其中(a)所述多肽为LIGHT的拮抗剂；或(b)所述多肽不是LIGHT的激动剂。
23.如权利要求1至22任一项所述的抗原结合多肽，其中，所述多肽与LIGHT结合的Kd 优选为约IO8M-1至约IOiqMA
24.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1至23任一项所述的抗原结合多肽和载体。
25.如权利要求M所述的药物组合物，所述组合物进一步包含额外的治疗剂或诊断剂。
26.一种治疗或诊断疾病或病症的方法，所述方法包括将权利要求M或25所述的药物组合物给药于有此需要的患者，其中，所述疾病或病症选自炎症性疾病或病症、免疫性疾病或病症、恶性疾病或病症、自身免疫疾病；炎症性肠病(IBD)；慢性阻塞性肺病(COPD)；关节炎；类风湿关节炎；多发性硬化症；移植排斥；移植物抗宿主病(GVHD)；中枢神经系统损伤；Thl介导的肠病；克罗恩病；银屑病；白血病；淋巴瘤；慢性淋巴细胞白血病；动脉粥样硬化；肺癌；结肠癌；和肝炎。
27.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1至23任一项所述的抗原结合多肽。
28.一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含启动子序列，所述启动子序列可操作地连接于权利要求27所述的多核苷酸。
29.一种分离的细胞，所述细胞用权利要求27或28所述的多核苷酸转化。
30. 一种制备由权利要求27或28所述的多核苷酸编码的抗原结合多肽的方法，所述方法包括a)培养由所述多核苷酸转化的细胞，从而表达编码的抗原结合多肽；以及b)回收由此表达的抗原结合多肽。
全文摘要
本发明涉及特异性结合LIGHT多肽的抗原结合多肽或其变体或衍生物。本发明还涉及制备所述抗体的方法以及尤其在免疫性疾病或病症、炎症性疾病或病症和恶性疾病或病症(例如，炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、类风湿关节炎和移植)的治疗或诊断中使用所述抗体的方法。
文档编号C07K16/28GK102428103SQ201080021618
公开日2012年4月25日 申请日期2010年3月22日 优先权日2009年3月24日
发明者克雷格·罗森, 布里奇特·A·库克西, 帕拉尼萨米·卡纳卡拉伊, 维克托·罗施克, 罗杰·史密斯 申请人:泰华生物制药美国公司