金刚烷羰基苯基哌嗪及其治疗非酒精性脂肪肝病的用途的制作方法

本发明属于非酒精性脂肪肝病治疗药物技术领域，具体涉及1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪、制备方法及其作为非酒精性脂肪肝病治疗药物的用途。

背景技术：

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，nafld)是一种以除酒精和其他明确的损肝因素外所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤，包括单纯性脂肪肝(sfl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)及其相关肝硬化(cirrhosis)。它是目前临床上最为常见的疾病之一，近年来发病率呈逐年上升趋势，已经严重危害人类健康。然而，目前临床上仍无有效治疗手段。因此，研发相关创新药物对于防止非酒精性脂肪肝及其并发症的发生发展具有重要的临床意义。

法尼醇x受体作为非酒精性脂肪性肝病治疗的重要靶点已有多年历史，但其靶向药物仍然处于临床研究阶段。其中推进最快的是处于临床iii期的奥贝胆酸，有望于2018年上市。但临床研究发现该药物具有增加低密度脂蛋白胆固醇的风险，同时会引起皮肤瘙痒症等不良反应。为此，发现新结构类型的法尼醇受体激动剂先导结构作为非酒精性脂肪肝病治疗药物仍有必要。

1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪类化合物具有法尼醇x受体激动活性，已经在体内动物模型上表现出改善非酒精性脂肪肝病相关指标的活性，有进一步开发成为临床用非酒精性脂肪肝治疗药物的价值。截至目前，国内外均未报道过本专利涉及的化合物可激动法尼醇x受体的活性以及改善脂肪肝的疗效，因此该系列化合物属于新结构类型的药物先导结构。对该结构类型深入研究将有望发现治疗效果更为显著的新型非酒精性脂肪肝治疗药物。

技术实现要素：

本发明的目的是为了克服国内外市场上尚无以法尼醇受体激动剂作为非酒精性脂肪肝治疗药物的不足，提供一类具有法尼醇x受体激动活性的1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪、制备方法及其作为非酒精性脂肪肝病治疗药物的用途。

本发明提供如下技术方案：

本发明第一方面提供了一种1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪，它是如式(1)所示的化合物：

其中：

当x选自氯时，r选自乙基、正丙基、异丙基、氟或溴；

当x选自氟或溴时，r选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟、氯或溴。

本发明的第二方面提供了1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪的制备方法，它包括如下步骤：

(1)将取代苯胺和双(2‐氯乙基)胺盐酸盐溶于乙二醇单甲醚溶液中，150℃加热反应12小时，薄层色谱法检测反应完毕后，溶液冷却到室温后加入适量甲醇，然后缓慢滴加乙醚，析出沉淀，过滤后乙醚洗涤，得到盐酸盐的中间体(a)，该中间体未经纯化直接用于下一步反应；

(2)将金刚烷甲酸的二甲基甲酰胺溶液中加入n，n-二异丙基乙胺和苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐，室温搅拌25分钟后，加入上步得到的中间体，室温过夜反应，反应完毕后，反应液中加入适量的水，析出沉淀，抽滤并干燥，硅胶柱层析得到权利要求1所述的化合物(1)；

其中：

当x选自氯时，r选自乙基、正丙基、异丙基、氟或溴；

当x选自氟或溴时，r选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氟、氯或溴。

本发明第三方面提供了1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪作为非酒精性脂肪肝病治疗药物的用途。

作为优选，1‐(1‐金刚烷羰基)‐4‐取代苯基哌嗪为：

1-(1-金刚烷羰基)-4-(3-氯)苯基哌嗪(xj085)

1-(1-金刚烷羰基)-4-(2,5-二氯)苯基哌嗪(xj075)

1-(1-金刚烷羰基)-4-(5-氯-2-甲基)苯基哌嗪(xj034)

作为优选，非酒精性脂肪肝病治疗效果为通过激动法尼醇x受体产生的治疗效果。

优选的，通过激动法尼醇x受体产生的治疗效果为降低血清中甘油三酯和总胆固醇的量，降低肝脏内甘油三酯的量，以及减小肝脏指数，所述肝脏指数为肝脏重量与体重的比值。

本发明通过体内外生物活性评价证实，若干1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪可降低高脂喂养c57bl/6j肥胖小鼠血清中甘油三酯(tg)的含量，具有降低血清中总胆固醇(tc)的趋势；具有降低肝脏内甘油三酯的趋势，使肝脏指数减小。

本发明第四方面提供了一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括本发明第一方面所述的1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪及其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。所述的药物组合物选自注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂。所述载体包括药学领域常规的赋形剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

作为优选，该药物给药剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂，给药途径为口服、经皮、静脉或肌肉注射。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

体内外生物活性测试表明，1-(1-金刚烷羰基)-4-取代苯基哌嗪可以改善非酒精性脂肪肝病相关指标的活性，为首次公开。该系列化合物有进一步开发成为临床用非酒精性脂肪肝治疗药物的潜力。

附图说明

图1化合物激动法尼醇受体的量效曲线及ec50

图2xj034对高脂喂养c57肥胖小鼠血清中甘油三脂(tg)和总胆固醇(tc)的影响

图3xj034对高脂喂养c57肥胖小鼠肝脏tg和肝脏指数的影响

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明进行限制。实施例中所用实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

一、xj系列化合物的获取和制备

xj系列化合物来源于compoundhandlingb.v.(tradename:specs)，公司地址为bleiswijkseweg55,2712pbzoetermeer,thenetherlands。其编号如下：

实施例1：xj034的制备和检测

将5-氯-2-甲基苯胺(423.3mg,3mmol)和双(2-氯乙基)胺盐酸盐(535.5mg,3mmol)溶于乙二醇单甲醚溶液中，150℃加热反应12小时，tlc检测反应完毕后，溶液冷却到室温后加入4ml甲醇，然后缓慢滴加50ml乙醚，析出沉淀，过滤后乙醚洗涤，得到盐酸盐的中间体，该中间体未经纯化直接用于下一步反应。

将金刚烷甲酸(540.6mg,3mmol)的dmf溶液中加入dipea(1.1ml,6mmol)和bop(2.7g,6mmol)，室温搅拌25分钟后，加入上步得到的中间体，室温过夜反应，反应完毕后，反应液中加入适量的水，析出沉淀，抽滤并干燥，硅胶柱层析得到乳白色固体0.7g，收率为60.4％。

终产物结构表征如下：1hnmr

(500mhz,dmso-d6)δ7.22(d,j＝7.9hz,1h),7.05(d,j＝9.2hz,2h),3.76(s,4h),2.84(t,j＝4.5hz,4h),2.27(s,3h),2.02(s,3h),1.97(s,6h),1.78-1.67(m,6h).ms-esim/z[m+h]⁺:373.2。

三、化合物的生物活性评价

实验例1：法尼醇x受体(fxr)活性初步筛选

1.方法：利用基因工程技术构建pcmx-gal4-fxrlbd和peak12-gal4uas-luci的报告基因质粒体系。293e细胞瞬时转染pcmx-gal4-fxrlbd/peak12-gal4uas-luci基因质粒系统,加入不同浓度fxr受体激动剂药物，以验证细胞模型fxr受体激动剂药物的反应性和特异性。即以报告基因荧光素酶的表达水平及酶活性反映fxr受体的激活活性，以fxr激动剂cdca作为阳性对照，在该细胞模型上cdca特异激活荧光素酶的表达活性设为100％，测试样品特异激活荧光素酶的表达活性与cdca相当的认为有效。首先在化合物起始浓度为50μm下测定，对于具有激动活性的化合物进一步测定其在10μm浓度下的激动活性。

2.化合物浓度为10μm浓度下对fxr的激动活性见表1。

实验例2：化合物激动激活fxr转录活性的ec50测定

1.方法：采用报告基因质粒体系转染293e细胞的方法，加入设定不同浓度的fxr受测化合物，以报告基因luciferase的酶活性反映fxr的激活活性，根据数值用graphpadprism6软件分析数据求得化合物的ec50。

2.化合物激动fxr的量效曲线和ec50见图1。结果显示，xj034的ec50值为3.2μm(图1a)，xj075的ec50值为3.2μm(图1b)，xj085的ec50值为7.9μm(图1c)。

3.各化合物量效曲线对应的原始数据分别见表2、表3和表4。

实验例3：化合物xj034对高脂喂养c57肥胖小鼠血清甘油三脂(tg)和总胆固醇(tc)的影响1.方法：雄性11周龄28-32g大小的c57bl/6j小鼠，给与高脂饲料喂养12周，体重达45g左右，根据体重、随机血糖、空腹血糖、40min血糖下降率、血清甘油三酯含量、总胆固醇含量随机分为3组，分别为模型组(control)，xj034低剂量组(50mg/kg)，xj034高剂量组(200mg/kg)，于给药第三周自尾尖采血测定血清中tg、tc含量。

2.实验结果如图2所示，xj034能降低高脂喂养c57bl/6j肥胖小鼠血清中tg的含量，具有降低血清中tc的趋势。

实验例4：化合物xj034对高脂喂养c57肥胖小鼠肝脏内甘油三脂(tg)和肝脏指数的影响

1.方法：雄性11周龄28-32g大小的c57bl/6j小鼠，给与高脂饲料喂养12周，体重达45g左右，进行分组，灌胃给药6周后处死动物，留取肝脏，测定肝脏内甘油三酯含量，记录肝脏重量和体重，计算肝脏指数(即肝脏重量与体重的比值)。

2.实验结果如图3所示，xj034(200mg/kg)具有降低肝脏内甘油三脂的趋势，xj034(50mg/kg)对肝脏内甘油三酯无影响；xj034(200mg/kg)使肝脏指数减小，xj034(50mg/kg)具有减小肝脏指数的趋势。

表1：代表性化合物在浓度为10μm时对法尼醇x受体的激动活性

表2：不同浓度的xj034化合物对应的fxr激活相对百分数(报告基因luciferase的酶活性)

表3：不同浓度的xj075化合物对应的fxr激活相对百分数(报告基因luciferase的酶活性)

表4：不同浓度的xj085化合物对应的fxr激活相对百分数(报告基因luciferase的酶活性)