使用egfr家族受体的抑制剂来治疗激素难治性乳腺癌的制作方法
【专利摘要】本发明提供通过使肿瘤细胞与ErbB3抑制剂，优选地抗ErbB3抗体接触来遏制激素难治性乳腺肿瘤的生长的方法。本发明还提供通过向患者施用调蛋白与ErbB3或与ErbB2／ErbB3异源二聚体的结合的抑制剂来治疗患者的激素难治性乳腺癌的方法，所述抑制剂是抗ErbB3抗体或抗ErbB2抗体。所述治疗方法可进一步包括选择患有激素难治性乳腺癌的患者，然后向所述患者施用所述抑制剂。所述治疗方法还可包括向所述患者施用雌激素受体拮抗剂或芳香酶抑制剂，并且可进一步包括向所述患者施用不为ErbB3抑制剂、雌激素受体拮抗剂或芳香酶抑制剂的至少一种其它抗癌剂与ErbB3抑制剂的组合。
【专利说明】使用EGFR家族受体的抑制剂来治疗激素难治性乳腺癌
[0001]背景 [0002]在女性中，乳腺癌是最常见癌症之一并且是第五大最常见的癌症死因。由于乳腺癌的异质性，10年无进展存活率可根据阶段和类型而有很大的不同，在98%至10%之间。不同形式的乳腺癌可具有显著不同的生物学特性和临床行为。因此，患者乳腺癌的归类已经成为确定治疗方案的关键部分。举例来说，除了组织学类型和等级的归类以外，现在对于乳腺癌的常规评估还涉及激素受体(雌激素受体(ER)和孕酮受体(PR))的表达以及HER2 (ErbB2)的表达，因为当前有许多靶向激素受体或HER2的治疗方式可资利用。其它癌症例如子宫或卵巢癌可以类似的方式来表征。ER和PR均为核受体(即，其主要位于细胞核，而非细胞表面)，并且已经开发直接或间接地靶向ER和/或PR的小分子抑制剂。HER2或2型人表皮生长因子受体是通常位于细胞表面上的受体，并且已经开发靶向HER2的抗体作为治疗剂。HER2 是 EGFR 家族(还包括 HERl (EGFR)、HER3 (ErbB3)和 HER4 (ErbB4))中唯一的不能够单独结合活化配体的成员。因此，HER2只有在与另一个EGFR家族成员如HER3一起合并成异源二聚体受体复合物时才能充当受体。归类为表达雌激素受体的癌症(雌激素受体阳性，“ER+”)可用ER拮抗剂如他莫西芬(tamoxifen)来治疗。类似地，归类为表达高水平HER2的癌症可用抗HER2抗体如曲妥珠单抗(trastuzumab)，或用HER2活性受体酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼(Iapatinib)(其还抑制EGFR酪氨酸激酶)或AG879来治疗。
[0003]他莫西芬几十年来一直用作抗御ER+乳腺癌的疗法，并且现在代表ER+乳腺癌的一线疗法的标准组成部分。他莫西芬是选择性雌激素受体调节剂(例如，雷洛昔芬(raloxifene)、托瑞米芬(toremifene)和氟维司群(fulvestrant))的类别的成员，其中他莫西芬、托瑞米芬和氟维司群是雌激素受体拮抗剂，并且雷洛昔芬在骨骼中具有促效活性，并且在乳腺癌和子宫癌中具有拮抗活性。这些拮抗药物特异性地阻断对于雌激素受体的激素活化并且是用于治疗尚未变得激素难治的ER+乳腺癌的有效治疗剂。举例来说，他莫西芬在初始治疗后在超过一半的ER+乳腺癌患者中引起好转。长期使用激素受体阻断受到以下现象的限制:在长期治疗之后，出现激素难治性肿瘤特性。大多数经过治疗的肿瘤最终变得激素难治是因为其变得具有他莫西芬抗性。
[0004]因此，用阻断雌激素合成的激素拮抗剂和其它激素调节药物如芳香酶抑制剂(例如，依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(Ietrozole)、阿那曲唑(anastrozole)、伏氯唑(vorozole)、福美司坦(formestane)和法倔唑(fadrozole))来进行激素阻断可延迟ER+肿瘤的发展，但是由于经常出现对于此类激素调节药物的抗性，因此产生了对于有效抗御激素难治性ER+癌症的抗癌治疗剂的长期需求。本公开满足此需求并且提供其它益处。
[0005]概述
[0006]本文提供治疗激素难治性乳腺癌(例如，肿瘤)，包括雌激素受体阳性和雌激素受体阴性激素难治性乳腺癌的方法，以及可用于此类方法的药物组合物。所述方法和组合物至少部分地基于以下发现:ErbB3抑制可遏制激素难治性乳腺癌细胞的生长。具体地说，施用抗ErbB3抗体被认为可遏制激素难治性乳腺癌细胞的生长。此外，现在发现调蛋白(heregulin)对ErbB2 / ErbB3异源二聚体的活化可进而活化(通过引起雌激素受体的磷酸化)雌激素受体，这种现象被认为在ER+肿瘤中出现对于激素调节药物的抗性中起作用。因此，本文还提供通过抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合来抑制雌激素受体活化的方法和组合物。此类方法可结合如本文描述的一种或多种雌激素受体调节药物的共同施用来有利地实施。
[0007]因此，提供ErbB3抑制剂用于治疗激素难治性乳腺癌的用途(例如，其用于制造药物的用途)。在另一方面，公开遏制激素难治性乳腺癌肿瘤(任选地为雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌肿瘤)生长的方法，所述方法包括使肿瘤与有效量的ErbB3抑制剂接触。在另一方面，提供遏制患者的激素难治性乳腺癌肿瘤(任选地为雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌肿瘤)生长的方法，所述方法包括向患者施用有效量的ErbB3抑制剂。在另一方面，提供治疗激素难治性乳腺癌肿瘤(任选地为雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌肿瘤)的患者的方法，所述方法包括向患者施用有效量的ErbB3抑制剂。在另一方面，提供治疗患者的乳腺癌肿瘤的方法，所述方法包括:选择患有激素难治性乳腺癌肿瘤(任选地为雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌肿瘤)的患者；以及向患者施用有效量的ErbB3抑制剂。
[0008]在示例性实施方案中，ErbB3抑制剂是抗ErbB3抗体。示例性抗ErbB3抗体为Ab#6，其包含含有分别在SEQ ID NO:1和2中阐明的氨基酸序列的V1^P/或Vl区。另一个示例性抗ErbB3抗体为如下抗体，其任选地以氨基末端至羧基末端的顺序包含分别如在SEQ ID勵:3-5中展示的￥11⑶Rl、2和3序列，并且任选地以氨基末端至羧基末端的顺序包含分别如在SEQ ID NO:6-8中展示的' CDR1、2和3序列。在另一个实施方案中，抗ErbB3抗体具有重链和轻链，其包含分别在SEQ ID N042和43中阐明的氨基酸序列。在其它实施方案中，抗ErbB3抗体为Ab#3(其包含分别如在SEQ ID NO:9和10中展示的'序列)、Ab#14(其包含分别如在SEQ ID NO: 17和18中展示的Vh和Vl序列)、Ab#17 (其包含分别如在SEQ ID NO:25和26中展示的Vh和\序列)或Ab#19 (其包含分别如在SEQ IDNO:33和34中展示的Vh和'序列)。在另一个实施方案中，施用抗ErbB3抗体可抑制肿瘤的生长或侵袭性或转移。
[0009]在另一方面，本文提 供的治疗方法进一步包括向患者共同施用不为ErbB3抑制剂的至少一种其它抗癌剂。在一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括至少一种化疗药物，如选自由以下组成的组的药物:钼基化疗药物、紫杉烷类、酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶抑制剂、抗EGFR抗体、抗ErbB2抗体、双特异性抗ErbB2 / ErbB3抗体和其组合。
[0010]在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括EGFR抑制剂，如抗EGFR抗体或EGFR信号转导的小分子抑制剂。优选抗EGFR抗体包括西妥昔单抗(cetuximab)。抗EGFR抗体的其它实例包括MM_151、Sym004、马妥珠单抗(matuzumab)、帕木单抗(panitumumab)、尼莫珠单抗(nimotuzumab)和mAb806。EGFR信号转导的示例性小分子抑制剂包括吉非替尼(gefitinib)。EGFR信号转导的适用小分子抑制剂的其它实例包括但不限于阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、卡奈替尼(canertinib)、厄洛替尼(erlotinib)HCL、培利替尼(pelitinib)、PK1-166、PD-158780 和 AG1478。
[0011]在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂。示例性VEGF抑制剂包括抗VEGF抗体,如贝伐单抗(bevacizumab)抗体。在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种。雌激素受体拮抗剂的实例包括雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(afimoxifene ;4_羟基他莫西芬)、阿佐昔芬(arzoxifene)、拉索昔芬(Iasofoxone)、托瑞米芬和氟维司群。芳香酶抑制剂的实例包括但不限于依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。在一个实施方案中，芳香酶抑制剂为来曲唑。在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶抑制剂，如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂，或有丝分裂原活化激酶激酶(MEK)抑制剂。mTOR抑制剂的实例包括但不限于坦罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、西罗莫司(sirolimus),或地憐莫司(ridaforolimus)。ΡΙ3Κ^φ制剂的实例包括但不限于CALlOl和ΡΧ-866，它们当前都在临床试验中进行测试。MEK抑制剂的实例包括但不限于 XL518、C1-1040、PD035901、司美替尼(selumetinib)和 GSK1120212。在一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括mTOR抑制剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种。在一个实施方案中，至少一种抗癌剂包括依维莫司和依西美坦。在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括IGFlR抑制剂。IGFlR抑制剂的实例包括达罗珠单抗(dalotuzumab)、AMG-479、R1507、菲替木单抗(f igitumumab)、IMC-Al2, XL228、BMS-754807 和 MM-141。
[0012]在一个实施方案中，激素难治性乳腺癌为ER+。
[0013]在另一个方面，本文提供抑制肿瘤细胞中的由调蛋白介导的雌激素受体活化的方法，所述方法包括I)选择已经用抗雌激素疗法治疗恶性疾病并且已经变得对于此疗法具有抗性的人患者，所述患者患有恶性肿瘤，在患者已经变得具有抗性之后对从患者获取的肿瘤活检进行的分析表明，所述肿瘤为雌激素受体阳性的并且过度表达HER2，并且所述活化包括雌激素受体的磷酸化，以及2)向以这种方式选择的患者施用可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗体，其中所述抗体以可在患者血液中产生一定浓度抗体的剂量来施用，所述浓度是足以在体外使MCF7细胞中的调蛋白诱导的雌激素受体磷酸化抑制至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%或至少70%的浓度，其中所述剂量下的所述施用可有效治`疗肿瘤。
[0014]所述细胞可在肿瘤中，通过活检，所述肿瘤为ER+和HER2++或HER2+++，或每微克蛋白质中含有至少0.02pg HRG(例如，通过ELISA)，或为HER2FISH阳性。抑制通过向胞外液中引入可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗体来完成。在一个实施方案中,肿瘤为恶性肿瘤。
[0015]所要治疗的肿瘤的类型的非限制实例包括乳腺、卵巢、肺或皮肤(例如，黑素瘤)
的癌症。
[0016]肿瘤可在患者体内并且将抗体引入血流中，方法是向患者施用一定量的抗体，从而在血流中有效产生足够浓度的抗体。施用可通过静脉内注射或输注。在一个实施方案中，抗体可为抗HER3 (抗ErbB3)抗体，例如具有包含分别在SEQ ID NO:1和2中阐明的氨基酸序列的％和/或'区的抗体。在另一个实施方案中，抗体可为包含含有分别在SEQ ID NO:42和43中阐明的氨基酸序列的Vh和/或 '区的抗ErbB3抗体。抗体可为抗HER2 (抗ErbB2)抗体，例如C6.5、C6.5双功能抗体,或培妥珠单抗(pertuzumab)。抗体还可为抗ErbB2 /抗ErbB3双特异性抗体。作为scFv人血清白蛋白(HSA)偶联物的许多双特异性抗ErbB2 /抗ErbB3抗体描述于美国专利公布20110059076和PCT公布号W02009 / 126920中，所述公布各自公开B2B3-1和其它双特异性抗ErbB2 /抗ErbB3抗体，其为scFv HSA偶联物并且适用于本文提供的方法和组合物中，包括ALM、A5-HSA-ML3.9、A5-HSA-B1D2、B12-HSA_B1D2、A5-HSA-F5B6H2、H3-HSA-F5B6H2、F4-HSA-F5B6H2 和 H3-HSA-B1D2。在一个实施方案中，双特异性抗体包括SEQ ID NO:440其它合适双特异性抗ErbB2 /抗ErbB3抗体在美国专利号7，332，580和7，332，585中公开并且要求保护。优选地，施用抗体可抑制肿瘤的生长或侵袭性或转移。
[0017]因此，提供ErbB3抑制剂(例如，抗ErbB3抗体)或抗ErbB2抗体或双特异性抗ErbB2 / ErbB3抗体(例如，其用于制造药物的用途)，其用于抑制调蛋白介导的雌激素受体活化，并且另外或替代地用于治疗激素难治性乳腺癌(或另一种激素难治性癌症如卵巢癌、子宫癌或宫颈癌)或芳香酶抗性雌激素受体阳性癌症如乳腺癌、卵巢癌、子宫癌或宫颈癌得到公开。在另一个实施方案中，提供ErbB3抑制剂，例如，抗ErbB3抗体或抗ErbB2抗体或双特异性抗ErbB2 / ErbB3抗体(例如，其用于制造药物的用途)，其用于在与芳香酶抑制剂的组合疗法中治疗雌激素受体阳性癌症(例如，乳腺癌、卵巢癌、子宫癌或宫颈癌)。此类组合在用此类组合治疗的癌症中阻止或预防激素抗性的出现。在其它实施方案中，所述方法进一步包括共同施用雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种。在其它方面，本文提供用于抑制调蛋白介导的雌激素受体活化的组合物，所述抑制在选择已经用抗雌激素疗法治疗恶性疾病并且已经变得对于此疗法具有抗性的人患者之后进行，所述患者患有恶性肿瘤，在患者已经变得具有抗性之后对从患者获取的肿瘤活检进行的分析表明，所述肿瘤为雌激素受体阳性的并且过度表达ErbB2，并且所述活化包括雌激素受体的磷酸化，所述组合物包含:抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB3抗体；结合ErbB2并且抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB2抗体(例如，培妥珠单抗)；或包含抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB2 /抗ErbB3双特异性抗体(例如，包含SEQ ID N0:44的抗体(在美国专利公布号20110059076中也称为SEQ ID N0:16)。在一些实施方案中，癌症为激素难治性雌激素受体阳性癌症。
[0018]在一个实施方案中，这些组合物各自任选地包含雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂中的一种或多种。雌激素受体拮抗剂的实例包括雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(4-羟基他莫西芬)、阿佐昔芬、拉索昔芬、托瑞米芬和氟维司群。芳香酶抑制剂的实例包括依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。在示例性实施方案中，芳香酶抑制剂为来曲唑。
[0019]在另一个实施方案中，这些组合物各自任选地包含mTOR抑制剂和芳香酶抑制剂中的一种或多种。mTOR抑制剂的实例包括坦罗莫司、依维莫司、西罗莫司或地磷莫司。在示例性实施方案中，mTOR抑制剂为依维莫司。芳香酶抑制剂的实例包括依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。在示例性实施方案中，芳香酶抑制剂为依西美坦。
[0020]在另一个实施方案中，这些组合`物各自任选地包含MEK抑制剂、PI3K抑制剂和IGF-1R抑制剂中的一种或多种。
[0021]附图简述
[0022]图1包括溶胞物的凝胶的蛋白质印迹的图像，所述溶胞物是来自未处理的对照细胞(“C”)、用(“丽121”)预处理或未用MM-121预处理的细胞，所述细胞以调蛋白β 1( “HRG”)、乙胞素(betacellulin) ( “BTC”)或雌激素(“E2”)刺激。上图展示来自用对于磷酸化ErbB3(pErbB3)具有特异性的抗体探测的印迹的结果，中图展示用对于磷酸化(serl67和serllS)雌激素受体a (pER)具有特异性的抗体探测的印迹，并且下图展示作为加载对照的用对于甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)具有特异性的抗体探测的印迹。
[0023]图2为来自图1中的对照(“Con.”)、调蛋白(“HRG”)、乙胞素(“BTC”)、调蛋白加MM-121( “HRG+MM121”)和乙胞素加MM_121( “BTC+MM121”)泳道各自中的相关(pER)条带的密度测量结果的图。条带密度相对于GAPDH密度进行标准化，并且对于如X轴所指示的对照和经过刺激的细胞(在加以和未加以MM-121预处理的两种情况下)来展示标准化的密度(Y轴)。HRG与BTC泳道之 间的箭头指示HRG泳道中的pER条带。
[0024]图3为显示在来曲唑抗性小鼠异种移植物模型中随着时间的推移(以周为单位，X轴)的肿瘤体积(y轴)的图。展示用以下物质处理的小鼠的数据:作为对照的PBS(正方形)、单独MM-121 (“MM”，三角形)、单独来曲唑(“Let”，倒三角形)，和MM-121与来曲唑的组合(MM+Let，菱形)。在14周标记处，来曲唑小鼠被划分成三组:单独来曲唑(“Let”，倒三角形)、单独MM_121(“Let —MM”，圆圈)和MM-121与来曲唑的组合(“Let — MM+Let”，星形)。
[0025]详细说明
[0026]本文提供治疗激素难治性乳腺癌和其它ER+癌症，尤其过度表达HER2的那些癌症的方法。还提供用于此治疗的药物组合物，和其用于此治疗的用途。如实施例中进一步描述，认为ErbB3抑制剂，例如抗ErbB3抗体，或可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的其它抗体能够遏制激素难治性乳腺癌细胞在体内的生长、侵袭性和转移中的一种或多种过程。因此，提供遏制激素难治性乳腺癌(例如，雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌)的生长侵袭性或转移的方法和组合物以及所述方法和组合物用于进行上述遏制的用途，以及例如以ErbB3抑制剂来治疗患者的此类乳腺癌的方法和组合物。
[0027]ER+癌症例示用于包括抗雌激素剂的治疗方案的候选者。此类癌症可包括但不限于某些乳腺、卵巢、子宫、子宫内膜、肺、骨骼、脑、膀胱、肝脏和泌尿生殖系统癌症。
[0028]癌症可为ErbB2基因扩增性癌症和/或表达(HER2+)或过度表达(HER2++，HER2+++)ErbB2的癌症。ErbB2，也称为HER2或Neu，是经由其细胞内酪氨酸激酶活性来产生细胞内信号(例如，在配体活化时)的细胞表面跨膜受体蛋白。在过量状态下，此类信号可例如通过触发细胞分裂来促进肿瘤发生。ErbB2基因在许多类型的人恶性疾病中扩增和/或过度表达，所述恶性疾病包括但不限于乳腺、卵巢、子宫内膜、胰脏、结直肠、前列腺、唾液腺、皮肤、肾脏和肺。取决于ErbB2过度表达的水平，过度表达ErbB2的癌症被标示为HER2+++或HER2++，其中HER2+++指示最高水平的HER2表达。HER2+++和HER2++状态通
常通过免疫测定如免疫组织化学(IHC)，例如，Herceptest?来确定。根据美国病理学家学会(College of American Pathologists ；CAP)和美国临床肿瘤学会(American Societyof Clinical Oncology ；ASC0)提供的准则，标示为HER2阴性的肿瘤是IHC测试展示无染色或在〈30%的肿瘤细胞中具有膜染色的肿瘤；如果IHC测试导致在>30%的肿瘤细胞中有淡淡的膜染色，那么肿瘤就标示为“HER2”+，其中仅仅一部分膜被染色；如果IHC检测导致在>30%的肿瘤细胞中有微弱或中度(完全)膜染色，那么肿瘤就标示为“HER2++”;并且如果IHC测试导致在>30%的肿瘤细胞中有均一、强烈的染色，那么肿瘤就标示为“HER2+++”。ErbB2基因扩增可通过例如FISH(荧光原位杂交法)来确定，其中HER2扩增型癌细胞是超过两个HER2基因拷贝为HER2扩增型的那些癌细胞，并且包含HER2扩增型癌细胞的细胞和/或肿瘤被称为“FISH阳性”。
[0029]定义:
[0030]如本文所使用，术语“激素难治性乳腺癌”是指对于抗激素疗法的作用具有抗性的乳腺癌。激素难治性乳腺癌是从一开始就对内分泌疗法具有抗性或在治疗时获得抗性的雌激素受体阳性乳腺癌。约25-50%的激素受体阳性乳腺癌从一开始就对内分泌疗法具有抗性，并且基本上所有转移性乳腺癌发展出获得性抗性。
[0031]如本文所使用，术语“雌激素受体阳性”(ER+)是指肿瘤细胞关于雌激素受体(ER)的得分为阳性(即，使用常规组织病理学方法)的肿瘤(例如，癌瘤)，通常为乳腺肿瘤。根据CAP和AS⑶提供的建议，如果至少1%的所测试肿瘤细胞(例如，通过免疫组织化学所测试)的得分为ER阳性，那么肿瘤为ER+。
[0032]如在本文中可互换使用的术语“ErbB3”和“HER3”是指人ErbB3蛋白质，如美国专利号5，480, 968中所描述。
[0033]如在本文中可互换使用的术语“ErbB2”、“HER2”和“HER2受体”是指人neu致癌基因的蛋白质产物，所述致癌基因也被称为ErbB2致癌基因或HER2致癌基因。
[0034]如本文所使用，术语“ErbB3抑制剂”意图包括抑制、向下调节、遏制或下调ErbB3活性的治疗剂。此术语意图包括化合物如小分子抑制剂，和生物剂如抗体、干扰RNA (shRNA,siRNA)、可溶性受体等。示例性ErbB3抑制剂为抗ErbB3抗体。
[0035]如本文所使用的“抗体”是由一个或多个多肽组成的蛋白质，所述多肽包含大致上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码的结合结构域，其中所述蛋白质免疫特异性地结合抗原。公认的免疫球蛋白基因包括K、λ、α、Υ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数免疫球蛋白可变区基因。轻链分类为K或λ。重链分类为Y、μ、α、δ或ε ,其进而分别定义免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。典型免疫球蛋白结构单元包括四聚体，其主要由两对相同的多肽链构成，每一对具有一个“轻”链(约25kD)和一个“重”链(约50-70kD)。和“VH”分别指这些轻链和重链的可变区。
[0036]抗体包括完整免疫球蛋白以及其抗原结合片段，所述片段可通过用各种肽酶消化来产生，或以化学方法从头合成或使用重组DNA表达技术合成。此类片段包括例如F (ab) 2二聚体和Fab单体。有用的抗体包括单链抗体(以单一多肽链形式存在的抗体)，例如，单链Fv抗体(scFv),其中Vh和\链接合在一起(直接或经由肽连接子)以形成连续多肽。
[0037]“免疫特异性(immunospecific) ”或“免疫特异性地(immunospecifically) ”涉及经由大致上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码的结构域来结合相关蛋白质的一个或多个表位的抗体，但是其大致上不识别和结合含有抗原分子的混合群体的样品中的其它分子。典型地，抗体以不大于50nM的Kd值免疫特异性地结合同源抗原，如通过表面等离子体共振测定或细胞结合测定所测量。此类测定的使用在本领域中是熟知的，并且描述于以下实施例3中。
[0038]“抗ErbB3抗体”是免疫特异性地结合ErbB3胞外结构域的抗体，并且“抗ErbB2抗体”是免疫特异性地结合ErbB2胞外结构域的抗体。抗体可为分离的抗体。与ErbB3或ErB2的此结合展现不大于50nM的Kd值，如通过表面等离子体共振测定或细胞结合测定所测量。示例性抗ErbB3抗体抑制EGF样配体介导的ErbB3磷酸化，例如抗ErbB2抗体抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合。EGF样配体包括EGF、TGF α、乙胞素、肝素结合表皮生长因子、biregulin、epigen、外调蛋白(epiregulin)和双调蛋白(amphiregulin),其通常结合ErbBl并且诱导ErbBl与ErbB3的异源二聚化。
[0039] 如本文所使用的术语“双特异性抗体”是指包含两个抗原结合位点的蛋白质，第一结合位点展现与第一抗原或表位的免疫特异性结合并且第二结合位点展现与不同于第一抗原或表位的第二抗原或表位的免疫特异性结合。抗ErbB3 /抗ErbB2双特异性抗体是包含两个结合位点的抗体，一个结合位点免疫特异性地结合ErbB3胞外结构域并且另一个结合位点免疫特异性地结合ErbB2胞外结构域。
[0040]如本文所使用，术语“EGFR抑制剂”或“EGFR信号转导的抑制剂”意图包括抑制、向下调节、遏制或下调EGFR信号转导活性的治疗剂。此术语意图包括化合物如小分子抑制剂(例如小分子酪氨酸激酶抑制剂)，和生物剂如抗体、干扰RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受体等。
[0041]如本文所使用，术语“VEGF抑制剂”意图包括抑制、向下调节、遏制或下调VEGF信号转导活性的治疗剂。此术语意图包括化合物如小分子抑制剂(例如小分子酪氨酸激酶抑制剂)，和生物剂如抗体、干扰RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受体等。
[0042]如本文所使用，术语“mTOR抑制剂”意图包括抑制、向下调节、遏制或下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的治疗剂。此术语意图包括化合物如小分子抑制剂(例如小分子丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)，和生物剂如抗体、干扰RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受体等。
[0043]如本文所使用，术语“MEK抑制剂”意图包括抑制、向下调节、遏制或下调有丝分裂原活化蛋白质激酶激酶(MEK)的治疗剂。此术语意图包括化合物如小分子抑制剂(例如小分子丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)，和生物剂如抗体、干扰RNA (shRNA，siRNA)、可溶性受体
坐寸ο
[0044]如本文所使用，术语“PI3K抑制剂”意图包括抑制、向下调节、遏制或下调磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的治疗剂。此术语意图包括化合物如小分子抑制剂(例如小分子丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)，和生物剂如抗体、干扰RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受体等。
[0045]如在本文中可互换使用的术语“遏制”和“抑制”是指生物活性(例如，肿瘤细胞生长)的任何统计上显著的降低，包括活性的完全阻断。举例来说，“抑制”可指生物活性降低约 10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%^； 100%。
[0046]术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人或其它哺乳动物。
[0047]如本文所使用的术语“治疗”是指本文描述的治疗性或预防性措施。“治疗”方法采用向患者例如患有激素难治性乳腺癌肿瘤的患者施用ErbB3抑制剂如本文描述的那些ErbB3抑制剂，以便治愈、延迟疾病或病症或复发性疾病或病症、降低其严重程度，或改善其一个或多个症状，或延长患者的存活期超过在没有此治疗的情况下的预期存活期。
[0048]如本文所使用的术语“有效量”是指药剂的在施用至患者时足以实现激素难治性乳腺癌的治疗、预后或诊断的量，所述药剂如ErbB3抑制剂，例如抗ErbB3抗体。治疗有效量取决于所治疗的患者和疾病状况、患者的体重和年龄、疾病状况的严重程度、施用方式等而变化，其可容易地由本领域的普通技术人员来确定。施用剂量的范围可为例如约Ing至约 10，OOOmg、约 5ng 至约 9，500mg、约 IOng 至约 9，OOOmg、约 20ng 至约 8，500mg、约 30ng 至约 7, 500mg、约 40ng 至约 7, OOOmg、约 50ng 至约 6, 500mg、约 IOOng 至约 6, OOOmg、约 200ng至约 5, 500mg、约 300ng 至约 5, OOOmg、约 400ng 至约 4, 500mg、约 500ng 至约 4, OOOmg、约Iyg 至约 3, 500mg、约 5 μ g 至约 3, OOOmg、约 10 μ g 至约 2, 600mg、约 20 μ g 至约 2, 575mg、约 30 μ g 至约 2，550mg> 约 40 μ g 至约 2，500mg> 约 50 μ g 至约 2，475mg、约 100 μ g 至约
2,450mg、约 200 μ g 至约 2, 425mg、约 300 μ g 至约 2, 000、约 400 μ g 至约 I, 175mg、约 500 μ g至约 1，150mg、约 0.5mg 至约 1，125mg、约 Img 至约 1，IOOmg> 约 1.25mg 至约 1，075mg、约
1.5mg 至约 I, 050mg、约 2.0mg 至约 I, 025mg、约 2.5mg 至约 I, OOOmg、约 3.0mg 至约 975mg、约
3.5mg 至约 950mg、约 4.0mg 至约 925mg、约 4.5mg 至约 900mg、约 5mg 至约 875mg、约 IOmg 至约 850mg、约 20mg 至约 825mg、约 30mg 至约 800mg、约 40mg 至约 775mg、约 50mg 至约 750mg、约 IOOmg 至约 725mg、约 200mg 至约 700mg、约 300mg 至约 675mg、约 400mg 至约 650mg、约500mg或约525mg至约625mg的如本文所提供的抗体或其抗原结合部分。给药可为例如每周一次、每10天一次、每2周一次、每18天一次、每三周一次、每4周一次、每5周一次或每6周一次。剂量方案可进行调整以便提供最佳治疗反应。有效量也是使ErbB3抑制剂的任何毒性或有害影响(副作用)变得最小和/或被有利作用超过的量。对于MM-121，施用可在恰好或约6mg / kg或12mg / kg每周一次,或12mg / kg或24mg / kg两周一次下静脉内施用。对于MM-111，给药可在恰好或约每X天一次下静脉内给药，其中初始负荷剂量为恰好或约y mg / kg并且后续维持剂量为恰好或约z mg / kg,其中x、y和z为:7、25和20,或10,40和30，或14,60和44，或18,90和75，或21、120和105。其它优选给药方案于下文描述。
[0049]术语“抗癌剂”和“抗肿瘤剂”是指用于治疗恶性疾病，如癌性生长的药物。药物疗法可单独使用，或结合其它治疗如手术或辐射疗法来使用。
[0050]“治疗协同作用”是指如下现象，其中用治疗剂的组合来治疗患者，与以其最佳剂量使用的组合的每一种个别组`成部分所实现的结果相比，表现出治疗上更好的结果(T.H.Corbett 等，1982, Cancer Treatment Reports (癌症治疗报告)，66,1187)。在这种情况下，治疗上更好的结果是如下结果，其中患者a)展现更少的不良事件发生率，同时所收到的治疗效益等于或大于在组合的个别成分各自作为单一疗法以与组合中的剂量相同的剂量来施用时的治疗效益，或b)不展现剂量限制性毒性，同时所收到的治疗效益大于当每一种成分以与在组合中作为个别组分施用时的剂量相同的剂量施用时以组合的每一种个别成分来治疗的治疗效益。在异种移植物模型中，在以其最大耐受剂量使用的组合的施用所获得的肿瘤生长减少大于在单独施用成分时最佳成分的肿瘤生长的减少值时，所述组合表现出治疗协同作用，其中每一种成分以总体上不超过其个别最大耐受剂量的剂量存在。
[0051]因此，与使用抗ErbB3抗体的单一疗法或在没有抗体疗法时使用化疗剂的治疗相t匕，在组合中，此类组合的组分对于遏制胰脏肿瘤生长具有相加或超相加效应。“相加”是指结果在程度(例如，肿瘤有丝分裂指数或肿瘤生长减少程度或肿瘤收缩程度或无症状或症状减少期的频率和/或持续时间)上大于使用每一种个别组分的单一疗法所获得的最佳单独结果，而“超相加”用于指示结果在程度上超过此类单独结果的总和。在一个实施方案中，相加效应测量为减缓或终止胰脏肿瘤生长。相加效应还可通过以下指标来测量，例如胰脏肿瘤尺寸的降低、肿瘤有丝分裂指数的减少、转移性病灶的数量随着时间的减少、总反应率的增加，或中值或总体存活期的增加。[0052]治疗性治疗的有效性可借以量化的指标的一个非限制性实例是计算1glO细胞杀灭，其根据以下方程来确定:
[0053]1glO 细胞杀灭=T C (天)/ 3.32 X Td
[0054]其中T C代表细胞生长的延迟，其为治疗组⑴的肿瘤和对照组(C)的肿瘤达到预定值(例如lg，或IOmL)的以天为单位的平均时间，并且Td代表对照动物中的肿瘤体积加倍所需要的以天为单位的时间。当采用此指标时，如果1glO细胞杀灭大于或等于0.7，那么产品被认为具有活性，并且如果1glO细胞杀灭大于2.8，那么产品被认为非常具有活性。使用此指标，以其自己的最大耐受剂量使用的组合在1glO细胞杀灭大于单独施用的最佳成分的1glO细胞杀灭值时展现治疗协同作用，在所述组合中每一种成分以总体上小于或等于其最大耐受剂量的剂量存在。在示例性情况下，组合的1glO细胞杀灭超过组合的最佳成分的1glO细胞杀灭值至少0.1细胞杀灭对数、至少0.5细胞杀灭对数,或至少
1.0细胞杀灭对数。各种方面和实施方案在以下小节中进一步详细描述。
[0055]1.ErbB3 抑制剂
[0056]如本文进一步详细描述，本文提供的方法和组合物涉及使用一种或多种ErbB3抑制剂。
[0057]在一个实施方案中，ErbB3抑制剂为抗ErbB3抗体，例如单克隆抗体。适用抗ErbB3抗体(或从其中得到的VH / VL结构域)可使用本领域中熟知的方法来制得。或者，可使用业内公认的抗ErbB3抗体。举例来说，可使用U.S.7，846，440中描述的Ab#3、Ab#14、Ab#17、Ab#19。也可使用与这些抗体中的任何一个来竞争与ErbB3的结合的抗体。可使用的其它的业内公认的抗ErbB3抗体包括在US7, 285，649、US20200310557、US20100255010中公开的那些抗体，以及抗体IB4C3和2DlD12(U3Pharma Ag)，这两种抗体都描述于例如US20040197332中并且由杂交瘤细胞系DSM ACC2527或DSM ACC2517 (保藏于DSMZ)产生；被称为AMG888的抗ErbB3抗体(U3-1287_U3Pharma Ag和Amgen)，其描述于美国专利号7，705，130中；以及单克隆抗`体8B8( ATCC? HB-12070?)，其描述于US5，968，511中，以及被称为AV-203的抗ErbB3抗体(Aveo Pharmaceuticals),其描述于美国专利公布号20110256154中。其它适用抗ErbB3抗体在双特异性抗体的情况下公开于本领域中(参见例如 WO / 2009126920 中的 B2B3-1 或 B2B3-2 和描述于 US7, 846，440、US20090291085、US20100056761和US20100266584中的那些抗体。示例性抗ErbB3单克隆抗体包括MM-121，其为当前正进行II期临床试验的完全人抗ErbB3抗体。MM-121进一步描述于PCT公布号W02008 / 100624和美国专利号7，846，440中，并且包含分别如在SEQ ID NO:1和2中展示的Vh和八序列。MM-121在US7，846，440中被称为“Ab#6”。或者，抗ErbB3单克隆抗体是与MM-121竞争与ErbB3的结合的抗体。在另一个实施方案中，抗ErbB3抗体是包含MM-121的Vi^PVlCDR序列的抗体，所述序列分别展示于SEQ ID NO:3-5 (VH CDR1、2、3)和6_8 (Vl CDR1、
2、3)中。在另一个实施方案中，抗ErbB3抗体具有包含分别在SEQID N042和43中阐明的氨基酸序列的重链和轻链。抗ErbB3抗体的其它实例包括Ab#3、Ab#14、Ab#17和Ab#19，其还进一步描述于W02008 / 100624并且具有如分别在SEQ ID NO:9和10、17和18、25和26以及33和34中展示的Vh和'序列。在另一个实施方案中，抗ErbB3抗体是包含Ab#3的Vh和\⑶R序列(分别展示于SEQ ID NO:11-13和14-18中)的抗体或包含Ab#14的Vh和Vl CDR序列(分别展示于SEQ ID NO:19-21和22-24中)的抗体或包含Ab#17的Vh和\ CDR序列(分别展示于SEQ ID NO:27-29和30-32中)的抗体或包含Ab#19的Vh和Vl CDR序列(分别展示于SEQ ID NO:35-37和38-40中)的抗体。
[0058]或者，抗ErbB3抗体是结合包含SEQ ID NO:41的残基92-104的人ErbB3的表位并且特征在于抑制表达ErbB3的癌细胞的增殖的单克隆抗体或其抗原结合部分。癌细胞可为MALME-3M细胞、AdrR细胞或ACHN细胞并且增殖可相对于对照减少至少10%。在另一个实施方案中，此分离的单克隆抗体或其抗原结合部分结合包含SEQ ID NO:41的残基92-104和129的表位。
[0059]在另一个实施方案中，抗ErbB3抗体可包含两种或更多种抗ErbB3抗体的混合物或混配物，其中每一种抗体各自结合ErbB3上的不同表位。在一个实施方案中，混合物或混配物包含三种抗ErbB3抗体，其中每一种抗体各自结合ErbB3上的不同表位。
[0060]在另一个实施方案中，ErbB3抑制剂包含抑制ErbB3的表达或活性的核酸分子，如RNA分子。ErbB3的RNA拮抗剂已在本领域中描述(参见例如美国专利申请公布号20080318894)。此外，对于ErbB3具有特异性的干扰RNA，如特异性地抑制ErbB3的表达和/或活性的shRNA或siRNA已在本领域中描述。
[0061]在另一个实施方案中，ErbB3抑制剂包含可溶性形式的ErbB3，其抑制经由ErbB3途径的信号转导。此类可溶性ErbB3分子已在本领域中描述(参见例如分别授予Maihle等的美国专利号7, 390，632、美国专利号7，638，303和美国专利号7，638，302，和Zhou的美国专利号7,919,098)。
[0062]11.杭 ErbB2 杭体
[0063]本文提供的方法和组合物可涉及使用一种或多种抗ErbB2抗体，其可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的 结合。合适抗ErbB2抗体包括描述于美国专利号5，977，322中的C6.5(和其许多衍生物)，以及如描述于美国专利号6，054，297中的曲妥珠单抗，或如描述于美国专利号6，949，245中的培妥珠单抗。
[0064]II1.双特异性抗体
[0065]本文提供的方法和组合物可涉及使用一种或多种双特异性抗体，优选为可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的双特异性抗体。此类双特异性抗体包括如描述于美国专利7，332，580中的ALM，以及如描述于美国专利申请公布号20110059076和PCT公布号 W02009 / 126920 中的 A5-HSA-ML3.9、A5-HSA-B1D2、B12-HSA-B1D2、A5-HSA-F5B6H2、H3-HSA-F5B6H2、F4-HSA-F5B6H2和H3-HSA-B1D2，如其中所描述，每一种双特异性抗体各自具有变体形式，如包含mHSA的那些变体形式。在一个实施方案中，双特异性抗体包括SEQID NO:44o
[0066]IV.方法
[0067]在一方面，提供ErbB3抑制剂用于制造供治疗激素难治性乳腺癌的药物的用途，在某些实施方案中乳腺癌是雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌。
[0068]在另一方面，提供遏制激素难治性乳腺癌细胞(任选地为ER+激素难治性乳腺癌细胞)生长的方法，所述方法包括使细胞与有效量的ErbB3抑制剂接触。
[0069]在另一方面，提供遏制患者的激素难治性乳腺癌肿瘤(任选地为ER+激素难治性乳腺癌肿瘤)生长的方法，所述方法包括向患者施用有效量的ErbB3抑制剂。
[0070]在另一个方面，提供治疗患者的乳腺癌肿瘤(任选地为雌激素受体阳性激素难治性乳腺癌肿瘤)的方法，所述方法包括:
[0071]选择患有激素难治性乳腺癌肿瘤的患者；以及
[0072]向患者施用有效量的ErbB3抑制剂。
[0073]在另一方面，患有激素难治性乳腺癌肿瘤的患者是进一步使用申请中的国际申请PCT / US2009 / 054051中公开的选择方法选择出的患者。
[0074]将要用ErbB3抑制剂治疗的激素难治性乳腺癌可共表达ErbBl (EGFR)、ErbB3和调蛋白(HRG)。EGFR和HRG的表达可通过RT-PCR或使用抗EGFR抗体、抗ErbB3抗体或抗HRG抗体通过标准免疫测定技术如ELISA测定、对经过福尔马林固定、以石蜡包埋的组织(例如常规处理用于组织学评估的乳腺癌组织)进行免疫组织化学染色来识别。根据本文中的公开用于治疗的优选肿瘤的其它特性阐明于申请中的美国专利公布号20110027291中，所述公布要求PCT申请号PCT / US2009 / 054051的优先权。
[0075]在一个实施方案中，施用至患者的ErbB3抑制剂是抗ErbB3抗体。示例性抗ErbB3抗体是MM-121，其包含分别如在SEQ ID NO:1和2中展示的Vh和'序列，或包含分别如在SEQ ID NO:3-5中展示的Vh CDR1、2和3序列和分别如在SEQ ID NO:6_8中展示的\CDR1、2和3序列(即，MM-121的Vh和\⑶R)的抗体。其它非限制性示例性抗ErbB3抗体和其它形式的ErbB3抑制剂详细描述于以上小节I中。
[0076]ErbB3抑制剂可通过适合于将抑制剂有效递送至患者的任何途径来施用至患者。举例来说，许多小分子抑制剂适合于口服施用。抗体和其它生物试剂通常肠胃外施用，例如静脉内、腹膜内、皮下或肌肉内施用。适用于本文提供的方法中的各种施用途径、剂量和药物制剂在下文进一步详细描述。
[0077]在其它方面，本文所`述的方法包括抑制(例如，至少部分阻断)调蛋白介导的雌激素受体活化磷酸化的方法。这些方法涉及使用一种或多种可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合从而抑制此磷酸化的抗体。在某些实施方案中，此类方法进一步包括任选地共同施用激素调节药物，包括雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂。
[0078]V.药物纟目合物
[0079]在另一方面，提供可用于本文公开的方法中的药物组合物，即，用于治疗激素难治性乳腺癌肿瘤的药物组合物。
[0080]在一个实施方案中，用于治疗激素难治性乳腺癌的药物组合物包含ErbB3抑制剂和药物载剂。ErbB3抑制剂可与药物载剂一起配制成药物组合物。另外，药物组合物可包括例如使用组合物来治疗患者的激素难治性乳腺癌肿瘤的说明书。
[0081]在一个实施方案中，组合物中的ErbB3抑制剂是抗ErbB3抗体，例如，MM-121或如下抗体，所述抗体包含的MM-121的乂11和' CDR以与其存在于MM-121中的顺序相同的相对顺序定位于抗体中以便提供ErbB3的免疫特异性结合。其它非限制性示例性抗ErbB3抗体和其它形式的ErbB3抑制剂详细描述于以上小节I中。
[0082]如本文所使用，“药学上可接受的载剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂、缓冲剂，和生理上相容的其它赋形剂。优选地，载剂适合于肠胃外、口服或局部体表施用。取决于施用途径，活性化合物例如小分子或生物试剂可以保护化合物免受酸和可使化合物失效的其它自然条件的作用的材料包覆。
[0083]药学上可接受的载剂包括无菌水性溶液或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，以及用于制备片剂、丸剂、胶囊等的常规赋形剂。使用这些介质和试剂用于配制药学活性物质在本领域中是已知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则涵盖其在本文提供的药物组合物中的使用。辅助活性化合物也可并入组合物中。
[0084]药学上可接受的载剂可包括药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括:(I)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸盐、丁羟茴醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α -生育酚等；和⑶金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
[0085]可用于本文提供的药物组合物中的合适水性和非水性载剂的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，和其合适混合物，和可注射有机酯，如油酸乙酯。在需要时，适当流动性可例如通过使用包衣材料如卵磷脂、在分散液的情况下通过维持所需粒度，以及通过使用表面活性剂来维持。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，所述等渗剂例如糖、多元醇如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中纳入延迟吸收的试剂来达成，所述试剂例如单硬脂酸盐和明胶。
[0086]这些组合物还可含有功能性赋形剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。
[0087]治疗组合物通常在制造和存储条件下必须为无菌、无热原质和稳定的。组合物可配制为溶液、微乳液、脂质体，或适合于高药物浓度的其它有序结构。
[0088]可制备无菌可注射溶液，方法是将所需量的活性化合物与以上列举的成分中的一种或成分的组合一起并入合适溶剂中，需要时随后例如通过微细过滤来灭菌。总体上，分散液通过将活性化合物并入无菌媒剂中来制备，所述媒剂含有基本分散介质和来自以上列举的那些成分的所需其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，从而产生活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其它所需成分的粉末。活性剂可在无菌条件下与其它药学上可接受的载剂，以及与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂`一起混合。
[0089]可通过以下两种方法来确保不存在微生物:上述灭菌程序，以及纳入各种抗细菌和抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚山梨酸等。也可能需要在组合物中纳入等渗剂，如糖、氯化钠等。另外，可注射药物形式的延长吸收可通过纳入延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶来达成。
[0090]包含ErbB3抑制剂的药物组合物可单独施用或以组合疗法施用。举例来说，组合疗法可包括本文提供的包含ErbB3抑制剂和至少一种或多种其它治疗剂的组合物，所述一种或多种其它治疗剂如在本领域中已知的一种或多种化疗剂，其在以下小节IV中进一步详细讨论。药物组合物还可结合辐射疗法和/或手术来施用。
[0091]对剂量方案进行调整以便提供最佳所需反应(例如，治疗反应)。举例来说，可施用单次快速注射，可随着时间的推移施用若干分次剂量，或如治疗情况的紧急性所指示，可按比例减少或增加剂量。
[0092]抗体施用的示例性剂量范围包括:IO-1OOOmg (抗体)/ kg (患者体重)、10_800mg / kg、10_600mg / kg、10_400mg / kg、10_200mg / kg、30_1000mg / kg、30-800mg / kg、30_600mg / kg、30_400mg / kg、30_200mg / kg、50_1000mg / kg、50_800mg / kg、50_600mg / kg、50_400mg / kg、50_200mg / kg、IOO-1OOOmg / kg、100_900mg / kg、100_800mg / kg、100_700mg / kg、100_600mg / kg、100_500mg / kg、100-400mg / kg、100-300mg / kg和100_200mg / kg。示例性剂量时程包括每三天一次、每五天一次、每七天一次(即每周一次)、每10天一次、每14天一次(即每两周一次)、每21天一次(即每三周一次)、每28天一次(即每四周一次)和每月一次。
[0093]为了便于施用和剂量均一性，宜将肠胃外组合物配制成单位剂型。如本文所使用的单位剂型是指适合作为单一剂量用于所要治疗的患者的物理离散单元；每个单元含有经过计算结合任何所需药物载剂可产生所需治疗效果的预定量的活性剂。单元剂型的规格由以下因素决定并且直接取决于这些因素:(a)活性化合物的独特特性和所要达成的特定治疗效果，和(b)在混配此种活性化合物用于治疗个体敏感性的领域中固有的限制。
[0094]本文公开的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可改变以便获得对于特定患者、组合物以及施用模式可有效达成所需治疗反应，而对患者无毒的活性成分的量。如本文在施用的情况下所使用的“肠胃外”是指除肠内和局部体表施用以外的施用模式，通常通过注射,并且包括而不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜上和胸骨内注射和输注。
[0095]如本文所使用的短语“肠胃外施用”是指除肠内(即，经由消化道)和局部体表施用以外的施用模式，通常通过注射或输注，并且包括而不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜上和胸骨内注射和输注。静脉内注射和输注经常(但是并非独占地)用于抗体施用。
[0096]当本文提供的试剂作为药物施用至人或动物时，其可单独给予或以药物组合物形式给予，所述药物组合物含有例如0.001至90% (更优选地0.005至70%，如0.01至30%)的活性成分与药学上可接受的载剂的组合。
[0097]V1.组合疗法
[0098]在某些实施方案中，本文提供的用于遏制激素难治性乳腺癌细胞生长或治疗患有激素难治性乳腺肿瘤的患者的方法和用途或者可包括施用ErbB3抑制剂和不为ErbB3抑制剂的至少一种其它抗癌剂。
[0099]在一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括至少一种化疗药物。此类化疗药物的非限制实例包括钼基化疗药物(例如，顺钼、卡波钼)、紫杉烷类(例如，紫杉醇(Taxol?)、多西紫杉醇(Taxotere?)、EndoTAG-l?(囊封于带正电荷的基于脂质的复合物中的紫杉醇制剂；MediGene?)、Abraxane? (结合至白蛋白的紫杉醇的制剂)、酪氨酸激酶抑制剂(例如，伊马替尼(imatinib) / Gleevec?、舒尼替尼(sunitinib) / Sutent?、达沙替尼(dasatinib) / Sprycel? )，和其组合。
[0100]在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括EGFR抑制剂，如抗EGFR抗体或EGFR信号转导的小分子抑制剂。示例性抗EGFR抗体是西妥昔单抗(Erbitux?，ImClone Systems)。抗EGFR抗体的其它实例包括MM-151 (进一步描述于2011年7月5日提交的Bukhalid等的共申请中的共同让与的美国专利申请序列号61 / 504，633中)、Sym004(Symphogen, Pederson 等，Cancer Research(癌症研究)2010 年 I 月 15 日 70 ;588，还参见美国专利序列号7，887，805)、马妥珠单抗(EMD72000)、帕木单抗(Vectibix? ；Amgen)、尼莫珠单抗(TheraCM?)和mAb806。EGFR信号转导途径的示例性小分子抑制剂是吉非替尼(Iressa?),其可从AstraZeneca和Teva商购获得。EGFR信号转导的小分子抑制
剂的其它实例包括厄洛替尼HCL(OSl-774 ；Tarceva?; OSI Pharma)，拉帕替尼(Tykerb?,Glaxo SmithKl ine),卡奈替尼(卡奈替尼盐酸盐，Pfizer),培利替尼(Pfizer)；PK1-166 (Novartis) ；PD158780 ;阿法替尼(Tomtovok?, Boehringer Ingleheim)；和AG1478(4-(3-氯苯氨基)_6，7- 二甲氧基喹唑啉)。
[0101]在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括VEGF抑制剂。示例性VEGF抑制剂包括抗VEGF抗体,如贝伐单抗(Avastatin?., Genentech)。
[0102]在另一个实施方案中，至少一种其它抗癌剂包括IGFlR抑制剂，如抗EGFR抗体或EGFR信号转导的小分子抑制剂。抗IGFlR抑制剂的实例包括达罗珠单抗(Merck，也称为 MK-0646)、AMG-479 (Amgen)、R1507 (Roche)、菲替木单抗(Pfizer)、IMC-A12 (Imclone /Lilly)和MM-141，其为一种双特异性ErbB3 / IGFlR抑制剂(进一步描述于2011年11月10日提交的Lugovskoy等的共申请中的共同让与的美国专利申请序列号61 / 558,192中)ο小分子IGFlR抑制剂的实例包括XL228 (Exelixis)和BMS-754807 (BMS)。
实施例
[0103]实施例1:用MM-121治疗ER+激素难治性乳腺肿瘤
[0104]使用MCF7人乳腺癌细胞的他莫西芬抗性变体的异种移植物对用MM-121治疗带有ER+激素难治性乳腺肿瘤的小鼠的抗肿瘤功效和耐受性进行分析。他莫西芬抗性人乳腺癌细胞系TAMR-1、TAMR-7和TAMR-8细胞是从A.E.Lykkesfeldt的实验室(丹麦癌症协会癌症生物学部肿瘤内分泌学部(Department of Tumor Endocrinology, Division for CancerBiology, Danish Cancer Society.Strandboulevarden49, DK_2100Copenhagen0,丹麦)获得。这些细胞作为异种移植物生长于从Charles River Laboratories International获得的雌性无胸腺nu+ / nu+裸小鼠体内。从亚利桑那州的图森市(Tucson, AZ)的亚利桑那癌症中心(Arizona Cancer Center)繁殖群获得的 SCID 小鼠(C.B.-17 / IcrACCscid)也为
合适的。将小鼠在设置于有空调的房间中的Tecniplast?个别通风聚碳酸酯(Makrolon?)
笼(IVC)中豢养并且可自由获取食物和酸化水。小鼠在全身麻醉状态下被皮下注射~(约)IO7个TAMR-1、TAMR-7或TAMR-8细胞至侧腹或注射至乳腺脂肪垫中。
[0105]为了研究单一疗法的抗肿瘤功效，对带有肿瘤的小鼠(即，在注射细胞之后，肿瘤生长14天之后)每三天通过IP注射给予每只小鼠600 μ g(MM_121呈PBS中的6mg / mL溶液形式)的MM-121或媒剂对照(100 μ L)。对照小鼠仅接收PBS媒剂。功效通过将抗体治疗小鼠与媒剂对照小鼠之间的肿瘤生长进行比较来确定并且表达为中值相对肿瘤体积的实验与对照比(Τ / C值)。低于50%的最小T / C值是将治疗评定为有效的先决条件。对照和实验组各自含有10只分别带有一个肿瘤的小鼠。为了获得30只带有类似尺寸的肿瘤的小鼠以供随机化，每种肿瘤单侧植入40只小鼠。
[0106]将小鼠随机化并且当足够数量的个别肿瘤已生长至约200mm3的体积时开始治疗。通过数字卡尺测量来测量肿瘤(L X W)并且使用公式π / 6 (W2x L)来计算肿瘤体积。第一次剂量在第O天(随机化之日)或一天后施用。
[0107]施用最终剂量之后约24小时，将所有小鼠放血以制备血清；另外，从同一小鼠收集肿瘤进行快速冷冻和石蜡包埋(FFPE)(各自I / 2肿瘤)。
[0108]根据动物实验规则，如果肿瘤体积超过1800mm3 (每只小鼠一个肿瘤)，就将小鼠处死。对小鼠进行监测和给药直到其肿瘤已生长至此尺寸为止但是不超过60天。其后，将其处死以便收集样品。 [0109]在研究结束时，施用最终剂量之后约24小时，将研究的所有小鼠进行舌下放血以获得最大量的血液用于制备血清。将血清分装于2个试管中，每个试管中约250 μ L。
[0110]另外，不延迟立即切除所有小鼠的肿瘤用于在液氮中快速冷冻(I / 2肿瘤，提供用于存储样品的C0VARIS袋)和固定于10%缓冲福尔马林中〈24小时，随后脱水并且进行石蜡包埋(I / 2肿瘤)。
[0111]每周两次测量动物体重和肿瘤直径(W和L)并且使用公式π / 6 (W2XL)计算肿瘤体积。将肿瘤生长曲线作图。计算持续2个和4个倍增时间的肿瘤抑制和绝对生长延迟。
[0112]大致上如所描述执行的实验的结果证明ΜΜ-121治疗抑制或停止肿瘤生长，并且在一些情况下减小肿瘤尺寸。
[0113]实施例2:ΜΜ~121在体外抑制HRG诱导的ER磷酸化
[0114]将MCF7细胞不进行处理或以ΜΜ-121 (250ηΜ)预处理I小时。然后，将细胞以调蛋白 β I (EGF 结构域，IOnM R&D systems)、乙胞素(20nM, R&D systems)或雌激素(β 雌二醇-lOOnM，Sigma)刺激30分钟，或保持未刺激。利用探测pER和pErbB3的蛋白质印迹对细胞的溶胞物进行分析。
[0115]为了证明MM-121减少调蛋白诱导的雌激素受体活化的能力，在ER+、PR+、ErbB2+癌细胞系MCF7中使用如上所述的方法或其平常变化形式来对处理进行测试。将细胞不进行处理或以MM-121预处理。未处理和预处理的细胞以调蛋白、乙胞素或雌激素刺激。通过蛋白质印迹来分析细胞溶胞物中ErbB3和雌激素受体的磷酸化形式。
[0116]如图1 (蛋白质印迹)和图2(图1中的数据的密度测量)中所示，未处理的经过调蛋白刺激的细胞，并且在较小程度上(约2 / 3更小)未处理的经过乙胞素刺激的细胞显示雌激素受体和ErbB3两者都被磷酸化。相比之下，以MM-121预处理的经过调蛋白刺激的细胞显示pErbB3和pER的量实质性(约2 / 3)减少。结果证明调蛋白诱导的雌激素受体活化由ErbB3介导并且MM-121可抑制此雌激素受体活化模式。意外地，与雌激素相比，调蛋白刺激诱导显著(至少四倍)更高水平的ER磷酸化。
[0117]实施例3:通过与MM-121共同施用来恢复敏感性和/或预防对芳香酶抑制剂的抗性
[0118]患者可良好耐受芳香酶抑制剂(Al)治疗，并且治疗在相对较长时期内为有效的。然而，最初对Al治疗有反应的患者可变得对于药物具有抗性。为了研究Al抗性的机制，开发对应于ER+停经后乳腺癌的异种移植物模型。用于此瘤内芳香酶异种移植物模型的肿瘤是从如下MCF7人乳腺癌细胞生长而来，即所述细胞已经用人胎盘芳香酶基因稳定转染以便在卵巢切除的无胸腺小鼠中提供雌激素产生的非卵巢来源(MCF-7CA，参见例如Brodie等，Clinical Cancer Research(临床癌症研究)884s 第 11 卷，884s_888s, 2005 年 I 月 15日(增刊))。MCF7-CA细胞产生足够雌激素(通过使所注射的雄烯二酮发生芳香化)以便刺激其增殖和肿瘤形成。这是患有表达芳香酶并且不含促性腺激素反馈调节的肿瘤的停经后乳腺癌患者的模型。
[0119]MCF-7CA肿瘤:将MCF-7CA细胞在含有5 %胎牛血清和新霉素的伊格尔氏最低基本必需培养基(Eagle’s minimum essential medium)中培养。培养基每周更换两次。将亚汇合的MCF-7CA细胞刮到汉克氏溶液(HanV s solution)中并且在4°C下以1，OOOrpm离心2分钟。然后将细胞重新悬浮于MatrigelTM(10mg / ml)中以制备2_5xl07个细胞/毫升的细胞悬浮液。将4-6周龄的卵巢切除的雌性BALB / c无胸腺小鼠(20-22g体重)在受控光照和湿度条件下豢养于无病原体环境中并且自由取用食物和水。每只小鼠皮下(s.c.)接种0.1ml细胞悬浮液。然后，对动物每日s.c.注射每只小鼠0.1mg雄烯二酮。通过每周用卡尺测量肿瘤来确定生长速率。根据球体公式(4 / 3rl2.r2)计算肿瘤体积。当肿瘤达到可测量尺寸时，将小鼠分组，每组中10只具有相等肿瘤体积(300mm3)的动物。将小鼠用
0.3%羟丙基纤维素(HPC)中的0.1ml化合物治疗6周。
[0120]来曲啤杭件樽型中的来曲啤与来曲啤+MMl 21
[0121]为了证明MM-121与来曲唑的组合在来曲唑抗性异种移植物模型中的功效，如上所述制备带有肿瘤的小鼠并且随机化至各自具有10只小鼠的3个组和具有30只小鼠的一个组，每个组包含的小鼠具有类似的肿瘤尺寸分布。对于预期出现抗性的时期期间的最初治疗，一个组用PBS进行Q3D、1.p.治疗作为对照；一个组用单独MM-121进行治疗(每3天每只小鼠1.P.施用.2ml PBS中的600yg丽121) ;30只小鼠组用单独来曲唑进行治疗(10微克/小鼠/天)；并且最后一个组用来曲唑和MM-121两者进行治疗。每周测量肿瘤并且计算肿瘤体积。如果肿瘤继续生长至大于约1400-1700mm3的体积，那么就将小鼠处死。当用单独来曲唑治疗的小鼠组中的肿瘤变得具有抗性并且体积超过约600_3时，将所述组细分成各自具有十只小鼠的3个组。为了研究MM-121组合疗法对于这些抗性肿瘤的作用，这三个组的治疗如下继续进行:一个组继续接受单独来曲唑(10微克/小鼠/天)，一个组停止接受每日来曲唑并且以单独ΜΜ_121(600μ g Q3D，1.p.)治疗，并且一个组以来曲唑(10微克/小鼠/天)与MM-121 (600 μ g Q3D，1.p.)的组合进行治疗。
[0122]结果展示于图3中。如其中指示，MM-121治疗(三角形)和仅PBS对照(正方形)小鼠体内的肿瘤在5周过程中快速生长，其为这些组的最后测量。在接受单独来曲唑治疗的三个组(颠倒箭头)和接受MM-121与来曲唑的组合治疗的组(菱形)中，肿瘤生长进展较慢。
[0123]接受来曲唑治疗的小鼠组中的来曲唑抗性定义为其中肿瘤体积增加至600_3的点。在接受单独来曲唑的组中在约14周每日来曲唑治疗之后，达到这一肿瘤体积。虽然接受单独来曲唑或单独MM-121的小鼠中的肿瘤的体积随着时间的推移而继续增加，但是接受MM-121与来曲唑的组合的小鼠的肿瘤降低至完全低于600_3抗性阈值并且在研究的整个其余部分(19周)中保持减少的体积，因而证明组合治疗克服所获得的来曲唑抗性。
[0124]与接受单独来曲唑的小鼠相比，从治疗一开始就接受来曲唑和MM-121两者的组(菱形)未发展来曲唑抗性肿瘤(即肿瘤从未达到600_3的体积)，由此证明用组合来治疗可防止出现来曲唑抗性。
[0125]实施例4:与mTOR抑制剂和芳香酶抑制剂一起共同施用MM-121
[0126]为了证明是否在治疗ER+乳腺癌方面，MM-121+依西美坦+依维莫司的三重组合比单独依西美坦或依维莫司与依西美坦的组合更有效，向患者给予单独MM-121、单独依西美坦、单独依维莫司、依维莫司与依西美坦的组合，以及MM-121、依维莫司与依西美坦的组合。MM-121例如在第I周以40mg / kg的负荷剂量来给予，随后每周一次以静脉内输注形式在60分钟内施用20mg / kg的每周维持剂量；依西美坦以每天一次口服施用25mg来给予；依维莫司以每天一次口服施用IOmg来给予。治疗患者直到记录到其疾病的辐射学或临床进展为止。结果证明在治疗ER+乳腺癌患者方面，MM-121+依西美坦+依维莫司的三重组合比单独依西美坦或依维莫司与依西美坦的组合更有效。
[0127]等同物
[0128]本领域的技术人员应认识到或仅仅使用常规实验即能够确定本文所述的具体实施方案的许多等同物。此类等同物意图由以下权利要求书来涵盖。附属权利要求中公开的实施方案的任何组合涵盖于本发明范围内。
[0129]通过引用并入
[0130]本文提到的每一和每个授权专利、专利申请和公布由此全部以引用的方式并入本文。
[0131]序列表概沭
[0132]
【权利要求】
1.一种ErbB3抑制剂，其用于治疗雌激素受体阳性或阴性激素难治性乳腺癌。
2.—种遏制雌激素受体阳性或阴性激素难治性乳腺癌细胞的生长的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的ErbB3抑制剂接触。
3.—种遏制患者的雌激素受体阳性或阴性激素难治性乳腺癌肿瘤的生长的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制剂。
4.一种治疗雌激素受体阳性或阴性激素难治性乳腺癌肿瘤的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制剂。
5.一种治疗患者的乳腺癌肿瘤的方法，所述方法包括 选择患有雌激素受体阳性或阴性激素难治性乳腺癌肿瘤的患者；以及 向所述患者施用有效量的ErbB3抑制剂。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述ErbB3抑制剂是抗ErbB3抗体。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗体包含含有分别在SEQID N0:1和2中阐明的氨基酸序列的Vh和/或 '区。
8.如权利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗体包含含有分别在SEQID N0:42和43中阐明的氨基酸序列的Vh和/或' 区。
9.如权利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗体以氨基末端至羧基末端的顺序包含分别如在SEQ ID NO:3-5中展示的VfDRl、2和3序列，并且以氨基末端至羧基末端的顺序包含分别如在SEQ ID NO:6-8中展示的VlCDRU 2和3序列。
10.如权利要求3至5中任一项所述的方法，其进一步包括向所述患者共同施用有效量的不为ErbB3抑制剂的至少一种其它抗癌剂。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述至少一种其它抗癌剂包括至少一种化疗药物。
12.如权利要求10所述的方法，其中所述至少一种其它抗癌剂选自由以下组成的组:钼基化疗药物、紫杉烷类、酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶抑制剂、抗EGFR抗体、抗ErbB2抗体和其组合。
13.如权利要求10所述的方法，其中所述至少一种其它抗癌剂包括EGFR抑制剂。
14.如权利要求10所述的方法，其中所述EGFR抑制剂包括抗EGFR抗体。
15.如权利要求14所述的方法,其中所述抗EGFR抗体包括西妥昔单抗(cetuximab)。
16.如权利要求13所述的方法，其中所述EGFR抑制剂是EGFR信号转导的小分子抑制剂。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述EGFR信号转导的小分子抑制剂选自由以下组成的组:阿法替尼(afatinib)、吉非替尼(gef itinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、卡奈替尼(canertinib)、培利替尼(pelitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、PK1-166、PD158780 和AG1478。
18.如权利要求10所述的方法，其中所述至少一种其它抗癌剂包括VEGF抑制剂。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述VEGF抑制剂包括抗VEGF抗体。
20.如权利要求19所述的方法,其中所述抗VEGF抗体是贝伐单抗(bevacizumab)。
21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述激素难治性乳腺癌呈雌激素受体阳性(ER+)。
22.如权利要求21所述的方法，其进一步包括共同施用雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述雌激素受体拮抗剂选自雷洛昔芬(raloxifene)、他莫西芬(tamoxifen)、阿非昔芬(afimoxifene ;4_羟基他莫西芬)、阿佐昔芬(arzoxifene)、拉索昔芬(Iasofoxone)、托瑞米芬(toremifene)和氟维司群(fulvestrant);并且所述芳香酶抑制剂选自依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(Ietrozole)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、睾内酯(testolactone)、伏氯唑(vorozole)、福美司坦(formestane)和法倔唑(fadrozole)。
24.如权利要求22所述的方法，其中所述芳香酶抑制剂是来曲唑。
25.如权利要求21所述的方法，其进一步包括共同施用mTOR抑制剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种。
26.如权利要求所述的方法25,其中所述mTOR抑制剂选自坦罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、西罗莫司(sirolimus)和地憐莫司(ridaforolimus);并且所述芳香酶抑制剂选自依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述芳香酶抑制剂是依西美坦。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述mTOR抑制剂是依维莫司。
29.—种抑制肿瘤细胞中的由调蛋白(heregulin)介导的雌激素受体活化的方法，所述方法包括I)选择已经用抗雌激素疗法治疗恶性疾病并且已经变得对于此疗法具有抗性的人患者，所述患者患有恶性肿瘤，在所述患者已经变得具有抗性之后对从所述患者获取的肿瘤活检进行的分析表明，所述肿`瘤为雌激素受体阳性的并且过度表达HER2，并且所述活化包括雌激素受体的磷酸化，以及2)向以这种方式选择的患者施用可抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗体,其中所述抗体以可在所述患者血流中产生一定浓度的所述抗体的剂量来施用，所述浓度是足以在体外使MCF7细胞中的调蛋白诱导的雌激素受体磷酸化抑制至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%或至少70%的浓度，其中所述剂量下的所述施用可有效治疗所述肿瘤。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述恶性肿瘤是乳腺、卵巢、肺或皮肤的肿瘤。
31.如权利要求29所述的方法，其中所述HER2的过度表达由所述肿瘤活检测试为HER2++ 或 HER2+++ 或 HER2FISH 阳性来指示。
32.如权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述抗雌激素疗法是用雌激素受体阻断剂来治疗和用芳香酶抑制剂来治疗中的一种或两种。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述施用是通过静脉内注射或输注。
34.如权利要求31至33中任一项所述的方法，其中所述抗体是抗ErbB2抗体。
35.如权利要求29至33中任一项所述的方法，其中所述抗体是抗ErbB3抗体。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述抗体包含含有分别在SEQID NO:1和2中阐明的氨基酸序列的Vh和/或 '区。
37.如权利要求35所述的方法，其中所述抗ErbB3抗体包含含有分别在SEQID NO:42和43中阐明的氨基酸序列的Vh和/或 '区。
38.如权利要求29至33中任一项所述的方法，其中所述抗体是抗ErbB2/抗ErbB3双特异性抗体。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述双特异性抗体选自由以下组成的组:ALM、A5-HSA-ML3.9、A5-HSA-B1D2、B12-HSA-B1D2、A5-HSA-F5B6H2、H3-HSA-F5B6H2、F4-HSA-F5B6H2 和 H3-HSA-B1D2。
40.如权利要求29至39中任一项所述的方法，其中所述抗体的施用抑制所述肿瘤的生长、侵袭性和转移中的一项或多项。
41.如权利要求29至40中任一项所述的方法，其进一步包括共同施用雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述雌激素受体拮抗剂选自雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(4-羟基他莫西芬)、阿佐昔芬、拉索昔芬、托瑞米芬和氟维司群；并且所述芳香酶抑制剂选自依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述芳香酶抑制剂是来曲唑。
44.一种用于抑制调蛋白介导的雌激素受体活化的组合物，所述抑制在选择已经用抗雌激素疗法治疗恶性疾病并且已经变得对于此疗法具有抗性的人患者之后进行，所述患者患有恶性肿瘤，在所述患者已经变得具有抗性之后对从所述患者获取的肿瘤活检进行的分析表明，所述肿瘤为雌激素受体阳性的并且过度表达ErbB2，并且所述活化包括雌激素受体的磷酸化，所述组合物包含:抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB3抗体。
45.一种用于抑制调蛋白介导的雌激素受体活化的组合物，所述抑制在选择已经用抗雌激素疗法治疗恶性疾病并且已经变得对于此疗法具有抗性的人患者之后进行，所述患者患有恶性肿瘤，在所述患者已经变得具有抗性之后对从所述患者获取的肿瘤活检进行的分析表明，所述肿瘤为雌激素受体阳性的并且过度表达ErbB2，并且所述活化包括雌激素受体的磷酸化，所述组合物包含:结合ErbB2并且抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB2抗体。`
46.如权利要求45所述的组合物，其中所述抗ErbB2抗体是培妥珠单抗(pertuzumab)。
47.一种用于抑制调蛋白介导的雌激素受体活化的组合物，所述抑制在选择已经用抗雌激素疗法治疗恶性疾病并且已经变得对于此疗法具有抗性的人患者之后进行，所述患者患有恶性肿瘤，在所述患者已经变得具有抗性之后对从所述患者获取的肿瘤活检进行的分析表明，所述肿瘤为雌激素受体阳性的并且过度表达ErbB2，并且所述活化包括雌激素受体的磷酸化，所述组合物包含:抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB2 /抗ErbB3双特异性抗体。
48.一种用于治疗激素难治性雌激素受体阳性癌症的组合物，所述组合物包含抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB3抗体。
49.一种用于治疗激素难治性雌激素受体阳性癌症的组合物，所述组合物包含结合ErbB2并且抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB2抗体。
50.如权利要求44至49中任一项所述的组合物，其用于与雌激素受体拮抗剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种共同施用。
51.如权利要求45所述的组合物，其中所述抗ErbB2抗体是培妥珠单抗。
52.一种用于治疗激素难治性雌激素受体阳性癌症的组合物，所述组合物包含抑制调蛋白与ErbB2 / ErbB3异源二聚体的结合的抗ErbB2 /抗ErbB3双特异性抗体。
53.如权利要求50所述的组合物，其中所述雌激素受体拮抗剂选自雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(4-羟基他莫西芬)、阿佐昔芬、拉索昔芬、托瑞米芬和氟维司群；并且所述芳香酶抑制剂选自依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
54.如权利要求53所述的组合物，其中所述芳香酶抑制剂是来曲唑。
55.如权利要求38所述的方法，其中所述双特异性抗体是包含SEQID NO:44的抗体。
56.如权利要求47或52所述的组合物，其中所述双特异性抗体是包含SEQID NO:44的抗体。
57.如权利要求44至59中任一项所述的组合物，其用于与mTOR抑制剂和芳香酶抑制剂中的一种或两种共同施用。
58.如权利要求57所述的组合物，其中所述mTOR抑制剂选自坦罗莫司、依维莫司、西罗莫司和地磷莫司；并且所述芳香酶抑制剂选自依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述芳香酶抑制剂是依西美坦。
60.如权利要求58所 述的方法，其中所述mTOR抑制剂是依维莫司。
【文档编号】C07K16/32GK103562226SQ201280012969
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2012年3月12日 优先权日:2011年3月11日
【发明者】G·加西亚, W·库巴塞科, V·莫尤, G·麦克贝思 申请人:梅里麦克制药股份有限公司