一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法与流程

本发明涉及物质制备技术领域，具体为一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法。

背景技术：

唐古特大黄又名鸡爪大黄，耐寒力强，多生长在2000—3900米的山地林缘、灌丛、草坡地带，冬天能耐负20℃以下的低温。极似掌叶大黄，但本变种的叶片深裂，裂片通常窄长，呈三角状披针形或窄线形。唐古特大黄叶片掌缺刻深裂；花小，淡黄至白色，瘦果椭圆状三棱形，沿棱有刺，暗褐色。因唐古特大黄多为野生，故在栽培技术上应以野生变家种为主。

传统的大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的制备方法过程复杂，且提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品所需要的时间较长，费时费力，从而降低了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的生产效率。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，以解决传统的大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的制备方法过程复杂，且提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品所需要的时间较长，费时费力，从而降低了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品生产效率的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量好且干净的唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎，粉碎后再进行筛选，并在预定温度下用乙醇溶液回流提取，且提取次数为3次，每次2h，再将提取液减压浓缩后得到粗提物。

S2、富集：将所述提取步骤中的粗提物用5-10倍去离子水充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，并将萃取后的去离子水进行过柱操作，用乙醇溶液对分离柱进行洗脱，得到洗脱液，将所述洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将所述富集物通过制备色谱仪，以将富集物中的二苯乙烯苷类化合物进行分离纯化。

其中，在通过制备色谱仪进行分离时，采用质量浓度为32％的甲醇溶液进行等度洗脱。

优选的，所述提取步骤中，乙醇溶液中乙醇的质量浓度的范围为50％-90％，且预定温度的范围为50℃-85℃，且每1g大黄的干燥的根采用10mL-15mL的乙醇溶液进行回流提取。

优选的，所述分离纯化步骤中，甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱。

优选的，所述富集步骤中，所述分离柱采用非极性大孔树脂柱，所述非极性大孔树脂柱包括D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂和X-5型大孔树脂。

优选的，所述富集步骤中，所述乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍-20倍。

优选的，所述富集步骤中，所述乙醇溶液中乙醇的质量浓度为50％-90％。

优选的，所述富集步骤中，在采用质量浓度为90％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱前，依次用去离子水、质量浓度为50％的乙醇溶液和质量浓度为70％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，且所述去离子水的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍-20倍，所述质量浓度为50％的乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍-20倍，所述质量浓度为70％的乙醇溶液的体积是所述分离柱中柱床的体积的5倍-20倍。

优选的，所述富集步骤中，所述水和正丁醇的体积比为1:3。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过配合制备色谱仪以及采用分离、富集和分离纯化的三步操作，使二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的制备方法更加简便和快捷，且省时省力，节约人力成本，而且节省了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的生产成本，且极大的缩短了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的制备时间，从而提高了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的生产效率。

采用本发明方法获得的单体化合物desoxyrhaponticin采用¹H-NMR和¹C-NMR鉴定符合其化合物结构(参见图3)，同时，利用HPLC检测其纯度在95％以上(参见图2)。

附图说明

图1本发明粗提取分离图；

图2本发明二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品纯度检测图；

图3本发明二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的结构图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1-3，本发明提供一种技术方案：一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量好且干净的唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎，粉碎后再进行筛选，并在预定温度下用乙醇溶液回流提取，且提取次数为3次，每次2h，再将提取液减压浓缩后得到粗提物，且乙醇溶液中乙醇的质量浓度的范围为50％-90％，且预定温度的范围为50℃-85℃，且每1g大黄的干燥的根采用10mL-15mL的乙醇溶液进行回流提取。

S2、富集：将提取步骤中的粗提物用5-10倍去离子水充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，且水和正丁醇的体积比为1:3，并将萃取后的去离子水进行过柱操作，用乙醇溶液对分离柱进行洗脱，且乙醇溶液中乙醇的质量浓度为50％-90％，且在采用质量浓度为90％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱前，依次用去离子水、质量浓度为50％的乙醇溶液和质量浓度为70％的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，且去离子水的体积是分离柱中柱床的体积的5倍-20倍，质量浓度为50％的乙醇溶液的体积是分离柱中柱床的体积的5倍-20倍，质量浓度为70％的乙醇溶液的体积是分离柱中柱床的体积的5倍-20倍，且乙醇溶液的体积是分离柱中柱床的体积的5倍-20倍，且分离柱采用非极性大孔树脂柱，非极性大孔树脂柱包括D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂和X-5型大孔树脂，得到洗脱液，将洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将富集物通过制备色谱仪，以将富集物中的二苯乙烯苷类化合物进行分离纯化，其中，在通过制备色谱仪进行分离时，采用质量浓度为32％的甲醇溶液进行等度洗脱，且甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱。

实施例一

一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量为2kg唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎至约40目后，以1g：10mL的比例用质量浓度为50％的乙醇在50℃下回流提取3次，每次提取2小时，然后将这两次提取得到的提取液合并，再将合并后的提取液减压浓缩，从而得到粗提物。

S2、富集：将提取步骤中的粗提物用5倍去离子水进行充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，其中水和正丁醇的体积比为1:3，将萃取的水相部分上D101型大孔吸附树脂柱，依次用5倍柱床体积的去离子水、5倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇、5倍柱床体积的质量浓度为70％的乙醇和5倍柱床体积的质量浓度为90％的乙醇洗脱，其中90％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将富集物通过制备色谱仪，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱，且采用甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，等度洗脱，即可得到二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品，且经过鉴定其结构式如图3所示。

实施例二

一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量为2kg唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎至约60目后，以1g：10mL的比例用质量浓度为60％的乙醇在60℃下回流提取3次，每次提取2小时，然后将这两次提取得到的提取液合并，再将合并后的提取液减压浓缩，从而得到粗提物。

S2、富集：将提取步骤中的粗提物用6倍去离子水进行充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，其中水和正丁醇的体积比为1:3，将萃取的水相部分上AB-8型大孔吸附树脂柱，依次用8倍柱床体积的去离子水、8倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇、8倍柱床体积的质量浓度为70％的乙醇和8倍柱床体积的质量浓度为90％的乙醇洗脱，其中90％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将富集物通过制备色谱仪，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱，且采用甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，等度洗脱，即可得到二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品，且经过鉴定其结构式如图3所示。

实施例三

一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量为2kg唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎至约80目后，以1g：10mL的比例用质量浓度为70％的乙醇在70℃下回流提取3次，每次提取2小时，然后将这两次提取得到的提取液合并，再将合并后的提取液减压浓缩，从而得到粗提物。

S2、富集：将提取步骤中的粗提物用7倍去离子水进行充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，其中水和正丁醇的体积比为1:3，将萃取的水相部分上X-5型大孔吸附树脂柱，依次用10倍柱床体积的去离子水、10倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇、10倍柱床体积的质量浓度为70％的乙醇和10倍柱床体积的质量浓度为90％的乙醇洗脱，其中90％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将富集物通过制备色谱仪，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱，且采用甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，等度洗脱，即可得到二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品，且经过鉴定其结构式如图3所示。

实施例四

一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量为2kg唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎至约100目后，以1g：10mL的比例用质量浓度为80％的乙醇在70℃下回流提取3次，每次提取2小时，然后将这两次提取得到的提取液合并，再将合并后的提取液减压浓缩，从而得到粗提物。

S2、富集：将提取步骤中的粗提物用9倍去离子水进行充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，其中水和正丁醇的体积比为1:3，将萃取的水相部分上D101型大孔吸附树脂柱，依次用15倍柱床体积的去离子水、15倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇、15倍柱床体积的质量浓度为70％的乙醇和15倍柱床体积的质量浓度为90％的乙醇洗脱，其中90％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将富集物通过制备色谱仪，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱，且采用甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，等度洗脱，即可得到二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品，且经过鉴定其结构式如图3所示。

实施例五

一种大黄中提取二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的方法，包括以下步骤：

S1、提取：选取质量为2kg唐古特大黄的根进行干燥，干燥后再进行粉碎至约100目后，以1g：10mL的比例用质量浓度为90％的乙醇在85℃下回流提取3次，每次提取2小时，然后将这两次提取得到的提取液合并，再将合并后的提取液减压浓缩，从而得到粗提物。

S2、富集：将提取步骤中的粗提物用10倍去离子水进行充分溶解，再使用正丁醇溶液进行萃取，其中水和正丁醇的体积比为1:3，将萃取的水相部分上X-5型大孔吸附树脂柱，依次用20倍柱床体积的去离子水、20倍柱床体积的质量浓度为50％的乙醇、20倍柱床体积的质量浓度为70％的乙醇和20倍柱床体积的质量浓度为90％的乙醇洗脱，其中90％的乙醇洗脱部分为含有目标成分的洗脱液，将含有目标成分的洗脱液经减压浓缩至恒重，即得含有目标成分的富集物。

S3、分离纯化：将富集物通过制备色谱仪，且在通过制备色谱仪进行分离时采用的色谱柱为C18色谱柱，且采用甲醇溶液中甲醇的质量浓度为32％，等度洗脱，即可得到二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品，且经过鉴定其结构式如图3所示。

综上所述：本发明通过配合制备色谱仪以及采用分离、富集和分离纯化的三步操作，使二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的制备方法更加简便和快捷，且省时省力，节约人力成本，而且节省了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的生产成本，且极大的缩短了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的制备时间，从而提高了二苯乙烯苷类化合物desoxyrhaponticin对照品的生产效率。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。