一种罗米地辛的分离纯化方法
【专利摘要】本发明公开了一种罗米地辛的分离纯化方法，其包含下列步骤：a.将含有罗米地辛的紫色色杆菌（Chromobacterium violaceum）的发酵液与大孔吸附树脂混合，搅拌至吸附完全；b.将吸附罗米地辛的大孔吸附树脂从发酵液中分离出来，上柱，清洗后洗脱，得洗脱液1浓缩，得浓缩液1；c.将所述的浓缩液1上样至大孔吸附树脂，上柱，洗涤后洗脱，洗脱过程中用HPLC进行检测，收集含有罗米地辛组分的洗脱液2，浓缩，得浓缩液2；d.将所述的浓缩液2萃取，得有机层，浓缩，得粗品；e.将所述的粗品精制，即得。本发明的分离纯化方法提取纯度较高，收率高，纯化工艺简单，成本较低。
【专利说明】-种罗米地辛的分离纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种罗米地辛的分离纯化方法。
【背景技术】
[0002] 罗米地辛，英文名称为Romidepsin,是从紫色色杆菌（化romobacterium violaceum)的发酵培养液中分离得到的一种天然多聚肤，其分子式为C24H36N4化S2,分子量为 540。
[0003] 罗米地辛是一种新型的组蛋白去己醜化酶（HDAC)抑制剂，HDAC是一类锋离子醜 胺酶，在催化组蛋白脱己醜基时，锋离子跟己醜基上氧的水合物馨合形成过渡态，HDAC的过 度或异常调控使组蛋白过度去己醜化，染色体凝聚使转录受到抑制，引起相应基因表达下 降，导致肿瘤病症发生。罗米地辛抗肿瘤机理为罗米地辛进入细胞后，由还原性谷脫甘肤 (GSH)将其二硫键还原为琉基，琉基可竞争性结合HDAC上的化 2+，使HDAC失效，从而达到抗 肿瘤的目的。
[0004]
【权利要求】
1. 一种罗米地辛的分离纯化方法，其特征在于，其包含下列步骤： a?将含有罗米地辛的紫色色杆菌（Chromobacterium violaceum)的发酵液与大孔吸附 树脂混合，搅拌至吸附完全；所述的大孔吸附树脂为非极性、弱极性和中等极性大孔树脂中 的一种或多种； b. 将吸附罗米地辛的大孔吸附树脂从发酵液中分离出来，上柱，清洗后洗脱，收集含有 罗米地辛组分的洗脱液1，浓缩，得浓缩液1 ;所述的清洗的溶剂为水；所述洗脱的溶剂为有 机溶剂，或有机溶剂与水的混合溶剂1 ;在所述的混合溶剂1中，所述的有机溶剂与水的体 积比为3. 5:6. 5?6:4 ;所述的有机溶剂为酮类溶剂、醇类溶剂或腈类溶剂； c. 将所述的浓缩液1上样至大孔吸附树脂，上柱，洗涤后洗脱，洗脱过程中用HPLC进行 检测，收集含有罗米地辛组分的洗脱液2,浓缩，得浓缩液2 ;所述洗涤的溶剂为有机溶剂与 水的混合溶剂2 ;在所述的混合溶剂2中，所述的有机溶剂与水的体积比为1:9?5:5 ;所述 洗脱的溶剂为有机溶剂与水的混合溶剂3 ;在所述的混合溶剂3中，所述的有机溶剂与水的 体积比为3. 5:6. 5?7:3 ;所述的有机溶剂为酮类溶剂、醇类溶剂或腈类溶剂； d. 将所述的浓缩液2萃取，得有机层，浓缩，得粗品； e. 将所述的粗品精制，即得。
2. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤a中，所述的大孔吸附树脂与 所述的发酵液的质量体积比为0. Olg/mL?0. 06g/mL ;所述的搅拌的时间为20?60min ;所 述的吸附完全为发酵液颜色变浅。
3. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤a和/或c中，所述的大孔 吸附树脂分别独立的为 X-5、XAD-2、XAD-7、ADS-17、SP825、Diaion HP50、D101、HPD-100、 HPD-300、AB-8、DA-201 和 HPD-400 中的一种或多种。
4. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤b中，在所述的混合溶剂1中， 所述的有机溶剂与水的体积比为4:6?5:5 ;所述的浓缩液1的颜色为棕黑色。
5. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤b和/或c中，所述的酮类溶 剂为丙酮；所述的醇类溶剂为碳链长度为Q?C3的烷基醇；所述的腈类溶剂为乙腈。
6. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤c中，所述的混合溶剂2中， 所述的有机溶剂与水的体积比为2:8?3. 5:6. 5 ;所述的混合溶剂3中，所述的有机溶剂与 水的体积比为4:6?5:5 ;所述的大孔吸附树脂与所述的浓缩液2的质量体积比为0. 03g/ mL?0. lg/mL ;所述的浓缩液2的颜色为浅棕色。
7. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤d中，所述的萃取的溶剂为酯 类溶剂和/或齒代烃类溶剂；所述的萃取的次数为两次。
8. 如权利要求7所述的分离纯化方法，其特征在于，所述的酯类溶剂为乙酸乙酯；所述 的卤代烃类溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷。
9. 如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤e中，所述的精制的方法为析 晶或重结晶；所述的析晶包括以下步骤：将步骤d得到的粗品，加入醚类溶剂，析出固体，即 可；所述的重结晶包括以下步骤：将步骤d得到的粗品，溶解在酮类溶剂、酮类溶剂与水的 混合溶剂4、醇类溶剂、醇类溶剂与水的混合溶剂5、腈类溶剂或腈类溶剂与水的混合溶剂6 中，再加入水至结晶析出，即可。
10. 如权利要求9所述的分离纯化方法，其特征在于，所述的醚类溶剂为乙醚；所述的 混合溶剂4中，所述的酮类溶剂与水的体积比为6:4?9:1 ;所述的混合溶剂5中，所述的 醇类溶剂与水的体积比为6:4?9:1 ;所述的混合溶剂6中，所述的腈类溶剂与水的体积比 为 6:4 ?9:1。
【文档编号】C07K1/22GK104447950SQ201310430063
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年9月18日 优先权日:2013年9月18日
【发明者】胡海峰, 熊磊 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院