本发明涉及4,5-二取代咪唑类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途，该类化合物可作为黄嘌呤氧化酶(Xanthineoxidase,XO)抑制剂，用于治疗由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症。本发明还涉及所述化合物、其药学上可接受的盐及包含其的药物组合物，以及所述化合物在制备XO抑制剂中的用途，和制备用于治疗痛风及其并发症等相关疾病的药物中的用途。
背景技术：
：痛风症(Gout)是仅次于糖尿病之后的第二大代谢疾病，是由体内嘌呤代谢紊乱导致尿酸生成过多，尿酸盐的结晶在体内沉积引起组织损伤的临床综合征，主要表现为反复发作性关节红、肿、热、痛与功能障碍，甚至会导致关节畸形、肾石病及尿酸性肾病。流行病学资料显示，随着人们生活水平的提高和生活节奏的加快，痛风的发病率在世界范围内呈逐年上升趋势。目前我国痛风的发病率已高于世界平均水平，这种疾病己被联合国列为21世纪二十大顽症之一。痛风可以导致诸多并发症，欧美地区以合并缺血性心脏病最多，其次是脑血管疾病、尿毒症、恶性肿瘤等。但在亚洲地区，日本却以尿毒症为首，其次才是缺血性心脏病、恶性肿瘤及脑血管疾病。无论是何种并发症，这些研究统计数据都值得我们重视。因此开发高效的抗痛风药物具有很重要的研究价值和现实意义。截至目前，只有两种黄嘌呤氧化酶抑制剂(XOI)被FDA批准作为抗通风药物。其中之一为由GlaxoSmithkine公司于1967年上市的别嘌呤醇，其IC50值为4.2μM。别嘌呤醇是次黄嘌呤的类似物，是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂，主要用于肾功能不全的病人。虽然己经使用了半个世纪，但其具有如发热、过敏性皮疹、腹痛、腹泻、白细胞及血小板减少，甚而有肝功能损害等无法忽视的不良反应。研究发现别嘌呤醇的代谢产物奥昔嘌呤也具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，但别嘌呤醇的毒副作用也是由于其代谢产物奥西嘌呤所致。由于此类药物可以从根本上减少尿酸的生成，起到治疗痛风的作用，因此人们很重视这类药物的开发。随着对黄嘌呤氧化酶靶点研究的深入，以及计算机辅助分析的不断开发，人们将黄嘌呤氧化酶的晶体结构完全解析，这为研究此类药物奠定了必要的基础。帝人(Teijin)公司于2009年开发上市的非布索坦(Febuxostat,TMX-67,TEI-6720)是一种新结构的XOI，具有极好的治疗痛风效果。但其引起肝功能异常、头痛等副作用是无法被忽视的，因此研究开发新型低毒高效的非嘌呤类XOI具有重要的现实意义。技术实现要素：为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明人进行了广泛而深入的研究，最终完成了本发明。本发明的一个目的是提供一种4,5-二取代咪唑类化合物或其药学上可接受的盐。本发明另一方面的目的是提供本发明所述的4,5-二取代咪唑类化合物的制备方法。本发明又一方面的目的是提供一种药物组合物，其包含本发明所述的4,5-二取代咪唑类化合物或其药学上可接受的盐。所述药物组合物用于制备抑制XO活性的药物(XO抑制剂)，用于制备治疗高尿酸血症、痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的药物。本发明又一方面的目的是提供本发明所述的4,5-二取代咪唑类化合物或其药学上可接受的盐，或者包含其的药物组合物在制备用于抑制XO活性的药物中的用途，在制备治疗高尿酸血症，痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的药物中的用途。本发明又一方面的目的是提供抑制XO活性的方法，治疗高尿酸血症、痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的方法，所述方法包括给具有需要的对象服用有效量的上述化合物和/或其药学上可接受的盐，或者服用包含上述化合物和/或其药学上可接受的盐的药物组合物。为了实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：本发明一方面提供一种4,5-二取代咪唑类化合物、或药学上可接受的盐，其具有如下通式I所示的结构：在通式I中，R1选自羟基和-NR6R7；R2和R3各自独立地选自氢、卤素、腈基(-CN)、硝基(-NO2)、羟基、氨基(-NH2)、取代或未取代的C1-C6直链或支链烷基、取代或未取代的C1-C6直链或支链烷氧基、取代或未取代的3至7元非芳香性碳环或杂环基、取代或未取代的5至7元杂芳基和取代或未 取代的C6-C10芳基，其中，所述取代基可以各自独立地选自卤素、腈基(-CN)、硝基(-NO2)、羟基、氨基(-NH2)、C1-C6直链或支链烷基以及C1-C6直链或支链烷氧基；优选地，R2和R3各自独立地选自氢、卤素、-CN、-NO2、羟基、氨基、C1-C6直链或支链烷氧基、C1-C6直链或支链烷基或者取代或未取代的含有1-2个N原子的4元至7元非芳香性杂环基；其中，所述取代基为C1-C4直链或支链烷基；进一步优选地，R2和R3各自独立地选自氢、卤素、-CN、-NO2、C1-C6直链或支链烷氧基或者取代或未取代的环上含有1个N原子的5元至6元饱和杂环基；其中，所述取代基为甲基或乙基；最优选地，R2和R3各自独立地选自氢、卤素、-CN、-NO2、甲氧基、异丁氧基、哌啶-1-基、4-甲基哌啶-1-基；或者R2与R3彼此相邻并与其相连接的苯环上的碳共同形成3至7元非芳香性碳环或杂环，优选形成环上含有一个氮原子的3至7元非芳香性杂环，优选地，R2与R3相互连接并与其相邻的苯环共同形成吲哚(苯并吡咯)基；R4和R5各自独立地选自氢和C1-C6直链或支链烷基；优选地，R4和R5各自独立地选自氢和C1-C4直链或支链烷基；最优选地，R4和R5各自独立地选自氢、甲基或者丙基，R6和R7各自独立地选自氢、氨基、C3至C7环烷基、羟基和C1-C6直链或支链烷基，优选各自独立地选自氢、氨基、C3至C5环烷基、羟基、C1-C4直链或支链烷基。优选地，所述4,5-二取代咪唑类化合物具有如下通式之一所示的结构：其中，R1、R2、R3、R4、R5和R6的定义与通式I中相同。在本发明中，除非另有具体说明外，对于取代基的含义做出如下定义：所述卤素原子指的是F、Cl、Br或I。所述C1-C6直链或支链烷基指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，其具体的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基，1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、异戊基、1-乙基丙基、新戊基、正己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、异己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、已基等；术语“C1-C4直链或支链烷基”具有类似的含义。所述C1-C6直链或支链烷氧基指的是具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，其具体的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基、3-甲基戊氧基等，术语“C1-C4直链或支链烷氧基”具有类似的含义。所述C3-C7环烷基指的是环上具有3至7个碳原子的脂肪族碳环基，其具体的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。所述C6-C10芳基指的是环上具有6至10个碳原子的芳香性碳环基，其具体的实例包括苯基、萘基等。所述3至7元非芳香性碳环指的是在环上具有3至7个原子的不具有芳香性的碳环，例如上述的C3-C7环烷基，以及C3-C7环烯基等。所述3至7元非芳香性杂环基指的是在环上具有3至7个原子且包含至少一个选自N、O、S中的杂原子的不具有芳香性的环基，例如环氧乙烷基、氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氮杂环戊烷基、哌啶基、高哌啶基等。所述环上含有1个N原子的5元至6元饱和杂环基指的是氮杂环戊烷基或哌啶基。所述5至7元杂芳基指的是在环上具有5至7个原子且包含至少一个选自N、O、S中的杂原子的芳香性环基，例如噻吩基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基等。所述药学上可接受的盐，例如可以是碱金属盐(例如，钠盐、钾盐、锂盐、铯盐等)；碱土金属盐(例如钙盐、镁盐、锶盐等)等；铵盐；与有机碱所成的盐，例如与三(低级)烷基胺(例如三甲胺、三乙胺、N-乙基二异丙胺等)、吡啶、喹啉、哌啶、咪唑、甲基吡啶、二甲氨基吡啶、二甲基苯胺、N-(低级)烷基吗啉(例如N-甲基吗啉等)、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬烯-5(DBN)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳烯-7(DBU)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)等所成的盐；无机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、碳酸盐等；有机酸盐，例如甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、碳酸盐、苦味酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、谷氨酸盐、双羟萘酸盐等。本发明的化合物在实践中可以是具有相同或类似活性的其药学上可接受的溶剂合物和异构体的形式，所述溶剂合物例如可以是水合物、乙醇合物等，优选的溶剂合物为水合物。所述异构体包括几何异构体、立体异构体、光学异构体等。最优选地，所述通式I所示4,5-二取代咪唑类化合物选自下述化合物：本发明另一方面提供一种上述通式I所示4,5-二取代咪唑类化合物的制备方法，该方法为以下反应路线之一：反应路线一：其中，R8为C1-C6烷基、苄基或对甲氧基苄基、苯基或六氟苯基；R1为-NR6R7，以及R4为C1-C6直链或支链烷基，R2、R3、R5、R6、R7的定义与前述定义相同。步骤a)：在溶剂中以咪唑4,5-二羧酸为原料与氯代试剂经过酰氯化反应得到化合物II；步骤b)：在溶剂中化合物II与R8-OH经过酯化反应得到化合物III；步骤c)：在溶剂中将化合物III与经过氨解得到化合物IV；步骤d)：在水解催化剂的存在下，化合物IV经过水解后得到化合物V；步骤e)：化合物V经过烷基化反应得到化合物VI；步骤f)：化合物VI与胺经过酰胺化反应得到通式I所示的化合物；反应路线二：其中，R4为C1-C6直链或支链烷基，其它取代基的定义与前述定义相同；步骤a)与前述步骤a)相同；步骤h)：在溶剂中，化合物II与经过胺解反应得到化合物VII；步骤i)：在水解催化剂的存在下，化合物VII经过水解反应得到化合物VIII；或者步骤j)：在溶剂中，化合物VII与HNR6R7经过氨解反应得到化合物VIII；步骤k)：化合物VIII与烷基卤代烃发生烷基化反应得到通式I所示的化合物。在步骤a)至步骤k)中的反应条件为能够发生反应的常规条件，其通常为本领域的技术人员所熟知。优选地，所述反应条件为：在步骤a)中，所述酰氯化反应在0℃到室温下进行，所述氯代试剂为二氯亚砜、草酰氯或者三氯氧磷；所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、苯或者甲苯；在步骤b)中，所述酯化反应在0℃到室温下进行，所述溶剂为二氯甲烷或四氢呋喃；在步骤c)中，所述氨解反应在室温到100℃条件下进行，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、苯或者甲苯；在步骤d)中，所述水解反应在室温到100℃条件下进行，所述水解催化剂为氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氯化氢溶液或硫酸溶液；在步骤e)中，所述烷基化反应是在0℃到室温下进行，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃或DMF；在步骤f)中，所述酰胺化反应是在0℃到室温下进行，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃或DMF；在步骤h)中，所述酰胺化反应在0℃到室温下进行，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、二氧六环、N-甲基甲酰胺、苯或者甲苯；在步骤i)中，所述水解催化剂为氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氯化氢溶液或者硫酸溶液；在步骤j)中，所述氨解反应在室温到160℃条件下进行，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、二氧六环、N-甲基甲酰胺、苯、甲苯或者N-甲基吡咯烷酮；在步骤k)中，所述的烷基化反应是在0℃到室温下进行，所述溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃或DMF。本发明还提供一种药物组合物，其包含通式I所示化合物和/或其药学上可接受的盐。优选地，所述药物组合物还可以进一步包含辅料，所述辅料可以为例如着色剂、防腐剂、香料、香味剂、甜味剂等。本发明还提供通式I所示化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备治疗高尿酸血症，痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的药物。本发明还提供一种药物组合物，其用于制备治疗高尿酸血症，痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的药物，其中，所述药物组合物包含通式I所示化合物和/或其药学上可接受的盐。优选地，所述药物组合物还可以进一步包含辅料，所述辅料例如可以为着色剂、防腐剂、香料、香味剂、甜味剂等。本发明另一方面还提供通式I所示化合物或其药学上可接受的盐及其药物组合物在制备药物中的用途，在制备用于抑制XO活性的药物(XO抑制剂)中的用途，在制备治疗高尿酸血症、痛风的药物中的用途，尤其是在制备治疗由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的药物中的用途，所述并发症为例如合并缺血性心脏病，脑血管疾病、尿毒症或恶性肿瘤。本发明又一方面还提供通式I所示化合物和/或其药学上可接受的盐及其药物组合物在抑制XO活性中的用途，以及在治疗高尿酸血症，痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症中的用途。本发明又一方面还提供一种抑制XO活性的方法，以及治疗高尿酸血症，痛风，尤其是由尿酸结晶在关节处的沉积导致的痛风及其并发症的方法，其中，所述方法包含向具有该需要的对象施用通式I所示化合物和/或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。本发明有如下有益效果：通过对激酶活性筛选，发明人发现：上述通式I表示的化合物中，本发明化合物的XO抑制活性在100nM以下，最好的化合物达到5.5nM；ATP竞争实验显示上述通式I表示的化合物为混合型抑制剂。因此，通式I表示的化合物是有效的XO抑制剂。附图说明图为化合物S6的米-门二氏方程式的双倒数曲线图(lineweaver～BurkPlot)。具体实施方式下面结合制备实施例对本发明作进一步描述，但不试图限制本发明的保护范围。质谱EI-MS使用FinniganMAT-95型质谱仪，ESI-MS使用FinniganLCQDeca型质谱仪测定。质谱EI-MS采用高分辨质谱由FinniganMAT仪器测定。1H-NMR光谱数据测量使用VarianMercury-300MHz或者VarianMercury-400MHz核磁共振仪，以四甲基硅烷(tetramethylsilane，TMS)为内标。所有溶剂均为分析纯试剂大部分来自于国药集团化学试剂有限公司，其他试剂一般均购自国药集团化学试剂有限公司、百灵威、韶远、Acros、毕得等试剂公司，除非特别提及，这些试剂都未经处理直接使用。无水溶剂纯化参照PurificationoflaboratoryChemicals,D.D.PerrinandW.L.F.Armarego,PergamonPress:Oxford,1980。除说明外，所有反应都通过薄层色谱法跟踪监测。使用的薄层层析硅胶板型号为HSGF254，来自山东青岛海洋化工厂。常用后处理步骤是先将特定有机溶剂加入到反应体系之中，然后用水稀释，反复萃取3次，将合并的有机相用饱和食盐水或饱和氯化铵溶液进行洗涤，收集有机相并用无水Na2SO4干燥，然后用旋转蒸发仪除去有机溶剂得到反应粗产品，粗产品通过快速柱层析方法所(使用的正相柱层析硅胶，型号为：zcx-11，200-300)或者用特定的溶剂进行重结晶或者洗涤得到纯品。制备实施例实施例14-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S1)5,10-二氧代-5,10-二氢咪唑[1,5-a:1',5'-d]吡嗪-1,6-二酰氯(1)取100mL圆底烧瓶，依次加入1-氢咪唑-4,5-二羧酸(600mg,1eq,3.84mmol)，氯化亚砜(1.81mL,6.5eq,24.98mmol)，超干二甲基甲酰胺(DMF)(0.15mL,0.5eq,1.92mmol)和5mL甲苯，90℃下回流16h。反应结束后，冷却，用吸管将反应液中过多的甲苯、二氯亚砜及DMF吸出，甲苯洗涤两次得粗品(化合物1)，不经进一步纯化直接用于下一步反应。5,10-二氧代-5,10-二氢咪唑[1,5-a:1',5'-d]吡嗪-1,6-二羧酸二苯酯(2)将化合物1悬浮于50mL二氯甲烷中，密封反应，冰盐浴下搅拌15min后，加入超干吡啶(1.55mL,5eq,19.17mmol)后缓慢滴加苯酚(360mg,1eq,3.84mmol)的四氢呋喃(THF)溶液，反应45min，停止反应，过滤抽干，加大量饱和碳酸氢钠冲洗，加大量水冲洗，加大量二氯甲烷(DCM)冲洗抽干，得淡黄色固体(化合物2)680mg，产率83％。1HNMR(300Hz,DMSO)δ9.12(s,2H),7.52-7.56(m,4H),7.34-7.40(m,6H)；ESI-MS:429[M+1]+.4-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S1)取10mL小微波管，依次加入化合物2(60mg，0.14mmol，1eq)、3,4-二氯苯胺(30mg，0.28mmol，2eq)、DMF3mL，于100℃下反应7h，待其冷却后，用50mL乙酸乙酯稀释，分别用30mL饱和氯化铵溶液洗2次、30mL饱和氯化钠溶液洗1次，无水硫酸钠干燥，浓缩。二氯甲烷(DCM)/石油醚(PE)重结晶，所得淡黄色固体(化合物3)不经进一步纯化直接投入下一步反应。将上述所得化合物3悬浮于3mL的THF中，再加入3mL2N的氢氧化钠溶液室温搅拌反应18h，待反应完全后，加2N的盐酸中和至pH为2左右，静置，固体逐渐析出，过滤，抽干，得白色固体(化合物S1),两步产率43％。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ11.85–11.40(s,1H),8.28(s,1H),8.13(s,1H),7.76(d,J＝9.8Hz,1H),7.67(d,J＝8.7Hz,1H).ESI-MS:301.4[M+H]+。实施例24-((4-异丁氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S2)4-异丁氧基苯胺(4)取一25mL圆底烧瓶，依次加入对羟基苯胺(478mg，4.38mmol，1.2eq)、DMF5mL、四丁基碘化铵(TBAI)(124mg，0.365mmol，0.1eq)、异丁基溴(397μL，3.65mmol，1eq)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(1.21mL，7.3mmol，2eq)，抽真空再充N2循环3次，充N2时间不少于5min，随后在N2保护下于60℃下反应12h。反应完全后，撤走油浴，待其冷却后，旋干DMF，100mL乙酸乙酯溶解，先后用饱和碳酸钠溶液洗两次、饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。硅胶柱层析(石油醚(PE):乙酸乙酯(EA)＝8：1)进一步纯化得纯白固体(化合物4)563mg，产率78％。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ6.68(d,J＝8.6Hz,2H),6.51(d,J＝8.6Hz,2H),1.84(td,J＝13.3,6.7Hz,1H),1.00–0.88(m,6H).4-((4-异丁氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S2)将化合物1悬浮于50mL二氯甲烷中，密封反应，冰盐浴下搅拌15min后，加入超干吡啶(0.8mL,5eq,9.60mmol)后缓慢滴加化合物4(634mg,1eq,3.84mmol)的THF溶液，反应45min，停止反应，过滤抽干，加大量饱和碳酸氢钠冲洗，加大量水冲洗，加大量DCM冲洗抽干，得土黄色固体(化合物5)。取一50mL圆底烧瓶，依次加入化合物576mg，THF3mL，2N的氢氧化钠溶液3mL，反应结束(4h)后滴加2N的盐酸中和至pH为2左右，此时有大量固体析出，静置待尽可 能多的固体吸出后，过滤得土黄色固体(化合物S2)。1HNMR(300MHz,DMSO):δ9.52(s,1H),7.62(s,1H),6.92(d,J＝8.6Hz,2H),6.57(d,J＝8.6Hz,2H),3.60(d,J＝7.4Hz,2H),1.79–1.65(m,1H),0.91(d,J＝6.6Hz,6H).实施例35-((3-氟-4-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-4-羧酸(S3)取10mL小微波管，依次加入(0.213mmol)3-氟-4-甲氧基苯胺和(80mg,0.194mmol)化合物2及3.0mLDMF，微波下于140℃下反应2h，冷却，减压蒸去大部分DMF。浓缩物加入2N的H2O/THF(v:v＝2:1)皂化完成后加入稀盐酸调节pH值，即析出白色固体，过滤干燥得产物(化合物S3)，两步产率为53％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.22(s,1H),7.73(dd,J＝13.5,2.3Hz,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),7.21(t,J＝9.3Hz,1H),3.85(s,3H).ESI-MSm/z:277.98(M-),HR-ESIMSC11H9N3O3(M-):计算值：278.0582,实测值:278.0577.实施例44-((4-氯-3-氰基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S4)除了使用5-氨基-2-氯苯甲氰代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S4，为白色固体21mg,产率为57％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.35(d,J＝2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.06(s,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,1H).ESI-MSm/z:277.98(M-),HR-ESIMSC12H6N4O3Cl(M-):计算值：289.0132,实测值:289.0128.实施例54-((3-氰基-4-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S5)2-甲氧基-5-硝基苯甲氰(6)取100mL圆底烧瓶，依次加入4-氯-3-氰基硝基苯(600mg,1eq，3.29mmol)，DMF5mL，用橡胶塞密封烧瓶，冰水浴下搅拌，抽真空充氮气循环3次，搅拌10min后，将甲醇钠的DMF溶液通过注射器缓慢注入密封的反应瓶中，反应1h后，待反应完全后，停止反应，加入100mL乙酸乙酯稀释，饱和氯化铵水溶液洗涤1次，饱和氯化钠水溶液洗 涤1次，水相再次用乙酸乙酯，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥30min，过滤，浓缩后硅胶柱层析(PE:EA＝5:1)分离得到440mg产物，为白色结晶固体(化合物6)，收率75％。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.59(d,J＝2.8Hz,1H),8.51(dd,J＝9.4,2.8Hz,1H),7.38(d,J＝9.4Hz,1H),4.37(q,J＝7.0Hz,3).5-氨基-2-甲氧基苯甲氰(7)取100mL圆底烧瓶，依次加入化合物2-甲氧基-5硝基苯甲氰(1eq，220mg，1.23mmol),甲醇20mL,钯碳22mg(质量的10％)，瓶口接上三通，室温搅拌，抽真空再充H2循环3次，充H2时间不少于5min，随后在H2保护下室温反应30min，点半待反应完全后，过滤钯碳，浓缩，柱层析(PE:EA＝5:1)分离得到150mg产物，为白色结晶固体(化合物7)，收率82％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.58–8.56(m,1H),8.53–8.48(m,1H),7.39(d,J＝9.4Hz,1H),4.09–4.08(m,1H).4-((3-氰基-4-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S5)除了使用5-氨基-2-甲氧基苯甲氰(化合物7)代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S5，为纯白色固体45mg，产率56％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.50–10.97(m,2H),8.22(s,1H),8.11(d,J＝2.5Hz,1H),8.00(s,1H),7.32(d,J＝9.3Hz,1H),3.94(s,3H).ESI-MSm/z:284.9(M-),HR-ESIMSC11H9N4O4(M-):计算值：285.0620,实测值:285.0624.实施例64-((3-氰基-4-异丁氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S6)异丁醇钠取25mL圆底烧瓶，依次加入异丁醇(2g,2eq)和1mLDMF，冰盐浴条件下搅拌10min，取另一25mL圆底烧瓶，加入氢化钠(1.09g,4eq)、10mLDMF(无水)溶解氢化钠，将氢化钠的DMF溶液缓慢滴入异丁醇的DMF溶液中，冰浴反应30min，生成异丁 醇钠。2-异丁氧基-5-硝基苯甲氰(8)取100mL圆底烧瓶，依次加入3-硝基-6-氯-苯甲氰(834mg,1eq)，5mLDMF(无水)，用橡胶塞密封烧瓶，冰水浴下搅拌，抽真空充氮气循环3次，搅拌10min后，将将上述反应得到的异丁醇钠的DMF溶液通过注射器缓慢注入密封的反应瓶中，待反应完全后，停止反应，加入100mL乙酸乙酯稀释，饱和氯化铵水溶液洗涤2次，饱和氯化钠水溶液洗涤1次，无水硫酸钠搅拌干燥30min，过滤浓缩后柱层析(PE:EA＝15:1)分离得到697mg化合物8，为橘黄色固体，产率65％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.56(d,J＝2.8Hz,1H),8.50–8.45(m,1H),7.35(d,J＝9.4Hz,1H),4.07–4.04(m,2H),2.25–2.11(m,1H),1.13–1.05(m,6).5-氨基-2-异丁氧基苯甲氰(9)取250mL圆底烧瓶，依次加入NiCl.6H2O(2eq，1424mg)、甲醇20mL，将其置于-200C低温反应器中搅拌，搅拌10min后，将化合物8(697mg,1eq)的THF(3mL)溶液缓慢滴入反应体系，滴完后，在缓慢加入硼氢化钠(228mg,2eq)直至反应体系变黑，变黑后继续反应5min，TLC监控反应，待原料消失后停止反应。后处理时加入100mL乙酸乙酯(EA)和100mL饱和氯化铵水溶液，快速搅拌直至体系中EA层变黄，水层变绿，萃取后再用饱和氯化钠洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得化合物9，为淡黄色固体，产率100％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ6.93(d,J＝2.4Hz,1H),6.91(s,1H),6.89(dd,J＝2.6,0.9Hz,1),3.78–3.75(m,2),2.13–1.98(m,1),1.05–1.02(m,6).4-((3-氰基-4-异丁氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S6)除了使用5-氨基-2-异丁氧基苯甲氰(化合物9)代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S6，为纯白色固体(化合物S6)21mg,产率56％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.35–10.94(m,1H),8.20(s,1H),8.10(d,J＝2.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.32(d,J＝9.1Hz,1H),3.95(d,J＝6.4Hz,2H),2.07(d,J＝6.6Hz,1H),1.03(d,J＝6.7Hz,6).ESI-MSm/z:327.0(M-),HR-ESIMSC16H15N4O4(M-):计算值：327.1100,实测值:327.1093.实施例75-((4-氯苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-4-羧酸(S7)除了使用对氯苯胺代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S7，为深灰色固体(化合物S7)28mg，两步产率38％.1HNMR(300MHz,DMSO)δ12.00–11.47(m,1H),8.26(s,1H),7.85–7.76(m,2H),7.48(dd,J＝6.8,2.1Hz,2H).13CNMR(126MHz,DMSO)δ139.10,137.59,130.15,124.30.ESI-MSm/z:264.0(M-),HR-ESIMSC11H7N3O3(M-)：计算值：264.0181,实测值:264.0176.实施例84-((4-氰基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S8)除了使用对氰基苯胺代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S8。为深灰色固体，两步产率26％.1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.28(s,1H),7.96(s,2H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H).ESI-MSm/z:255.0(M-),HR-ESIMSC7H7N4O3(M-):计算值：255.0513,实测值:255.0518.实施例94-((3-氰基-4-(哌啶-1-基)苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S9)5-硝基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰(10)取50mL圆底烧瓶，依次加入2-氯-5-硝基苯甲氰(2g,1eq,10.96mmol),碳酸钾(4.54g,3eq,32.87mmol)，哌啶(1.63mL,1.5eq,16.43mmol)和DMF5mL，于90℃油浴加热反应3h，待反应完全后，撤走油浴。旋干DMF，用100mLEA稀释，分别用饱和氯化铵、氯化钠洗涤，水相再次用乙酸乙酯萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得黄色固体(化合物10)2.528g,产率99％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.41–8.35(m,1H),8.22(ddd,J＝9.4,3.3,1.7Hz,1H),7.16–7.10(m,1H),3.49(d,J＝5.4Hz,4H),1.82–1.69(m,6H).5-氨基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰(11)化合物5-硝基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰经NaBH4还原反应30min，后处理得黄色固体(化 合物11)2.0g，产率92％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ6.99–6.85(m,3H),2.94(dd,J＝7.3,3.0Hz,4H),1.72(dd,J＝9.9,4.9Hz,4H),1.60–1.48(m,2H).4-((3-氰基-4-(哌啶-1-基)苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S9)除了使用5-氨基-2-(哌啶-1-基)苯甲氰(化合物11)代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S9，为红色固体45mg,产率60％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.29–11.05(m,1H),8.21(s,1H),8.08(d,J＝2.5Hz,1H),7.93(s,1H),7.21(d,J＝9.0Hz,1H),3.10(d,J＝5.2Hz,4H),1.70(s,4H),1.56(s,2H).ESI-MSm/z:338.0(M-),HR-ESIMSC17H16N5O3(M-):计算值：338.1255,实测值:338.1253.实施例104-((3-氰基-4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S10)5-氨基-2-(4-甲基哌啶-1-基)苯甲氰(13)除了使用4-甲基哌啶代替哌啶以外，以与合成化合物11相同的步骤合成化合物13，为黄色固体1.95g,两步产率88％。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ6.99–6.86(m,3H),3.28–3.20(m,2H),2.66(t,J＝11.3Hz,2H),1.73(d,J＝10.3Hz,2H),1.43(d,J＝7.8Hz,2H),0.99(dd,J＝5.9,1.3Hz,3H).4-((3-氰基-4-(4-甲基哌啶-1-基)苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S10)除了使用5-氨基-2-(4-甲基哌啶-1-基)苯甲氰(化合物13)代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S10，为红色固体56mg,产率69％。1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.34–11.06(m,1H),8.22(s,1H),8.08(d,J＝2.3Hz,1H),7.91(s,1H),7.21(d,J＝9.0Hz,1H),3.47(d,J＝11.5Hz,2),2.79(t,J＝11.6Hz,2),1.75(d,J＝12.4Hz,2),1.52(s,1H),1.42–1.24(m,2),0.98(d,J＝6.4Hz,3).ESI-MSm/z:354.0(M+),HR-ESIMSC18H18N4O3(M+):计算值：354.1560,实测值:354.1566.实施例114-((4-氯-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S11)除了使用4-氯-3-甲氧基苯胺代替化合物44以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S11，为红色固体38mg,产率48％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.26(s,1H),7.68(s,1H),7.45(s,1H),3.87(s,1H).ESI-MSm/z:293.9(M-),HR-ESIMSC12H9N3O4Cl(M-):计算值：294.0280,实测值:294.0282.实施例124-((4-氯-3-硝基苯)氨基甲酰基)-1H-咪唑-5-羧酸(S12)除了使用4-氯-3-硝基苯胺代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S12，为红色固体35mg,产率44％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.59(s,1H),8.30(s,1H),8.02(s,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,2H).ESI-MSm/z:308.9(M-),HR-ESIMSC11H5N4O5Cl(M-):计算值：309.0031,实测值:309.0027.实施例134-((1H-吲哚-5-基)氨基甲酰胺)-1H-咪唑-5-羧酸(S13)除了使用5-氨基-吲哚代替化合物4以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S13，为红色固体41mg,产率51％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ11.16(s,1H),10.86(s,1H),8.18(s,1H),7.97(s,1H),7.40(d,J＝8.0Hz,3H),6.46(s,1H).ESI-MSm/z:269.0(M-),HR-ESIMSC13H9N4O3(M-):计算值：269.0683,实测值:269.0675.实施例144-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸(S14)4-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸甲酯(14)取50mL圆底烧瓶，依次加入化合物S1(200mg,1eq,666.45μmol),DMF5mL,用胶塞封好，抽真空再充氩气循环3次，充氩气时间不少于5min，随后在氩气保护下于冰浴条件下搅拌10min后，缓慢滴加氢化钠(200mg,3eq,2mmol)的DMF溶液和碘甲烷(83μL,2eq,1.33mmol)的DMF溶液。3天后，待反应完全，旋干DMF，加二氯甲烷超声至瓶壁上所有化合物震荡下来，静置，过滤，母液旋干，用1mL二氯甲烷溶解，以厚制备硅胶板(洗脱液：二氯甲烷:甲醇＝20:1，v/v)分离得到纯白色固体(化合物14)74mg,产率34％.1HNMR(300MHz,CDCl3)δ12.40(s,1H),7.99(dd,J＝2.4,0.9Hz,1H),7.56(s,1H),7.55–7.50(m,1H),7.39(dd,J＝8.7,0.9Hz,1H),7.24(d,J＝1.0Hz,1H),4.07(d,J＝0.5Hz,3H),4.03(d,J＝1.0Hz,3H).4-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸(S14)取一50mL圆底烧瓶，依次加入化合物14(74mg，225.5μmol),THF3mL,2N的氢氧化钠溶液3mL,反应2h后，TLC监控反应完全后，滴加2N的盐酸溶液中和至pH为2左右，此时有大量固体析出，静置，待尽可能多的固体吸出后，过滤得纯白色固体(化合物S14)45mg，三步产率64％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ12.57(s,1H),8.13(s,1H),8.08(s,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,1H),3.86(s,3H).EI-MSm/z:313,HR-EIMSC12H9N3O3Cl2:计算值：313.0021,实测值:313.0025.实施例15N4-(3,4-二氯苯基)-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S15)化合物15除了使用3,4-二氯苯胺代替化合物4以外，以与合成化合物5相同的步骤合成化合物15。N4-(3,4-二氯苯基)-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S15)取50mL圆底烧瓶，依次加入化合物15(80mg,1eq,666.45μmol),40％的氨水5mL,于冰水浴下搅拌反应2.5h,TLC监控反应完全后，旋干氨水，加20mL乙酸乙酯超声震荡下瓶壁上的化合物，静置，带有大量固体析出，过滤，抽干，分别加1N氢氧化钠溶液、水、乙酸乙酯冲洗，抽干，得白色固体(化合物S15)52mg，产率61％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ12.37(s,1H),8.04(s,2H),7.56(d,J＝20.4Hz,2H).EI-MSm/z:298.HR-EIMSC11H8N4O2Cl2:计算值：298.0011,实测值:298.0009.实施例16N-(3,4-二氯苯胺)-5-酰肼-1H-咪唑-4-酰胺(S16)除了使用85％的水合肼替代40％的氨水以外，以与实施例15合成化合物S15相同的步骤合成化合物S16，为白色固体46mg，产率52％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ10.12(s,1H),8.08(s,1H),7.96(s,1H),7.61(d,J＝19.3Hz,1H),4.80(s,2H).EI-MSm/z:313.HR-EIMSC11H8N4O2Cl2:计算值：313.0133,实测值:313.0131.实施例17N5-环丙基-N4-(3,4-二氯苯胺)-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S17)除了使用环丙胺替代40％的氨水以外，以与实施例15合成化合物S15相同的步骤合成化合物S17，为白色固体53mg,产率55％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ9.22(s,1H),8.15(s,1H),7.84(s,1H),7.64(s,1H),7.54(d,J＝2.3Hz,1H),2.94(s,1H),0.80–0.62(m,4H).ESI-MSm/z:337.0(M-),HR-ESIMSC14H11N4O2Cl2(M-):计算值：337.0255,实测值:337.0259.实施例18N4-(3,4-二氯苯胺)-N5-羟基1H-咪唑-4,5-二酰胺(S18)除了使用羟胺的盐酸盐替代40％的氨水以外，以与实施例15合成化合物S15相同的步骤合成化合物S18，为白色固体53mg,产率55％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.14(s,1H),7.56(m,3H).ESI-MSm/z:313.0(M-),HR-ESIMSC11H7N4O3Cl2(M-):计算值：312.9901,实测值:312.9895.实施例19N4-(3,4-二氯苯胺)-N5-甲基-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S19)除了使用甲胺的盐酸盐替代40％的氨水以外，以与实施例15合成化合物S15相同的步骤合成化合物S19，为白色固体54mg,产率61％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.13(s,1H),7.97(s,1H),7.69–7.48(m,2H),2.89(d,J＝4.6Hz,3H).ESI-MSm/z:311.1(M-),HR-ESIMSC12H9N4O2Cl2(M-):计算值：311.0110,实测值:311.0103.实施例20N4-(3-氰基-4-异丁氧基苯基)-N5-环丙基-1H-咪唑-4,5-二酰胺(S20)除了用5-氨基-2-异丁氧基苯甲氰替代3,4-二氯苯胺，用环丙胺替代40％的氨水之外，以与实施例15合成化合物S15相同的步骤合成化合物S20，为白色固体60mg,产率57％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.14(s,1H),7.84(s,2H),7.29(d,J＝9.2Hz,1H),3.92(d,J＝6.0Hz,2H),2.94(s,1H),2.08(s,1H),1.02(d,J＝6.6Hz,6H),0.75(d,J＝6.7Hz,2H),0.68(d, J＝6.7Hz,2H).ESI-MSm/z:366.1(M-),HR-ESIMSC19H20N5O3(M-):计算值：366.1562,实测值:366.1566.实施例214-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S21)2-丙基-1H-咪唑-4,5-二羧酸(17)于50ml的圆底烧瓶中依次加入2-丙基-1H-咪唑-4,5-二羧酸二乙酯(2g,7.78mmol),2N氢氧化钠(6mL),THF(2mL)升温到50℃搅拌反应4h,反应完成后用4N的HCl调节pH值到2，搅拌30min后过滤，乙酸乙酯洗，真空干燥得白色固体(化合物17)1.32g,产率85％。1HNMR(400MHz,DMSO):δ2.80(t,J＝7.5Hz,2H),1.79-1.66(m,2H),0.85(t,J＝7.4Hz,3H).4-((3,4-二氯苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S21)除了以3,4-二氯苯胺代替化合物4以及用化合物17代替1-氢咪唑-4,5-二羧酸以外，以与实施例2合成化合物S2相同的步骤合成化合物S21，为白色固体115mg,产率54％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ8.09(s,1H),7.67(s,2H),2.78(s,2H),1.75(s,2H),0.89(s,3H).ESI-MSm/z:340.0(M-).HR-ESIC14H12N3O3Cl2(M-):计算值：340.0253,实测值:340.0256.实施例224-((4-氯-3-氰基苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S22)除了以5-氨基-2氯苯甲氰代替3,4-二氯苯胺以外，以与实施例21合成化合物S21相同的步骤合成化合物S22，为白色固体118mg,产率55％。1HNMR(300MHz,DMSO)δ8.32(s,1H),7.98(s,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,1H),2.77(s,2H),1.75(d,J＝6.9Hz,2H),0.90(t,J＝6.3Hz,3H).ESI-MSm/z:331.0(M-).HR-ESIC15H12N4O3Cl(M-):计算值：331.0600,实测值:331.0598.实施例234-((4-甲氧基-3-氰基苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S23)除了以5-氨基-2-甲氧基苯甲氰代替3,4-二氯苯胺以外，以与实施例21合成化合物S21相同的步骤合成化合物S23，为白色固体120mg,产率57％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ8.10(s,1H),7.93(s,1H),7.32(d,J＝7.3Hz,1H),3.94(s,3H),2.75(s,2H),1.74(s,2H),0.91(d,J＝4.9Hz,3H).ESI-MSm/z:327.0(Mk-).HR-ESIC16H15N4O4(M-):计算值：327.1090,实测值:327.1093.实施例244-((4-异丁氧基-3-氰基苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S24)除了以5-氨基-2-异丁氧基苯甲氰代替3,4-二氯苯胺以外，以与实施例21合成化合物S21相同的步骤合成化合物S24，为白色固体138mg,产率60％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ11.35–10.80(m,1H),8.09(d,J＝2.4Hz,1H),8.01–7.87(m,1H),7.31(d,J＝9.2Hz,1H),3.93(d,J＝6.4Hz,2H),2.75(s,2H),2.06(dd,J＝13.2,6.5Hz,1H),1.75(dd,J＝14.9,7.4Hz,2H),1.02(d,J＝6.7Hz,6H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H).ESI-MSm/z:370.0(M-).实施例254-((4-哌啶-3-氰基苯基)氨基甲酰基)-2-丙基-1H-咪唑-5-羧酸(S25)除了以5-氨基-2-哌啶-1-基苯甲氰代替3,4--二氯苯胺以外，以与实施例21合成化合物S21相同的步骤合成化合物S25，为白色固体119mg,产率47％。1HNMR(300MHz,DMSO):δ8.07(s,1H),7.84(s,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),3.10(s,4H),2.76(s,2H),1.69(s,6H),1.56(s,2H),0.90(t,J＝7.5Hz,3H).ESI-MSm/z:380.0(M-).HR-ESIC20H22N5O3(M-):计算值：380.1730,实测值:380.1723.mp:244-246℃.实施例26本发明化合物的活性测试实验原理与方法:尿酸法：底物黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(Sigma)的催化下生成尿酸和超氧离子，通过测定292nm波长下光吸收值来测定尿酸生成量，从而检测黄嘌呤氧化酶的活性。并且固定酶浓度，测定不同底物浓度下最大反应速度以及不同抑制剂浓度最大反应速度的影响。统计方法：Exel软件计算双复孔数据得出抑制率，并以GraphpadPrism5.0拟合出化合物的IC50值，所得结果示于下表1中。表1化合物对XO体外抑制活性化合物IC50化合物IC50化合物IC50S1BS9AS17BS2DS10BS18BS3BS11CS19CS4BS12BS20DS5BS13CS21DS6AS14DS22DS7BS15CS23DS8BS16DS24DS25Da被测化合物抑制XO激酶活性：A:1nM<IC50<10nM；B:10nM<IC50<100nM；C:100nM<IC50<1μM；D:1μM<IC50<100μM；由表1可以看出，本发明化合物大多数对黄嘌呤氧化酶表现出较好的活性，部分化合 物抑制活性达到nM级，是一类很有应用前景的治疗痛风的药物。实施例27本发明化合物S6的酶动力学测试实验原理与方法:尿酸法:底物黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(Sigma)的催化下生成尿酸和超氧离子,通过测定292nm波长光吸收值来测定尿酸生成量,从而检测黄嘌呤氧化酶的活性。固定酶浓度，测定不同底物浓度下最大反应速度以及不同抑制剂浓度对最大反应速度的影响。实验结果:固定酶浓度，测定出不同底物浓度下的最大反应速度；固定酶浓度与底物浓度，测定不同化合物S6浓度作用下的最大反应速度，拟合出lineweaver～BurkPlot(如图1)，与文献对比可发现，S6表现出混合型抑制剂的酶动力学特征。当前第1页1 2 3