一种豇豆花叶病毒亚科病毒广谱检测试剂盒及其方法与流程

文档序号:11809912阅读:来源:国知局

技术特征:

1.检测或辅助检测豇豆花叶病毒亚科病毒的成套引物,为如下1)或2):

1)由引物1、引物2和引物3组成;

2)由引物1、引物2、引物4和引物5组成;

所述引物1为序列1所示的单链DNA分子;

所述引物2为序列2所示的单链DNA分子;

所述引物3为序列3所示的单链DNA分子;

所述引物4为序列4所示的单链DNA分子;

所述引物5为序列5所示的单链DNA分子。

2.一种检测或辅助检测豇豆花叶病毒亚科病毒的PCR试剂,包括权利要求1所述的成套引物。

3.根据权利要求2所述的PCR试剂,其特征在于:所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4和所述引物5在所述PCR试剂中的终浓度均为10μmol/L。

4.一种检测或辅助检测豇豆花叶病毒亚科病毒的试剂盒,包括权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂。

5.权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测或辅助检测待测病毒是否为豇豆花叶病毒亚科病毒中的应用;

或权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测病毒是否为豇豆花叶病毒亚科病毒的产品中的应用。

6.权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样品中是否含有豇豆花叶病毒亚科病毒中的应用;

或权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有豇豆花叶病毒亚科病毒的产品中的应用。

7.一种检测或辅助检测待测样品中是否含有豇豆花叶病毒亚科病毒的方法,包括如下步骤:

(1)从所述待测样品中提取总RNA,采用权利要求1中的引物1进行反转录反应,得到待测cDNA;

(2)以所述待测cDNA作为模板,采用权利要求1中的引物1和引物2进行第一轮PCR反应,获得第一轮PCR产物;

(3)以第一轮PCR产物作为模板,采用权利要求1中的引物1和引物3进行第二轮PCR反应,获得第二轮PCR产物;

或以第一轮PCR产物作为模板,采用权利要求1中的引物4和引物5进行第二轮PCR反应,获得第二轮PCR产物;

(4)根据所述第二轮PCR产物的大小按照如下方法确定所述待测样品中是否含有豇豆花叶病毒亚科病毒:

若所述第二轮PCR产物中含有大小为400~440bp的DNA片段,则所述待测样品中含有或候选含有豇豆花叶病毒亚科病毒,反之则所述待测样品中不含有或候选不含有豇豆花叶病毒亚科病毒。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述反转录反应的温度为42℃。

9.根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于:所述第一轮PCR反应共进行35个循环,前5个循环的退火温度为42℃,后30个循环的退火温度为50℃。

10.根据权利要求7-9中任一所述的方法,其特征在于:所述第二轮PCR反应共进行40个循环,前5个循环的退火温度为42℃,后35个循环的的退火温度为52℃。

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