一种荭草苷和异荭草苷的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种分离制备碳苷黄酮类异构体的方法，特别涉及一种利用动态轴向压缩柱大规模分离制备荭草苷和异荭草苷的一种方法，该异构体由竹叶中提取获得。此方法解决了采用传统的分离制备碳苷黄酮类异构体所存在的成本高、收率低、生产周期长等问题。包括以下步骤：1）竹叶提取粗品溶解于水中，超声处理，滤膜过滤，取滤液待用；2）使用制备液相色谱系统对过滤后的粗品进行分离纯化；3）将对应谱带洗脱液中的溶剂蒸干，即可得到色谱纯为98.5%的荭草苷和异荭草苷单体。本发明所述的分离纯化方法适合于工业化分离制备碳苷黄酮类异构体。
【专利说明】一种荭草苷和异荭草苷的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及了一种碳苷黄酮类异构体的大规模分离制备方法，具体涉及一种荭草苷和异荭草苷的分离制备方法。
【背景技术】
[0002]荭草苷及其异构体异荭草苷，属于黄酮苷类化合物，易溶于水、乙醇，难溶于苯、氯仿、乙醚等有机溶剂，是竹叶黄酮的主要成分。具有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血月旨、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用。而竹叶在我国具有悠久的药用历史，是一味著名的清热解毒良药。竹叶提取物的功能因子主要是黄酮苷，竹叶黄酮具有多方面的生物活性，如抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基、阻断亚硝基化、降低血脂及血胆固醇、抗菌消炎、抗病毒、增强免疫功能、抑制移植性肿瘤在宿主体内的生长等方面的作用。竹叶黄酮以其巨大的资源优势及良好的药理活性已成为一种非常有前途的天然药物，是具有广阔开发前景的新型药用资源。荭草苷和异荭草苷现有的提取工艺多是微波提取、大孔树脂分离、开放ODS柱色谱、微孔滤膜分离等，方法操作繁琐，分离效果差，回收率低。而现有文献中对从竹叶中提取分离荭草苷和异荭草苷的研究也较少，也没有文献具体研究荭草苷和异荭草苷相关的大规模的分离制备方法。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种大规模分离制备荭草苷和异荭草苷的方法，其技术思路是根据反相高效液相色谱法的原理，利用动态轴向压缩柱大规模分离制备荭草苷和异荭草苷，解决目前在纯化荭草苷和异荭草苷的过程中所存在的时间长及纯度不高等技术问题，操作简单，产品含量高，可重复性好，该方法包括以下步骤:
a.将竹叶提取粗品溶于水后进行超声并过滤，一般将竹叶提取粗品配制成饱和溶液，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整；
b.取配制好的溶液，用填充好固定相填料的动态轴向压缩柱进行分离，分别收集荭草苷和异荭草苷对应谱带的馏分；
c.将步骤b中收集的对应谱带洗脱液中的溶剂蒸干，即可得到色谱纯为98.5%以上的荭草苷和异荭草苷单体。
[0004]本发明的有益效果是可直接采用粗提的竹叶提取粗品来制备，不需要大量的前处理，简单、易控制，工艺技术简化，使用的流动相也是反相高效液相色谱中常用的试剂，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，纯度高于98.5%，完全可用于药物和功能性食品的开发。
【专利附图】
【附图说明】
[0005]图1是竹叶提取粗品的液相色谱法测定图谱。
[0006]图2是荭草苷单体液相色谱法测定图谱。
[0007]图3是异荭草苷单体液相色谱法测定图谱。
[0008]图4是分离纯化荭草苷和异荭草苷的制备谱图。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
1.取Ig竹叶提取物粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
[0010]2.将步骤I的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ 50 X 250mm,填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为30um，上样量lg，O到40分钟，乙腈/水的体积比由20:80到40:60，紫外可见光度检测器的检测波长为330nm，收集保留时间在16?19min异荭草苷的馏分，2(T23min荭草苷的馏分，当荭草苷和异荭草苷洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。冷冻干燥后，HPLC检测分析纯度分别为98.9%和99.1%。
[0011]实施例2
1.取2g竹叶提取物粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
[0012]2.将步骤I的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ 50 X 250mm,填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为45um，上样量2g，O到40分钟，乙腈/水的体积比由25:75到50:50，紫外可见光度检测器的检测波长为330nm，收集保留时间在15?20min异荭草苷的馏分，24min荭草苷的馏分，当荭草苷和异荭草苷洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。冷冻干燥后，HPLC检测分析纯度分别为98.6%和98.7%。
[0013]实施例3
1.取1g竹叶提取物粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
[0014]2.将步骤I的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ 150 X 250mm,填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为70um，上样量10g，O到40分钟，乙腈/水的体积比由20:80到50:50，紫外可见光度检测器的检测波长为330nm，收集保留时间在16?21min异荭草苷的馏分，22?25min荭草苷的馏分，当荭草苷和异荭草苷洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。冷冻干燥后，HPLC检测分析纯度分别为98.5%和98.7%。
【权利要求】
1.一种分离制备荭草苷和异荭草苷的方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将竹叶提取粗品溶于水后超声处理，滤膜过滤，取滤液待用； (2)使用制备液相色谱系统对过滤后的粗品进行分离制备:通过动态轴向压缩柱，流动相为乙腈和水的混合溶液，梯度洗脱分离，紫外检测器对样品进行检测，分段收集目的峰值的馏分； (3)将收集到的馏分进行减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到棕色粉末状产品，经检测纯度达98.5%以上。
2.根据权利要求1所述的一种分离制备荭草苷和异荭草苷的方法，其特征是:所述的竹叶提取粗品为水提取或有机溶剂沉淀后所得。
3.根据权利要求1所述的一种分离制备荭草苷和异荭草苷的方法，其特征是:所述色谱系统的动态轴向压缩柱内填充固定相为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，其粒度范围
10 μ m^75 μ m。
4.根据权利要求1所述的一种分离制备荭草苷和异荭草苷的方法，其特征是:动态轴向压缩柱的填充内径范围为5(T200mm。
5.根据权利要求1所述的一种分离制备荭草苷和异荭草苷的方法，其特征是:流动相中乙腈与水的体积比(V/V)范围为20:80?50:50。
【文档编号】C07D407/04GK104370895SQ201410416858
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年8月22日 优先权日:2014年8月22日
【发明者】张宇, 张大兵, 李胜迎 申请人:江苏汉邦科技有限公司