一株高耐受酿酒酵母菌株及其构建方法与流程

文档序号:11837247阅读:来源:国知局

技术特征:

1.选育出的高耐受酿酒酵母菌株,是在酿酒酵母出发菌株中弱化腺苷酸环化酶编码基因CYR1的启动子强度获得。

2.如权利要求1所述的高耐受酿酒酵母菌株,其特征在于,所述出发菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC32315。

3.如权利要求1所述的高耐受酿酒酵母菌株,其特征在于,所述酿酒酵母具有正常的生长性能,对55℃热击以及8%(v/v)乙醇都有一定的耐受性,并且在40℃玉米原料高温浓醪发酵中乙醇产量相对亲本菌株提高了14.6%。

4.如权利要求1所述的高耐受酿酒酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述构建方法是通过融合PCR技术和整合型载体质粒YIplac211介导的两步基因整合法,把编码腺苷酸环化酶基因CYR1启动子3’端-150bp至-30bp(ATG=+1)这一序列无痕敲除来实现。

5.如权利要求4所述的高耐受酿酒酵母菌株的构建方法,其特征在于,具体步骤包括:用PCR方法获得突变ura3片段,将其通过醋酸锂化学转化法导入到酿酒酵母出发菌株,通过同源重组实现出发菌株的URA3基因突变;用PCR方法分别扩增靶序列上游和下游长度约为1.2kb的同源序列片段,然后通过融合PCR,将上、下游序列融合成无缝片段;将该片段克隆至酵母整合质粒YIplac211上,获得能够进行整合敲除的质粒;在整合敲除质粒的上游同源臂或者下游同源臂中,选择合适的单一酶切位点,将质粒酶切线性化;通过醋酸锂化学转化法,将线性化的整合敲除质粒导入酿酒酵母中,用不含尿嘧啶的酵母合成培养基筛选发生第一步整合重组的酵母突变株;将经过鉴定的发生第一步整合重组的酵母突变株,经含有5-氟乳清酸合成培养基平板反向筛选获得发生第二步整合重组的酵母突变株;用PCR方法获得出发菌株正常的URA3基因片段,将其导入到发生了二步整合重组的酵母突变株中,以回复突变的ura3标记基因。

6.如权利要求2所述的高耐受酿酒酵母菌株在乙醇生产中的应用。

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