本发明涉及微生物发酵领域，具体为具体涉及一种枯草芽孢杆菌的培养基及其制备方法。
背景技术：
在我国畜牧、水产养殖业向着规模化发展，养殖密度增大，疾病的控制是养殖业重中之重，由于畜禽疾病的复杂以及监管不到位，抗生素的应用越来越多，增加了食品安全隐患，研发和寻找新型抗菌物质成为当务之急。枯草芽孢杆菌菌体菌生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短干菌肽、多粘菌等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；枯草芽孢杆菌在肠道生长中会消耗肠内游离氧，会促进厌氧菌的生产并产生乳酸等有机酸类，降低肠道ph值，间接抑制其它致病菌生长；枯草芽孢杆菌能合成维生素b1、b2、b6、烟酸等多种b族类维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性，枯草芽孢杆菌有这么多的优点使得其成为抗生素的部分替代产品。然而现在生产枯草芽孢杆菌培养多使用酵母粉、蛋白胨等价格较高的原料，使得枯草芽孢杆菌的价格居高不下；而且枯草芽孢杆菌芽杆菌芽孢率较低，保存困难，后处理收率低，货架周期短。
技术实现要素：
本发明相对于现有技术所要解决的技术问题是培养基所用原料成本高，以及现有培养基培养枯草芽孢杆菌芽孢率较低，保存困难，后处理收率低，货架周期短等等问题，本发明采用原料花生饼粉、玉米粉和小麦次粉，其成本较低，其中小麦次粉主要是由小麦的种皮、果皮、糊粉层、胚以及部分胚乳组成，由于加工工艺不同，制粉程度不同，出麸率不同，它的胚乳含量低于标准粉而高于麸皮，富含蛋白质、膳食纤维、维生素、矿物质等，含有30%左右的淀粉，营养非常丰富，可促进枯草芽孢杆菌的生长。
本发明所采用的技术方案如下：
一种枯草芽孢杆菌培养基，其特征在于，其组分包括水，花生饼粉，玉米粉，小麦次粉，氯化钠，葡萄糖，磷酸氢二钾，硫酸锰；所述培养基的各种组分以水的质量为基准的配比为：花生饼粉4.8%~5.3%，玉米粉3.6%~4.2%，小麦次粉1.0%~1.2%，氯化钠0.18%~0.22%，葡萄糖0.5%~1%，磷酸氢二钾0.1%~0.3%，硫酸锰0.01%~0.03%。
作为优选的，所述培养基的各种组分以水的质量为基准的配比为：花生饼粉4.9%~5.1%，玉米粉3.8%~4.0%，小麦次粉1.0%~1.1%，氯化钠0.18%~0.22%，葡萄糖0.6%~0.8%，磷酸氢二钾0.1%~0.3%，硫酸锰0.01%~0.03%。
进一步，所述花生饼粉质量要求：细度80%以上过80目，蛋白含量≥46%，油脂含量≥5%，酸价≤3mgkoh/g。
进一步，所述玉米粉质量要求：细度80%以上过80目，淀粉含量≥70%。
一种枯草芽孢杆菌培养基的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
第一步，将花生饼粉加入反应器皿中，按比例加水搅拌溶解，水浴加热至48℃，调节ph值至7.5，加入碱性蛋白酶后不停搅拌，酶解反应30min；
第二步，将剩余物料玉米粉、小麦次粉、氯化钠、磷酸氢二钾和硫酸锰，按照配比加入花生饼粉的酶解溶液中，搅拌至完全溶解，调节ph值至7.5；
第三步，将混合好的物料入灭菌锅中，在温度121℃条件下，灭菌30min；
第四步，将葡萄糖加水溶解后，在灭菌锅内116℃的条件下，灭菌20min；
第五步，将灭菌过后的葡萄糖溶液通过无菌操作加入灭菌过的混合物料中，混合均匀，即得一种枯草芽孢杆菌培养基。
进一步，在第一步中，所述向花生饼粉中加水的比例为1:15。
进一步，在第一步中，所述碱性蛋白酶的酶用量为5000u/g。
进一步，在第一步和第二步中，所述调节ph值的方法均为以饱和氢氧化钠溶液进行定容滴定。
进一步，在第四步中，所述葡萄糖加水的比例为1:5。
本发明的有益效果是：本发明涉及配方成本低，制作方法简便，发酵周期短，菌量高，芽孢率高，后处理收率高，稳定性好。因小麦次粉富含维生素、矿物元素以及其他营养物质，其添加可大大提高了枯草芽孢杆菌活菌数和芽孢率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。以下实施例中涉及花生饼粉质量要求均为细度80%以上过80目，蛋白含量≥46%，油脂含量≥5%，酸价≤3mgkoh/g；涉及玉米粉质量要求均为细度80%以上过80目，淀粉含量≥70%；涉及碱性蛋白酶的酶用量均为5000u/g。
实施例1
一种枯草芽孢杆菌培养基，其组分包括水，花生饼粉，玉米粉，小麦次粉，氯化钠，葡萄糖，磷酸氢二钾，硫酸锰；所述培养基的各种组分以水的质量为基准的配比为：花生饼粉4.8%，玉米粉3.7%，小麦次粉1.0%，氯化钠0.18%，葡萄糖0.8%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸锰0.02%。
上述一种枯草芽孢杆菌培养基的制备方法，按照如下步骤进行：
第一步，取花生饼粉4.8g放入挡板三角瓶中，加水72ml搅拌溶解，放水浴锅中加热至48℃，调节ph值至7.5，加碱性蛋白酶酶解30min；
第二步，称取玉米粉3.7g,小麦次粉1.0g，氯化钠0.18g,,磷酸氢二钾0.2，硫酸锰0.02g，放入第一步中的挡板三角瓶中，加水28ml，用饱和氢氧化钠调节ph值至7.5；
第三步，将第二步中挡板三角瓶，用八层纱布封口，外用报纸包裹瓶口，放入灭菌锅中121℃灭菌30min；
第四步，称取葡萄糖0.8g加入试管中加入4ml水，用棉塞塞住试管口，外用报纸包裹试管口，放入灭菌锅中116℃，灭菌20min。
第五步，将灭菌过后的葡萄糖在超净工作台中的酒精灯旁边加入到灭菌过后的培养基中。
通过上述步骤制得的培养基培养枯草芽孢杆菌24h可使菌量达到185亿cfu/ml，芽孢率98%。
实施例2
一种枯草芽孢杆菌培养基，其组分包括水，花生饼粉，玉米粉，小麦次粉，氯化钠，葡萄糖，磷酸氢二钾，硫酸锰；所述培养基的各种组分以水的质量为基准的配比为：花生饼粉5%，玉米粉4.1%，小麦次粉1.1%，氯化钠0.18%，葡萄糖0.8%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸锰0.02%。
上述一种枯草芽孢杆菌培养基的制备方法，按照如下步骤进行：
第一步，取花生饼粉5g放入挡板三角瓶中，加水75ml搅拌溶解，放水浴锅中加热至48℃，调节ph值至7.5，加碱性蛋白酶酶解30min；
第二步，称取玉米粉4.1g,小麦次粉1.1g，氯化钠0.18g,,磷酸氢二钾0.2，硫酸锰0.02g，放入第一步中的挡板三角瓶中，加水25ml，用饱和氢氧化钠调节ph值至7.5；
第三步，将第二步中挡板三角瓶，用八层纱布封口，外用报纸包裹瓶口，放入灭菌锅中121℃灭菌30min；
第四步，称取葡萄糖0.8g加入试管中加入4ml水，用棉塞塞住试管口，外用报纸包裹试管口，放入灭菌锅中116℃，灭菌20min。
第五步，将灭菌过后的葡萄糖在超净工作台中的酒精灯旁边加入到灭菌过后的培养基中。
通过上述步骤制得的培养基培养枯草芽孢杆菌24h可使菌量达到192亿cfu/ml，芽孢率99%。
实施例3
一种枯草芽孢杆菌培养基，其组分包括水，花生饼粉，玉米粉，小麦次粉，氯化钠，葡萄糖，磷酸氢二钾，硫酸锰；所述培养基的各种组分以水的质量为基准的配比为：花生饼粉5.1%，玉米粉4.2%，小麦次粉1.0%，氯化钠0.18%，葡萄糖0.8%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸锰0.02%。
上述一种枯草芽孢杆菌培养基的制备方法，按照如下步骤进行：
第一步，取花生饼粉5.1g放入挡板三角瓶中，加水75ml搅拌溶解，放水浴锅中加热至48℃，调节ph值至7.5，加碱性蛋白酶酶解30min；
第二步，称取玉米粉4.2g,小麦次粉1.0g，氯化钠0.18g,,磷酸氢二钾0.2，硫酸锰0.02g，放入第一步中的挡板三角瓶中，加水25ml，用饱和氢氧化钠调节ph值至7.5；
第三步，将第二步中挡板三角瓶，用八层纱布封口，外用报纸包裹瓶口，放入灭菌锅中121℃灭菌30min；
第四步，称取葡萄糖0.8g加入试管中加入4ml水，用棉塞塞住试管口，外用报纸包裹试管口，放入灭菌锅中116℃，灭菌20min。
第五步，将灭菌过后的葡萄糖在超净工作台中的酒精灯旁边加入到灭菌过后的培养基中。
通过上述步骤制得的培养基培养枯草芽孢杆菌24h可使菌量达到182亿cfu/ml，芽孢率97%。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出更动或修饰等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，均仍属于本发明技术方案的范围内。